成果简介：根据该项目的目标和计划，通过研究Wnt/β-catenin细胞内信号通路中，筛选能够阻断Dkk-1蛋白，上调Wnt信号通路，促进成骨细胞分化成熟，促进骨髓基质干细胞向成骨分化的途径的有效化合物和药物，防治糖皮质激素性骨质疏松，为寻找抗骨质疏松新药与新治疗方法提供实验依据，并为临床转化研究奠定科学基础。项目已完成包括：①用成骨细胞系、骨髓基质干细胞为靶细胞，以Wnt/β-catenin信号通路中负性蛋白DKK-1和正性蛋白β-catenin的基因表达，在体外筛选能抑制DKK-1的有效候选化合物，结果发现了丹参多酚类化合物(中药丹参的主要水溶性抗氧化成分丹参素和丹参酚B可以对抗高浓度糖皮质激素诱导的Wnt/β-catenin紊乱，下调DKK-1，上调β-catenin的mRNA表达，从而促进成骨细胞分化，促进骨基质和骨矿的形成；②通过糖皮质激素诱导的骨质疏松模型，在动物体内观察候选药物的抗骨质疏松机制。结果糖皮质激素诱导的骨质疏松大鼠骨形成明显受到抑制，骨吸收变化不大，骨量下降，骨生物力学性能下降，丹参素和丹参酚B有效对抗糖皮质激素诱导的大鼠骨质疏松，其机制通过促进骨形成，抑制骨髓脂肪分化，促进骨髓微血管形成和开放，该作用可能与抑制DKK-1，上调β-catenin的mRNA表达有关；③研究抗DKK-1单克隆抗体分别对骨细胞和骨质疏松动物模型的作用，比较候选药物丹参素和丹参酚B的作用，从而进一步阐明阻断Dkk-1蛋白上调Wnt信号通路防治糖皮质激素性骨质疏松的理论机制。结果发现抗DKK-1抗体可以完全阻断糖皮质激素诱导的MC3T3-E1细胞的DKK-1mRNA的表达，丹参酚B的作用与抗DKK-1抗体相似，但效应比抗DKK-1抗体弱。抗DKK-1抗体体内给药3个月后，能对抗糖皮质激素诱导的大鼠骨形成抑制作用，增加骨矿沉积率，增加骨密度，提高骨生物力学性能，提高骨质量；④以上研究得出结论(成果)：通过以Dkk-1蛋白靶点的研究，发现中药丹参的主要水溶性抗氧化成分丹参素和丹参酚B可通过阻断Dkk-1蛋白上调Wnt信号通路防治糖皮质激素性骨质疏松，其优势是可以避免生物大分子抗体的昂贵、副作用多的缺点，成为防治骨质疏松的新的治疗手段。丹参素和丹参酚B是否用于临床实践有待进一步研究。

成果简介：prelamin A的堆积和异常加工均导致细胞衰老，其分子机理可能与prelamin A的结合蛋白相关。本项目采用酵母双杂交方法筛选得到41个prelamin A和lamin A结合蛋白，包括Kin17、COMMD1、Fam96B、Narf等。一对一的回复杂交结果显示仅Narf为prelamin A特异性结合蛋白。荧光共定位分析结果表明prelamin A和Kin17、COMMD1、Fam96B、Narf均能定位于核纤层。免疫共沉淀实验证明Kin17、Fam96B与laminA/C 在体内有相互作用。过表达Kin17降低HEK293细胞中laminA/C的表达水平。COMMD1主要分布在细胞质而少部分定位于胞核中，与prelamin A共转染后COMMD1表达产物主要位于核膜附近，同时过表达COMMD1能够影响细胞活力。Fam96B的表达在复制性衰老组和H2O2诱导Wi-38细胞早衰组中都明显下调，提示抑制Fam96B的表达可能会诱导Wi-38细胞衰老。RNAi结果显示沉默Fam96B可以诱导Wi-38人胚肺成纤维细胞衰老。这些结果表明prelamin A的结合蛋白与细胞衰老。

成果简介：发现多个与AD发病风险相关的炎症相关基因多态性。RAGE G82S、XBP-1-116C/G、VEGF-2578C/A、Bin1 rs744373增加AD的发病风险。PICALM rs3851179、VEGF-1154G/A降低AD的发病风险。RAGE G82S、XBP-1-116C/G与认知功能更快恶化相关。发现GSK-3β调节Aβ的生成的新机制。抑制GSK-3β增加AMPK活性，减少Aβ的生成，并且不依赖于BACE酶。发现治疗AD的潜在药物及其机制。bGFG抑制神经干细胞凋亡；丹参酮、米诺环素，抑制炎症，保护神经元，提高AD大鼠学习记忆能力。报道了AD患者体内存在致炎和抑炎失衡。

成果简介：(1)发现G1862T变异在急性重型乙肝患者中的发生率明显高于慢性携带者用我们构建的错配聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术，检测了HBV基因前C信号酶裂解位点(G1862T)变异在重型乙型肝炎、乙型肝炎无症状携带者(AsC)、乙型肝炎病毒感染后肝硬化(LC)以及慢性活动性肝炎(CH)病人中的发生率，并与测序结果比较，符合率为100%。四组病人中1862(G→T)变异发生率具有显著差异，提示1862(G→T)变异与乙型肝炎病毒引起的急性重症肝炎或慢性肝炎急性加重有关。 (2)细胞表达以及体外翻译实验证实，G1862T变异显著影响HBeAg前体加工成分泌性的HBeAg通过体外定点突变构建构建了l862(G→T)EBO-Pre/C真核表达质粒并转染HepG2细胞进行稳定表达。细胞培养上清用ELISA检测HbeAg，细胞内HBeAg及其前体用westernblot法进行检测，结果细胞培养上清中HBeAg检测为阴性，westernblot证实G1862T变异并不影响HBeAg前体的合成，但影响HBeAg前体加工成分泌性的HbeAg，也导致感染者血清HBeAg阴性。通过构建G1862T野生株和变异株表达载体pTM3，进行体外翻译，结果证实，Gl862T变异显著影响HBeAg前体加工成分泌性的HBeAg。

成果简介：(1)建立了一种新的基因分型方法：通过比较GenBank中223株HBV各基因型全序列的S基因氨基酸及核甘酸序列，设计限制性内切酶BsrI、StyI、DpnI和HpaII来鉴别HBVA-F基因型，经与国外建立的前S区PCR-RFLP基因分型方法相比，结果一致。本分型法不但克服了国外PCR-RFLP方法学存在的参考序列少，代表性略差和酶切图谱复杂等缺点，而且灵敏度高，特异性强，且酶切图谱简明单一，易于识别，对于以B、C基因型为主的我国，一步法即可鉴别出90%以上的标本。因此该分型法对于亚洲、特别是我国HBV基因型的鉴别具有非常明显的优势。 (2)运用PCR-RFLP基因分型以及克隆测序方法 对我国大陆地区9个省市1096例慢性乙肝病毒感染者血清样本进行了大规模调查。结果发现在我国大陆地区流行的HBV基因型有A、B、C、D四种，所占比例分别为1.2%、39.3%、50.2%、8.1%。各地区的HBV基因型分布也大不相同。在北方地区，以基因型C为主，占 81.6%：南方则以基因型B为主，基因型C也占相当比例。两种主要的基因型B和C的临床特征比较发现，感染HBV基因型B的人群平均年龄较感染基因型C者小；随年龄增长，基因型C在感染人群中所占比例逐渐增加。在年龄大于30岁的感染者中，感染基因型C者e抗原阳性率显著高于基因型B组。两组之间在肝功能改变、临床诊断以及病理变化评估方面未见有统计学差异。序列分析显示我国HBV基因型B毒株均为基因型C特征前C/C基因重组体。本研究基本阐明我国大陆地区HBV基因型地理分布：提示尽管基因型B较基因型C有较早的e抗原清除，两者之间临床结局并无显著差异，这可能与在中国地区流行的基因型B均为与基因型C前C/C重组体有关。

成果简介：通过对2565份分别来自慢性肝病患者、隐源性肝硬化患者、血液透析者以及献血者血清标本乙肝标志物的检测，共收集了46例乙肝病毒表面抗原(HBsAg)阴性HBV感染者血清标本，经克隆测序后发现S基因存在多种突变，包括：QlOlK、T115A、Kl22N、T123A、T126N、Q129N、G130R、T131I、M133T、F134L、C138Y、K141E、P142S、G145R、Nl46S、C147F/R，其中有7种联合突变为国际上首次报道。我们构建了这7种突变体的真核表达载体，并转染Cos7细胞，建立了这7株HBsAg变异株的稳定表达细胞系。分别用酶联免疫法 (ELISA)、放射免疫法(RIA)以及单克隆抗体结合试验对细胞表达的HBsAg的抗原性进行检测，结果除一例可检测到较弱的阳性外，其余6株均检测不到HBsAg的存在，说明新发现的HBsAg联合突变均对HBsAg的抗原性有明确的影响，是造成HBsAg阴性HBV感染的直接原因。本研究结果提示：如果这些自然发生的突变株能够逃避与中和抗体的结合，或者与中和抗体的结合性下降，同时这些毒株又具有与野生株相同或相近的复制能力，那么它们就有可能感染接受了疫苗的个体，随着疫苗接种范围的扩大，它们就可能成为更为普遍的毒株。另外，由于病毒的变异，使其与抗体结合的敏感性下降，如果这些变异的HBsAg在血清中低于一定程度时将不能被检出，引起供血筛检过程中的漏检，将会造成该毒株在人群中的流行。研究结果同时提出，当前如何诊断HBsAg阴性/HBV DNA阳性HBV感染并筛除阳性供血是临床和流行病学面临的新课题，具有重要的现实和临床意义。

成果简介：运用我们最早建立的PCR-RFLP快速筛检YMDD变异的方法，并对临床拉米夫定治疗患者用药过程中的耐药情况进行检测，发现中国拉米夫定治疗患者的耐药发生率在用药一年、二年和三年依次为12.5%(10/80)、37.3%(19/51)和83.9%(26 /31)；耐药的发生与用药时间成正相关，而与患者性别、治疗前病人HBeAg状况及ALT水平无明显关联，变异发生后会引起ALT水平明显升高。耐药主要是由P基因YMDD变异所引起，部分伴有YMDD上游L526M突变。研究基本阐明我国拉米夫定耐药突变的发生规律，可指导我国慢性乙型肝炎患者合理进行拉米夫定抗病毒治疗。 系统研究了中国乙肝病毒感染者核苷类似物耐药毒株的特点和临床耐药监测模式，就国内开展耐药突变研究的方法学和注意事项，提出适合我国国情的耐药监测方法，并应邀以专家论坛或述评的形式，分别在《中华医学杂志》、《中华内科杂志》、《解放军医学杂志》等刊物上提出了指导性的意见，对国内该领域的发展起到了推动作用。

成果简介：目的：对职业紧张量表的结构效度进行验证。 方法：随机抽取某医院医护人员318人作为样本，对OSI-R进行效度评价。采用验证性因子分析的方法验证OSI-R的结构效度。 结果：ORQ、PSQ和PRQ的各项目以及3个问卷的整体结构均比较合理，基本符合OSI-R的理论构建。多数条目在相应项目上的因子载荷均学意义，某些项目的条目对其他项目具有交叉度量性。 结论：OSI-R经适当的修订后，其结构效度会进一步提高，更好地作为具有统计学意义（P＜0.05），但某些项目的条目与该项目之间的载荷不具有统计职业紧张的测量工具。

成果简介：血栓性疾病的发病是遗传因素和多种环境因素共同作用的结果，凝血因子基因的单核苷酸多态性(SNP)可能与年龄、肥胖、个人生活习惯(饮食、吸烟、运动)等多种因素协同作用影响凝血因子的水平，某些凝血因子的基因多态性变化可能成为血栓性疾病的遗传易感性或保护性因素。该项目调查β纤维蛋白原(Fgβ)-455G/A、-148C/T、448G/A基因多态性，凝血因子XⅢ(FXⅢ)Val34Leu变异和凝血因子V(FV)Leiden基因突变在不同人群中的分布频率，研究三种凝血因子基因的SNP与血栓性疾病发病的关系。该研究用比浊法测定血浆Fg浓度，低渗溶解红细胞快速抽提法从外周血白细胞中提取基因组DNA。PCR-RFLP技术确定β-Fg-455G/A、-148C/T、448G/A、FXⅢVal34Leu等SNP位点的基因型，PCR-SSP技术检测FVLeiden基因突变。PCR-SSCP、DHPLC(热变性高效液相色谱分析仪)等技术进行遗传性FXⅢ缺乏症患者的家系调查。用基因记数方法计算相对等位基因频率，方差分析及t检验进行样本均数比较。各群体之间等位基因频率的差异及基因型Hardy-Weinburg平衡吻合度采用X<'2>检验。研究成果主要有：(1)调查比较不同地区、不同种族人群的凝血因子基因多态性分布频率。(2)发现年龄、吸烟因素影响血浆Fg水平，且与Fgβ148C/T基因多态性有协同作作用，T<'-148>等位基因携带者更易受环境因素影响致血浆Fg水平升高而成为血栓性疾病的易感人群。(3)发现FXⅢVal34Leu变异在中国人群中非常罕见，与缺血性心脑血管疾病没有关联；还发现1例遗传性FXⅢ缺乏症患者A链基因外显子5存在第603-606位AAGA缺失(603-606delAAGA)引起的移码突变，并从DNA和蛋白质水平证实了这一新的发现，该新发现国内外仍未见报道。(4)发现FVLeiden突变在中国至少在粤西地区不是一种常见的遗传缺陷。经检索，上述发现国际上尚未见报道。从调查Fg、FXⅢ和FV基因多态性在不同人群中的分布频率入手研究凝血因子基因多态性与血栓性疾病的关系，是该项目研究的特点。研究结果填补了国内有关不同地区、不同种族人群凝血因子基因多态性频率分布研究的空白；同时FXⅢA链基因突变的新发现，为人类基因组多样性研究积累了宝贵资料。研究成果已首先在粤西地区和海南省小范围临床应用，开展了Fgβ-455G/A、-148C/T、448G/A基因多态性检测项目的筛查，及早发现部分人易患血栓性疾病的危险因素，对降低血栓性疾病的发病率产生了一定社会效益。部分成果也得到国内多家单位的应用，已发表论文共被他人引用36次。

成果简介：该研究想通过系统分析LP(a)、LPO及RCD在心房纤颤(AF)血栓形成中的作用，从更高层次揭示心房纤颤导致血栓形成机理，旨在为心房纤颤血栓形成的早期预防提供一些有临床指导意义的实验室资料。研究提示，Lp(a)升高、LPO升高及RCD的下降是心房纤颤血栓形成的危险因素。在国内外，率先完成了风湿性心房颤动和非风湿性心房颤动血栓形成LP(a)、LPO及RCD的研究。在国内第一个完成了老年非风湿性心房颤动脑发生缺血与脂蛋白(a)的关系研究。该研究成果已经应用于湛江部分地区。结果提示，降低LPO水平及提高RCD可预防心房纤颤血栓形成，使一些患者免除了身心上和经济上的损失。

成果简介：该项目采用髂外动脉下段及股动脉上段结扎术治疗感染性假性股动脉瘤是一种新的治疗方法。97年1月采用自身大隐静脉移植术，发现大隐静脉无法满足替代血管的要求。97年6月采用6 mmePTFE人工血管移植手术，由于大多数患者瘤体较大，人工血管很难甚至无法完全避开瘤体及瘤腔。01年7月采用髂外动脉下段及股动脉上段结扎术。并加强术前、术后护理工作的培训。目前在各级医院该疾病的主要手术方式均采用股动脉及髂外动脉结扎，反映效果很好，已基本成为该疾病的标准术式。应用情景远大。

成果简介：本成果采用了基因转染、流式细胞术、RT-PCR、蛋白印迹(Western blot)、电镜技术、荧光染色等多项技术和方法，首次在国内系统地分析了bcl-xs基因、bcl-xL反义寡核苷酸、某些药物和生化因素等对人低分化型鼻咽癌细胞CNE-2Z的影响，特别是研究了线粒体和Caspase对凋亡的调控机理，为开辟鼻咽癌的基因治疗途径和筛选抗鼻咽癌的药物提供了理论和实验依据。

成果简介：该项目的主要科学价值在于首次发现粤产草药、蕨类植物半边旗具有抗癌活性，并围绕该发现对半边旗进行了全面、系统、深入的研究：①首次发现并证实半边旗具有显著的抗癌活性，毒副作用轻微，并且与其他化疗药物联合应用具有增效作用。②首次发现全新的抗癌活性成分5F、6F及A，均为二萜类化合物，并确定了上述活性成分的分子式、分子量及化学结构。③采用构效分析方法，确定了抗癌活性成分的效价，从而为进一步瞄准目标化合物进行后续研究打下理论基础。④采用现代分子生物学方法，阐明了抗癌活性成分5F、6F的作用机制，证实了半边旗抗癌活性与细胞凋亡的诱导、细胞增殖的抑制及细胞侵袭的阻断关系密切，并涉及到众多与细胞凋亡、增殖、侵袭相关的细胞因子的表达变化。⑤通过建立动物模型，分析探讨了5F的药代动力学过程。⑥应用中药现代化的先进手段，采用超临界CO<,2>萃取与大孔吸附树脂吸附分离相结合，高效液相色谱大气压化学电离源质谱联用(LC-MS)等方法，建立了半边旗抗癌活性成分的分离、鉴定标准。⑦将半边旗抗癌活性成分制成多种剂型的尝试。⑧首次将半边旗的植物来源、药材性状、显微结构及理化性质作了详细系统研究，并成功地将其录入广东省药材标准。⑨该项目经过多年研究，发表了100余篇实验结果论文，对从事抗癌药物研究的同行可能会有一定的借鉴、参考价值。综上所述，该项目首次发现粤产草药、蕨类植物半边旗具有抗癌活性，而其抗癌活性成分也极具成为抗癌新药的巨大潜力。

成果简介：项目为自选课题，建立于综合20多年的专业工作基础上。该项属于临床应用研究。由于医学检验飞跃式发展，研究不断深入，新的检验项目越来越多，因而需要一本简明的，而又能反映目前检验医学高新技术和实用性较强专著，供从事临床医疗、教学和实验室的工作人员应用。我们紧扣时代的要求进行研究编写《临床检验诊断学》，全书分为《体液、分泌物及排泄物检验》、《血液学检验》、《临床生物化学检验》、《免疫学检验》、《微生物学》和《检验结果的分析与选择应用》等6篇，50章，插入彩图118幅。内容系统、全面、新颖、实用，语言文字描述要通俗深入浅出、表达准确，反映当代检验医学研究最新的研究成果。查询结论：该项目在内容、插图等方面较已有专著更新、更全面、更多，插图的丰富尤为突出达到国内先进水平。本书出版后得到广东省临检中心推荐。据出版社证明2次印刷6000册将近销售完毕，读者遍及全国各级医院的临床医师、护士等医务工作者和全国各高等医学院校的教师、学生和个体开业的医务人员，并给予较高的评价。本著作出版不久即被有关的杂志引用，如《中国医院药学杂志》、《理化检验-化学分册》和《中国中西医结合急救》等杂志。该项研究社会效益和经济效益显著，在临床医疗、教学和科研工作中发挥了重要的作用，已为社会创造的利润有51万元。2次印刷的6000册，目前已快销售完，故该书的应用前景很好。我们已着手收集读者对该书的反馈意见，准备再版。

成果简介：构建GFP的EB病毒LMP1表达质粒，用表达LMP1的细胞做细胞基质粘附、细胞运动和基底膜侵袭实验检测LMP1对CNE1粘附、运动及侵袭能力等综合研究。为开发和应用抑制LMP1作用药物来控制鼻咽癌发生和抑制浸润转移提出新的思路。

成果简介：用反义寡核甘酸、膜片钳等技术证实睫状体上皮细胞通过激活容积敏感性氯通道实现容积调节性回缩，而这氯通道分子本质之一是MDRI基因产物P-gP。MDRI基因是容积调节性回缩的重要相关基因。本研究为开辟治疗青光眼新途径奠定理论基础。

成果简介：该课题为细胞凋亡机理及影响因素的研究。经研究发现，将外源性人bcl-xs基因导入CNE-2Z细胞，可增加化疗药物（顺铂、三氧化二砷、喜树碱）及γ-射线对CNE-2Z细胞凋亡的敏感性；用反义寡核苷酸封闭bcl-xL 基因，可诱导CNE-2Z细胞凋亡，证明凋亡的调控机制中有Caspase-3的活化、Cyt C的释放；发现白藜芦醇经Caspase-9、Caspase-3、Caspase-6的依此活化诱导CNE-2Z细胞凋亡，而高三尖杉酯碱经Caspase-8、Caspase-3、Caspase-6的级联活化诱导CNE-2Z细胞凋亡。该研究为开辟NPC的基因治疗途径及筛选毒副作用较小的抗NPC药物提供了理论和实验依据，今后在临床上应用，将产生较大的社会经济效益。

成果简介：创新各种制片法并引进数学与物理学对人蛲虫子宫内的活卵与死卵,自然产与解剖出的活卵与死卵用光镜、扫描电镜与透射电镜行相互佐证法研究，历时20余年。更正了教科书的错误结论并有多项发现。为教学与诊断提供了翔实的资料。

成果简介：在国内首先证实和报道了淫羊藿及其复方制剂具有显著的抗骨质疏松作用，并系统地进行了 实验研究和理论探讨，发表了23篇研究论文，提出了中医药防治骨质疏松的新的学术观点，为防 治骨质疏松提供了新的制剂，研究水平居国内领先。

成果简介：发明了两种新药（复方醋酸曲安奈德溶液剂和复方氯倍他索乳膏剂），对顽固的皮炎湿疹类 皮肤病疗效达国内外领先水平；在组方理论的科学性先进性上有明显创新，故获得国家发明专科 证书。已技术转让给三家药厂应用，销售已超亿元。