摘要：肌肉作为机体内主要的代谢活动中心，是体内蛋白质最大的储备库，为多种器官（如心脏、肝和大脑）提供能量。在体内肌肉蛋白的合成和降解是一种动态平衡，其调控机制较为复杂。免疫应激诱导的炎症反应可以导致肌肉蛋白质的降解，但其具体机制尚未可知。本研究以分化的C2C12肌管细胞为研究对象，旨在探讨脂多糖（LPS）诱导的炎症反应导致肌管蛋白降解的作用，并且探讨二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸（DHA）两种 n-3多不饱和脂肪酸（PUFA）是否能够对LPS诱导的肌肉蛋白降解有调控作用。
　　本研究首先选取不同浓度（10 ng/mL、100 ng/mL、1000 ng/mL）LPS刺激C2C12肌管细胞，采用RT-PCR方法检测炎性细胞因子TNF-α和IL-6的表达，确定 LPS最佳刺激浓度并建立稳定的免疫应激模型。采用最佳浓度1000 ng/mL LPS刺激 C2C12肌管细胞0 min、30 min、1 h、3 h、6 h、12 h和24 h，检测肌肉蛋白质降解标志基因 MAFbx和 MuRF1在此时间点的表达量，结果显示在刺激12 h和24 h时 MuRF1、IL-1β和 TLR4的表达显著上调（P＜0.05）。利用 Western blot方法检测LPS刺激 C2C12肌管细胞12 h后Akt/Foxo、mTOR和P38信号通路相关蛋白的表达情况，发现仅 Akt和 Foxo1蛋白磷酸化水平明显降低。研究了添加营养素 EPA和 DHA对 LPS诱导的炎症反应引起的肌肉蛋白质降解的调控作用，结果显示EPA组和 DHA组与 LPS组相比， TNF-α、IL-1β和 IL-6的基因表达显著降低（P＜0.05）， NF-κB的表达受到显著抑制。然而， EPA和DHA对 LPS引起的MuRF1表达显著上调无明显抑制作用。发现 EPA和DHA组的Akt磷酸化水平与 LPS组相比无明显差异，说明 EPA和 DHA 可能对 Akt信号通路未产生影响，因而对 MuRF1上调表达无明显的抑制作用。肌肉萎缩是指当蛋白质降解超过蛋白合成时，会导致肌纤维的横截面减小和肌力减退。长期营养不良、严重烧伤、老化以及各种慢性疾病会引发肌肉萎缩。因此，肌肉萎缩会导致生活质量的下降，提高患者的发病率和死亡率。通过探讨免疫应激诱导的炎症反应导致肌管蛋白降解的分子机制，旨在为缓解肌肉蛋白质降解提供有效的预防手段及理论基础。

摘要：本文对气管平滑肌上钙激活的大电导钾离子通道中不同亚基功能进行了研究。离子通道一般拥有选择性通透离子和在适当刺激的情况下能够开放这两种特性。离子通道无论在动物还是植物的细胞中都发挥着至关重要的作用，不仅负责调控膜电位，还控制着细胞增殖和激素释放，钾离子通道就是其中之一。大电导钙激活的钾离子通道，简称BK通道，是钾离子通道中较复杂的一类离子通道，它调控着各种各样的生理活动。BK通道广泛存在于生物体内的大部分细胞中，如平滑肌细胞、心肌细胞、脑垂体细胞、神经细胞，甚至存在线粒体中。因为BK通道具有钙激活，大电导，多方位调控等特性，而且对生命体尤为重要，所以一直在被广泛研究。BK通道尽管是由单基因slowpoke编码而成，但是却丝毫没有影响到其多样性。由于β亚基拥有监控通道开放，调控代谢等多种功能，使得 BK通道在多种组织中保持多样性。BK通道一般是通过细胞内钙浓度升高或是膜电位去极化激活。这意味着BK通道可以调节肌肉收缩，因此，BK通道在肌细胞中的研究具有广阔的前景。众所周知，BK通道是由α和β两种亚基组成。β亚基（β1-β4）在BK通道中扮演着重要的角色，四种β亚基的作用各不相同，β1亚基可以使通道迅速活化，由于它的电压感受器结构，还能增强BK通道的钙敏感性；β2亚基是调控通道的开关；β3亚基可以迅速关闭通道[3]；β4亚基则可以钝化通道的调控特性。因此不同的亚基之间功能相辅相成，使得BK通道更具复杂性和多样性[4]。我们希望弄清BK通道不同亚基的功能。结果显示，气管平滑肌细胞表达BK-α，β1，β4亚基mRNA；BK-α亚基失活之后，BK单通道电流消失，说明BK-α亚基是BK通道组成的核心部分；BK-β1亚基失活后BK单通道电流得到部分抑制；而在BK-β4亚基失活后， BK单通道电流无明显变化。

摘要：研究背景和目的：0-12月的婴儿期是出生后心脏发育的关键时期。这段时期内，婴儿心脏的结构和功能发生了快速的变化，外在表现为心率从150次/分钟减慢为80次/分钟，而收缩压则从55mmHg上升到100mmHg。死于先天性心脏病的患儿55.3%是发生在这段时期并且绝大部分复杂先天性心脏病（如大动脉错位、肺动脉闭锁等）需要在新生儿或婴儿早期手术。心肌细胞增殖关系到心脏的发育和手术后心脏的修复，是目前研究的热点之一。然而，由于人体心肌组织标本的获取困难，目前对于人心肌细胞的增殖的研究仅有数篇报道，特别是对于婴儿早期心肌细胞的增殖所知更少。本研究拟收集一岁内的人心肌组织，观察人婴儿早期心肌细胞增殖的特征；并探讨调控婴儿心肌细胞增殖改变的内在机理；在上述研究的基础上，利用小分子化合物探索药物促进婴儿早期心肌细胞增殖的可能；最后研究心肌细胞增殖在先天性心脏病外科手术中的意义。
　　方法：采用苏木精-伊红染色比较0-12月心肌细胞的形态学特征，利用激光共聚焦显微镜和流式细胞术观察Ki67阳性和Aurora B阳性心肌细胞的比例，明确婴儿早期心肌细胞的增殖特征。利用Western Blot、Qrt-pcr、免疫荧光和免疫组化等方法观察目前已知的关键性调控因子在人心肌细胞的表达情况；分离人心肌细胞在体外进行培养，观察添加小分子化合物后，EdU阳性和Ki67阳性心肌细胞比例的改变；对小鼠行肺动脉环缩术，超声确定环缩效果，免疫荧光检测右心室增殖的心肌细胞，Qrt-PCR检测增殖肥大相关基因的改变。
　　结果：HE染色显示心肌细胞的平均体积随年龄的增加而不断加大。激光共聚焦显微镜显示0-3月，4-6月和7-12月的Ki67阳性心肌细胞的比例分别为0.55±0.02%、0.05±0.01%和0.02±0.005%，而Aurora B阳性心肌细胞的比例分别为0.12±0.02%、0.01±0.01%和0.005±0.004%；流式细胞术显示0-3月，4-6月和7-12月的Ki67阳性心肌细胞的比例分别为0.47±0.16、0.07±0.02和0.02±0.01。Western-blot，免疫荧光和免疫组化显示关键性转录因子 NICD和 YAP1表达随着年龄的推移而减少，而β-catenin的表达随年龄的增加而增加。婴儿早期心肌细胞在体外培养较易培养，小分子化合物CHIR99021可以明显促进婴儿早期心肌细胞的增殖。小鼠肺动脉环缩术后，增殖的心肌细胞明显增加并且与增殖有关的基因也明显上调。
　　结论：0-3月的人心肌细胞具有十分突出的增殖能力，是婴儿早期心肌细胞的特征之一；NICD，β-catenin和 YAP1均可能参与了婴儿期心肌细胞增殖的调控；小分子化合物可用来调控早期人心肌细胞的增殖；肺动脉环缩术可使小鼠右心室发生增殖和肥大的改变，心肌细胞的增殖可能是肺动脉环缩术锻炼心室功能的机制之一。

摘要：骨骼肌的形成是一个复杂的过程，包括成肌细胞的增殖、分化和肌管的形成等，这一过程受到一系列的信号分子，如转录因子等的调节。microRNA(miRNA)是动植物中广泛存在的、物种间高度保守的、长度为22个核苷酸左右的一类单链小分子非编码的RNA，在转录或转录后水平调控基因的表达。近年来，随着对microRNA研究的深入，人们发现这类单链小分子RNA参与了骨骼肌发育的调节。Myf6是生肌调节因子MRFs（Myogenic Regulatory Factors）家族的一员，它可以识别并结合于许多肌肉发育相关基因的启动子区域，调控肌肉的发育。本研究鉴定了直接靶定Myf63'UTR的microRNAs，主要研究了miR-374b和miR-299对C2C12成肌细胞分化的影响，主要工作及结果如下:
　　1.调节Myf6基因的microRNA鉴定
　　通过在线软件预测了miR-299、miR-374b、miR-376c、miR-377、miR-499和miR-669f是直接靶定Myf6基因的候选microRNAs。我们构建了482bp的包含有候选microRNAs结合位点的My f63'UTR野生型和突变掉miR-299和miR-374b结合位点的Myf63'UTR突变型双荧光素酶报告载体。证明了miR-374b能够直接靶定Myf63'UTR并调控内源Myf6表达。
　　2.miR-374b在肌细胞分化中的作用
　　利用Q-PCR分别分析了miR-374b的组织表达谱和miR-374b在成肌细胞分化过程中的表达模式。miR-374b在2月龄C57BL6小鼠心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、脂肪、骨骼肌九个组织广泛表达;miR-374b在C2C12成肌细胞分化的第0h、24h、72h和96h呈先上升后下降的表达趋势。
　　我们通过超表达和抑制内源miR-374b表达，研究了miR-374b在C2C12成肌细胞分化过程中的作用。结果显示，在超表达miR-374b后，分化标志基因MyoG的表达量增加，而MyoD和Myf5基因的mRNA水平变化不明显。但western blot检测发现肌球蛋白重链(MyHC)的蛋白水平明显降低，免疫荧光检测也显示细胞融合率下降;相反，转染miR-374b的抑制剂，抑制miR-374b的表达，肌球蛋白重链的蛋白水平明显升高，免疫荧光检测显示细胞融合率上升。因此，我们证实了miR-374b负向调控C2C12成肌细胞的分化。另外，细胞增殖实验显示miR-374b促进C2C12成肌细胞的增殖。
　　miR-374b在腓肠肌（混合型肌纤维）中的表达量高于比目鱼肌（慢肌纤维）的表达量。在超表达miR-374b的C2C12细胞中，Myh7（慢肌）和Myh4（快肌）的表达量均有下降，但是Myh7的下降幅度要大于Myh4的下降幅度，说明miR-374b可以同时抑制快肌纤维和慢肌纤维的形成，但是对慢肌的抑制作用更加明显。
　　3.miR-299在肌细胞分化中的作用
　　同样，我们利用Q-PCR分别分析了miR-299组织表达谱以及miR-299在成肌细胞分化过程中的表达模式。在2月龄C57BL6小鼠心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、脂肪、骨骼肌九个组织中，miR-299广泛表达;miR-299在C2C12成肌细胞分化的第0h、24h、72h和96h，表达量呈上升趋势。
　　通过超表达和抑制内源miR-299表达实验，我们研究了miR-299在C2C12成肌细胞分化过程中的作用。结果显示，超表达miR-299后，分化标志基因MyoG，MyoD，My f5的mRNA水平均上升;通过转染miR-299的抑制剂，分化标志基因MyoG，MyoD，My f5的表达量显著均下降。因此，我们证实了miR-299正向调控C2C12成肌细胞的分化。
　　本研究首次鉴定出miR-374b和miR-299能够调控成肌细胞分化，从而进一步完善了肌肉发育的microRNA调控网络，为农业生产和肌相关疾病临床治疗提供了一定的理论基础。

摘要：生物学研究表明，肌肉收缩张力是由肌细胞中肌球蛋白头部和肌动蛋白丝结合点位的相互作用而产生的。这个过程中能量来自于ATP分解为ADP和Pi时自由能的变化。在肌肉等长收缩暂态响应的实验中，发现肌肉收缩张力与时间成双指数函数，但是指数系数不同。对于这些实验结果尚无理论解释，本文基于简化的肌球蛋白工作循环四态模型，给出描述大量肌球蛋白集体工作的化学动力学方程，通过求解其解析解，建立肌肉等长收缩的暂态响应的表达式，得出理论结果与实验结果基本相符。
　　本文由四个部分组成。第一部分主要介绍肌肉的结构，肌肉收缩的滑行机制。第二部分主要介绍了肌球蛋白的分子结构，肌球蛋白的主要功能，及其肌球蛋白工作循环。第三部分主要介绍了肌肉收缩的相关实验和其结果。第四章是本文的核心内容，建立了肌肉收缩暂态响应的理论，给出了暂态响应时力与时间的关系，将理论结果与实验结果进行了比较。

摘要：生物体正常的生命活动依赖于正常的能量供应。骨骼肌是人体重要的运动器官，消耗了有机体大量的能量，因此骨骼肌又是重要的能量代谢器官。脂质是骨骼肌中储存能量的物质，随时水解出脂肪酸进行β氧化提供能量。骨骼肌中脂质代谢异常会引起胰岛素抵抗，进而发展成为糖尿病。因此，研究骨骼肌中的脂质代谢具有重要的意义。
　　骨骼肌中的脂质储存于骨骼肌细胞的脂滴中。脂滴表面由一单层磷脂包围，中心充满了以甘油三酯和胆固醇酯为主的中性脂，单层磷脂膜外分布着许多蛋白质，这些蛋白质赋予了脂滴的多功能性。脂滴不仅与脂质代谢密切相关，还参与了细胞器之间的信息交流，发育，蛋白降解，细胞凋亡，免疫以及病毒的复制。脂滴蛋白质PAT家族中，除了perilipin，其它PAT蛋白质在骨骼肌脂滴上均有表达:ADRP丰度最高，其次是TIP47，S3-12和OXPAT表达量较低。
　　TIP47又称M6PRBP1，是在对阳离子依赖的M6PR进行酵母双杂交实验时鉴定出来的，因其分子量大小是47 kDa，与M6PR的尾端结合，因此被命名为47 kDa尾连蛋白(tail-interacting protein of47 kDa)。TIP47与M6PR结合，将M6PR从后期胞内体转运回到反面高尔基体管网状结构上。后来发现，小分子GTPase Rab9可以和TIP47直接相互作用，促进TIP47与M6PR的结合和转运。TIP47是一个广泛表达的蛋白质，在胎盘、卵巢、肾上腺、脑、皮肤、脂肪、肌肉和心脏等组织或器官中均有表达，并且，TIP47在子宫颈癌组织中高表达。目前，TIP47被当作发生子宫颈癌的血液标志和当作子宫颈发育不良与侵润性癌症的生物标志。TIP47也在眼睛中表达，参与眼睛明亮与黑暗的适应反应。另外，TIP47参与肝脏脂肪变性，病毒感染和肿瘤发展过程。
　　TIP47与ADRP在氨基酸序列比对上达到43％的同源性。ADRP敲除后，TIP47可以代偿ADRP的功能。TIP47可以从细胞质中募集到脂滴上，与ADRP共同参与新生脂滴的成熟。ADRP的研究较为深入，且已经建立了基因敲除鼠，而TIP47对脂质代谢的研究较少，作用机制远未阐明，既没有建立TIP47敲除细胞系，更没有TIP47基因敲除鼠的报道。因此本研究采用最新的CRISPR/Cas9基因敲除技术，敲除小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12中的TIP47，进一步解释TIP47在小鼠骨骼肌细胞脂质代谢的作用。
　　CRISPR/Cas9是细菌抵御外源遗传物质入侵的获得性免疫系统，属于Ⅱ型CRISPR/Cas系统。经过改良后，可以简便高效地用于真核细胞的基因敲除和基因组编辑，现已广泛应用于动物模型的建立、基因治疗和动植物育种等。其基本原理是Cas9核酸酶在单链指导RNA(sgRNA)的指引下，对特异的双链DNA靶序列进行切割产生双链断裂，随后细胞进行非同源末端连接修复或同源重组修复，导致产生碱基或片段的缺失或插入突变。
　　本研究运用改良后的CRISPR/Cas9技术，成功敲除了小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12中的TIP47，并获得了几个TIP47敲除（TIP47 KO）C2C12细胞系。用激光共聚焦扫描显微镜观察LipidTOXTM Red脂滴染色，在正常情况下，与对照组相比，脂滴没有变化，推断TIP47并不影响正常情况下C2C12细胞内中性脂和脂滴的生成。但是用200μM OA处理细胞12小时后，与对照组相比，TIP47KO的C2C12细胞内脂滴变多，说明TIP47可能参与了C2C12细胞在OA刺激下脂质的合成。3H标记OA示踪甘油三酯代谢的实验结果显示，与对照组相比，TIP47 KO的C2C12细胞，其甘油三酯的总量增加了，说明TIP47参与了甘油三酯代谢。另外，免疫印迹杂交的结果，在TIP47 KO的C2C12细胞中，ADRP的蛋白质表达量增加了，这表明，在TIP47 KO的C2C12细胞内，ADRP可能代偿了TIP47的功能。总之，本研究表明，TIP47在C2C12细胞的脂质代谢中起着重要的作用。

摘要：1988年，Okamura和Ishiwata在脊椎动物骨骼肌肌原纤维发现了张力和肌节长度的自发振动，并称之为SPOC(spontaneous oscillation contraction)。SPOC发生的条件是让肌肉处于松弛-收缩的中间态。这一条件可通过高浓度的MgADP和Pi或者低于微摩尔浓度Ca2+实现。
　　关于肌肉的自发振动国外学者建立了两个理论模型，这些理论拓展了我们对肌肉收缩及其自发振动的认识，但理论结果很难与实验结果进行比较。内蒙古大学生物物理学科工作者利用Baker等人给出的肌肉态方程，建立了等张力条件下肌肉收缩及其自发振动的理论模型，并且理论结果与实验结果基本相符，但无法解释等长条件下的肌肉收缩及其自发振动。针对这一问题，本文利用肌肉收缩时的张力及各种弹性成分，结合肌肉的特殊结构，建立等长条件下肌肉收缩及自发振动的动力学方程，理论结果同实验结果基本相符。
　　本文共分为四章，第一章介绍了肌肉收缩的滑行学说、肌球蛋白的结构、肌球蛋白工作循环的机械化学偶联。第二章介绍了肌肉收缩及其自发振动的定义及其特性。第三章介绍了国内外学者对SPOC的历史研究。第四章是本文的核心内容，基于对肌肉收缩及其自发振动的理解，构建了等长条件下肌收缩的动力学模型，并且将得到的理论结果与实验进行相比较。

摘要：HET1是Db(l)蛋白结构域家族的一类鸟苷酸交换因子，它能够调节Rho家族的G蛋白与GDP或GTP的结合状态。当G蛋白与GTP连接，其GTPase活性激活，其下游效应蛋白被激活，传递细胞信号;当G蛋白与GDP结合时，其GTPase失活，则不发挥作用。HET1对Rac1、Cdc42和RhoA结合GTP状态和GDP结合状态之间的转换，具有重要调控作用。HET1在脑、心脏、肌肉等兴奋组织中广泛并高表达，它能通过对小G蛋白的激活调控，进而影响细胞形状、分裂、迁移，细胞极性和细胞粘连。以往的研究表明，肌肉损伤后HET1表达上调，并且利用腺病毒外源性过表达HET1能加快肌肉损伤的修复，并且Rac1，Cdc42和RhoA GTPase激活。在体外C2C12细胞系中，HET1能促使C2C12向肌细胞分化，并抑制其向脂肪细胞分化。尽管如此，由于体内基因敲除小鼠模型的缺乏，Het1在体内肌肉再生和分化中的功能仍不清楚，我们首次建立了Het1fl/fl小鼠，使之与EII-Cre转基因小鼠杂交，得到HET1全敲小鼠，PCR与Southern的结果都显示，HET1全敲小鼠中基因片段的剔除。但是全敲小鼠与野生型小鼠的生活状况无明显差异，而且心、肌肉、胃和肠的组织切片对比，观察发现两者无明显区别。我们利用注射心脏毒素(CTX)成功诱导了一个肌肉损伤和修复的模型。我们向小鼠骨骼肌注射50μl的10μg/ml的心脏毒，通过检测c-myc、MyoD和myogenin因子发现，在注射CTX5天后，肌肉卫星细胞增殖和向肌细胞分化达到顶峰。而且我们通过对全敲小鼠和野生型小鼠分别注射心脏毒素5天，10天后，取肌肉损伤部位进行组织切片对比，观察发现HET1全基因敲除鼠，肌肉损伤恢复状况较野生型小鼠明显延迟。我们的结果首次在体内证明，HET1在调节肌肉损伤修复中的重要作用。

摘要：诸多研究表明，机械应力（mechanical strain）尤其是张应变，在血管生理稳态维持和血管重建病理机制中均起到重要作用。探讨张应变力学刺激调控血管细胞功能的细胞内信号转导网络，研究其中关键蛋白的生物学效应，对心血管生理和疾病病理研究有重要意义。
　　蛋白质转录后的可逆性磷酸化修饰参与了几乎所有生命活动的调节。然而，生物体内通过可逆性磷酸化修饰参与细胞内信号转导的蛋白质通常仅占细胞内蛋白质总量的不足10％，应用传统蛋白质组学技术分离鉴定差异表达的蛋白质过程中，磷酸化蛋白往往由于表达丰度低而得不到有效显示。所以，我们将稳定同位素标记活细胞培养（SILAC）、TiO2亲和层析结合质谱分析（MS）的磷酸化蛋白质组学（phosphoproteomics）技术应用于张应变调控血管平滑肌细胞（VSMCs）的细胞内信号转导网络研究，以期从整体上观察张应变诱导的细胞中全部蛋白质磷酸化修饰的状态及其变化。
　　应用SILAC技术标记体外培养大鼠VSMCs，应用FX-4000张应变加载系统施加不同时长的生理性张应变：幅度10%，频率1.25 Hz，时间分别为0,15 min，30 min，1 h及6 h。TiO2亲和层析结合质谱分析（MS）得到了时间序列的VSMCs内磷酸化蛋白质的表达谱及相应肽段的特异磷酸化位点。之后，运用DAVID数据库、IPA软件等生物信息学方法对上述磷酸化蛋白质组学数据进行功能分析、信号通路分析和模糊C均值聚类分析（FCM），得到了10%-1.25Hz周期性张应变加载条件下VSMCs内磷酸化发生显著变化的蛋白所参与的主要细胞功能及可能的张应变细胞内信号转导网络。结果提示，Rho相关的卷曲蛋白激酶（ROCK）及蛋白激酶C（PKCs）家族可能参与了张应变调控的VSMCs功能。
　　为深入探讨上述磷酸化蛋白质组学及生物信息学提示的力学响应分子ROCK、蛋白激酶家族在张应变调控VSMCs功能中的作用，我们首先应用western blotting（WB）技术检测了10%-1.25Hz生理性张应变加载不同时间（0 min，15 min，30 min，1 h，6 h，12 h和24 h）后ROCK1，蛋白激酶家族成员p-PKCθ、p-PKCα/β、p-PKCζ/λ、p-PKCδ/θ、p-PKD/PKCμSer916、p-PKD/PKCμSer744/748以及p-Akt随时间变化的磷酸化蛋白质表达情况；之后，应用RNA干扰技术探究了ROCK1在其中的调控作用。本部分结果表明：（1）生理性张应变加载24 h显著提高VSMCs活性；（2）生理性张应变显著抑制ROCK1的表达；（3）生理性张应变分别在短时相（15 min&30 min）、长时相（6 h&12 h&24 h）两次激活p-PKCθ，但是对p-PKCα/β，p-PKCζ/λ，p-PKCδ/θ无显著影响；（4）生理性张应变激活p-Akt和p-PKD/PKCμSer744/748是一个瞬时、短暂的效应（15 min&30 min），但对p-PKD/PKCμSer916位点的激活则较Ser744/748位点持续更久（持续到1 h）；（5）干扰ROCK1促进PKCθ、PKD/PKCμ Ser916及PKD/PKCμ Ser744/748的磷酸化，但抑制Akt的磷酸化。
　　基于上述磷酸化蛋白质组学及后续实验验证两部分的结果，我们得出结论：生理性张应变能够增强VSMCs活性，从而发挥保护功能；该功能的实现可能是通过复杂的细胞内信号转导网络实现，其中生理性张应变抑制ROCK1表达，从而调控PKCθ及Akt的磷酸化可能起到重要作用。我们的研究为探明机械应力诱导之血管重建的分子学机制提供了新思路，为心血管疾病的研究提供了一定的实验依据和理论基础。

摘要：味觉是哺乳动物极为重要的感觉,其中苦味是五大基本味觉之一。苦物质受体近期被广泛发现于身体的各个组织细胞中,如:胃肠道细胞,睾丸细胞,神经细胞和呼吸细胞。近期的研究表明苦物质受体参与了气管平滑肌细胞的舒张作用,其过程是在给气管平滑肌细胞激动剂如乙酰胆碱,引起气管收缩之后,再加入苦物质如chloroquine,能够使气管平滑肌细胞舒张。但是在气管平滑肌细胞静息状态下,单纯加入苦物质却引起了气管平滑肌细胞的钙离子的升高。这看似矛盾的作用使得苦物质作用于气管平滑肌细胞的机理急待阐明。
　　本文一方面研究的是通过测量气管肌张力的方法,给完预刺激之后,在给激动剂乙酰胆碱的时候再给苦物质chloroquine能引起气管的舒张;并且用激光共聚焦双记录的方式,我们把钙离子用特异性的染料FLUO-4染色,通过透射光和激光的双记录,我们看到细胞收缩的同时,chloroquine能降低细胞的钙离子,我们认为这是引起气管舒张的主要原因。
　　另一方面研究的是苦物质chloroquine在静息状态下能否引起气管平滑肌细胞的收缩,并阐明其机理。通过气管环肌张力测量的方法,在给完3次乙酰胆碱预刺激之后,静置30分钟使气管恢复,观察气管在静息状态下加入chloroquine时,能引起气管平滑肌的一过性的收缩,为了证明引起收缩作用的钙离子是来源于细胞外的钙离子进入,还是细胞钙库中的钙离子释放入胞浆,我们先用无钙离子的细胞外液进行相同的实验,chloroquine依然能引起收缩。为了进一步验证,我们用钙泵阻断剂CPA使细胞内钙排空后再加入chloroquine,则收缩作用被阻断。这两方面同时印证了chloroquine引起气管平滑肌收缩的机理是使细胞内钙释放进入胞浆,胞浆钙离子浓度升高引起了收缩。
　　苦物质引起的收缩是一过性的,其模式很像内钙释放所引起的,我们就观察chloroquine对IP3受体的影响,用IP3受体阻断剂2-APB阻断后,加chloroquine后气管平滑肌无收缩,则chloroquine作用于IP3受体使内钙释放的,其上游通路GProtein-PLC可能发挥了作用,通过特异性的Gα阻断剂PTX培养气管环过夜,再加入chloroquine时,其收缩作用被抑制,同样的实验用Gβγ阻断剂Gallein则对收缩没有抑制作用。这些数据说明了chloroquine通过Gα-PLC-IP3-IP3R通路引起细胞内钙的释放,导致了这个一过性的收缩。
　　我们研究发现,苦物质通过苦受体,引起了鼠气管平滑肌收缩,并非舒张,本研究结果对进一步探讨苦物质和苦受体在哮喘气道高反应形成中是否发挥了重要作用,为将来苦物质参与治疗奠定了良好的基础。

摘要：在骨的形成过程中，成骨细胞胞外钙离子浓度([Ca2+]o)会有所升高（从2mM升高至8～40 mM），外钙浓度上升直接抑制破骨细胞的活性，刺激成骨细胞活性。有报道称，细胞外钙离子浓度升高会促进成骨细胞的增殖，但是[Ca2+]o升高对成骨细胞的刺激机制目前尚未明了。在本研究中，我们发现[Ca2+]o升高引发成骨细胞SOCE(Store operated calcium entry)机制，并对细胞增殖有着促进作用。首先我们发现升高[Ca2+]o可以引起细胞内钙离子浓度[Ca2+]i上升，这种[Ca2+]i上升主要是由于细胞外钙内流引起的。SOCE机制的阻断剂2-APB与细胞内钙释放抑制剂TMB-8都能抑制这种现象，而电压门控的钙离子通道(Cav)抑制剂硝苯地平(nifedipine)和维拉帕米（verapamil）都不能抑制该现象。NPS2390和U73122能抑制这种[Ca2+]i上升，NPS2390是钙敏感的受体通道(CaSR)的特异性抑制剂，U73122是磷脂酶C(PLC)的抑制剂。我们同样发现[Ca2+]o升高对成骨细胞增殖的促进作用，增殖被2-APB，TMB-8，NPS2390和U73122抑制，不受nifedipine和verapamil的影响。此外，GdCl3是一种非生理性的CaSR的激动极，可以引起[Ca2+]i的升高及细胞增殖。以上结果显示，成骨细胞[Ca2+]o上升活化CaSR，并激活PLC，引起细胞增殖。
　　 人体的骨关节系统一直处于受力状态，成骨细胞是骨关节系统形成的源动力，也是骨关节系统中力学信号感受与响应的的关键细胞群，机械力刺激对成骨细胞的生长增值、分化分泌、细胞骨架重组等多种生理功能有显著影响，不过，关于力学因素调节成骨细胞功能的详细机制尚未阐明。在本文中，我们发现流体剪切力(Fluid Shear Stress，FSS)可以刺激成骨细胞引起细胞内钙离子浓度（[Ca2+]i）上升，并且诱导细胞向外分泌ATP，这种作用很可能是通过TRPV4通道的活化来实现的。首先，我们证明了TRPV4通道基因在成骨细胞中的表达。然后，我们采用0.12 Pa、0.24 Pa、0.48 Pa和1.2 Pa的FSS来刺激成骨细胞，[Ca2+]i及细胞外液中的ATP浓度都随之升高，其中GdCl3、钌红（RR）和EGTA都能抑制细胞分泌ATP，GdCl3是机械敏感离子通道MSCC(mechanosensitivecation-selective channel)的阻断剂、辽红(Ruthenium Red，RR)是香草素受体偶联的离子通道(TRPV)类阻断剂、EGTA是细胞外钙离子的鳌合剂。此外，4α-PDD是TRPV4通道特异性激动剂，它能刺激细胞分泌ATP，且ATP的分泌受GdCl3、RR和EGTA的抑制。除了4α-PDD，另一组对照实验中，我们发现低渗透压的细胞外液同样能使成骨细胞分泌ATP。通过以上结果，我们得出结论:剪切力FSS可以刺激成骨细胞引起细胞内钙离子浓度（[Ca2+]i）上升，并且诱导细胞向外分泌ATP，这种作用很可能是通过TRPV4通道的活化来实现的。

摘要：目的：运用二维斑点追踪技术研究正常青年人运动负荷实验不同状态等容收缩期左室心尖、基底水平内外膜心肌旋转，描述其变化规律，探讨左室心尖、基底水平内外膜等容收缩期旋转反映左室功能的价值。
　　方法：40例在校健康大学生，用二维斑点追踪技术得出基础状态、运动负荷状态、恢复状态等容收缩期左室心尖、基底水平内外膜下心肌旋转及左室内外膜整体扭转，同时获得心脏功能参数：左室射血分数（LVEF）、左室缩短分数（LVFS）、心率血压二重乘积（RPP）、左室储备、二尖瓣舒张早期血流速度峰值（E峰）与左室侧壁二尖瓣环舒张早期速度峰值（e峰）比值（E/e）；分析不同状态左室各水平内外膜等容收缩期旋转及左室内外膜整体扭转与心脏功能参数相关性。
　　结果：1.①左室心尖内外膜在等容收缩期末为逆时针旋转，到射血期末增加达峰值，于舒张期末顺时针减低；基底内外膜在等容收缩期末顺时针旋转，然后逆时针增加，舒张期末顺时针减小；②内膜整体扭转、外膜整体扭转、心尖水平内膜旋转、心尖水平外膜旋转在基础、负荷、恢复三状态中差异有统计学意义；基底水平内外膜各状态中旋转差异无统计学意义。2.左室心尖水平外膜下心肌等容收缩期旋转与LVEF、E/e、RPP正相关，与左室储备负相关；心尖水平内膜下心肌旋转与E/e及RPP有正相关，与LVEF及左室储备无相关；外膜下心肌整体扭转与E/e，RPP正相关，与左室储备负相关，内膜下心肌整体扭转与E/e及RPP正相关；基底水平内外膜下心肌与心脏功能参数无相关。
　　结论：1.运动负荷试验各状态，左室各水平内外膜下心肌旋转及左室内外膜下心肌扭转变化规律符合心肌生理变化；2.各个状态中，心尖水平外膜下心肌等容收缩期旋转与心功能参数有相关性，可以作为反映左室收缩功能、舒张功能、左室储备及左室心肌做功过程的指标。

摘要：骨质重塑由成骨细胞介导的骨形成和破骨细胞介导的骨吸收之间的协同作用来调控,以往的研究证明Wnt信号通路在出生后骨质重塑过程中起着重要的作用。β-catenin是经典Wnt信号通路的重要介导因子,Lrp5也是经典Wnt信号通路的细胞表面受体之一。β-catenin在成骨细胞中的缺失导致骨量减少,破骨细胞形成增强。然而有研究表明,在小鼠肠道上皮细胞中敲除Lrp5基因可以导致骨量减少,而在成骨细胞中特异敲除Lrp5却对骨量积累没有影响。因此,Wnt/LRP5信号是在骨细胞中直接调控还是通过肠道分泌血清素间接调控骨密度仍然存在争议。另外,Lrp5基因敲除小鼠主要表现为成骨形成的减少;而β-catenin的缺失主要导致破骨形成的增强,它们影响了骨质重塑的不同方面。
　　本研究的目的是阐明Wnt信号通路在出生后骨质重塑过程中的作用机制,并为成骨微环境是如何调控出生后骨质平衡以及骨髓间充质干细胞(BMSCs)的维持提供更多的线索。通过免疫组化实验可知,包括经典的Wnt10b和非经典的Wnt5a/Wnt5b在内的Wnt蛋白在成骨细胞中表达。定量PCR的结果验证了以上结果,结果显示在未成熟的成骨细胞中高量表达包括Wnt5a和Wnt5b在内的Wnt蛋白,而在成熟的成骨细胞中高量表达包括Wnt4, Wnt7b和Wnt16在内的Wnt蛋白。为研究这些Wnt蛋白在出生后骨质重塑中的作用,我们利用特异性的Collagen1α1(3.6kb)(Col1)-Cre和Osteocalcin(Osc)-Cre在成骨细胞中敲除Wntless蛋白,敲除Wntless蛋白导致成骨细胞中几乎所有的Wnt蛋白的分泌受阻。大部分Col1cre/+;Wlsc/c突变鼠表现出严重的骨质减少表型,伴随着骨吸收的增加,骨形成的减少和骨髓间充质干细胞的维持的受损。Osccre/+;Wlsc/c突变鼠的表型和Col1cre/+;Wlsc/c突变鼠表型类似但要微弱很多。进一步的研究表明,阻断成骨细胞分泌Wnt蛋白一方面导致成骨生成减少,原因包括:成骨细胞增殖减少,凋亡增加以及分化受损;另一方面导致破骨生成增加,原因包括:骨保护素(OPG)的表达量降低以及细胞核因子КB受体活化因子(RNAKL)和巨噬细胞集落因子(M-CSF)的表达量的增加。此外,阻断成骨细胞分泌Wnt蛋白导致骨髓间充质干细胞的维持受损。为了进一步证实成骨细胞分泌的Wnt蛋白对于骨质重塑的调控作用,我们构建了Col1cre/+;Wlsc/c;Catnbex3/+双突变小鼠,在双突变小鼠中,经典的Wnt信号通路在成骨细胞中增强,同时成骨细胞中Wnt蛋白的分泌被阻断。比较Col1cre/+;Catnbex3/+单突变小鼠和Col1cre/+;Wlsc/c;Catnbex3/+双突变小鼠中的骨质重塑进程,结果表明成骨细胞分泌的Wnt蛋白可能直接对破骨形成和分化起到负调控作用。总的来说,这些研究支持了Wnt/Lrp5信号通路在骨中直接调控出生后骨质重塑,这个调控主要通过成骨细胞中的Wnt信号通路从以下两方面完成:成骨细胞介导的骨形成和由破骨细胞介导的骨吸收,成骨细胞中的Wnt信号通路的主要作用是促进成骨生成,抑制破骨生成。此外,成骨细胞为骨髓间充质干细胞(BMSCs)的维持提供了微环境,为骨髓间充质干细胞(BMSCs)微环境的识别提供了新的证据。

摘要：目的:
　　 探讨细胞表面α2，3唾液酸对成骨的影响和可能的作用机制。
　　 方法:
　　 1.建立MC3T3-E1 Subclone14成骨细胞培养模型，倒置显微镜观察细胞形态，RT-PCR和Western-Blot检测成骨细胞相关因子骨钙素、骨唾液酸蛋白等mRNA和蛋白水平的表达，碱性磷酸酶、Von Koss染色以鉴定骨基质和骨矿化的形成。
　　 2.在成骨细胞培养模型中加入不同浓度的α2，3神经氨酸苷酶，使用荧光标记的具有识别α2，3唾液酸结构特异性的凝集素MALⅡ检测细胞表面的α2，3唾液酸，并通过流式细胞仪验证效果;同时观察其对成骨功能及相关细胞因子mRNA和蛋白水平的影响和可能的作用机制。
　　 结果:
　　 1.成功建立了MC3T3-E1 Subclone14成骨细胞培养模型，证明MC3T3-E1Subclone14细胞培养至10d左右碱性磷酸酶染色呈强阳性反应，即成骨细胞大量形成，Von kossa染色至14d左右呈强阳性反应，说明成骨细胞分泌的骨基质进入矿化期。
　　 2.利用流式细胞仪验证荧光标记的凝集素MALⅡ能有效结合细胞表面的α2，3唾液酸;细胞表面α2，3唾液酸对成骨细胞无明显的影响，但对骨矿化有一定的影响。它可能通过影响维生素D受体VDR的表达，从而影响骨的矿化，但对成骨细胞分化无明显影响。
　　 综上所述，我们成功建立了MC3T3-E1 Subclone14成骨细胞培养模型;证实细胞表面α2，3唾液酸主要影响骨的矿化，但对成骨细胞无明显影响。它可能通过影响维生素D受体VDR的表达，从而影响骨的矿化。

摘要：目的:神经调节蛋白-1在抗心肌细胞凋亡、促进心肌细胞增殖上以及心衰的发生发展发挥重要作用。由骨髓间充质干细胞诱导分化的内皮祖细胞在血管内皮修复和新生血管形成发挥重要作用,并且在心脏重构上发挥潜在的作用。本研究重点探讨神经调节蛋白-1(NRG-1)基因转染内皮祖细胞(EPCs)后的条件培养液以及未转染rhNRG-1的EPCs条件培养液对心肌细胞凋亡、增殖及相关细胞因子的影响。
　　 方法:(1)分离扩增培养及鉴定大鼠EPCs,应用PCR技术体外合成NRG-1对应的基因组片段,定向克隆到pGC-FU-GFP慢病毒载体,构建大鼠NRG-1真核表达载体。将pGC-FU-GFP-rhNRG-1慢病毒载体转染入第二代的EPCs。分别于转染后第2、4、6天后,应用荧光显微镜下观察转染效率,并于转染后第6天应用RT-PCR及Western Blot法检测NRG-1的mRNA及蛋白的表达。
　　 (2)分离培养及鉴定大鼠心肌细胞,用TNF-alpha,建立心肌细胞凋亡模型。实验分为实验A和实验B两部分。
　　 实验 A:1、检测NRG-1基因转染EPCs后的条件培养液以及未转染NRG-1的EPCs条件培养液对心肌细胞凋亡的影响。实验分三组,空白组:乳鼠心肌细胞+TNFα(50ng/ml)；对照组:乳鼠心肌细胞+TNFα(50ng/ml)+EPCS培养液上清；实验组:乳鼠心肌细胞+TNFα(50ng/ml)+转染NRG-1后的EPCs培养液上清。24h后Hoechest33342-PI双染色法及Annexin-FIFC/PI流式细胞法检测各组心肌细胞凋亡率。2、检测NRG-1基因转染EPCs后的条件培组,空白组:乳鼠心肌细胞。对照组:乳鼠心肌细胞+EPCs培养养液以及未转染NRG-1的EPCs条件培养液对心肌细胞增殖的影响。实验分三液上清。实验组:乳鼠心肌细胞+转染NRG-1后的EPCs培养液上清。24h后应用MTT法检测各组心肌细胞增殖率。
　　 实验 B:检测NRG-1基因转染EPCs后的条件培养液以及未转染NRG-1的EPCS条件培养液对心肌细胞细胞因子的影响。实验分三组,空白组:乳鼠心肌细胞。对照组:乳鼠心肌细胞+EPCs培养液上清。实验组:乳鼠心肌细胞+转染rhNRG-1后的EPCs培养液上清,48小时后应用qRT-PCR以及Western Blot法检测各组心肌细胞中ANP、BNP、TGF-β1和CRP的mRNA及蛋白的表达。
　　 结果:(1)PCR鉴定及DNA测序表明,NRG-1真核表达载体构建成功。
　　 (2)培养原代内皮祖细胞,细胞纯度达95％,呈典型的铺路卵石样结构。免疫荧光结果显示90％以上的EPCs表达内皮细胞特征性标志物CD31、Ⅷ,符合EPC特征。
　　 (3)NRG-1基因转染EPCs后第2天,80％以上的EPCs表达绿色荧光蛋白,转染后第6天应用qRT-PCR和Western blot法检测NRG-1mRNA及蛋白的表达,结果显示转染NRG-1基因的EPCs的NRG-1mRNA及蛋白表达明显上调。与未转染rhNRG-1相比具有统计学差异(P<0.05)。
　　 (4)实验A:Hoechest33342/PI以及Annexin V-PI流式细胞法检测并计算各组心肌细胞凋亡指数,结果显示:与对照组相比,实验组细胞凋亡指数减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组相比,对照组细胞凋亡指数减少,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT法检测各组心肌细胞增殖率,结果显示:与对照组相比,实验组细胞增殖率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组相比,对照组细胞增殖率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。
　　 (5)实验B:qRT-PCR及Western blot法检测各组心肌细胞细胞因子的表达。
　　 结果显示实验组较对照组较心肌细胞ANP、BNP、CRP的mRNA及蛋白的表达均下调,TGF-β1的mRNA及蛋白的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组相比,对照组心肌细胞ANP、BNP、CRP的mRNA及蛋白的表达均下调,TGF-β1的mRNA及蛋白的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。
　　 结论:NRG-1转染EPCs后的条件培养液及EPCs条件培养液均能抑制心肌细胞凋亡以及促进其增殖,并且能下调心肌细胞中ANP、BNP及CRP表达并上调TGF-β1表达,尤以NRG-1转染EPCs后的条件培养液更为显著,为NRG-1治疗心脏病提供前期基础。

摘要：MagT1,是一种特异性通道样Mg2+转运体,含有335个氨基酸,分子量为38KDa。它含有4个跨膜区域,N末端和C末端都在细胞外。MagT1在哺乳动物的各组织和器官中有广泛表达,可能与Mg2+转运入细胞有关。Mg2+是一种对心肌细胞生命活动有重要影响的二价阳离子,特别是对心肌细胞的离子通道。临床观察表明,当心肌细胞内游离Mg2+浓度低于生理水平(0.4-1.0mM)时,会导致心律失常等症状。
　　 本研究发现,MagT1在大鼠和小鼠心肌细胞均有较高的表达。在各个发育时期的大鼠心肌细胞中,MagT1表达水平呈相对稳定,说明MagT1可能在维持心肌细胞Mg2+内稳态过程中起重要的作用。我们应用siRNA下调大鼠心肌细胞中的MagT1后观察到心肌细胞内Mg2+浓度出现明显下降,其中48h下降了24％(p<0.05),60h下降了36％(p<0.01)。伴随着心肌细胞Mg2+浓度的下降,心肌细胞还出现了凋亡,siRNA下调MagT148h和60h后:细胞凋亡率分别达到31.2％(p<0.01)和40.6％(p<0.01),比对照细胞有显著提高。我们在调查凋亡的信号通路时发现,凋亡细胞的线粒体膜电位显著降低,其中48h下降了21％(p<0.05),60h下降了30％(p<0.01)。而caspase-9活性则在60h后有显著提高。这说明线粒体介导的信号通路参与了心肌细胞凋亡。另外,我们把心肌细胞培养液中的Mg2+浓度由1mM增加为10mM时,细胞的凋亡率会显著降低,其中48h下降了8.4％(p<0.05),60h下降了13.9％(p<0.05)。这说明下调MagT1所致的胞内Mg2+下降可能是诱发细胞凋亡的上游起始信号。 以上结果提示：①MagT1是心肌细胞的重要镁离子转运体,其功能与心肌细胞内的Mg2+摄入／平衡有关；②siRNA下调大鼠心肌细胞MagT1后,会使细胞内Mg2+浓度显著降低并伴随有细胞凋亡,机制与线粒体凋亡信号通路有关。其对心肌细胞电生理的影响尚待进一步研究。

摘要：抑制细胞色素P-450(CYP450)ω-羟化酶作用20-羟二十烷四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic，20-HETE)产生降低，明显抑制心肌梗死面积。但是20-HETE对心肌细胞的作用还不清楚。因此，本研究旨在研究20-HETE对细胞内钙离子水平和活性氧( ROS)的影响。利用钙离子荧光探针Fluo-3染色，运用激光共聚焦显微镜检测20-HETE对培养大鼠乳鼠心肌细胞内钙离子浓度及钙瞬变的影响；ROS荧光探针DHE可穿透细胞，检测胞内ROS，Image ProPlus软件测定药物处理前后荧光强度的变化；运用光泽精化学发光法测定NADPH氧化酶活性。20-HETE（0.1umol/L）孵育，可以使胞内钙离子浓度由531±35.0增加到942±47.2，升高44％，且钙瞬变的幅度由2.8±0.24增加到4.2±0.27升高33％，20-HETE造成的细胞内钙离子超载的作用可明显被ROS清除剂tempol(100 u M)和NADPH氧化酶抑制剂加拿大麻素(apoeynin，1uM)阻断。20-HETE(O.1 u M)可致心肌细胞内超氧化物阴离子从31±1.2增加到40±1.7升高23％，同时使NADPH氧化酶活性由152972±11354.5增加到209932±17738.5增加27％。上述研究表明20-HETE引起心肌细胞钙超载：20-HETE激活NADPH氧化酶导致胞内ROS水平上调，造成心肌细胞钙超载。20-HETE可能与心肌缺血造成的心肌损伤有关。

摘要：20-羟二十烷四烯酸（20-HETE），细胞色素P450s（CYP）ω-羟化酶的花生四烯酸的代谢物，具有重要的血管紧张度调节作用。但是关于20-HETE对心脏的作用报道甚少，尤其在心肌细胞水平的研究更少。为了揭示20-HETE在对心肌细胞凋亡的作用，本文研究了外源20-HETE对培养的乳鼠心肌细胞诱导凋亡的效应及其信号通路，发现20-HETE可以通过线粒体信号通路诱导心肌细胞凋亡。方法与结果：（1）通过FITC-annexinV/propidium iodide（PI）双染的方法检测细胞凋亡率，发现与对照组相比，20-HETE处理后，细胞凋亡率从20.7±0.8％升高到31.7％±2.0％；（2）通过激光共聚焦，利用JC-1做荧光探针，发现20-HETE可以使心肌细胞线粒体膜电位升高，这就意味着线粒体内凋亡信号分子的释放，激活了心肌细胞凋亡的线粒体信号通路。细胞凋亡是细胞程序性死亡，有重要凋亡基因的参与；（3）通过RT-PCR的方法对促凋亡基因Bcl-2和抑凋亡基因BaxmRNA的表达进行了检测，发现20-HETE能引起Bcl-2的表达下调，而Bax的表达上调，Bax蛋白的表达可以进一步促进线粒体凋亡因子的释放；（4）对凋亡蛋白Caspase-3的活性进行了检测，显示20-HETE导致Caspase-3产生增多，进一步证明了凋亡的发生；（5）通过对于[Ca2+]i的测定，发现20-HETE可能通过增加[Ca2+]i引起钙超载，激活了线粒体信号通路，导致心肌细胞发生凋亡，而引起一系列的级联反应。这些结果揭示了20-HETE可以通过线粒体信号通路诱导心肌细胞凋亡，这为进一步研究20-HETE在心脏上的作用做出了理论依据。

摘要：20-HETE是花生四烯酸在CYP450w-羟化酶催化作用下形成的代谢产物。它在血管收缩的调控中起到重要的作用。20-HETE在心脏中同样起到一个重要的作用，在糖尿病大鼠心脏中的20-HETE含量是正常大鼠的2倍。在缺血再灌注模型中，20-HETE的抑制剂起到了心肌保护的作用，外源性的给子20-HETE可以使心肌损伤增加。
　　 缓激肽(BK)是引起血管舒张的一种肽，能够引起血压降低。它也是典型的血管紧张素转换酶(ACE)的抑制剂，被用来降低血压；在缺血再灌注损伤中，缓激肽能够减轻缺血再灌注损伤，延缓心力衰竭进程。
　　 一些发现认为，BK引起的血管舒张作用被NO和CYP450代谢产物20-HETE介导，并且有报道说BK在亨氏袢升支(TALH)中刺激20-HETE的合成。但在心脏中，BK与20-HETE的这种作用还未见有报道。本文就BK在20-HETE引起的大鼠心肌力学变化中的作用进行研究。
　　 我们揭示出20-HETE的缩血管作用能够被BK调节的可能性，我们在体重150-200g的Wistar大鼠中测定BK在20-HETE引起的心肌力学改变中的作用。在体内的心脏变化模型中，应用心肌力学（右颈动脉插管）和Langendorff的方法，通过PowerLab生命科学数据采集系统记录心肌力学的变化。心肌力学指标包括：LVP(kPa)、LVEDP(kPa)、心率（beat/min）、±dp/dtmax(kPa/s)，数据用Chart5Ch特异性设计软件分析。
　　 在灌流心脏中，左心室收缩压(LVSP)随着20-HETE剂量的不同而改变。在低剂量时，20-HETE(1-3nM)提高LVSP和±dp/dt:在高剂量时，20-HETE(10nM)使LVSP降低。但高剂量的20-HETE(10nM)能够显著的提高心率，而低剂量（1-3nM）与对照组相比没有显著的变化。在在体心肌力学中，静脉注射BK30nM能够使由20-HETE3nM引起的LVSP的升高(8.51士0.57kPa)降低19.81％(7.95士0.49 kPa)。在被灌流的心脏中，注射BK30nM能够使由20-HETE3nM引起的LVSP的升高降低11.76％。可见，BK能够对抗由20-HETE引起的心脏损伤的作用。
　　 本文就BK对20-HETE引起的心脏损伤的抑制作用进行研究，这将为由20-HETE介导的心脏疾病的治疗提供一些理论依据。

摘要：在血管平滑肌上已发现4种钾通道：①大电导钙激活性钾通道(BKca)；②电压依赖性钾通道(Kv)；③内向整流钾通道(Kir)；④ATP敏感性钾通道(KATP)。在这些类型的钾离子通道中，大电导钙激活钾离子通道(BKCa)在平滑肌上广泛表达，在调节膜电位及血管平滑肌张力方面具有重要作用。已经证实其非正常的表达及功能紊乱与心血管疾病的发生有着密切的关系。
　　 本研究选用Sprague-Dawley(SD)雌性幼年大鼠，力竭性训练采用游泳的方式。具体方法是：力竭性训练组每天游泳2次，每次90min，两次训练之间间隔至少4hr。一周训练7天，共持续4周。在训练前进行8天进行预游泳训练，第一天游泳时间为10分钟，之后每天增加10分钟，每天训练两次，直到8天后，游泳时间达到90分钟后进行正式游泳训练。采用酶消化法为膜片钳实验提供大量SD大鼠原代胸主动脉平滑肌细胞。应用单通道内膜向外记录模式记录K+离子通道电流，并分析其特性变化。实验结果表明：①力竭性运动1周后，BKCa通道开放频率没有变化；力竭性运动2周后，BKCa通道开放频率发生增加；力竭性运动3周和4周后，BKCa通道开放频率明显增加。②力竭性运动后，BKCa通道的单通道电导没有发生显著变化。