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[成果] 0900010087 湖南
[Q78, R36] 应用技术 医学研究与试验发展 公布年份:2008
成果简介:随着人类基因组研究的深入,已有大量的序列、图谱、功能研究等数据积累。人类新基因的克隆,尤其是遗传病致病基因的克隆成为国际竞争的热点。生物信息学技术在基因克隆的研究中扮演着越来越重要的角色。通过对国际人类基因组研究信息资源的分析,结合遗传性致病基因克隆的需要,课题组建立了一套信息分析体系,并应用于遗传病相关基因的克隆研究。将已知致病基因对EST数据库作同源搜寻,获得了代表相关新基因的同源EST。EST间的比较分析构建起EST重叠群,优化了基因克隆策略,进而通过实验克隆了atrophin-1样基因、ataxin-2样基因、M6ba、二甲基甘氨酸脱氢酶样基因、间隙连接蛋白beta-3和间隙连接蛋白beta-5等六个人类新基因。该论文重点介绍了atrophin-1样基因、M6ba、间隙连接蛋白beta-3的克隆情况:将齿状核红苍白路易氏体退行性病变(DRPLA)致病基因(Atrophin-1)cDNA序列对EST数据库进行同源性比较,得到与Atrophin-1显著相似的EST 25个,构建5个EST重叠群。根据其中的3个EST重叠群设计引物,对cDNA文库扩增,PCR法制备探针,筛选人cDNA和gDNA文库。cDNA克隆经测序,拼接,获得含完整编码区的cDNA序列4.6kb(命名为Atrophin-1样基因,Atrophin-1 like gene),其中有一个303bp的阅读框架。基因编码区由9个外显子构成。基因组DNA克隆经荧光原位杂交定位于1p36。人、鼠Atrophin-1基因家族各成员的比较分析显示,均为亲水性较强的蛋白质,其C端保守性较强,有两个酸性与碱性氨基酸交替区。DRPLA、Haw River综合症与Atrophin-1中CAG的过度重复相关,而人类Atrophin-1样蛋白中不含长的多聚谷氨酰胺残基(其基因中只有三次CAG的重复)。蛋白脂蛋白(PLP)基因突变导致Pelizaeus-Merzbacher病(PMD)和部分X-连锁的痉挛性截瘫。Olinsky等克隆了M6ba的部分序列(U45955),该基因认为是PLP基因家族成员之一。课题组以巢式PCR得到一约300bp的片段,测序为与U45955的5’端局部重叠的新序列,拼接后得到1.642kb的序列,其中含有可编码265个氨基酸的开放阅读框。该阅读框经对脑cDNA文库PCR产物的测序确证(命名为M6ba)。M6ba的cDNA序列及其编码氨基酸序列与小鼠中M6b基因和蛋白质序列显著相似(分别为91.2%和93.4%一致)。Northern杂交的结果及cDNA文库PCR扩增、EST数据库分析的结果提示M6b基因至少存在三种剪接形式。M6ba基因与PLP基因显著相似,并且两蛋白质在所有疏水区高度保守。M6ba基因结构的分析,显示此基因编码区由7个外显子构成。间隙连接蛋白以六聚体方式构成相邻细胞间的通道,在细胞的生长、分化、增殖调控中都发挥着重要作用。已有研究显示间隙连接蛋白基因家族成员的突变常与遗传性疾病相关。该工艺通过同源EST分析克隆了人类间隙连接蛋白beta-3基因(GJB3),并通过荧光原位杂交将此基因定位在人类染色体1p34。而有一型常染色体显性遗传的神经性耳聋也定位于同一区带。两个双侧对称性高频听力减退家系的突变分析显示,该基因分别有错义和无义突变的杂合子存在,并且突变与疾病的发生明显相关。该发现表明GJB3基因的突变可能是导致以双侧对称性高频听力减退为主要特征的神经性耳聋的病因。通过单纯的信息综合分析课题组还鉴定了人类auxilin基因的部分cDNA序列,并将该基因定位到人类染色体1p31。Auxilin蛋白诱导Hsp70c蛋白与笼形蛋白的结合,在真核细胞衣被小泡脱衣被的过程中扮演了重要的角色。Auxilin基因的EST分析,显示此基因在多种组织中表达而非以往研究认为的只在脑组织中表达。说明在计算机上克隆、分析基因已具备了比较成熟的条件。通过以上基因的克隆,以及对已克隆基因与遗传病关系的分析,课题组提出了“基因家族-候选疾病克隆策略”-选择多个成员与遗传病相关的基因家族,克隆、定位其新成员,在其定位点附近选取已连锁定位的“候选疾病”,进行基因的突变检测,以期最终克隆新的遗传病致病基因。通过“基因家族-候选疾病克隆策略”克隆新的致病基因将是一条很有潜力的研究路线。
[成果] 0100110054 湖南
R739.6 应用技术 医学研究与试验发展 公布年份:2001
成果简介:将中国人鼻咽癌细胞株(CNE2)DNA转染对TPA敏感的小鼠上皮细胞株JB<,6>(P<'+>)CL41,从第三轮转染所获得转化细胞构建的基因组DNA文库中筛选出10个Alu阳笥克隆,对其中一个克隆进行了详细研究。这个克隆的DNA导入JB<,6>P<'+>细胞后有转化活性,钭此DNA段命名为Tx基因。初步证明,Tx基因与H-ras,K-ras,N-ras,src,myb,jum,myc,fos,raf或imt-2等癌基因均无同源性,燕发现这个基因在CNE2细胞株中有一个1.3kb的表达产物。随后运用岛枪法对Tx序列中与转化作用有关的一个2.8kbEcoRI片断作了核苷酸序列分析(全长2737bp),研究其开放阅读架(ORF)。与基因数据库中的DNA片民已知人类基因无同源笥。同时用荧乐标记的原位杂交(FISH),以2.8kb的Tx基因片段为探针与正常人外周血淋巴细胞中期染色体进行原位杂交,将该基因定位地8q23-24.1。Tx基因可能是一种 人癌基因。
[成果] 0801242097 湖南
[Q34, R714] 应用技术 医学研究与试验发展 公布年份:2000
成果简介:细胞遗传学研究的主要对象是染色体,染色体是基因的载体,染色体异常所致的疾病称为染色体病。1972年,夏家辉就在国内最先引进和改良了瑞典科学家GASPERSSON1970年发现的人类染色体显带技术,并于1974年最先提出了中国人G显带染色体模式图,在国内最先开设了染色体病遗传咨询门诊。二十六年来,该研究紧跟国际前沿建立了皮肤、羊水、绒毛、永生淋巴样细胞培养技术,细胞遗传学方面的G-11、C、Q、DA/DAP1、N显带、LX、X小体、Y小体、FRA(X)、高分辨等技术以及分子细胞遗传学的染色体原位杂交技术(FISH),完成了6893例门诊病人的染色体检查,对一些基础理论问题作了深入研究,查明了我国新生活婴中染色体异常的发生率为0.73%,与此同时为了配合我国有关“控制出生人口数量,提高出生人口素质”的计划生育政策的贯彻执行,在总结个别进修的基础上,于1980年开始在中央卫生部领导下举办了以妇产科主治医师为主体的半年一届的“全国细胞遗传学产前诊断专修班”,推广了染色体病的诊断和产前诊断技术,至今培养的学生共865名,他们来自除西藏、台湾以外的各省市,这些学员回单位后在临床广泛开展了染色体病的诊断和预防工作,从而使我国从零开始建立了“临床细胞遗传学”这一崭新的学科。
[成果] 0801241506 湖南
[Q78, R73-3] 应用技术 医学研究与试验发展 公布年份:1998
成果简介:该项目属于分子细胞遗传学科学技术领域。建立了可用于活性基因区域DNASE-1敏感区在人中期染色体上定位的BRDU完全替代的染色体原位切口移位的B带技术;系统阐明了B带技术显带机理;建立正常人淋巴细胞,上皮细胞和成纤维细胞的染色体B带核型图谱,并对其带型差异进行系统比较;应用B带技术证实肿瘤始动部位假说;通过对DNASE-1敏感区稳定性的观察,阐明表达活跃的基因位点遗传稳定性的分子基础。国际首创了用于活性基因在人中期染色体上定位的B带技术;首次系统阐明了B带及B带技术的产生机制和原理;B带技术能高分辨地显示基因组中活跃表达的基因区;B带技术能有效地为恶性肿瘤、遗传性疾病相关基因的克隆与分离提供简便而快速的分子细胞遗传学手段;B带技术所绘制的人淋巴细胞,上皮细胞和纤维细胞的B带图谱为研究基因组稳定性提供了极为重要的研究标准。哈尔滨医科大学遗传所,华西医科大学肿瘤所等单位将其移植于该研究室,先后用B带技术对肺癌,鼻咽癌细胞基因组中的活性基因区进行了定位和分子细胞遗传学的研究。B带技术对北京大学生物系尚克刚同志“应用BRDU抗体技术显示BRDU标永的染色体和DNA”的研究提供了重要启示。经查SCI和部分中文杂志,该项目已被引用40次。
[成果] gkls021783
R31 应用技术 公布年份:1992
成果简介:该研究通过小鼠胚胎取样、冷冻保存、体外发育和单卵裂球体外增殖以及染?色体制备技术等方面的研究,成功地建了4-细胞鼠胚遗传学诊断模型。发?明了一种从4-细胞胚胎中吹出单卵裂球的活检方法,避免了单卵裂球取出?时因过度变形造成的单卵裂球损失;建立了单裂球和输卵管联合体外培养系?统,提高了单卵裂球体外增殖率,为染色体制备打下了基础;建立了用微型?胚泡制备染色体技术,为着床前胚胎遗传学诊断打下了基础。?
[成果] gkls021266
R15 应用技术 公布年份:1992
成果简介:观察6 ̄82岁健康男性的血清过氧化脂质,红细胞超氧化物歧化酶和全血谷?胱甘肽过氧化物酶,Cu,Zn,Se与增龄的关系。发现60岁以上老人的?LPO较儿童组、青少年组、中年组及老年前期组显著增加,而SOD、G?PX、Cu、Zn、Zn/Cu显著降低,各年龄组的血Se含量无显著性?差异。经相关及回归分析,年龄与LPO呈正相关,与GPX、Zn/Cu?呈负相关,与LPO及GPX的关系最密切。提示:LPO促进衰老,而G?PX、SOD、Zn,Cu抑制衰老。?
[成果] 99000425 湖南
R-33 应用技术 [医学研究与试验发展, 医院]
成果简介:该课题是李元建教授1989年获美国心脏博士后资助在美国加州大学工作期间及回国后领导课题组进行了一项研究。自1990年1月至1994年12月,对降钙素基因相关肽(CGRP)的释放调节与心血管作用进行研究。CGRP是一种神经多肽,是感觉神经的主要递质,广泛分布于心血管组织,具有多种生理作用。该研究选用离体大鼠(Fischer344大鼠)肠系膜血管,以跨壁神经刺激,用计算机连续记录灌注压,选择多种神经递质或局部活动性物质的激动剂与拮抗剂评价了感觉神经活动的调节。研究发现阿片肽、一氧化碳、缓激肽参与感染神经活动的调节,而血管内皮细胞、γ-氨基丁酸和N-钙通道阻断剂不影响感觉神经活动。中药人参的主要成分人参皂甙能抑制感觉神经活动,其作用与促进内皮细胞以外组织释放NO有关。该研究为揭示外周血管感觉神经的调节活动及血管活动的神经调控提供了重要的实验依据,也为研究中药对感觉神经活动的影响提供启示。该研究在成年以上动物(Fischer344大鼠)用放免分析方法测定CGRP含量与观测感觉神经活动(CGRP释放)对年龄与感觉神经功能进行综合评价。结果显示,外周血管CGRP含量及释放随着年龄增加而降低。该研究结果为某些与年龄有关的心血管疾病的发病机理研究提供了新思路。在CGRP对内皮细胞保护研究中,采用离体血管与培养内皮细胞相结合,证明CGRP对内皮细胞具有直接保护作用,能减轻低密度脂蛋白与溶血性磷脂酰胆碱对内皮细胞的损伤。该研究为阐明动脉粥样硬化的发病机理和研制防治药物具有重要意义。
[成果] 920814 湖南
R51 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该成果建立了红细胞膜血型糖蛋白(GP)的免疫印迹技术,具有灵敏度高、操作简便和效果稳定等优点。采用该方法,筛查了白人、黑人、黄种人的红细胞膜GP,比较观察了非人灵长类动物红细胞GP的物种特点;检测了一些血液病患者的红细胞膜GP异常,较系统地揭示了红细胞膜GP的多态性以及其同人种和动物进化的关系;阐明了GP在恶性疟原虫侵袭人红细胞中的生化变化以及它和某些红细胞膜疾病的相关性。该成果对遗传、优生、人口迁移等有指导意义。
[成果] 99000357 湖南
[Q44, R-33] 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:心内膜对心肌收缩能力具有某种调节和控制作用,是国际知名心脏学家Brutsaevt教授于1988年提出的,心内膜由紧密连接的单层内皮细胞构成,形成许多复杂的皱褶,大大增加了心内膜的面积,认为心内膜内皮细胞同血管内皮细胞一样,可以释放独特的活性物质对心肌收缩产生调节和控制。湖南医科大学于1992年1月 ̄1994年12月作为中国自然科学基金资助项目,对心内膜对正常和病理心肌收缩功能调控作用进行了系列研究。通过实验向中国引入了心内膜变力调制功能这一新概念;引进了Triton-X100去膜技术,建立了选择性去除功能性心内膜的乳头肌标本,为中国开展心内膜功能的研究提供了方法学基础;对豚鼠心内膜细胞超微结构进行电镜及形态学计量分析,证明其独特的结构是心内膜内皮细胞有屏障、跨膜运转和释放活性物质的基础;利用豚鼠乳头肌,选择性去除心内膜后,等长收缩峰值明显降低,但±dp/dtmax没有相应改变,收缩时程缩短,舒张反应提前,证实了心内膜对心肌收缩性能有明显的、特征性的调控作用;利用离体豚鼠右心作功的心脏,预先用皂甙选择性去除心内膜后,对组胺及组胺H〈,2〉受体激动剂咪硫胍剂量依赖性的使心肌收缩明显增强,表明心内膜参与调控受体激动剂的心脏效应;用肾性高血压Wistar大鼠肥厚乳头肌证明,心内膜主要影响心肌舒张反应及舒张早期充盈,并推测此作用在中介或引发心肌肥厚甚至导致心衰起到一定作用。用正常大鼠乳头肌进一步证明,心内膜的作用是选择性调控心肌收缩的舒张过程。
[成果] 99000370 湖南
R38 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:1989年8月 ̄1994年11月作为中国自然科学基金项目,对间日疟原虫红细胞外期进行体外培养并观察其生物学特性。方法。1989年以鼠约氏疟原虫模型作红外期体外培养成功后,1991年研究间日疟原虫。子孢子加入人肝癌细胞,培养7天后,用吉氏液染色或作免疫酶、免疫荧光染色,查见成熟红外期裂殖体及休眠体。培养10天后加入红细胞,又在其中查见红内期疟原虫。将腺感染按蚊置于不同温度环境中5天,或将按蚊低温保存于-70℃或液氮中5天,再取子孢子接种肝癌细胞,观察温度对红外期发育的影响。子孢子进蚊涎腺后继续饲养5 ̄25天,每5天解剖一批按蚊,检查衰老对子孢子发育为红外期的影响;结果。在中国首次建立了间日疟原虫红外期体外培养系统;广东深圳、始兴、湖南长沙和湖北四个地区分离株的培养物中均查见红外期裂殖体和休眠体,其中深圳株休眠比例最小,应城株比例最大,休眠体比例与纬度大小呈正相关。按蚊在30°±1℃、26°±1℃及13°±1℃环境中生活5天,其体内子孢子发育率以26°±℃组最高;13°±1℃组休眠体占红外期总数的比例显著高于另两组。低温保存,使子孢子发育为休眠体比例上升至惊人的高度。衰老使子孢子发育率显著下降并使红外期发育迟缓。子孢子发育率与日龄呈负相关的线性关系。休眠体的比例因日龄增加而下降。上述研究结果,以论文及专著形式,在国内外进行了广泛的学术交流。
[成果] 883256 湖南
R33 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:对多能造血干细胞的功能、性质及其调控的研究,是当前造血干细胞研究中的前沿问题。该研究应用脾集落测定、生物辐射、骨髓细胞移植、细胞免疫、细胞培养、组织学观察和染色体显带等多种方法,证实了13天的CFU-S是更为早期的、重建造血的主要干细胞,并发现CFU-S表面胆硷能N受体与细胞向粒系分化有关,提出表面受体与CFU-S不均一性的一些新见解,丰富了对造血生理和病理的认识。
[成果] 93201750 湖南
R19 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该成果在国内外同类研究的基础上,引进、修正、发展、完善了有关的几个健康和疾病危害程度评价指标,并提出了一些新的计算方法,即减寿年数,或潜在的寿命损失年数(PYLL);潜在的健康生命损失天数(PHDLL);慢性病致残百分数和预期劳动寿命等指标,可作为当前生命统计、残疾统计、病伤死因统计分析、疾病危害程度评价以及人群健康测量与评价的重要手段,为制订卫生计划,为病伤死因防治决策,为有限的人力、人才、资金的合理分配和使用等提供重要依据,因而具有巨大的社会效益和潜在的经济效益,对建立我国卫生信息系统也将产也深远影响。
[成果] 93201789 湖南
R59 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该课题组对217名健康男性体内自由基反应产物一过氧化脂质与抗氧化酶SOD、GSH-px及与之有关的微量元素铜、锌、硒等在血及红细胞中的含量进行测定、用多元回归及逐步回归方法处理分析,评定这些指标的增龄性变化,并探讨自由基反应与衰老的关系。结果发现:老年时抗氧化酶SOD及GSH-px活性及血锌、铜、锌/铜含量急剧下降,过氧化脂质增加、蓄积,其中与年龄关系最密切的是过氧化脂质,其余依次为GSH-px、SOD、锌及铜LPO促进衰老。该研究对各项指标相互关系和影响的分析论证科学性强,对自由基反应与衰老关系的研究较为深入,具有重要的基础理论意义及应用价值。
[成果] 93201804 湖南
R18 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该课题对卡介菌成分及其作用机理进行了深入研究,对卡介菌多糖核酸的提取工艺作了重大改进,对多糖核酸组分进行生物学测定和分子量测定。并通过动物实验确定所提组分是一种小分子多糖核酸,在体内能激活巨噬细胞,增强非特异性T细胞转化并诱发γ-干扰素、白细胞介素2及MIF的产生,使机体的吞噬作用加强。在药物安全工作方面进行了急性、亚急性和慢性毒性试验,证明该品是安全的。经临床治疗455例观察,对初治肺结核痰阳转阴、病变吸收、空洞闭合有显著疗效。此外对流感、感冒、哮喘、慢性支气管炎等亦均有疗效。
[成果] 93201805 湖南
R97 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该成果主要研究了血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)包括巯甲丙脯酸、苯丁酯脯酸和拉米普利酸抗心肌缺血再灌注损伤和抗电解引起的血管内皮细胞损伤的药理。证明ACEI有保护心肌梗塞区节段收缩的作用,减少心肌缺血再灌注损伤异位节律和死亡率。保护CPK酶活性,减少心肌细胞缺糖缺氧后LDH的释放,对抗外源性氧自由基引起的心肌和血管内皮细胞损伤、保护血管内皮细胞释放EDRF、保护过氧化物岐酶(SOD)活性,减少MDA含量。该项成果为开创ACEI在冠心病中的应用提供了实验证据和理论依据。
[成果] 93201808 湖南
R44 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该课题建立了一种诊断血吸虫病的“成虫一卵一尾蚴”三联抗原酶免疫测定法。其原理是血吸虫三个主要阶段,即成虫、虫卵、尾蚴既有共同抗原,又有特异抗原。经测试,89.4%粪卵阳性病人对这三种抗原同时表现出阳性反应,而非疫区皮试阳性人群中仅4.7%对三种抗原呈阳性反应;此外,11%的非疫区皮试阳性者,3.9%献血员都表现出对一种抗原的阳性反应,无一例献血员或其他血吸虫病患者血清对三种抗原皆具有阳性反应。该结果提示三种抗原同时呈阳性反应的特异性优于一种抗原,即以三种抗原同时出现阳性反应作的为阳性标准,则试验的特异性达100%,该试验结果可满足不同防治阶段、不同流行特点的疫区、不同目的防治措施所提出的对查病方法的敏感性和特异性的不同要求。该试验费用低,易观察结果,易于推广。
[成果] 93201809 湖南
R32 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该项目通过pH、微量元素、结合蛋白之间关系及其与生物健康关系的大量研究,提出了“正常人体中微量元素相互间是按一个大致比例关系存在”的新论点。还提出了生物机体微量元素、结合蛋白的生理功能、毒理效应等均随pH变化而化,pH是影响健康的根本因素。该研究中建立的HPLC-AAS分离测定MT-I和MT-Ⅱ的分析方法,提出无MT标准情况下对MT的分离测定,方法准确、灵敏。该研究所用技术方法先进,数据处理准确,资料齐全,科学论证合乎逻辑,兼有理论和实用价值。
[成果] 92213593 湖南
R56 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:肺损伤病死率高,目前认为肺血管细胞(En)和肺泡上皮细胞损伤后,引起呼吸膜通透性增加起重要作用。1980~1990年对其发病机制研究,证实:①1980~1985年用Wu Hock法定量测肺解聚微聚物(MA)功能,发现休克时肺解聚功能与促凝血素A<,2>(TXA<,2>)增加及前列腺环素(PGI<,2>减少有关,发现654-2及消炎痛均能有效防治MA引起的肺损伤。②1986~1987年,发现内毒素和油酸引起肺损伤时,外周血嗜中性多核白细胞(PMN)减少,肺泡灌洗液及肺组织中PMN增加,激活的PMN能损伤En,外源性嘌呤/嘌呤氧化酶(X/XOD)亦能损伤En。1988~1990年动物注入油酸和内毒素,En受损,乳酸脱氢酶(LDH)与VⅢ:Ag释出增多。各种损伤因子如内毒素、缺氧等,均可损伤培养的En,654-2、别嘌呤醇及钨等嘌呤氧化酶均可减轻该损伤。
[成果] 90207533 湖南
TH7 应用技术 医疗仪器设备及器械制造
成果简介:该发明涉及生物组织切片技术领域,更具体地说是在生物电镜细胞化学研究中对组织进行薄片切片的装置。该装置是利用现有国产或进口而价廉的石蜡切片机,装配一种细胞化学组织切片台和刀架,可任意调节选择组织切片的不同厚度,快速切出精细均匀、电镜观察清晰的细胞化学组织薄片,解决电镜细胞化学研究中的难点。该装置由盖圈、平台、台心、紧固螺钉、限位螺钉、台心螺柱、板手、滑动轨、弹簧、保护杆、刀片压板、刀体等组成样品台和刀架,通过螺钉紧固、弹簧作用、滑轨移动方式,将样品台、刀架固定在石蜡切片机上,可获得精细、厚薄均匀、符合要求的组织切片,为电镜观察细胞化学形态提供清晰的图象组织切片。专利号88218735。
[成果] 90207062 湖南
G43 应用技术 其他教育
成果简介:该发明涉及一种画面胶片投影教学装置,是使用一画面分解活动进行授课的投影片板。该投影片板由框底板、盖板、胶片、拉线、橡皮筋等组成。在现有的教学领域中,投影教学方法已广泛应用于大中学校,尤其是采用画面投影进行示教,有直观理解,容易掌握知识的效果,而且便于携带,深受师生喜爱。但是,目前国内所有采用投影仪进行教学的图象胶片,全是单张呆板不动的画面胶片,若要分解说明某些专业内容,或者需要用动态形式讲解时,则往往需要多张单独不同图象形状的投影胶片来进行讲解,这样比较麻烦而且不易理解。该投影片板不仅避免了教师授课费时多语的劳累,而且还能获得更好的教学效果。该成果专利号89212205。
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