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[成果] 0900010087 湖南
[Q78, R36] 应用技术 医学研究与试验发展 公布年份:2008
成果简介:随着人类基因组研究的深入,已有大量的序列、图谱、功能研究等数据积累。人类新基因的克隆,尤其是遗传病致病基因的克隆成为国际竞争的热点。生物信息学技术在基因克隆的研究中扮演着越来越重要的角色。通过对国际人类基因组研究信息资源的分析,结合遗传性致病基因克隆的需要,课题组建立了一套信息分析体系,并应用于遗传病相关基因的克隆研究。将已知致病基因对EST数据库作同源搜寻,获得了代表相关新基因的同源EST。EST间的比较分析构建起EST重叠群,优化了基因克隆策略,进而通过实验克隆了atrophin-1样基因、ataxin-2样基因、M6ba、二甲基甘氨酸脱氢酶样基因、间隙连接蛋白beta-3和间隙连接蛋白beta-5等六个人类新基因。该论文重点介绍了atrophin-1样基因、M6ba、间隙连接蛋白beta-3的克隆情况:将齿状核红苍白路易氏体退行性病变(DRPLA)致病基因(Atrophin-1)cDNA序列对EST数据库进行同源性比较,得到与Atrophin-1显著相似的EST 25个,构建5个EST重叠群。根据其中的3个EST重叠群设计引物,对cDNA文库扩增,PCR法制备探针,筛选人cDNA和gDNA文库。cDNA克隆经测序,拼接,获得含完整编码区的cDNA序列4.6kb(命名为Atrophin-1样基因,Atrophin-1 like gene),其中有一个303bp的阅读框架。基因编码区由9个外显子构成。基因组DNA克隆经荧光原位杂交定位于1p36。人、鼠Atrophin-1基因家族各成员的比较分析显示,均为亲水性较强的蛋白质,其C端保守性较强,有两个酸性与碱性氨基酸交替区。DRPLA、Haw River综合症与Atrophin-1中CAG的过度重复相关,而人类Atrophin-1样蛋白中不含长的多聚谷氨酰胺残基(其基因中只有三次CAG的重复)。蛋白脂蛋白(PLP)基因突变导致Pelizaeus-Merzbacher病(PMD)和部分X-连锁的痉挛性截瘫。Olinsky等克隆了M6ba的部分序列(U45955),该基因认为是PLP基因家族成员之一。课题组以巢式PCR得到一约300bp的片段,测序为与U45955的5’端局部重叠的新序列,拼接后得到1.642kb的序列,其中含有可编码265个氨基酸的开放阅读框。该阅读框经对脑cDNA文库PCR产物的测序确证(命名为M6ba)。M6ba的cDNA序列及其编码氨基酸序列与小鼠中M6b基因和蛋白质序列显著相似(分别为91.2%和93.4%一致)。Northern杂交的结果及cDNA文库PCR扩增、EST数据库分析的结果提示M6b基因至少存在三种剪接形式。M6ba基因与PLP基因显著相似,并且两蛋白质在所有疏水区高度保守。M6ba基因结构的分析,显示此基因编码区由7个外显子构成。间隙连接蛋白以六聚体方式构成相邻细胞间的通道,在细胞的生长、分化、增殖调控中都发挥着重要作用。已有研究显示间隙连接蛋白基因家族成员的突变常与遗传性疾病相关。该工艺通过同源EST分析克隆了人类间隙连接蛋白beta-3基因(GJB3),并通过荧光原位杂交将此基因定位在人类染色体1p34。而有一型常染色体显性遗传的神经性耳聋也定位于同一区带。两个双侧对称性高频听力减退家系的突变分析显示,该基因分别有错义和无义突变的杂合子存在,并且突变与疾病的发生明显相关。该发现表明GJB3基因的突变可能是导致以双侧对称性高频听力减退为主要特征的神经性耳聋的病因。通过单纯的信息综合分析课题组还鉴定了人类auxilin基因的部分cDNA序列,并将该基因定位到人类染色体1p31。Auxilin蛋白诱导Hsp70c蛋白与笼形蛋白的结合,在真核细胞衣被小泡脱衣被的过程中扮演了重要的角色。Auxilin基因的EST分析,显示此基因在多种组织中表达而非以往研究认为的只在脑组织中表达。说明在计算机上克隆、分析基因已具备了比较成熟的条件。通过以上基因的克隆,以及对已克隆基因与遗传病关系的分析,课题组提出了“基因家族-候选疾病克隆策略”-选择多个成员与遗传病相关的基因家族,克隆、定位其新成员,在其定位点附近选取已连锁定位的“候选疾病”,进行基因的突变检测,以期最终克隆新的遗传病致病基因。通过“基因家族-候选疾病克隆策略”克隆新的致病基因将是一条很有潜力的研究路线。
[成果] 0100110054 湖南
R739.6 应用技术 医学研究与试验发展 公布年份:2001
成果简介:将中国人鼻咽癌细胞株(CNE2)DNA转染对TPA敏感的小鼠上皮细胞株JB<,6>(P<'+>)CL41,从第三轮转染所获得转化细胞构建的基因组DNA文库中筛选出10个Alu阳笥克隆,对其中一个克隆进行了详细研究。这个克隆的DNA导入JB<,6>P<'+>细胞后有转化活性,钭此DNA段命名为Tx基因。初步证明,Tx基因与H-ras,K-ras,N-ras,src,myb,jum,myc,fos,raf或imt-2等癌基因均无同源性,燕发现这个基因在CNE2细胞株中有一个1.3kb的表达产物。随后运用岛枪法对Tx序列中与转化作用有关的一个2.8kbEcoRI片断作了核苷酸序列分析(全长2737bp),研究其开放阅读架(ORF)。与基因数据库中的DNA片民已知人类基因无同源笥。同时用荧乐标记的原位杂交(FISH),以2.8kb的Tx基因片段为探针与正常人外周血淋巴细胞中期染色体进行原位杂交,将该基因定位地8q23-24.1。Tx基因可能是一种 人癌基因。
[成果] 0801242097 湖南
[Q34, R714] 应用技术 医学研究与试验发展 公布年份:2000
成果简介:细胞遗传学研究的主要对象是染色体,染色体是基因的载体,染色体异常所致的疾病称为染色体病。1972年,夏家辉就在国内最先引进和改良了瑞典科学家GASPERSSON1970年发现的人类染色体显带技术,并于1974年最先提出了中国人G显带染色体模式图,在国内最先开设了染色体病遗传咨询门诊。二十六年来,该研究紧跟国际前沿建立了皮肤、羊水、绒毛、永生淋巴样细胞培养技术,细胞遗传学方面的G-11、C、Q、DA/DAP1、N显带、LX、X小体、Y小体、FRA(X)、高分辨等技术以及分子细胞遗传学的染色体原位杂交技术(FISH),完成了6893例门诊病人的染色体检查,对一些基础理论问题作了深入研究,查明了我国新生活婴中染色体异常的发生率为0.73%,与此同时为了配合我国有关“控制出生人口数量,提高出生人口素质”的计划生育政策的贯彻执行,在总结个别进修的基础上,于1980年开始在中央卫生部领导下举办了以妇产科主治医师为主体的半年一届的“全国细胞遗传学产前诊断专修班”,推广了染色体病的诊断和产前诊断技术,至今培养的学生共865名,他们来自除西藏、台湾以外的各省市,这些学员回单位后在临床广泛开展了染色体病的诊断和预防工作,从而使我国从零开始建立了“临床细胞遗传学”这一崭新的学科。
[成果] 0801241506 湖南
[Q78, R73-3] 应用技术 医学研究与试验发展 公布年份:1998
成果简介:该项目属于分子细胞遗传学科学技术领域。建立了可用于活性基因区域DNASE-1敏感区在人中期染色体上定位的BRDU完全替代的染色体原位切口移位的B带技术;系统阐明了B带技术显带机理;建立正常人淋巴细胞,上皮细胞和成纤维细胞的染色体B带核型图谱,并对其带型差异进行系统比较;应用B带技术证实肿瘤始动部位假说;通过对DNASE-1敏感区稳定性的观察,阐明表达活跃的基因位点遗传稳定性的分子基础。国际首创了用于活性基因在人中期染色体上定位的B带技术;首次系统阐明了B带及B带技术的产生机制和原理;B带技术能高分辨地显示基因组中活跃表达的基因区;B带技术能有效地为恶性肿瘤、遗传性疾病相关基因的克隆与分离提供简便而快速的分子细胞遗传学手段;B带技术所绘制的人淋巴细胞,上皮细胞和纤维细胞的B带图谱为研究基因组稳定性提供了极为重要的研究标准。哈尔滨医科大学遗传所,华西医科大学肿瘤所等单位将其移植于该研究室,先后用B带技术对肺癌,鼻咽癌细胞基因组中的活性基因区进行了定位和分子细胞遗传学的研究。B带技术对北京大学生物系尚克刚同志“应用BRDU抗体技术显示BRDU标永的染色体和DNA”的研究提供了重要启示。经查SCI和部分中文杂志,该项目已被引用40次。
[成果] gkls021266
R15 应用技术 公布年份:1992
成果简介:观察6 ̄82岁健康男性的血清过氧化脂质,红细胞超氧化物歧化酶和全血谷?胱甘肽过氧化物酶,Cu,Zn,Se与增龄的关系。发现60岁以上老人的?LPO较儿童组、青少年组、中年组及老年前期组显著增加,而SOD、G?PX、Cu、Zn、Zn/Cu显著降低,各年龄组的血Se含量无显著性?差异。经相关及回归分析,年龄与LPO呈正相关,与GPX、Zn/Cu?呈负相关,与LPO及GPX的关系最密切。提示:LPO促进衰老,而G?PX、SOD、Zn,Cu抑制衰老。?
[成果] gkls021783
R31 应用技术 公布年份:1992
成果简介:该研究通过小鼠胚胎取样、冷冻保存、体外发育和单卵裂球体外增殖以及染?色体制备技术等方面的研究,成功地建了4-细胞鼠胚遗传学诊断模型。发?明了一种从4-细胞胚胎中吹出单卵裂球的活检方法,避免了单卵裂球取出?时因过度变形造成的单卵裂球损失;建立了单裂球和输卵管联合体外培养系?统,提高了单卵裂球体外增殖率,为染色体制备打下了基础;建立了用微型?胚泡制备染色体技术,为着床前胚胎遗传学诊断打下了基础。?
[成果] 942373 湖南
[Q51, R55] 应用技术 [医院, 自然科学研究与试验发展]
成果简介:该成果采用了高分子量DNA的制备、聚合酶链式反应选择性扩增β-珠蛋白基因片段、探针标记、分子杂交和放射自显影等技术。建立了PCR扩增单拷贝基因的直接双链基因组测序技术及绒毛和羊水的采集方法。建立了大规格的层析柱纯化血红蛋白组分的方法,并运用离子交换法和超滤技术浓缩分离的血红蛋白稀溶液。改进了微晶纤维素薄层指纹法,采用高压电泳取代常规电泳。采用高效液相色谱进行氨基酸组成分析,并用邻苯二甲醛显色,用DABITC/PITC双偶联法测序。建立了“薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦”技术,并用于血红蛋白病的诊断。
[成果] 99022268 湖南
R730 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:从人鼻咽癌(NPC)活检标本、裸鼠/SCID鼠移植感染EBV(Epstein-Barr病毒)的人胚鼻咽上皮和创制EBV致NPC的转基因鼠模型三条途径,采用分子生物学、分子病理学、分子遗传学新技术,病理标本与实验研究、动态与静态研究相结合,阐明EBV诱发NPC的阶段性及其分子生物学特征,特别是鼻咽部感染EBV的敏感细胞、TPA受体(PKC)基因突变、p53蛋白的失活、端粒酶的活化、抑瘤基因的变化等,以创立鼻咽上皮癌变的分子模型。
[成果] 6000008650 湖南
R13 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:铅中毒是常见的职业病之一,肾脏是铅作用的重要靶器官。由于肾脏有较强的代偿功能,常用的一睦肾功能的检测,不能揭示早期和轻微的肾损害,一旦这些指标出现异常的病变,往往到了比较严重的程度。故探讨筛选新的能反映肾脏病变的早期检测指标,是一个急需解决的问题,此对预防铅毒性肾损害及铅中毒防治具有十分重要意义。该课题在国内首次对铅毒性肾损害进行了早期监测的实验和职业流行病学调查研究,探讨了铅作业工作肾损害早期生物学监测指标及其变化特点,提出尿NAG、γ-GT,及β2-微球蛋白作为铅性肾损伤早期监测指标。还分析了不同工龄及铅吸收、铅中毒与尿中各项指标的关系。
[成果] 6000009785 湖南
R55 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该项目是“血栓形成机理形态学的系列研究”,采用聚乙烯管插入动脉,建立“实验性动脉血栓形成模型”,采用电镜、电镜细胞化学技术观察血小板血管内皮等微结构的动态改变,采用同位素技术测定血小板、内皮分子标志物的动态改变。结果表明,该成果为阐明血栓形成机理提供了实验形态学依据,为抗血栓药物的筛选提供了实验指标。结合研究结果应用行专家邀请合作编写专著3本。该研究具有一定的基础理论意义,也具有一定的临床指导意义和应用价值。
[成果] 6000009991 湖南
[R12, X70] 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:液化气是我国居民生活的主要燃料。关于液化气燃烧造成室内空气污染国内外已有报导,但对人体健康影响报导较少。该项目进行了液化气燃烧对室内空气污染状况,动物亚慢性毒性实验和现场流行病学调查。研究结果说明液化气燃烧可造成SO<'2>、TSP、CO<'2>和总烃类化合物的室内空气污染,其中以烃类化合物的污染较严重,经3个月动物亚慢性毒性实验,说明液化气燃烧废气对小鼠胞免疫功能有一定影响。小鼠骨髓嗜多染红,细胞微核率高,雄鼠精子畸形率增加,说明废气中存在致突变物。动物睡眠时间延长,说明废气中存在某种抑制神经调节功能的物质;流行病学调查结果表明,废气可引起鼻咽部、眼粘膜的刺激症状,说明对人体存在致突变的危险性。
[成果] 6000010046 湖南
R32 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该课题从整体、离体器官、细胞及基因四个水平研究了热休克反应与机体、细胞内源性抗损伤能力的关系。首先应用不种属动物(大小鼠、牛、鸡)从三个层次(整体、离体器官、细胞)探讨子热休克反应对不同致损因子(内毒素、油酸、缺血--再灌流损伤、烧伤及过氧化氢)所造成的器官、细胞锅伤的保护作用,然后从基因表达水平对保护作用的机制进行了探索,发现该保护作用与热休克反应诱导的细胞中热休克蛋白基因从转录和翻译两个水平增强,细胞抗氧化能力增加,并产生某种“支铁”作用有关。该项目全面系统地探讨了热休克反应对脏器、细胞损伤的保护作用及其机制,通过检索查新国内外尚未见类似系统报道,填补了疾病防治领域中的空白。
[成果] 6000012508 湖南
R55 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:人工红细胞G6PD陷症是人类遗传性酶病中发病率最高的一种常见病和多发病。该研究应用薄层等电聚焦技术测定人工红细胞G6PD同工酶,发现了16条同工酶带,其分辨率显著高于国内外同行学者研究水平。在此基础上又作了改进,使该方法更简便、快速,加样量少,其结果仍与原法一致,形成独特的微量法检测G6PD同工酶技术。该研究还研制了一种定性筛查G6PD缺陷症的方法及诊断盒。应用该法不仅具有取血量少、操作容易、结果迅速可靠的特点,而且可直接在农户家中检测。这与国内外学者已建立的11种定性筛查法比较,是一技术上的突破,它可直接应用于症疫防治发病现场,保证疟疾防治工作顺利开展。
[成果] 93201804 湖南
R18 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该课题对卡介菌成分及其作用机理进行了深入研究,对卡介菌多糖核酸的提取工艺作了重大改进,对多糖核酸组分进行生物学测定和分子量测定。并通过动物实验确定所提组分是一种小分子多糖核酸,在体内能激活巨噬细胞,增强非特异性T细胞转化并诱发γ-干扰素、白细胞介素2及MIF的产生,使机体的吞噬作用加强。在药物安全工作方面进行了急性、亚急性和慢性毒性试验,证明该品是安全的。经临床治疗455例观察,对初治肺结核痰阳转阴、病变吸收、空洞闭合有显著疗效。此外对流感、感冒、哮喘、慢性支气管炎等亦均有疗效。
[成果] 93201808 湖南
R44 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该课题建立了一种诊断血吸虫病的“成虫一卵一尾蚴”三联抗原酶免疫测定法。其原理是血吸虫三个主要阶段,即成虫、虫卵、尾蚴既有共同抗原,又有特异抗原。经测试,89.4%粪卵阳性病人对这三种抗原同时表现出阳性反应,而非疫区皮试阳性人群中仅4.7%对三种抗原呈阳性反应;此外,11%的非疫区皮试阳性者,3.9%献血员都表现出对一种抗原的阳性反应,无一例献血员或其他血吸虫病患者血清对三种抗原皆具有阳性反应。该结果提示三种抗原同时呈阳性反应的特异性优于一种抗原,即以三种抗原同时出现阳性反应作的为阳性标准,则试验的特异性达100%,该试验结果可满足不同防治阶段、不同流行特点的疫区、不同目的防治措施所提出的对查病方法的敏感性和特异性的不同要求。该试验费用低,易观察结果,易于推广。
[成果] 90207062 湖南
G43 应用技术 其他教育
成果简介:该发明涉及一种画面胶片投影教学装置,是使用一画面分解活动进行授课的投影片板。该投影片板由框底板、盖板、胶片、拉线、橡皮筋等组成。在现有的教学领域中,投影教学方法已广泛应用于大中学校,尤其是采用画面投影进行示教,有直观理解,容易掌握知识的效果,而且便于携带,深受师生喜爱。但是,目前国内所有采用投影仪进行教学的图象胶片,全是单张呆板不动的画面胶片,若要分解说明某些专业内容,或者需要用动态形式讲解时,则往往需要多张单独不同图象形状的投影胶片来进行讲解,这样比较麻烦而且不易理解。该投影片板不仅避免了教师授课费时多语的劳累,而且还能获得更好的教学效果。该成果专利号89212205。
[成果] 99049243 湖南
[Q78, R739.6] 应用技术 [医院, 自然科学研究与试验发展]
成果简介:该成果采用EST介导的定位候选克隆、cDBA代表差异显示法,并运用生物信息学,成功地克隆了9个与鼻咽癌相关的新基因。现已完成了这9个基因初步的功能研究,包括NPC活检组织中的表达、点突变,其它肿瘤中的表达,多种正常组织中的表达,部分基因的细胞传染等。这些初步的结果显示:NAG-8基因在NPC病人的基因变。综在胃癌、肾癌中表达,提示NAG-8可作为临床分子诊断的标志物。NAG-4基因在Hela S3中细胞株中存在着赖氨酸的移码突变,NAG1、NAG2基因的转染试关基因(群)为形成NPC基因组学理论或NPC多基因网络学说奠定了坚实的基础,同时可望筛选出具有临床应用价值的靶基因,应用领域或产业:临床医学。
[成果] 90207533 湖南
TH7 应用技术 医疗仪器设备及器械制造
成果简介:该发明涉及生物组织切片技术领域,更具体地说是在生物电镜细胞化学研究中对组织进行薄片切片的装置。该装置是利用现有国产或进口而价廉的石蜡切片机,装配一种细胞化学组织切片台和刀架,可任意调节选择组织切片的不同厚度,快速切出精细均匀、电镜观察清晰的细胞化学组织薄片,解决电镜细胞化学研究中的难点。该装置由盖圈、平台、台心、紧固螺钉、限位螺钉、台心螺柱、板手、滑动轨、弹簧、保护杆、刀片压板、刀体等组成样品台和刀架,通过螺钉紧固、弹簧作用、滑轨移动方式,将样品台、刀架固定在石蜡切片机上,可获得精细、厚薄均匀、符合要求的组织切片,为电镜观察细胞化学形态提供清晰的图象组织切片。专利号88218735。
[成果] 920814 湖南
R51 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该成果建立了红细胞膜血型糖蛋白(GP)的免疫印迹技术,具有灵敏度高、操作简便和效果稳定等优点。采用该方法,筛查了白人、黑人、黄种人的红细胞膜GP,比较观察了非人灵长类动物红细胞GP的物种特点;检测了一些血液病患者的红细胞膜GP异常,较系统地揭示了红细胞膜GP的多态性以及其同人种和动物进化的关系;阐明了GP在恶性疟原虫侵袭人红细胞中的生化变化以及它和某些红细胞膜疾病的相关性。该成果对遗传、优生、人口迁移等有指导意义。
[成果] 93201789 湖南
R59 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该课题组对217名健康男性体内自由基反应产物一过氧化脂质与抗氧化酶SOD、GSH-px及与之有关的微量元素铜、锌、硒等在血及红细胞中的含量进行测定、用多元回归及逐步回归方法处理分析,评定这些指标的增龄性变化,并探讨自由基反应与衰老的关系。结果发现:老年时抗氧化酶SOD及GSH-px活性及血锌、铜、锌/铜含量急剧下降,过氧化脂质增加、蓄积,其中与年龄关系最密切的是过氧化脂质,其余依次为GSH-px、SOD、锌及铜LPO促进衰老。该研究对各项指标相互关系和影响的分析论证科学性强,对自由基反应与衰老关系的研究较为深入,具有重要的基础理论意义及应用价值。
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