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[博士论文] 韩文婷
卫生毒理学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  苯是广泛存在于职业环境和生活环境中的污染物,1982年被国际癌症研究机构(IARC)确定为环境致癌物质。在我国,慢性苯中毒连续多年位于慢性职业中毒原因的首位。吸烟和汽车尾气的排放是生活环境中苯的主要来源,苯污染已经成为亟待解决的环境污染问题。苯具有血液毒性,诱发血细胞减少,再生障碍性贫血,粒细胞白血病等,早期以外周血白细胞减少症为主要特征。苯的毒性作用尚无明确的阈值,流行病学的资料发现,即使空气中的苯暴露浓度低于1ppm,职业工人的外周血白细胞和血小板计数明显低于对照组,因此,日常生活生活中预防苯中毒显得尤为重要,开发有效的营养策略来防治环境中的苯中毒具有重要的理论和现实意义。
  大蒜在受到切割、挤压等处理时,大蒜中的蒜氨酸酶被激活,催化蒜氨酸转化为大蒜素,迅速被代谢分解生成多种有机硫化物(OSCs),如二烯丙基一硫(DAS),二烯丙基二硫(DADS),二烯丙基三硫(DATS)、烯丙基甲基硫化物(AMS)、S-烯丙基半胱氨酸(SAC)和S-烯丙基巯基半胱氨酸(SAMC)等。已知大蒜中的有机硫化物具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、抗菌、化学预防作用等生物活性。尤其是大蒜有机硫化物能通过促进化学毒物的解毒和排出,从而发挥化学预防作用。王硕等人的研究发现,二烯丙基三硫能通过调节代谢酶细胞色素P450酶,拮抗正己烷诱导的周围神经损伤。曾涛等人的研究表明,在荷瘤小鼠中,大蒜油(大蒜脂溶性提取物)能抑制化疗药物环磷酰胺和放射治疗诱导的外周血白细胞减少症。我们前期的研究也发现,大蒜油能拮抗苯诱导的外周血白细胞减少症,但其有效成分和作用机制尚不明确。有研究表明,大蒜有机硫化物的生物活性可能与硫集团数目有关。
  因此,本研究选用大蒜提取物中含有三个有机硫基团的二烯丙基三硫(DATS)作为干预药物,经口灌胃建立苯诱导白细胞减少症的动物模型,观察二烯丙基三硫对苯诱导的外周血白细胞减少症的拮抗作用,并从抗细胞凋亡、抗氧化、调节苯代谢、PI3K/Nrf2/ARE通路调节四个方面,分析其可能的作用机制。以期为开发二烯丙基三硫的药效作用提供理论依据,为慢性苯中毒的防治提供营养防治策略。
  方法:
  1.观察大蒜的三种有机硫制剂对苯诱导的白细胞减少症的预防作用。
  昆明小鼠110只,随机分为11组,即空白对照组、模型组、大蒜匀浆(GH)低、高剂量干预组、大蒜匀浆对照组、大蒜油(GO)低、高剂量干预组、大蒜油对照组、二烯丙基三硫(DATS)低、高剂量干预组和DATS对照组。除空白对照组和苯模型组外,分别用GH,GO和DATS经口灌胃进行干预,2h后,苯模型组和各干预组经口给与苯-玉米油混悬液(1.3g/kg BW)染毒,对照组给与同等体积的玉米油,每天一次,共21天。全自动血球计数仪检测外周血中白细胞计数(WBC),分离肝脏、脾脏和胸腺,计算脏器指数和肝脏、脾脏组织切片病理学检查,观察三种大蒜制剂对苯诱导的靶器官损伤的保护作用,并比较可能的不良事件。
  2.PI3K-Akt通路介导的细胞凋亡和抗氧化作用在DATS拮抗苯诱导的外周血细胞减少症中的作用
  60只雄性SD大鼠随机分为6组,分别为:空白对照组,模型组,DATS低、中、高干预组和DATS对照组,每组10只。3个DATS干预组分别经口给予DATS(15,30,45mg/kg BW),2h后,除了2个对照组给与同体积玉米油外,其余4组大鼠均经口灌胃苯-玉米油混悬液(1.3g/kg BW)建造苯诱导白细胞减少症动物模型,每天1次。28天后,经腹主动脉取血,检测外周血细胞计数。分离外周血中的单个核细胞(PBMCs)和股骨中的骨髓细胞(BMCs),分别用流式细胞仪检测细胞凋亡水平,Weston blot检测凋亡相关蛋白和PI3K-Akt通路蛋白的表达。测定细胞内活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)水平评估氧化应激水平,检测非酶性抗氧化物质还原型谷胱甘肽(GSH)水平,抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和谷胱甘肽还原酶(GR)活性,评估抗氧化能力。
  3.苯体内代谢的调节在DATS拮抗苯诱导的外周血白细胞减少症的中毒作用
  50只雄性SD大鼠随机分为5组,即空白对照组,模型组,DATS低、高干预组和DATS对照组,每组10只。DATS干预组和对照组大鼠分别经口灌胃不同剂量DATS(15,30mg/kg.BW),其他组给与同体积玉米油,2h后,除对照组外,经口灌胃苯(1.3g/kg/d)建造苯诱导外周血白细胞减少症模型,每天1次,共28天。收集24小时尿液,高效液相色谱分析尿中苯代谢物苯巯基尿酸(SPMA)和反式-反式粘糠酸(t,t-MA)的含量;腹主动脉取血,全自动血球计数仪分析外周血细胞计数,化学法检测肝脏代谢酶细胞色素P4502E1(CYP2E1)、谷胱甘肽-S-转移酶GST和骨髓组织中代谢酶髓过氧化物酶酶(MPO)、NADPH:醌氧化还原酶(NQO1)的活性,Western Blot检测这些代谢酶的蛋白表达水平。
  结果:
  1.观察大蒜的三种有机硫制剂对苯诱导的白细胞减少症的预防作用。
  结果显示,模型组小鼠外周血白细胞计数降低至对照组的41.31%(p<0.01),而大蒜匀浆(400mg/kg)、大蒜油(60mg/kg)和DATS(30mg/kg)干预后,外周血白细胞计数分别比模型组增加了144.04,140.07和148.34,各干预对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义。肝脏指数在各组间无统计学差异,病理检查未发现异常,而苯模型组小鼠的脾脏指数和胸腺指数分别比空白对照组降低44.99和54.04,脾结节减少,胸腺萎缩。而三种大蒜制剂干预后,脾脏和胸腺指数均明显增高,仅大蒜匀浆(400m g/kg)和大蒜油(60mg/kg)对照组,小鼠脾脏肿大,脾脏指数比空白对照组高32.03和28.61(p<0.05)。苯染毒后,小鼠体重明显下降,三种干预均能在一定程度上使体重恢复增长,但DATS效果最好。
  2.PI3K-Akt通路介导的细胞凋亡和抗氧化作用在DATS拮抗苯诱导的外周血细胞减少症中的作用
  模型组大鼠外周血白细胞(WBC)和红细胞(RBC)计数分别降低至对照组的31.0和79.2。而DATS(30,45mg/kg)能有效抑制外周血细胞的减少。流式细胞仪检测细胞凋亡水平的结果显示,模型组大鼠外周血单核细胞和骨髓细胞的凋亡率分别增至对照组的274和284。Weston blot的实验结果显示,细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调,Bax和活化的caspase-3的蛋白表达上调,磷酸化PI3K和Akt蛋白表达下调。而DATS干预能有效抑制这些反应,并呈剂量依赖趋势。相对于模型组,在30,45mg/kg DATS干预组中,DATS干预使外周血WBC数量增加至267.1和304.8%,而RBC数量增加至108.6和117.7%。细胞凋亡水平下降,凋亡相关蛋白的表达水平也相应恢复,PI3K/Akt通路相关蛋白的表达水平也恢复正常水平。苯染毒后,模型组中大鼠的PBMCs和BMCs氧化应激水平增强,PMBCs中的ROS和MDA水平分别增高3.4和1.5倍,BMC中的ROS和MDA水平分别增高3.3和2.2倍。PBMCs和BMCs中的GSH水平分别降低42.7和45.2,抗氧化酶SOD、GSH-Px和GR活性均下降。DATS干预后,细胞中氧化应激参数下降,氧化酶活性增强,GSH含量增加,并呈一定的剂量依赖性。
  3.苯体内代谢的调节在DATS拮抗苯诱导的外周血白细胞减少症的中毒作用
  苯暴露后,大鼠外周血白细胞计数比空白对照组降低了65.5,尿中可检测到两种苯代谢物。DATS干预后,大鼠外周血白细胞计数比模型组分别增高0.64和1.67倍,尿中t,t-MA水平分别降低了19.84和53.68,而SPMA水平增加了0.55倍和0.92倍。苯暴露后,参与苯活化代谢的代谢酶CYP2E1和MPO的酶活性分别增高为对照组的1.80倍和3.03倍,而参与苯解毒代谢的GST和NQO1的酶活性分别减低为对照组的70.53和42.44,酶蛋白表达水平也表现为类似变化。DATS干预后这一现象可明显逆转,特别在DATS(30mg/kg)干预组中,CYP2E1和MPO的酶活性和蛋白表达水平明显低于对照组,而GSTT1和NQO1酶活性和蛋白表达水平明显高于对照组(p<0.05)。
  结论:
  1.生大蒜匀浆、大蒜油和DATS三种大蒜制剂均能有效拮抗苯诱导的外周血白细胞减少症,其中DATS预防效果和安全性最好。
  2.DATS能通过激活抗氧化酶和提高非酶性抗氧化物的水平,拮抗外周血单核细胞和骨髓细胞中苯诱导的氧化应激。
  3.苯诱导的外周血细胞减少可能与氧化应激诱导的外周血单核细胞和骨髓细胞凋亡有关,DATS能通过调节细胞凋亡有效拮抗苯诱导的血细胞减少症,激活PI3K/Akt通路可能是DATS调节氧化应激诱导的细胞凋亡的重要机制。
  4.DATS通过抑制代谢酶CYP2E1和MPO介导的苯代谢活化和激活GSTT1和NQO1介导的苯解毒代谢过程,从而减少有毒代谢产物的生成,拮抗苯诱导的白细胞减少症。
  5.DATS通过PI3K/Nrf2/ARE信号通路增强抗氧化酶介导的抗氧化作用和促进Ⅱ相代谢酶介导的解毒代谢过程,从而拮抗苯诱导的血液毒性和细胞毒性。
[博士论文] 于洪存
影像医学与核医学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:血友病是遗传性出血性疾病,由于凝血因子缺乏或活性凝血活酶生成障碍所致,具有易出血、凝血时间延长倾向。根据缺乏凝血因子种类分为三种:血友病A、B和C,分别缺乏第Ⅷ、Ⅸ和Ⅺ凝血因子。根据患者凝血因子活性占正常人活性百分比,把血友病A分为亚临床型、轻型、中间型和重型。血友病B的轻重分型,一般参照A型分型标准。血友病假肿瘤(hemophilic pseudotumor,HP)是血友病的一种并发症,是在血友病疾病基础上发生的软组织和骨骼部位或其他部位的血肿,多为亚急性或慢性。Starker等在1918年首先描述本病,临床上比较罕见,约占血友病患者1-2%,以四肢和骨盆多见,亦见于其他四肢骨、胸腔、腹腔和颅脑。Brant EE和Sim KB等根据HP发生在肌骨不同部位分为3型:Ⅰ型,HP在软组织;Ⅱ型,在骨膜下;Ⅲ型,在骨骼内。HP虽然是一种良性病变,但患者具有出血后不易控制特点,若诊断不当或处理不合理,就会给患者和临床带来很大麻烦,严重者导致残疾或截肢,因此HP影像诊断与临床治疗一直是医学热点和难点。
  由于本病临床上少见,常由于对本病缺乏认识,影像学易出现误诊,临床上易出现错误评估或误诊误治。国内1991年肖官惠等分析了10例HP患者X线表现,病变都在四肢部位,重点讨论HP的膨胀性骨质破坏和骨膜增生形态;2012年胡曙东等探讨了16例骨骼和软组织HP的计算机体层摄影(computer tomography,CT)征象,总结了HP的溶骨性破坏,钙化和软组织肿块形成等CT表现;2016年黄晓辉等分析了12例A型血友病HP的多种影像学表现,其中报道了5例磁共振(magnetic resonance imaging,MRI)检查患者,初步分析了HP对肌骨损害的MRI表现。在国外报道中,1972年Brant研究了6例骨骼HP的X线基本征象,1980年Guilford等报道了2例骨盆HP骨质破坏的CT表现,1997年和2004年Jaovisidha和Park JS分别讨论了几例HP的MRI表现,提出MRI检查对HP病变显示具有敏感性。
  总之,从国内外文献中,发现对HP的MRI研究相对较少,可能与病例少见,获得的患者病例样本较少有关,有必要进一步探讨HP的MRI表现;有关HP引起关节破坏和腹腔HP相关影像信息报道较少,本研究将初步探讨有关这方面内容。软组织内HP易导致肌肉、筋膜等破坏,还会引起邻近骨膜水肿或增生,压迫骨皮质使骨髓腔狭窄及骨髓水肿等。运用3TMRI分析软组织HP的大小、生长方式及位置等因素,探讨这些因素是否与引起骨骼变化有关,可以获得对软组织HP某些新的认识。GE Signal1.5T磁共振成像仪和西门子MAGNETOM Skyra3.0T智能MRI仪在HP病变显示上具有较高的敏感性,充分发挥MRI在判断和评估HP病情方面优势,特别是T2加权成像压脂(T2weighted imaging fat suppression,T2WIFS)序列和质子密度成像压脂(proton density weighted imagingfat suppression,PDWIFS)序列能有效消除软组织中和骨髓腔中脂肪信号,避免脂肪组织引起的图像干扰,清晰真实呈现HP的MRI信号特点。GE discovery XR650数字摄影(digital radiography,DR)X线机和GE discovery CT750HD FREEDOM CT扫描仪也为肌骨HP检查提供了多种影像学设备联合应用,且具有有效减少辐射剂量优势。
  目的:
  1、研究肌骨部位HP和关节及腹盆部特殊部位HP在X线、CT和3TMRI影像学表现,有利于提高对本病多种影像学的全面认识,减少误诊、避免延误治疗和错误治疗。
  2、运用3TMRI T2WIFS和PDWIFS序列成像,分析软组织HP引起的骨膜和骨髓变化,研究软组织假肿瘤的最大纵径、最大横径、HP与骨骼距离及HP包绕骨骼范围的大小对骨骼影响,可以使影像学医师和临床医师获得对软组织内HP新的认识,为临床医师预治预判提供参考和指导。
  方法:
  研究对象收集本院2001年2月至2016年12月经临床检验、影像学或手术结果证实的42例血友病HP患者。HP发生在软组织和(或)骨骼,均为血友病A型或B型。排除对象患者HP部位有手术史;HP部位合并其他性质病变;患者有其他与肌骨相关基础疾病。
  一般资料42例患者均为男性,年龄10-58岁,平均32.4±12.0岁。A型血友病患者34例(34/42,80.9%),B型血友病患者8例(8/42,19.1%);患者轻重程度:轻型患者2例(2/42,4.8%),中型患者31例(31/42,73.8%),重型患者9例(9/42,21.4%))。42例患者中,血友病病史3个月~36年,平均23±9.4年。自幼发现并诊断血友病患者23例。
  方法:
  1、42例患者中,31例经X线、CT和3.0TMRI检查,11例患者由于身体方面原因或考虑到自身受到的辐射剂量原因只进行了其中两种检查。把获得的所有检查影像信息,根据HP发生部位进行分组,分别为软组织内HP,骨骼内HP(包括骨膜下HP),累及关节HP和腹盆部HP四个组,探讨和研究每组中的HP多种影像学表现。
  2、研究软组织HP(Ⅰ型HP)对骨骼影响:选择所有42例患者中,肢体软组织中存在HP的32位患者作为此研究对象,且所有选择的HP病变标准:均做MRIT2WIFS和PDWIFS序列扫描,每个病变具有可测量性,邻近骨骼具有可观察性,且邻近骨骼没有病变存在。(对多发病变患者,选取一侧肢体或两侧肢体上符合标准的病变来研究)。研究中涉及39个肢体,共39个病灶,其中25例患者为单侧肢体,7例患者为双侧肢体。在T2WIFS或PDWIFS序列的横断、冠状和矢状面上测量每个HP的最大横径(longest transverse diameter,LTD)、HP最大纵径(longest longitudinal diameter,LLD)、HP与骨骼距离(distance between pseudotumor and bone,D)及HP包绕骨骼范围(scope of bone wrapped,SOBW)。在以上两个序列中分别测量所得的每个HP的四个参数值,经统计学分析,在两个序列上测量值没有统计学差异。
  结果:
  1、HP影像学表现(1)骨骼HP(Ⅲ型),在17例患者骨骼上发生27处病变,其中呈纯溶骨性骨破坏者8处、囊样骨破坏者6处、膨胀性骨破坏者13处;骨皮质变薄或不连续者14处、累及邻近关节者5处、病变内斑点状和小斑片状钙化者16处、软组织肿块形成11处及病变密度不均匀者19处;在T1WI,T2WIFS和PDWIFS图像上,病变呈混杂、高低不等信号者18处,边界有骨硬化或假包膜形成低信号边缘者23处。(2)关节内HP3例,关节面和骨端均有骨质破坏,关节肿胀畸形。(3)骨膜下HP(Ⅱ型),在5例患者骨膜下发生8处病变,沿骨膜下纵轴发展者5处,向外生长者3处,压迫骨皮质(或髓腔)者8处,骨膜增生增厚者6处,形成骨膜三角者2处。
  2、软组织内HP(Ⅰ型)引起骨膜变化和骨髓水肿结果
  在选择研究的39个软组织内HP病变中,骨膜改变组病变为24个(24/39,61.5%),非骨膜改变组病变为15个(15/39,38.5%);39个软组织HP病变中,骨髓水肿组病变为15个(15/39,38.5%),非骨髓水肿组病变为24个(24/39,61.5%)。在39个软组织内HP中,同时引起骨膜改变和骨髓水肿的病变5个,由于这类病变的个数较少,未与同时无骨膜和无骨髓变化的软组织内HP病变的参数(LTD、LLD、D和SOBW)做统计学分析。
  结论:
  1、HP在X线、CT和MRI不同影像学检查上表现具有多样性,但皆具有血肿影像学特点;MRI能比较真实的显示假肿瘤内血肿成分信号及假包膜和含铁血黄素沉者,在诊断和鉴别诊断上有重要价值。
  2、软组织HP(Ⅰ型HP)的SOBW、LLD、D三种参数大小是影响邻近骨膜变化的因素;SOBW和LLD的大小是影响骨髓水肿的因素。
  临床意义:
  通过对42例骨骼和软组织内HP和特殊部位HP的多种影像学综合分析,特别是MRI多种序列应用,有助于影像科医师和临床医师比较清晰全面的认识HP病变,有助于HP与骨巨细胞瘤,骨肉瘤及动脉瘤样骨囊肿等其他疾病的鉴别诊断,减少误诊;为临床及时及早制定合理治疗方案提供参考依据。
  创新性:
  1、比较系统地对42例不同部位HP的X线、CT和3TMRI三种影像学进行归类总结分析,探讨了不同部位HP多种影像学检查表现,一定程度上扩展了对HP的认知程度,克服了以往因病例较少报道的局限性和片面性。2、运用T2WI FS和PDWI FS序列成像,研究了导致骨骼变化的软组织内HP(Ⅰ型HP)的LLD、SOBW、LLD和D四个参数因素,应用统计学方法分析得出了SOBW、LLD和D三个参数的大小是引起骨骼变化因素;用定量的方法研究软组织内HP影响骨骼变化因素,克服了定性研究中主观因素影响的不足。
  不足:
  1、本研究着重在HP影像学分析上,缺乏组织学病理图片对照研究。
  2、样本量较小,在统计学上可能存在某些不足,以及可能限制本研究结果的广泛适用性。
[硕士论文] 黄爱杰
内科学(血液病学) 中国人民解放军海军军医大学;第二军医大学 2017(学位年度)
摘要:研究目的:
  异基因造血干细胞移植(allogeneic stem cell transplatation,allo-HSCT)后部分患者出现一系或多系血细胞减少,临床上以红系、巨核系减少为主,多见于Ⅱ°以上急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD),巨细胞病毒感染,更昔洛韦类抗病毒药物使用等情况。持续性血细胞减少提示患者预后不良,是移植相关并发症或死亡的重要原因之一。目前关于移植后造血功能不良的机制尚不十分清楚,治疗手段有限。本研究主要纳入接受allo-HSCT的血液系统恶性肿瘤患者,动态观察移植前后各时间点白细胞、中性粒细胞、血红蛋白、血小板计数水平、骨髓和外周血细胞因子的动态变化,分析造血功能不良特别是持续性血小板减少患者的临床特征及相关危险因素。利用骨髓体外集落培养、多参数流式细胞术分析各类造血干、祖细胞增殖情况,探究异基因造血干细胞移植术后造血功能异常、尤其是血小板减少的机制,为临床治疗提供新策略。
  研究方法:
  移植后血小板减少患者的临床特征分析2015年8月至2017年2月接受allo-HSCT的病历资料完整且移植后无复发的血液系统恶性肿瘤患者56人,动态观察其移植前(-7天),移植后15天、30天、60天、90天、180天、270天、360天的外周血三系计数变化,根据有无aGVHD及血小板减少(Thrombocytopenia,TP)发生分为3组:1)aGVHD/TP组:移植后+30天内造血重建成功,其后发生Ⅱ°以上aGVHD,而后出现持续性血小板减少(<20×109/L)7天以上,骨髓巨核增生低下,仍需输注血制品支持;2)造血良好组:移植后+30天内造血重建成功,血象稳定并逐渐恢复至正常水平(>90×109/L),未发生Ⅱ°以上aGVHD;3)造血不良组:移植后无aGVHD表现,血小板重建缓慢,+90天内血小板计数持续<90×109/L;另选取健康供体作为对照组。骨髓体外集落培养(CFU)将上述时间点骨髓,体外分离获取单个核细胞,进行体外集落培养,包括粒细胞集落形成单位(CFU-G)、巨噬细胞集落形成单位(CFU-M)、粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)、混合细胞集落形成单位(CFU-Mix)、红细胞集落形成单位(CFU-E)、爆式红细胞集落形成单位(BFU-E)、巨核细胞集落形成单位(CFU-Mk),每组6个复孔,12-14天后显微镜下计数集落。骨髓微环境的变化将上述时间点骨髓,体外分离纯化为单个核细胞,取1×106单个核细胞标记单克隆抗体,应用多参数流式细胞术检测造血干/祖细胞(CD34+)、造血干细胞(CD34+CD38-)、造血祖细胞(CD34+CD38+)、髓系祖细胞(CD34+CD38+CD135+CD10-)、巨核系-红系定向祖细胞(CD34+CD38+CD135-CD10-)细胞群;骨髓内皮细胞(CD45CD34+CD309+)、管周细胞(CD45-CD34CD146+)和骨髓巨核细胞(CD41+);CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞、Th1(CD3+CD4+IFN-r+)、Th2(CD3+CD4+IL-17+)、Th17(CD3+CD4+IL-17+)、Treg(CD3+CD4+CD25+FoxP3+)。统计学分析分析3组外周血三系恢复情况及与aGVHD的关系,采用IBM SPSS Statistics20、Graphpad Prism5统计分析,利用Kaplan-Meier生存曲线分析总体生存,Log-rank对生存差异进行比较。
  研究结果:
  1、移植后100天内发生临床Ⅱ°以上aGVHD13例,其中aGVHD/TP组共10例。按照移植后100天内aGVHD及并发血小板减少的情况将病人分为:aGVHD/TP17.86%(10/56),造血良好组为66.07%(37/56),造血不良组为16.07%(9/56)。中位aGVHD发生时间为52(24-92)天,aGVHD/TP组较造血良好组总体生存明显减低(P<0.0001)。aGVHD/TP组移植后血小板计数较造血良好组明显减低,同时伴血红蛋白计数下降,中性粒细胞计数无明显下降。骨髓形态学检查示:aGVHD/TP组中巨核细胞数量在aGVHD发生后减少,伴巨核细胞呈小圆巨核发育异常,产板减少,aGVHD/TP组与造血不良组巨核细胞数量无显著统计学差异;aGVHD/TP患者外周血中IL-2R在aGVHD发生时明显增高,且与血小板计数呈相反变化趋势。
  2、与正常供者来源骨髓相比,allo-HSCT后患者集落形成能力减低,以巨核系红系祖细胞(MEP)阶段为主,+60天后缓慢恢复至与正常供体相似;aGVHD/TP组较造血不良组各系CFU频率减低,但组间差异上无明显统计学意义;aGVHD/TP组各系造血细胞CFU频率较造血良好组明显下降,在移植后+90天组间差异明显;且巨核细胞呈现分化发育异常。
  3、造血良好组HSC/HPC的比例是波动变化的,整体水平高于aGVHD/TP组及造血不良组,在移植后1年内造血良好组HSC/HPC比例尚未完全恢复正常;其HSC、HPC、MEP均低于正常对照组,且MEP较其他细胞群恢复慢。aGVHD/TP组骨髓造血干/祖细胞及下游祖细胞相对比例均较造血良好组减低,在移植+30天以后差异明显,主要表现在HPC、CMP及MEP细胞群。
  4、在移植后15天至180天,aGVHD/TP组骨髓内皮与造血良好组相比,aGVHD/TP组与正常对照组相比均无显著差异;aGVHD发生后,aGVHD/TP组管周细胞及巨核祖细胞数目较其他两组明显减低。
  5、aGVHD/TP组Th1细胞群较造血良好组增高,造血不良组与造血良好组变化相似。
  研究结论:
  1、Allo-HSCT后患者多存在血红蛋白及血小板恢复迟缓,aGVHD/TP患者血小板计数较造血良好组明显减低,同时骨髓形态中巨核细胞比例明显下降,从各种细胞的恢复趋势看,造血不良组不同于aGVHD/TP组,造血最终能缓慢恢复。
  2、Allo-HSCT后患者各系集落形成能力减低,以CFU-E/BFU-E及CFU-Mk为主,aGVHD/TP组红系及巨核系集落除了数量上更明显的下降外,培养的巨核细胞呈现小圆巨核形态异常,产板减少,可能与aGVHD对造血细胞的二次打击有关。
  3、Allo-HSCT后流式检测骨髓造血细胞比例下降,以HSC/HPC及MEP为主,造血良好组HSC/HPC比例在移植后1年尚未完全恢复至正常,提示allo-HSCT使造血系统受损。而aGVHD/TP组各群造血细胞比例下降更为明显,提示aGVHD环境下干/祖细胞群造血抑制程度加深。
  4、aGVHD/TP组骨髓内皮虽无明显下降,由于病例数少,不能确定是否影响造血;aGVHD/TP组巨核祖细胞数目较其他两组明显减低,巨核细胞的异常可能对骨髓造血微环境异常有贡献。
  5、aGVHD/TP组Th1细胞群可能与aGVHD下血小板减少发生有关。
[博士论文] 冯锐
内科学(血液病) 山东大学 2017(学位年度)
摘要:背景:
  原发免疫性血小板减少症(Primary Immune Thrombocytopenia,ITP)是一种免疫因素介导的出血性疾病,主要表现为皮肤粘膜瘀点、瘀斑,严重时可出现消化道、泌尿生殖道出血,甚至出现脑出血危及生命。实验室检查以血小板减少、骨髓巨核细胞数量常增多伴成熟障碍、血小板生存时间缩短、血中出现血小板抗体为特点。近期研究表明,ITP的发病机制存在着较大的异质性,主要为机体出现抗血小板抗体而导致血小板破坏过多,同时细胞免疫功能异常,细胞毒性T细胞功能亢进也参与发病。
  脾切除术目前仍然被推荐为ITP的标准二线治疗,但脾切除术是有创性、侵入性手术,有围手术期和术后并发症,并且没有方法可以预测术后缓解情况和长期预后,因而当新的治疗药物不断出现且缓解率不断提高时,选择脾切除术进行治疗的患者和外科医师已经越来越少。二线方案中的药物主要包括利妥昔单抗、血小板生成素(Thrombopoietin,TPO)及其受体激动剂、免疫抑制剂、细胞毒药物等,以利妥昔单抗和TPO及其受体激动剂应用较多。
  然而,ITP治疗中选择利妥昔单抗作为二线治疗时仍存在一些问题需要进一步探讨,例如:有没有指标能预测利妥昔单抗治疗的效果?利妥昔单抗治疗的确切疗效以及应用时机?是否利妥昔单抗早期干预能推迟甚至于避免脾切除术等。另外,有研究发现大剂量地塞米松一线治疗ITP的疗效与血小板自身抗体的类型相关,但不同研究得出的结论并不一致。为此,论文进行了两方面的研究:1、血小板自身抗体与大剂量地塞米松和小剂量利妥昔单抗治疗ITP疗效的相关性研究;2、利妥昔单抗治疗ITP缓解率的Meta分析,以期为ITP个体化治疗提供依据。
  第一部分 血小板自身抗体与大剂量地塞米松和小剂量利妥昔单抗治疗ITP疗效的相关性研究
  目的:
  血小板特异性自身抗体是ITP体液免疫异常的标志,其与ITP治疗效果间的相关性尚未明确。本研究通过分析大剂量地塞米松一线治疗和小剂量RTX二线治疗ITP疗效与血小板特异性自身抗体(GPⅡb/Ⅲa抗体和GPⅠb/Ⅸ抗体)的关系,探究ITP一线、二线治疗疗效的预测指标。
  方法:
  分析山东大学齐鲁医院2010-2016年间213例ITP患者的血小板自身抗体与治疗疗效的关系。127例初治ITP患者使用大剂量地塞米松治疗,具体用法:40mg/d×4d,无效患者在半月后重复1次;86例激素治疗无效、不能耐受或复发的ITP患者使用小剂量RTX治疗,具体用法:100mg每周1次共用4周或375mg/m2×1次。所有患者在初始治疗前用改良单克隆抗体特异性俘获血小板抗原实验(MAIPA)检测血小板特异性自身抗体(GPⅡb/Ⅲa抗体和GPⅠb/Ⅸ抗体),评估具有不同抗体的ITP患者药物疗效的差异,进行统计分析。有效标准:血小板计数≥30×109/L,且比治疗前血小板计数增加2倍以上,同时临床无出血症状。
  结果:
  1、127例大剂量地塞米松一线治疗的患者,血小板自身抗体总阳性(单一GPⅡb/Ⅲ抗体阳性、单一GPⅠb/Ⅸ抗体阳性和抗体双阳性)率70.1%(89/127),GPⅡb/Ⅲa抗体阳性率42.5%(54/127),GPⅠb/Ⅸ抗体阳性率46.5%(59/127)。GPⅡb/Ⅲa抗体阳性组患者大剂量地塞米松治疗有效率(38.9%,21/54)低于GPⅡb/Ⅲa抗体阴性组(74.0%,54/73),差异有统计学意义(P<0.05)。GPⅠb/Ⅸ抗体阳性组有效率(61.0%,36/59)与GPⅠb/Ⅸ抗体阴性组(57.4%,39/68)差异无统计学意义(P>0.05)。经多因素分析,地塞米松疗效与患者年龄(P>0.05,OR0.956,95%CI0.932~2.016)、性别(P>0.05,OR1.168,95%CI0.526~4.982)、基础血小板数目(P>0.05,OR1.506,95%CI0.986~2.259)不存在相关性。
  2、86例小剂量利妥昔单抗二线治疗患者中血小板自身抗体总阳性(单一GPⅡb/Ⅲ抗体阳性、单一GPⅠb/Ⅸ抗体阳性和抗体双阳性)率58.1%(50/86),GPⅡb/Ⅲ抗体阳性率41.9%(36/86),GPⅠb/Ⅸ抗体阳性率36.0%(31/86)。GPⅡb/Ⅲa抗体阳性组患者小剂量利妥昔单抗治疗有效率(75.0%,27/36)高于GPⅡb/Ⅲa抗体阴性组(46.0%,23/50),差异有统计学意义(P<0.05)。GPⅠb/Ⅸ抗体阳性组有效率(54.8%,17/31)与GPⅠb/Ⅸ抗体阴性组(60.0%,33/55)差异无统计学意义(P>0.05)。经多因素分析,利妥昔单抗疗效与患者年龄(P>0.05,OR0.996,95%CI0.966~1.027)、性别(P>0.05,OR0.939,95%CI0.351~2.516)、基础血小板数目(P>0.05,OR1.030,95%CI0.958~1.107)、利妥昔单抗不同给药方式(P>0.05,OR0.921,95%CI0.348~2.433)不存在相关性。
  结论:
  1、血小板GPⅡb/Ⅲa抗体阳性是糖皮质激素一线治疗初治ITP效果不佳的预后指标;
  2、血小板GPⅡb/Ⅲa抗体阳性是利妥昔单抗二线治疗ITP效果较好的预后指标;
  3、血小板GPⅠb/Ⅸ抗体与糖皮质激素和利妥昔单抗治疗ITP疗效无相关性。
  第二部分 利妥昔单抗治疗ITP缓解率的Meta分析
  目的:
  通过数据库检索大量文献,采用Meta分析系统评估利妥昔单抗治疗ITP的确切疗效及其在ITP治疗中的地位,以期为临床合理、安全甚至早期使用利妥昔单抗治疗ITP提供理论依据。
  方法:
  检索Medline(Pubmed)、Embase、Cochrane Library、Google学术搜索引擎。根据制定的纳入标准及排除标准进行文献筛选,对符合标准的文献进行数据提取,主要数据包括治疗方案、完全反应率(CR)、有效率(OR)。方法学质量按照Cochrane Collaboration Reviewers'Handbook的要求及标准进行评价及解释。
  本次Meta分析中,主要研究指标为利妥昔单抗治疗ITP的有效率(OR),包括PLT≥30×109(OR30)或50×109/L(OR50),次要研究指标为完全反应率(CR),PLT≥100×109/L(CR100)或150×109/L(CR150)。由于所收集的临床对照试验中的对照组包含不同的治疗方案,所以无法进行对照分析;药物不良事件的分类方法完全不同,因而未总结利妥昔单抗治疗ITP的安全性。使用I2检验和Q检验判断研究资料的异质性。如果存在异质性,则进行亚组分析和敏感性分析寻找异质性的来源。报告偏倚使用漏斗图和Egger线性回归法进行评价。分析软件是Meta-Analyst,采取Review Manager进行偏倚检测。
  结果:
  初步检索数据库,共获取文献4077篇,阅读文献题目和摘要筛选后,排除3956篇,阅读全文后排除114篇,最终有7篇文献纳入Meta分析。每篇文献中的患者从60例到138例不等,共计716例。
  4篇文献报道了171名患者OR30为67.7%(95%CI:0.60~0.74),研究之间不存在异质性(I2=0.0%,P=0.39)。4篇文章报道了188名患者OR50为60.4%(95%CI:0.45~0.73),研究之间存在着中度异质性(I2=42.5%,P=0.01)。Li等的试验是导致异质性的原因,当排除该文献后异质性明显下降(I2=37.4%,P=0.08)。6篇文章报道了251名患者的CR100为48.1%(95%CI:0.37~0.59),研究之间存在轻度异质性(I2=39.6%,P=0.01)。通过针对试验设计的亚组分析发现,每周100mg连用4周利妥昔单抗剂量组的文献数据可能是导致异质性的主要原因。针对试验地域的亚组分析发现,非欧洲地区的试验数据是导致异质性的另一因素。通过逐一排除各个试验的敏感性分析发现,没有任何一项试验能单独导致异质性出现。2篇文献报道了95名患者CR150为31.8%(95%CI:0.15~0.55),研究之间存在中度异质性(I2=44.0%,P=0.03)。Zaja等的文献中,利妥昔单抗合并了地塞米松治疗ITP可能是导致异质性的原因。
  在OR30分析中,漏斗图基本对称,Egger线性回归分析显示不存在明显发表偏倚(P=0.029,95%CI:0.195~1.395)。在OR50和CR100分析中,漏斗图良好的对称性和Eggger线性回归分析(OR50,P=0.479,95%CI:-1.007~1.514;CR100,P=0.379,95%CI:-0.552~1.162)均表明不存在发表偏倚。在CR150的分析中,提示可能存在发表偏倚,试验数量偏少可能是导致偏倚的主要原因。
  结论:
  本Meta分析显示,利妥昔单抗在治疗ITP治疗中具有着较高的缓解率,因此,利妥昔单抗在ITP治疗方案中是一个很好的选择,在ITP的治疗中尽早使用利妥昔单抗具有一定的合理性。虽然未能对利妥昔单抗安全性进行分析,但是在本分析中的7篇文献均显示利妥昔单抗治疗ITP时不良反应较少,安全性好,严重不良反应罕见。
[博士论文] 刘双
内科学(血液病) 山东大学 2017(学位年度)
摘要:背景:Fcγ受体(Fc gamma receptors,FcγRs)是一种在体内多种细胞表面表达的糖蛋白,属于免疫球蛋白超家族的成员,Fcγ受体与IgG的Fc段特异性结合,引发多种免疫反应,是非常重要的免疫调节分子,不仅维持机体的正常生理平衡,在免疫损伤、炎症性疾病和肿瘤的发病及进展过程中起着非常重要的调节作用。人类FcγRs分三类,即FcγRⅠ/CD64、FcγPⅡ/CD32和FcγRⅢ/CD16,根据它们对免疫反应调节作用的不同又分为活化型受体(FcγRⅠ、FcγRⅡa、FcγRⅢ)和抑制型受体(FcγRⅡb)。FcγRⅠ分布在单核细胞、树突细胞、巨噬细胞及中性粒细胞表面,是唯一的高亲和力Fcγ受体。FcγRⅡ分FcγRⅡa和FcγRⅡb两种亚型,主要与聚合IgG相结合,具有低到中度亲和力,广泛表达于单核细胞、树突细胞、自然杀伤细胞(naural killer cell,NK)、中性粒细胞及血小板等。FcγRⅢ结合单体IgG能力较弱,与聚合IgG有低到中度结合力,主要在单核/巨噬细胞、中性粒细胞、NK细胞表面表达。FcγR的胞内段包含免疫受体络氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activating motif,ITAM)和抑制基序(ITIM),活化型抑或抑制型受体性质取决于此。活化型受体与相应配体IgG-Fc结合,Src家族蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases,PTKs)活化使ITAM磷酸化,引起Syk蛋白募集,激活磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K),产生磷脂酰肌醇3,4,5,-三磷酸(phosphatidylinositol3,4,5-trisphosphate,PIP3),后者活化酪氨酸蛋白激酶(Bruton tyrosine kinase,BTK)和磷脂酶Cγ(phospholipase Cγ,PLCγ),产生二酰甘油(diacylglycerol,DAG)和肌醇三磷酸(inositol triphosphate,IP3),细胞膜的离子通道开放,钙离子内流,从而引发一系列免疫细胞活化反应,包括单核/巨噬细胞吞噬作用、抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)及细胞因子、炎症介质释放等。FcγRⅡb是Fcγ受体中唯一抑制型受体,免疫复合物与FcγRⅡb结合后,激活胞内ITIM信号,引起Src家族酪氨酸激酶去磷酸化,阻止活化信号传递,抑制机体免疫反应。另外,FcγRⅡb还可以抑制B细胞增殖、促进B细胞凋亡,从而维持机体免疫耐受。细胞表面往往同时表达活化型和抑制型Fcγ受体,细胞反应结果是两种受体比值决定的,很多因素可以影响两种受体的比例,这就可能导致机体免疫反应异常从而引发自身免疫病。目前大量研究证实,多种自身免疫病包括系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)、多发性硬化(multiple sclerosis,MS)、类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)、原发免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia,ITP)等都存在FcγR表达失衡,表现在活化型受体FcγRⅠ、FcγRⅡa、FcγRⅢ的表达升高而抑制型受体FcγRⅡb表达降低。活化型和抑制型FcγR的比例失衡在自身免疫病发生发展中起至关重要的作用,因此调节两种受体平衡是保持免疫耐受和治疗自身免疫病的有效途径。
  ITP以往称为特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura),现根据本病病因不明、免疫相关及出血表现不一等更名为原发免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia),是最常见的出血性疾病,占临床出血性疾病的1/3。临床多表现在皮肤黏膜出血、鼻出血、牙龈出血及女性月经过多,严重时可出现脏器出血、颅内出血等致命性出血。出血严重程度与血小板数量呈负相关,另外某些其他因素如年龄、机体状况、生活环境等也与出血风险相关。按病程长短ITP分为新诊断、持续性(3-12个月)和慢性(≥12个月)三大类。研究表明ITP是一种自身免疫病,机体免疫效应细胞过度反应,产生针对血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa和GPⅠb/Ⅸ的特异性IgG,其与血小板结合后作用于单核细胞表面FcγR,通过网状内皮系统被巨噬细胞吞噬,引起血小板的破坏。目前研究显示体液和细胞免疫介导的巨核细胞数量及质量异常所致血小板生成减少也在ITP发病中起重要作用。另外其他多种免疫失衡如Th1/Th2改变、Th17异常、细胞毒性T细胞直接破坏及T细胞抗原受体(T cell antigen receptor,TCR)基因表达变化等机制均可能参与了ITP的发病过程,确切发病机制有待进一步研究证实。
  目前ITP的治疗主要针对阻止血小板过度破坏和促使血小板的生成两种途径,包括糖皮质激素、免疫球蛋白、脾切除、利妥昔单抗等免疫抑制治疗和促血小板生成素治疗,通常ITP对上述治疗有效,但容易反复,需要多疗程控制,长期治疗伴随骨质疏松、高血压、免疫低下、严重感染等副作用。仍有约1/3患者迁延不愈,成为慢性ITP。
  ITP是最经典的Fcγ受体介导的自身免疫性疾病之一,已有研究证明活化型受体上调和抑制型受体下调是ITP患者发病的基础,同时伴随着ITP治疗有效,FcγR平衡趋向恢复。Samuelsson等应用静脉注射免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIg)治疗小鼠ITP,发现随着血小板恢复,小鼠脾巨噬细胞FcγRⅡb表达上升。Ashi发现对清除幽门螺杆菌治疗有效的ITP患者单核细胞活化型受体FcγRⅠ和FcγRⅡa表达下降而抑制型受体FcγRⅡb表达上升,治疗无效患者没有类似反应,说明清除幽门螺杆菌有利于恢复FcγR平衡从而治疗ITP。刘新光等研究了大剂量地塞米松治疗ITP患者前后FcγRs的表达,证实地塞米松影响Fcγ受体特别是抑制型FcγRⅡb表达。目前为止没有关于TPO-RAs对慢性ITP患者FcγRs表达影响的研究报道。
  目的:检测慢性ITP患者应用艾曲波帕治疗前后外周血单核细胞FcγRⅠ、Ⅱ、Ⅲ分子表达及FcγRⅡa、Ⅱb mRNA水平变化;体外观察ITP患者治疗前后单核细胞吞噬自身血小板的能力变化;检测ITP小鼠注射罗米司亭前后单核/巨噬细胞FcγRⅠ、Ⅱ、Ⅲ表达变化,探讨TPO-RAs对FcγRs系统的调控机制。
  方法:1.ITP患者治疗前后及健康对照外周血的准备:慢性ITP患者21例,健康对照者20例,分别于艾曲波帕服用前、服用6周后抽取外周血,分离单个核细胞和血浆。
  2.应用流式细胞仪检测外周血CD14+单核细胞表面FcγRⅠ、Ⅱ、Ⅱb和Ⅲ表达;免疫磁珠分离CD14+单核细胞,实时逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,real-time RT-PCR)测定FcγRⅡa、Ⅱb mRNA水平;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测ITP患者治疗前后和正常对照血浆中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的水平。
  结果:1.21位慢性ITP患者经艾曲波帕治疗6周后,治疗有效者占71.43%,其中完全缓解者占28.57%,治疗无效者占28.57%。
  2.流式检测结果表明:艾曲波帕治疗6周后,ITP患者单核细胞FcγRⅠ表达明显降低,FcγRⅡb表达明显升高,FcγRⅡ和FcγRⅢ的表达较治疗前无显著变化。在治疗有效组中,FcγRⅡb的表达较治疗前明显升高,FcγRⅠ表达明显降低;治疗无效组中,FcγRⅠ、FcγRⅡ和FcγRⅡb的表达治疗前后均无显著性差异;FcγRⅢ的表达在治疗有效组及无效组中均无显著变化。
  结论:1.血小板生成素受体激动剂(TPO-RAs)艾曲波帕治疗慢性ITP反应率高,耐受性好。
  2.艾曲波帕治疗慢性ITP患者6周后,单核细胞活化型受体FcγRⅠ表达下降,抑制型受体FcγRⅡb表达上升,FcγRⅡa/Ⅱb mRNA比值明显下降。
  3.艾曲波帕治疗有效后,随着ITP患者单核细胞抑制型受体FcγRⅡb表达回升,单核/巨噬细胞吞噬自身致敏血小板的能力下降。
  4.艾曲波帕治疗有效患者血浆抗炎细胞因子TGF-β1浓度升高,单核细胞FcγRs平衡恢复。
  5.血小板生成素受体激动剂罗米司亭治疗ITP小鼠后,血小板数值的恢复伴随单核/巨噬细胞活化型受体FcγRⅠ表达下降和抑制型受体FcγRⅡ表达升高。
  意义:本研究证明血小板生成素受体激动剂(TPO-RAs)是治疗慢性ITP的有效药物,血小板数目恢复伴随单核细胞抑制型受体FcγRⅡb表达升高,活化型受体FcγRⅠ、Ⅱa表达下降,FcγRs系统平衡恢复,提示TPO-RAs存在潜在的免疫调节作用,这可能为TPO-RAs治疗慢性ITP的一种新的作用机制。
[博士论文] 李平
内科学(血液病) 山东大学 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几部分展开论述:
  第一部分 获得性再生障碍性贫血患者健康相关生活质量影响因素研究
  研究背景:
  本研究为国内首次应用SF-36量表对再生障碍性贫血患者的生活质量进行评价,将纳入一般资料、化验指标、治疗方法等大量的自变量,细致分层,运用SPSS21.0分析软件进行多种统计学分析,不仅针对量表的八个维度,而且加入了生活质量总分、心理健康总分、生理健康总分作为因变量,探讨影响生活质量的因素,使得本研究结果更具新颖度和说服力。
  同时调查患者的社会支持情况(应用SSRS量表),分析其与生活质量之间的相关性亦是本课题结果的一大亮点。从而为提高患者生活质量、制定最佳策略、树立良好的社会家庭支持体系提供科学参考依据。
  研究目的:
  本研究旨在应用生活质量量表SF-36调查再生障碍性贫血患者的生活质量,统计患者人口社会学资料、临床特征、实验室检查等指标,分析影响生活质量的因素。
  研究方法:
  1.采用横断面病例对照研究。病例组来自2012年8月至2017年9月在山东大学齐鲁医院血液科住院的符合入组条件的获得性再生障碍性贫血患者。对照组为健康人群(年龄与性别匹配)。问卷内容包括患者的一般资料、实验室检查、生活质量量表三个部分。
  2.应用SF-36评估患者的生活质量。通过编码、计分、换算,得出各维度得分、生理健康总分、心理健康总分和生活质量总分。
  3.运用SPSS21.0软件对资料进行描述性分析、单因素分析、多因素分析和多元线性回归等。取P<0.05为有统计学差异。计量资料以((x)±s)表示。计数资料采用百分比或频率。两组之问用独立样本t检验。多组之间的比较采用单因素方差分析,若方差分析有差异,不同组间选用Least-significant difference(最小显著差,LSD)法进行均数多重比较。
  4.对研究结果进行分析总结。
  研究结果:
  1.与对照组相比,除总体健康自评外(患者的得分略高于健康对照组),病例组在生活质量的其他7个维度的得分均低于对照组。其中在躯体功能、躯体功能对角色的影响、生命活力、社会功能4个维度得分显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。
  2.血红蛋白大于90g/L和血小板计数大于30×109/L的AA患者的生活质量除躯体功能对角色的影响和社会功能2个维度外(病例组仍显著低于对照组),在其他维度的得分与正常对照组相比差异无统计学意义。生理健康领域(PCS)、心理健康领域(MCS)和生活质量总评分均接近正常人群。
  3.轻、中、重/极重度贫血患者在生命活力、躯体功能对角色的影响、情感对角色影响、躯体功能、社会功能5个维度及生理健康领域(PCS)、心理健康领域(MCS)和生活质量总评分(Total Score)方面差异性大,有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。重度或极重度贫血的患者生活质量下降最显著(P<0.05或P<0.01)。贫血程度越重,生活质量越差。不同程度血小板减少的患者在躯体功能、躯体功能对角色的影响、生命活力、社会功能4个维度及生理健康领域(PCS)、心理健康领域(MCS)和生活质量总评分方面差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。血小板计数越少,生活质量越低。输血依赖患者的生活质量较非输血依赖患者明显下降,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。
  4.疲乏对生活质量影响非常显著。自觉疲乏的患者在与躯体功能、躯体功能对角色的影响、社会功能、活力、总体健康自评5个维度得分较无疲乏者显著下降(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。
  5.不同年龄患者生活质量得分比较,差异有统计学意义(P<0.01)。
  6.ATG/ALG/造血干细胞移植治疗组患者的生活质量在生活质量各维度和总分上均高于其他治疗组,尤其是活力、心理健康2个维度(P<0.05或P<0.01)。
  研究结论:
  1.再生障碍性贫血患者的生活质量较正常人明显降低。
  2.血红蛋白大于90g/L和血小板计数大于30×109/L的AA患者的生活质量与正常人无明显差异。
  3.影响AA患者生活质量的主要因素有目前贫血程度、血小板减少程度、疲乏、治疗方法。年龄、月收入、居住环境与生活质量的关联性较小。
  4.贫血程度越重、血小板计数越低,生活质量越差。
  5.应用ATG/ALG/造血干细胞移植的患者的生活质量比其他治疗组更好。
  第二部分 获得性再生障碍性贫血患者社会支持与生活质量相关性分析
  研究背景:
  社会支持(social support)指的是个体在发生重大事件时可从朋友、家人、亲属等处获得精神和物质支持,包括客观支持、主观支持及支持利用度[6]。
  社会支持在生活质量中发挥非常重要的角色,与生活质量的各个维度密切相关。获得社会支持越多,其主观的感受就越好,自我评价的生活质量就越高[7]。有研究报道,白血病患者的社会支持得分很高,是白血病患者生活质量的预后因素之一(标准化β系数从0.37到0.58),给予患者社会支持越多,其生活质量也就越好,进一步统计学分析发现,社会支持与生活质量有密切相关性,其中主动寻求的社会支持比被动接受更能有效提高患者的生活质量[8]。因此为了改善患者的生存状态,除了生活上的照顾,物质上的给予,还要注意情感上的关怀,合理寻求、获取社会支持,才能提升生活质量中生理与心理两个基本需求。马迎春等学者对白血病患者进行了相关研究,认为患者生活质量与社会支持之间可能存在正相关,拥有良好的社会支持会有利于患者躯体和心理的康复[9]。Savard J等指出,较高的社会支持可以让患者及其照顾者的焦虑、担忧等负面情绪得以减轻,促进心理康复,可以更好的配合治疗,增强战胜疾病的信心[10]。
  对于再生障碍性贫血患者来说,社会支持度同样非常重要。确诊再生障碍性贫血,疗效的不确定性、治疗过程的艰辛、病情的反复、高额的花费、漫长的治疗周期,对患者来说,是一个强烈的打击,对家庭来说是一个巨大的变故,工作和生活被迫受到影响,患者迫切需要真切的人文关怀、情感支持和来自家庭、社会的经济支持,减轻对疾病的恐惧感,获得安慰和增强战胜疾病的自信心,改善生活质量。
  研究目的:
  本研究旨在通过社会支持评定量表(SSRS)调查获得性再生障碍性贫血患者获得的社会支持情况,分析社会支持的影响因素,并通过相关性分析,探讨社会支持与生活质量之间的关系。
  研究方法:
  1.采用病例对照研究。病例来自2012年8月至2017年9月在山东大学齐鲁医院血液科住院的符合入组条件的再生障碍性贫血患者。对照组为健康人群。问卷内容包括一般资料与社会支持评定量表两个部分。
  2.计算各维度(主观支持、客观支持、支持利用度)得分和社会支持总分。
  3.运用SPSS21.0软件对资料进行描述性分析、单因素分析、多因素分析。取P<0.05为有统计学差异。
  4.运用person相关性分析得出再生障碍性贫血患者社会支持与生活质量之间的关系。
  5.对结果进行分析总结。
  研究结果:
  1.与健康对照组相比,病例组得到的主观支持、客观支持、对支持的利用度3个维度和社会支持总分均高于健康对照组,二者差异有统计学意义(P<0.05)。
  2.单因素分析发现,男性在客观支持和对社会支持利用度2个维度的得分均低于女性,差异有统计学意义(P<0.05)。已婚者在主观支持、客观支持二个维度和社会支持总分得分均显著高于未婚者(P<0.01或P<0.001)。通过单因素方差分析,可见不同年龄组人群在主观支持维度和社会支持总分的得分有明显差异(P<0.01或P<0.001)。中年人群社会支持各维度得分和社会支持总分均明显高于老年人、青年和少年(P<0.01或P<0.001,差异具有统计学意义)。高收入人群在主观支持、客观支持、对支持的利用度和社会支持总分方面均高于低收入人群,但差异无统计学意义(P>0.05)。
  3.文化程度、职业类型、居住地对社会支持的影响无明显差异。
  4.多元线性逐步回归分析结果显示,影响社会支持总分的因素有婚姻、年龄;影响主观支持得分的因素有婚姻、家庭月收入;影响客观支持得分的因素有婚姻和文化程度;而性别影响对支持利用度得分(P值均<0.05或<0.01或<0.001)。
  5.应用相关性分析对再生障碍性贫血患者获得的社会支持与生活质量进行统计学分析,结果显示,“对支持的利用度”这一方面与生活质量呈正相关关系(r=0.22-0.53,P<0.05或P<0.01)。对支持的利用度主要影响生活质量中总体健康自评、生命活力、躯体疼痛维度和生活质量总分、心理健康总分。
  研究结论:
  1.再生障碍性贫血患者获得的社会支持度较正常人明显增加。
  2.影响社会支持的因素有性别、年龄、月收入、婚姻等。
  3.再生障碍性贫血患者对支持的利用度越好,生活质量越高。
  4.男性的社会支持度低于女性。已婚者的社会支持度高于未婚者。中年人比老年人、青年和少年拥有更多的社会支持。收入较高者可以获得更多的社会支持。
[硕士论文] 侯亚颖
生理学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:miR-144和miR-451是一个双顺反子miRNA基因位点。miR-451的表达重约占据红细胞发育晚期miRNA的50%。大量体内外实验结果发现,miR-144/451在红细胞发育成熟过程中和珠蛋白合成过程中起到至关重要的作用。β地中海贫血患者的前体红细胞中miR-451的表达明显增高,miR-144/451参与β地中海贫血的发生发展,那么我们猜想miR-144/451是否也在其他类型的贫血中发挥着重要的作用呢?
  主要进行以下实验:
  1)建立缺铁性动物模型、慢性失血性贫血动物模型、和注射苯肼致溶血性贫血动物模型;
  2)检测miR-144/451在各种贫血模型中的外周血、骨髓以及小鼠胚胎肝红细胞中表达趋势;
  3)研究分析miR-144/451在贫血动物模型中表达增高的分子机制及其临床意义。通过以上实验,本研究旨在明确miR-144/451与除β地中海贫血以外的其他类型贫血的关系,阐明miR-144/451与贫血关系的可能分子机制。
  1.三种小鼠贫血模型的建立及其miR-144/451的表达
  目的:
  通过物理、化学等方法建立小鼠贫血模型,观察缺铁性贫血小鼠的精神状态,皮肤黏膜情况等,用于研究缺铁性贫血状态下miR-144/451表达情况。
  方法:
  1)21天大小的C57BL/6小鼠(断奶小鼠)用缺铁性饲料(购自南通特洛菲饲料科技有限公司Trophic Animal Feed High-Tech Co.,Ltd,China)饲养,并且在缺铁性饲料饲养小鼠期间同时喂食超纯水以避免水中铁元素对实验结果的影响。然后在饲养缺铁饲料后的第4-5周目内眦采集小鼠外周血检测,记录相关指标变化,检测小鼠贫血程度。并提取小鼠外周血红细胞中的总RNA,进行反转录成cDNA,并运用qRT-PCR技术检测miR-144和miR-451的表达情况。
  2)C57BL/6小鼠通过腹腔注射浓度为65mg/kg的苯肼溶液,于注射前和注射后的1,2,3,4,5,6,7天目内眦采集小鼠外周血检测,记录相关指标变化,检测小鼠贫血程度。并提取小鼠外周血红细胞中的总RNA,进行反转录成cDNA,并运用qRT-PCR技术检测miR-144和miR-451的表达情况。
  3)每两天为C57BL/6小鼠目内眦放血一次,每次放200μl,连续放血6次。在最后一次放血后,目内眦采集小鼠外周血检测,记录相关指标变化,检测小鼠贫血程度。并提取小鼠外周血红细胞中的总RNA,进行反转录成cDNA,并运用qRT-PCR技术检测miR-144和miR-451的表达情况。
  结果:
  小鼠出现贫血症状,各组小鼠的皮肤和粘膜颜色苍白,外周血红细胞数量、血红蛋白含量、红细胞压积降低,网织红细胞比例增高,小鼠表现为贫血状态。取小鼠外周血并提取其RNA检测其miR-144/451的表达,miR-144/451的表达增高。
  结论:
  建立了小鼠贫血模型,可以为用于检测miR-144/451表达情况的实验。贫血状态下miR-144/451的表达增高说明miR-144/451可能参与贫血的发生发展。
  2.临床缺铁性贫血、肿瘤贫血样本miR-144/451的表达
  目的:
  明确miR-144/451在临床缺铁性贫血、肿瘤贫血样本中的表达,为进一步探讨miR-144/451与贫血的关系及其机制研究提供支持。
  方法:
  收集临床缺铁性贫血样本、肿瘤贫血病人血样本和再生障碍性贫血样本。并且提取红细胞中的总RNA,进行反转录成cDNA,并运用qRT-PCR技术检测miR-144和miR-451的表达情况。
  结果:
  临床缺铁性贫血、肿瘤贫血病人血样本红细胞中miR-144/451的表达增高,但是再生障碍性贫血病人血样本中红细胞miR-144的表达无明显变化而miR-451表达减低。
  结论:
  临床缺铁性贫血、肿瘤贫血病人血样本红细胞中miR-144/451的表达增高说明miR-144/451可能参与病人缺铁性贫血和肿瘤贫血病人贫血过程的发生发展,并且其作用机制不同于再生障碍性贫血疾病。
  3.miR144/451在贫血过程中的功能研究
  目的:
  利用上述建造的小鼠贫血模型和临床贫血样本中miR-144/451在红细胞中的表达情况。通过相同条件同时处理miR-144/451敲除小鼠和野生型小鼠,观察两种类型小鼠贫血情况。探究miR-144/451在贫血过程中的功能。
  方法:
  利用上述方法同时处理相同年龄,相同性别的miR-144/451敲除小鼠和野生型小鼠,检测两种小鼠外周血常规变化情况;制作外周血涂片,并进行瑞氏-吉姆萨染色明确小鼠外周血中红细胞形态、数量变化;运用流式细胞技术检测小鼠外周血和骨髓中的红细胞,明确红细胞的分化成熟度;运用流式细胞仪检测外周血中网织红细胞数量,明确红细胞成熟度;检测小鼠脾脏的形态学及组织学变化,明确各组小鼠的代偿性造血水平;磁珠分选小鼠骨髓有核红细胞WB检测GATA1表达;qRT-PCR检测小鼠骨髓有核红细胞中抗氧化应激酶包括SOD、Catalase、GPX1、NQO1的表达变化。
  结果:
  1)外周血涂片瑞氏-吉姆萨染色结果提示:与贫血处理过的wt组小鼠比较,miR144/451敲除组小鼠外周血红细胞形态并改善,红细胞大小不均匀,细胞破碎,中心淡染区增大,网织红细胞计数明显增多;
  2)流式细胞仪检测结果提示:与贫血处理过的wt组小鼠比较,miR-144/451敲除组小鼠的外周血中网织红细胞比例增加,且骨髓及外周血的红细胞成熟度减低;
  3)脾脏形态学及组织学结果提示:与贫血处理过的wt组小鼠比较,miR-144/451敲除组小鼠的脾脏偏大,重量增大,提示小鼠体内代偿性造血功能减弱;与未处理过的wt组小鼠相比,处理过的贫血wt小鼠GATA1表达增高,抗氧化酶表达量下降。
  结论:
  1)miR-144/451敲除小鼠和经处理过的wt贫血小鼠体内的氧化应激水平增加;
  2)由于经处理过的wt贫血小鼠miR-144/451表达增高,而对miR-144/451敲除小鼠经过相同条件处理后,贫血情况并未改善反而加重,说明了在外源性刺激下小鼠贫血的发生受其他机制的调控作用更加明显。
[硕士论文] 庄蕊萌
临床医学 东南大学 2017(学位年度)
摘要:目的:院内感染导致住院时间延长,增加医疗费用,并导致患者的死亡率升高。拟通过统计分析血液病患者发生医院感染的临床病史资料,比较了各种血液病医院感染的发病率,并研究血液病患者发生医院感染的危险因素,为临床克服医院感染提供依据。
  方法:选取2016年1月1日-2016年12月31日在中大医院血液科住院的所有血液病患者。入组的所有患者均经过骨髓涂片、化学染色、病理活检等手段,依照各血液病公认诊断标准进行筛选。根据2001年卫计委制定的相关标准对上述患者是否发生医院感染进行严格界定。收集所有入组患者的基本信息(包括:姓名、住院号、性别、年龄、疾病种类、住院时间、是否化疗、有无粒缺及粒缺时间、是否接受侵入性操作等),借助SPSS软件统计分析上述患者中感染的发生率、部位分布、病原学特点等,最终对血液病患者医院感染相关危险因素进行分析及讨论,归纳总结目前血液病患者医院感染的形式并给予适当预测,针对上述问题提出可能的应对措施。
  结果:2016年全年在我院住院的血液病患者共1376人,其中发生医院感染的总人数为230例,共计发生医院感染383例次,例次感染率为27.83%。与青年组相比,老年的感染率更高(24.86%vs37.14%,P小于0.05);恶性血液病患者医院感染的感染率高于非恶性疾病(30.82%vs10.13%,P=0.000)。将住院时间分为1-10天,11-20天,21-40天,40天以上四个组,其感染率依次递增(6.32%vs20.98%vs.51.7%vs75%,组间两两比较P均小于0.05)。粒缺超过10天的患者中观察到较高的感染率(47.15%vs74.22%,P小于0.05)。
  感染部位涉及血液、上呼吸道、肺、消化道、泌尿道、口腔、皮肤及软组织等,其中,感染发生率以上呼吸道为最高,占28.46%,其次为肺部感染,占25.59%,消化道感染和血液系统感染也较多。血液病患者的医院感染的发生与患者的年龄、住院天数、侵入性操作、是否化疗、粒缺天数有关,与性别无关。
  结论:本研究得出的结论显示老年患者、住院天数、侵入性操作、化疗、长时间粒缺等因素是诱发医院感染的高危因素,缩短住院时间和粒缺时间,减少侵入性操作可能是预防医院感染的有效手段。
[硕士论文] 高凤艳
儿科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  检测急性原发性免疫性血小板减少症(acute primary immune thrombocytopenia,AITP)、慢性原发性免疫性血小板减少症(chronic primary immune thrombocytopenia,CITP)患儿外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞(regulation T cell,Treg细胞)、转化生长因子(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、白介素(interleukin,IL-10)的含量,讨论三者在ITP发生与发展中的作用机理。
  方法:
  入选符合ITP诊断标准的2015年1月至2016年6月期间在山西省儿童医院血液科住院和门诊诊治的ITP患儿66例,根据病程分为AITP组、CITP组,AITP组为初诊的未使用人免疫球蛋白及激素治疗的ITP患儿35例,CITP组为病程大于12个月的ITP患儿31例,依据病情将初诊的35例AITP患儿分为重型ITP组11例和非重型ITP组24例,正常对照组为本院2016年1月至3月体检中心健康儿童20例。用流式细胞术(FCM)分别检测AITP组、CITP组、重型ITP组、非重型ITP组及健康对照儿童外周血CD4+CD25+CD127-百分率及血清IL-10含量,血清中TGF-β1含量用ELISA方法测得,并进行各组间比较及相关性分析。
  结果:
  1.定量检测表明,急性组CD4+CD25+CD127-Treg百分率(4.23±0.82)%显著低于对照组(5.05±0.90)%(P<0.01),慢性组CD4+CD25+CD127-Treg百分率(3.47±0.63)%显著低于急性组(4.23±0.82)%(P<0.01)。急性组TGF-β1水平(189.36±66.71)Pg?ml-1低于对照组(231.45±113.89)Pg?ml-1(P<0.05),急性组IL-10含量(34.07±11.57)Pg?ml-1低于对照组(43.83±10.96)Pg?ml-1(P<0.05),TGF-β1及IL-10含量慢性组低于急性组(P<0.01)。非重型ITP组CD4+CD25+CD127-Treg百分率(4.55±0.90)%显著高于重型ITP组(4.14±0.58)%(P<0.05),非重型ITP组TGF-β1水平(210.25±73.65)Pg?ml-1未明显高于重型ITP组(188.16±57.7)Pg?ml-1(P>0.05),非重型ITP组IL-10含量(39.42±13.55)Pg?ml-1未明显高于重型ITP组(31.63±9.9)Pg?ml-1(P>0.05)。
  2.相关性分析显示,ITP患儿CD4+CD25+CD127-Treg百分率与TGF-β1含量呈正相关(r=0.75,P<0.01)。ITP患儿外周血IL-10含量与CD4+CD25+CD127-Treg百分率、TGF-β1含量则无相关性。
  结论:
  ITP患儿外周血Treg数目下降以及TGF-β1、IL-10含量降低可能与ITP患儿的细胞免疫调节功能紊乱相关,与调节性 T细胞有关的免疫功能的改变在慢性组及重型ITP组中表现尤其明显,这可能是慢性ITP患儿在疾病过程中治疗效果不佳呈现长病程的原因之一。
[硕士论文] 宋建芳
中医儿科学 南京中医药大学 2017(学位年度)
摘要:目的:1.利用德尔菲法(Delpi Method)制订小儿免疫性血小板减少症的中医诊疗指南;2.探索文献研究、专家问卷调查、专家论证会三者结合的方法在中医临床诊疗指南制订过程中的价值。
  方法:在文献研究的基础上,利用德尔菲法从诊断、辨证、治疗、预防与调护等方面设计第一轮小儿免疫性血小板减少症的专家调查问卷,通过邮件形式发送给调查专家,并对返回问卷加以统计。结合课题组专家建议,设计第二轮问卷,重复以上方法设计第三轮问卷。综合三轮专家意见及建议,初步形成小儿免疫性血小板减少症中医临床诊疗指南的初稿。三轮问卷结束后,召开专家论证会,就初稿中未能达成共识的问题进行讨论,形成小儿免疫性血小板减少症的征求意见稿。然后经全国行业专家征求意见、专家指导组审核、开展临床评价、网上公开征求意见形成指南送审稿。
  结果:通过文献研究、专家问卷调查、专家论证会等多个环节,在术语与定义、诊断、辨证、治疗、预防与调护等方面选择专家评分较高、意见协调程度高的项目达成专家共识,最终形成了小儿免疫性血小板减少症中医临床诊疗指南的征求意见稿。
  结论:通过运用德尔菲法,基本制订了适用于18周岁以下人群的免疫性血小板减少症的中医儿科临床诊疗指南。通过分析表明文献研究、专家问卷调查、专家论证会这种三法合一的方式在中医临床诊疗指南制订的过程中发挥了重要的作用,值得在相关研究中应用推广。
[硕士论文] 王文娟
儿科学 桂林医学院 2017(学位年度)
摘要:目的:通过对Hong Kongαα型地中海贫血家系的诊断和分析,阐述Hong Kongαα型地中海贫血的基因型和表型,对家系中未出生胎儿进行地中海贫血的产前诊断。
  方法:收集家系成员血样,进行血红蛋白检测和血常规检测。收集孕妇羊水8ml,磁珠法提取外周血DNA及胎儿DNA。通过PCR-反向斑点杂交检测受试者地中海贫血α点突变以及β点突变,单管多重gap-PCR技术检测常见缺失型α地中海贫血,普通PCR检测αααanti4.2突变,运用巢式PCR检测Hong Kongαα型地中海贫血基因。确定家系每个个体基因型。分析Hong Kongαα型地中海贫血基因携带者表型,对家系中的胎儿进行产前诊断,并为其提供产前优生咨询。
  结果:该家系共11个成员,血常规、血红蛋白电泳结果表明,除Ⅱ-6以外,其他个体均有不同程度的小细胞低色素贫血表现。其中,个体Ⅱ-4贫血程度较为严重。家系中5人为Hong Kongαα型地中海贫血基因携带者,基因型分别为:一人为HKαα/-α3.7合并β41-42M/βN,两人为nKαα/--SEA、βN/βN,两人为HKαα/-α4.2、βN/βN。胎儿基因型为HKαα/-α4.2、βN/βN。
  结论:Hong Kongαα型地中海贫血是一种罕见的地中海贫血类型,容易误诊、漏诊。巢式PCR是临床诊断Hong Kongαα型地中海贫血的重要参考。结合患者临床表现以及巢式PCR的检测结果,可以为Hong Kongαα型地中海贫血提供诊断依据。
[硕士论文] 赵蔚
药物经济学 河北北方学院 2017(学位年度)
摘要:本文研究目的在于结合恶性血液病合并侵袭性真菌病患者的临床特点、病原学分布及影响疗效的危险因素,对卡泊芬净和米卡芬净的临床用药进行合理性与药物经济学评价分析,旨在为恶性血液病合并侵袭性真菌病的临床药物治疗提供治疗思路,并为卡泊芬净和米卡芬净的临床应用提供参考依据。研究回顾性分析了2014年1月至2015年12月某三甲医院收治的180例使用卡泊芬净或米卡芬净治疗恶性血液病合并侵袭性真菌病患者的临床资料,通过调查,汇总患者的病原学分布、感染部位、治疗效果、住院成本、影响疗效的危险因素及卡泊芬净与米卡芬净的使用情况等,同时运用SPSS21.0软件对数据进行统计学分析以达到研究目的。研究结果显示从180例恶性血液病合并侵袭性真菌病患者的送检标本中共分离出真菌75株,主要为念珠菌属和曲霉菌属,分别占69.34%和19.33%;主要感染部位为肺部,占93.88%;治疗总有效率为44.44%,侵袭性真菌病相关死亡率为15.00%。抗真菌治疗效果与三种及以上抗菌药物联合应用及患者肝功能状况呈负相关,是影响抗真菌治疗疗效的独立因素。抗真菌药物使用过程中出现的不合理现象主要为治疗时未给予负荷剂量以及维持剂量不合理,其中卡泊芬净不合理使用率为42.74%,米卡芬净不合理使用率为5.22%;本研究中药物使用均无不良反应发生,安全性良好。药物经济学研究采用成本-效果分析法,卡泊芬净组总成本为273709.08元,米卡芬净组总成本为227156.05元;卡泊芬净组和米卡芬净组的总有效率分别为35.00%和71.67%,以总有效率为判别标准,卡泊芬净组与米卡芬净组的C/E值分别为7820.26和3169.47,以总成本较小的米卡芬净组作为参照,△C/△E为-1269.51,卡泊芬净组每下降1个疗效单位多花费1269.51元,米卡芬净组比卡泊芬净组更具成本-效果优势,是治疗恶性血液病患者侵袭性真菌病的较优药物。以上结果表明恶性血液病合并侵袭性真菌病患者感染的病原菌以白色念珠菌为主;使用三种及以上抗菌药物及肝功能不全都是影响疗效的危险因素,应当避免滥用抗菌药物,以及重视肝功能不全患者的用药合理性及安全性。卡泊芬净和米卡芬净在恶性血液病患者中的不合理使用现象较普遍,用法用量及药物相互作用等问题应当引起重视,建议加强抗真菌药物使用的监管。卡泊芬净与米卡芬净用于治疗恶性血液病合并侵袭性真菌病时,米卡芬净是较为经济有效的药物。
[硕士论文] 周岚
中医内科学 南京中医药大学 2017(学位年度)
摘要:目的:评价“益肾清利、活络泄浊”法治疗慢性肾脏病3-5期肾性贫血的临床疗效,提高中医对该病理论及诊疗方面的认识。
  方法:采用临床观察法,纳入的100例患者均是2015.03-2016.12就诊于江苏省中医院肾内科门诊或住院治疗的符合中、西医诊断标准为肾性贫血(非透析)的患者,试验组和对照组各50例。对照组50例除基础治疗外,加用多糖铁复合物胶囊0.3g/d及叶酸片15mg/d口服。治疗组50例在对照组治疗的基础上予“益肾清利、活络泄浊”法辨证治疗,中药每日一剂,三餐后温服;1个月为1个疗程,观察2个疗程。观察治疗前后试验组与对照组的中医证候、血常规指标、肾功能指标,比较临床疗效,并观察和记录不良反应。
  结果:中医证候积分疗效对比:比较试验组及对照组治疗前后中医证候总积分,试验组总有效率76%,对照组总有效率42%,两组使用经秩和检验,试验组中医总体疗效优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组、对照组治疗前后神疲乏力、腰腿酸软、面色苍白或萎黄、浮肿、纳差、恶心呕吐、肢体麻木等临床症状均有所缓解,其中治疗前后试验组与对照组相比,神疲乏力、腰腿酸软、浮肿、大便干结等症状改善明显,面色萎黄或苍白、纳差、恶心呕吐、肢体麻木等症状改善与对照组相比无明显统计学意义。西医疾病疗效比较:试验组、对照组治疗前后血常规、肾功能等指标均有好转,其中与对照组相比,试验组血常规中的Hb、Hct,肾功能中的Scr、Ccr等指标均有明显改善,两组治疗后血常规、肾功能指标对比有显著差异。试验组和对照组总有效率分别为50%和38%,经秩和检验,P>0.05,并不能说明试验组与对照组之间有明显差异。
  结论:益肾清利活络泄浊法改善肾功能的同时,能够改善肾性贫血,且疗效显著,该法以补肾为先,重视健脾养胃滋养后天,兼顾活血清利,使正气得复,气血得调。尤其在中医证候方面,改善患者神疲乏力、腰腿酸软、浮肿、纳差、大便干结等诸多症状,提高了患者的生存质量。同时,对于提高患者血红蛋白水平,稳定肾功能方面,试验组均高于对照组,表明益肾清利活络泄浊法改善肾性贫血疗效确切。
[硕士论文] 李晶
军事预防医学 中国人民解放军陆军军医大学;第三军医大学 2017(学位年度)
摘要:本论文由两部分组成,第一部分是细胞胆固醇代谢与造血干细胞的增殖分化研究,第二部分是短时高温致红细胞损伤的机制研究。
  第一部分:通过pLKO.1-NPC1/NPC2 shRNA重组慢病毒感染EML(erythroidmyeloid lymphoid,EML)细胞获得NPC1、NPC2基因沉默的EML细胞模型,进而探讨NPC1、NPC2对EML细胞增殖分化的影响。方法通过NPC1 shRNA、NPC2 shRNA重组慢病毒感染EML细胞获得NPC1、NPC2基因有效沉默的EML细胞模型。利用该模型以Filipin染色检测NPC1、NPC2基因敲低后对EML细胞内胆固醇分布的影响,以CCK-8和台盼蓝染色进行增殖检测,以流式细胞术检测NPC1、NPC2基因沉默后EML细胞干性标志物CD34、sca-1、c-kit及TER-119、CD11b、B220的改变,利用Western blot分析SCF刺激细胞后c-kit磷酸化的改变。结果成功构建NPC1、NPC2基因沉默的EML细胞模型,NPC1、NPC2基因在mRNA和蛋白水平表达均显著降低(P<0.01)。NPC1、NPC2敲低的EML细胞中出现胆固醇蓄积,且在NPC1敲低的EML细胞模型中胆固醇蓄积更显著。沉默NPC1、NPC2基因后使得EML细胞增殖减慢(P<0.01),并且能够降低EML细胞CD34、sca-1和TER-119、B220的阳性率(P<0.01)。经SCF刺激后NPC1基因沉默的EML细胞中c-kit的磷酸化降低显著(P<0.01),但在NPC2基因沉默的EML细胞中c-kit磷酸化的改变并无统计学差异。结论胆固醇转运相关基因NPC1通过调节细胞胆固醇流动参与了EML细胞的增殖和分化调控。
  造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)是机体具有组织特异性的一群细胞,为了维持正常的造血功能其可通过不对称分裂(asymmetric division)在调节自身数量稳定的同时生成多系和/或单系造血祖细胞(hematopoietic progenitor cells,HPCs)。正常生理情况时,机体HSCs的含量和各系造血祖细胞的数量维持在一个动态平衡的状态。当这个稳定平衡状态被打破,HSCs的量急剧增多或哪一系或多系造血祖细胞数量发生显著改变都将引发疾病。究其机制,过去大量的研究主要聚焦在免疫系统。近年来,有研究显示细胞内胆固醇的流出对HSCs和HPCs稳态维持起着重要作用。三磷酸腺苷结合蛋白ABCA1和ABCG1通过把HSCs和HPCs内胆固醇转运至高密度脂蛋白(high-densitylipoprotein,HDL)而将其运出细胞,当ABCA1和ABCG1缺失时上述胆固醇转运途径障碍,将使得造血祖细胞恢复造血功能,同时出现髓外造血。此外,巨核细胞祖细胞(megakaryocyte progenitor cells,MPCs)内胆固醇外流障碍将引发血小板增多综合征,与ABCG1高度同源的三磷酸腺苷结合转运蛋白ABCG4在巨核细胞祖细胞中的缺失将使得胞内胆固醇转运至HDL障碍,进而引发细胞膜促血小板生成素(thrombopoietin,TPO)受体(c-MPL)表达增多,最终引发疾病。在动脉粥样硬化的小鼠在体模型中载脂蛋白E(apo lipoprotein E,ApoE)通过影响ABCA1和ABCG1的功能而调节细胞内胆固醇流出进而调控HSCs增殖且与单核细胞增多相关。除此之外,NPC1、NPC2基因在胆固醇流出细胞的过程中同样起着关键作用。NPC1基因的缺失将引发以胆固醇转运障碍为特征的尼曼匹克病(NPC1),患者主要表现为神经元的大量胆固醇聚集和神经功能障碍,同时患者也存在造血功能障碍,但是机制不清楚,还需要探讨。
  为了探索NPC1、NPC2基因调节造血干细胞生物学特性,特别是增殖和分化特征,本课题以造血干细胞系EML(erythroid myeloid lymphoid)作为模型,通过基因表达分析、基因功能分析研究NPC1、NPC2基因对EML细胞增殖和分化的调控及其机制。
  首先我们根据EML细胞干性标志sca-1不同水平的表达,通过细胞流式技术分离sca-1-high、sca-1-inter、sca-1-low3个细胞亚群,检测各亚群细胞中NPC1和NPC2基因的表达,分析NPC1、NPC2基因表达与EML细胞干性的关联。其次,通过基因沉默技术敲降(knock-down) EML细胞NPC1和NPC2基因,分析NPC1和NPC2对EML细胞增殖和分化的影响。最后,通过分析NPC1和NPC2基因对SCF介导c-kit磷酸化的影响,探讨NPC1和NPC2调节细胞增殖分化的机制。
  本研究得到的主要结果有:
  在EML细胞中NPC1和NPC2基因的表达与sca-1呈正相关。
  利用NPC1、NPC2基因慢病毒成功构建了NPC1、NPC2基因敲低的EML细胞模型。Filipin染色结果显示,与对照相比,在NPC1和NPC2基因沉默的EML细胞中胆固醇显著蓄积,且NPC1基因沉默的EML细胞中胆固醇蓄积更显著。
  NPC1、NPC2基因沉默的EML细胞生长明显慢于对照细胞(P<0.01),表明NPC1和NPC2基因参与了EML细胞的增殖调控。同时,NPC1、NPC2基因沉默的EML细胞CD34和sca-1的阳性率显著降低(P<0.01),提示NPC1、NPC2沉默以后能够使EML细胞的分化能力降低。
  在几种细胞中粒系标志物CD11b所占比例均较低,且差异无统计学意义,说明NPC1、NPC2基因敲低后对EML细胞向粒系的分化并无影响;而在NPC1沉默的EML细胞中TER-119所占比例显著低于其余3种细胞(P<0.01),说明NPC1基因的沉默能够抑制EML细胞向红系分化;B220所占比例在NPC1、NPC2基因沉默的EML细胞中显著降低(P<0.01),表明沉默NPC1、NPC2基因能够抑制EML细胞向淋巴系分化。
  SCF刺激细胞后,NPC1基因沉默的EML细胞c-kit磷酸化受到明显抑制(P<0.01),但在NPC2基因沉默的EML细胞中c-kit的磷酸化改变并无统计学差异。提示,NPC1基因参与了EML细胞c-kit的磷酸化调控。
  利用细胞胆固醇转运阻断剂U18666A、细胞膜胆固醇剥离剂beta-CD、游离胆固醇处理EML细胞后发现,经U18666A、beta-CD处理后EML细胞c-kit的磷酸化显著降低(P<0.01),与NPC1基因沉默对c-kit磷酸化的影响一致;并且,当联合使用beta-CD和胆固醇处理后相较于前者,EML细胞c-kit的磷酸化有所升高(P<0.01),提示NPC1对SCF介导的EML细胞c-kit磷酸化的影响是通过改变细胞膜胆固醇含量实现的。
  第二部分:红细胞(Red blood cells,RBC)是哺乳动物血液中数量最多的血细胞,RBCs除了是氧气运输的主要媒介还是重要的免疫细胞。RBCs生成于骨髓,在体内,新生的RBCs平均寿命为120d,并将经历轻龄、中龄、老龄3个阶段,最终衰老的RBCs被机体免疫系统清除,或是在经过肝脏时被枯否细胞(Kupffer Cells)分解为胆汁。但在病理状态下RBCs的衰老死亡将加剧。细胞生物学研究发现,高温能够引起细胞质膜变形,形成凸起状泡。在一定程度上,泡的形成是自适应的,从而增加细胞的存活率。但是细胞受热越严重起泡程度越大,并且细胞死亡率越高。广泛的数据显示,高热、热射病时体温升高治疗不及时或治疗不完善将导致红细胞减少甚至贫血,但究其机制还尚不清楚,亟待进一步研究。
  为了观察短时高温引起红细胞结构和功能的变化,探讨高热(中暑)引起红细胞损伤的机制。本研究取健康志愿者的静脉血,分别在37℃(对照组)和42℃(实验组)下孵育10 min,Percoll密度梯度离心法分离不同细胞年龄的红细胞,测定其Zeta电位值,分析不同年龄红细胞所占比例的改变;同时,我们利用流式细胞仪检测细胞大小、细胞凋亡以及红细胞内活性氧(ROS)的变化,探讨高温对红细胞衰老、凋亡的影响。
  本研究得到的主要结果有:
  与37℃相比,42℃下实验组的红细胞表面电荷显著降低(P<0.05),红细胞体积显著减小(P<0.05),凋亡显著增加(P<0.05),细胞内ROS显著增加(P<0.05)。最终发现,短时高温能引起红细胞理化性质的改变,进而导致红细胞衰老、凋亡加剧,这可能是急性高热(中暑)引起血液系统病理改变的机制。
[博士论文] 高飏
病理学与病理生理学 解放军军事医学科学院;中国人民解放军军事医学科学院 2017(学位年度)
摘要:地中海贫血又称为珠蛋白生成障碍贫血或者海洋性贫血,是一组由基因缺陷遗传因素导致的溶血性贫血类疾病。由于遗传的基因缺陷致使血红蛋白中一种或者多种珠蛋白肽链合成缺失或者不足导致的贫血或者溶血的病理状态。合成血红蛋白的珠蛋白链减少或缺失导致血红蛋白结构异常,这种含有异常血红蛋白的红细胞变形性降低,寿命缩短,在骨髓中就可能出现原位溶血,进入到外周血液循环可以提前被肝脾等破坏,导致贫血、体内铁沉积甚至发育异常。地中海贫血的治疗方法包括:一般支持治疗,高剂量输血及规律祛铁治疗,造血干细胞移植,诱导胎儿血红蛋白药物治疗和探索性的基因治疗。目前所有治疗方法中唯一有治愈希望的方法是造血干细胞移植。1981年托马斯进行了首例地贫患者的造血干细胞移植并取得成功,30多年间造血干细胞移植在全球多个中心广泛开展并取代了之前经典的输血、祛铁治疗方案。但这一方法仍然受制于 HLA全相合供者缺乏、移植后GVHD和移植相关死亡。与此同时,一直以来科学家始终在寻找可以治疗地中海贫血的药物,目前FDA唯一批准用于临床治疗的口服药物是羟基脲,但由于目前对于胎儿血红蛋白表达的基因调控机理仍不清楚,目前该药物的临床疗效并不一致且存在很大的副作用,直到人们应用全基因组关联性分析(GWAS)的方法检测并分析了相关患者的HbF细胞数量和HbF水平,相关研究才取得关键性突破,证实了作为转录抑制因子的BCL11A对HbF的表达有直接负性调控作用,尤其是抑制胎儿血红蛋白表达。这使得人们可以用核酸酶进行基因编辑方面的进展在造血干细胞DNA水平通过基因打靶来失活该基因红细胞特异增强子功能,从而使后续产生的红细胞中增加胎儿血红蛋白的表达,达到缓解临床症状的目的。
  该实验中我们应用CRISPR/Cas9技术,在HEK293T细胞中初步进行了+55、+58、+62三个红系特异增强子的基因编辑,结果提示由于采用了Cas9D10A切口酶使得基因编辑的效率偏低。后续我们又根据最新的文献报道选择+58红系特异增强子,应用野生型Cas9配合单gRNA基因编辑方法,在K562细胞中实现了24%的突变频率,在地贫患者骨髓来源的CD34+细胞中实现了对于BCL11A基因红系增强子的基因编辑,效率达到10%。利用筛选的sgRNA和CRISPR/Cas9体系,我们实现了对地贫患者骨髓来源CD34+细胞的基因编辑。将基因编辑的CD34+造血干祖细胞体外进行红系分化后,我们在mRNA水平对胎儿血红蛋白表达进行检测,结果提示实验组较对照组的HbF mRNA表达水平提高1.9倍,在细胞水平我们用流式细胞仪检测了表达HbF细胞的比例,结果提示实验组较对照组的比例提高50%。以上结果提示基因编辑后的分化培养红细胞中胎儿血红蛋白表达增加。为了验证基因编辑后的造血干细胞造血重建能力,我们将细胞注射亚致死剂量照射的NPG小鼠进行移植实验,通过移植后检测小鼠外周血人CD45+细胞检测重建,移植8周后小鼠体内可以检测到1.38%重建,提示基因编辑的造血干细胞仍有造血重建能力。最后我们根据软件对筛选出来的sgRNA进行脱靶分析,选择预测的脱靶可能最高的六个位点设计引物,检测了基因编辑CD34+细胞中脱靶情况。通过对六个靶点进行克隆分析,未发现在脱靶位点存在基因突变。
  我们首次报道利用CRISPR/Cas9体系在地贫患者骨髓来源CD34+细胞中实现特定位点的基因编辑,观察到了分化后的红细胞中胎儿血红蛋白表达增加。基因编辑的CD34+细胞仍具有造血重建能力且未发现脱靶现象。综上,我们建立了一种应用CRISPR/Cas9体系对地贫患者骨髓CD34+造血干细胞细胞进行基因编辑的方法,编辑后细胞有可能通过自体造血干细胞移植重建地贫患者造血,使得缺乏HLA全相合供者的地贫患者得到治疗的机会,为后续这一新的治疗方法进行临床实验提供理论支持。
[博士论文] 张春兰
临床医学 北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院中国医学科学院 2017(学位年度)
摘要:目的:
  轻链型淀粉样变(AL)是一种肿瘤性浆细胞产生的轻链沉积在各个器官导致其功能不全的血液疾病。如无有效的治疗,患者的生存期仅有1~2年。心脏受累程度是决定AL患者预后的重要因素。但是,AL中轻链致心肌毒性的机制还不清楚。另外,AL轻链(AL-LC)的来源受限也是困扰研究者们的一个重要问题,目前AL-LC的主要来源是从患者尿液中提取,存在获取AL-LC总量有限及LC的异质性等诸多问题,而从原核系统表达AL-LC则导致其翻译后修饰缺乏。因此,建立稳定表达AL-LC的真核表达平台也至关重要。
  方法:
  通过构建pcDNA3.1重组质粒,转入293T细胞体外表达IGLV1-44来源的AL心肌毒性轻链,建立AL轻链的真核系统表达平台。将合成的AL轻链作用于心肌细胞,并设置多发性骨髓瘤轻链(MM-LC)对照及空白对照,研究轻链与H9C2心肌细胞的相互作用。首先,通过免疫荧光激光共聚焦定位检测轻链与心肌细胞的定位关系。其次,用流式细胞术检测心肌细胞的凋亡率及活性氧自由基(ROS)水平。再次,用Western Blot分析心肌细胞蛋白表达水平的变化,探究AL轻链心肌毒性可能涉及的分子通路。
  结果:
  转入pcDNA3.1重组质粒的293T细胞稳定合成表达AL轻链,AL轻链的真核系统表达平台成功建立。AL与MM轻链均可进入心肌细胞,但AL轻链明显多于MM轻链,且能在细胞外间质形成沉积,包绕心肌细胞。然而,AL轻链与MM轻链均不与线粒体共定位。将体外合成的AL轻链作用于心肌细胞引起细胞凋亡,使用浓度为40μg/ml、60μg/ml及80μg/ml的AL轻链作用心肌细胞24h后的凋亡率分别为10%、18%和26%,相比MM轻链对照及空白对照(~5%)明显升高。利用DCFH-DA检测心肌细胞ROS水平,60μg/ml AL轻链作用2h及4h后心肌细胞的MFI值分别为13018.39±338.37及16766.86±29.47,其中4h组显著高于对照组水平(MM组:13191.70±409.04,空白对照12917.81±614.69)。同时,在作用6h或12h时,AL组的凋亡标志物c-casp3水平均可检测到显著升高。分子通路方面,AL轻链处理心肌细胞6h及12h后,p-p38MAPK水平较MM组及空白对照升高,且下游的PP2A水平在6h时明显升高,12h时回到对照水平,但NF-κB、p-MEK1/2及JNK水平AL组与对照无明显差别。另外,AL轻链可引起心肌细胞p-AMPK及下游FoxO3水平下降,但激活AMPK并不能逆转心肌细胞的凋亡,或FoxO3表达水平的上升。
  结论:
  成功建立了AL轻链的真核系统表达平台,并验证了其表达的AL轻链能诱导心肌细胞凋亡,且符合AL心肌毒性轻链的定位特点,这为后续AL轻链心肌毒性机制研究提供了良好的平台。其次,AL轻链与MM轻链均可进入心肌细胞,但不与线粒体共定位。再次,AL轻链可导致心肌细胞p-p38MAPK及AMPK等信号分子水平的变化,但激活AMPK并不能逆转心肌细胞凋亡。
[硕士论文] 姚利娟
中医内科学 南京中医药大学 2017(学位年度)
摘要:目的:探讨益气养阴健脾清热组方治疗慢性免疫性血小板减少症(Chronic ImmuneThrombocytopenia,cITP)的疗效分析。
  方法:临床纳入了2015.12-2016.12期间来自江苏省中医院血液科病房及血液科专科门诊的72例cITP患者。72例患者中儿童组30例,中药组15例,中西医组15例;成人组42例,中药组24例,中西医组18例。中药组予益气养阴健脾清热组方(炙黄芪15g、熟地黄15g、水牛角15g先煎、仙鹤草15g、肿节风15g、羊蹄根15g、蒲黄炭15g、三七粉3g冲服、茯苓15g、焦白术15g、知母10g、连翘10g、炙升麻6g),就诊时正在服用糖皮质激素者和既往使用糖皮质激素治疗有效者可继续规范用药并根据病情缓解情况逐渐撤减糖皮质激素用量。以4周为1疗程,观察至少3个疗程,比较各组每疗程治疗前后血小板计数、临床治疗总反应率、糖皮质激素撤减剂量。
  结果:儿童组30例患者,15例中药组患者治疗3疗程后临床治疗总反应率为86.67%,血小板计数由治疗前(29.40±20.22)×109/L升至(59.33±38.31)×109/L。3疗程后15例中西医组患者临床治疗总有效率为80.00%,血小板计数由治疗前(39.60±29.09)×109/L升至(67.67±29.34)×109/L。两组内3疗程血小板计数均较治疗前有显著性提高,差异均有统计学意义(P<0.05),两组间3疗程临床治疗总反应率均无差异(P>0.05)。成人组42例患者,24例中药组患者在治疗3疗程后临床治疗总有效率87.50%,血小板计数由治疗前(23.96±15.21)×109/L升至(48.67±23.03)×109/L。3疗程后18例中西医组患者临床治疗总有效率为83.33%,血小板计数由治疗前(44.72±29.81)×109/L升至(77.28±45.04)×109/L。两组内3疗程血小板计数均较治疗前有显著性提高,差异均有统计学意义(P<0.05),两组间3疗程临床治疗总反应率无差异(P>0.05)。全部中药组共39例患者,治疗3疗程后临床治疗总反应率87.18%,血小板计数由治疗前(26.05±17.26)×109/L升至(52.77±29.77)×109/L。全部中西医组33例患者3疗程后临床治疗总反应率为81.82%,血小板计数由治疗前(42.39±29.14)×109/L升至(72.91±38.44)×109/L。两组内3疗程血小板计数均较治疗前有显著性提高,差异均有统计学意义(P<0.05),两组间3疗程临床治疗总反应率均无差异(P>0.05)。儿童中西医组糖皮质激素剂量由治疗前10.42±5.54mg减至3.17±3.12mg,成人中西医组糖皮质激素剂量由治疗前18.12±17.37mg减至4.38±3.44mg,全部中西医组糖皮质激素剂量由治疗前14.62±13.75mg减至3.83±3.31 mg,三组激素变化水平均较治疗前有显著性降低,差异有统计学意义(P<0.05)。
  结论:本次研究结果证明益气养阴健脾清热组方具有良好的临床疗效,可以有效提高儿童及成人cITP患者血小板计数及临床治疗总反应率,并协助激素撤减,改善出血症状。
[硕士论文] 张百灵
内科学 湖南师范大学 2017(学位年度)
摘要:目的:研究CXCR4通过调控PI3K通路活性对大鼠骨髓内皮祖细胞的生物功能学影响的机制
  方法:⑴构建CXCR4过表达rAAV6病毒载体;感染SD大鼠骨髓内皮祖细胞;运用RT-PCR方法、Western Blot方法检测SD大鼠骨髓内皮祖细胞中CXCR4的表达水平;⑵运用CCK8实验评价CXCR4过表达对缺氧预处理的SD大鼠骨髓内皮祖细胞增殖能力的影响;运用流式细胞术评价CXCR4过表达对缺氧预处理的SD大鼠骨髓内皮祖细胞凋亡情况的影响;运用运用Transwell迁移实验评价CXCR4过表达对缺氧预处理的SD大鼠骨髓内皮祖细胞迁移能力的影响;⑶运用Western Blot方法检测缺氧预处理/CXCR4过表达对BM-EPCs的PI3K/Akt信号通路表达的影响;⑷运用CCK8实验评价LY294002(PI3K抑制剂)对CXCR4过表达的缺氧预处理的SD大鼠骨髓内皮祖细胞增殖能力的影响;运用流式细胞术评价LY294002对CXCR4过表达的缺氧预处理的SD大鼠骨髓内皮祖细胞凋亡情况的影响;运用Transwell迁移实验评价LY294002对CXCR4过表达的缺氧预处理的SD大鼠骨髓内皮祖细胞迁移能力的影响。
  结果:①CXCR4过表达组的内皮祖细胞中CXCR4核酸、蛋白的表达均高于空载体对照组(p<0.01);②CCK8实验、Transwell迁移实验、流式细胞术分别得出缺氧预处理对BM-EPCs具有抑制增殖(p<0.05)、迁移(确定单一变量,各自两组间的迁移细胞数具有统计学差异,p<0.01),增加凋亡(确定单一变量,各自两组间的凋亡百分比具有统计学意义,p<0.01); CCK8实验、Transwell迁移实验、流式细胞术分别证实了CXCR4过表达对缺氧预处理的BM-EPCs具有促进其增殖(确定单一变量,各自两组间的OD值具有统计学差异,p<0.05)、迁移确定单一变量,各自两组间的迁移细胞数具有统计学差异,p<0.01)的作用,抑制其凋亡(确定单一变量,各自两组间的凋亡百分比具有统计学意义,p<0.01);③Western Blot结果显示缺氧预处理可下调BM-EPCs的CXCR4/PI3K/Akt表达;CXCR4过表达可上调经缺氧预处理的BM-EPCs的CXCR4/PI3K/Akt表达;④CCK8实验、Transwell迁移实验、流式细胞术分别证实了LY294002可消除CXCR4过表达对缺氧预处理的BM-EPCs增殖能力增强的作用(各自两组间的OD值具有统计学差异,p<0.05)、消除CXCR4过表达对缺氧预处理的BM-EPCs迁移能力增强的作用(各自两组间的迁移细胞数具有统计学差异,p<0.01);同时消除CXCR4过表达对缺氧预处理的BM-EPCs凋亡抑制的作用(各自两组间的凋亡百分比具有统计学意义,p<0.01)。
  结论:在SDF-1介导下,CXCR4过表达可通过调控PI3K通路活性,促进缺氧预处理BM-EPCs增殖、迁移,抑制其凋亡。
[硕士论文] 颜呈呈
内科学 北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院中国医学科学院 2017(学位年度)
摘要:目的:观察伴有异常巨核细胞的获得性再生障碍性贫血(Acquiredaplasticanemia,AA)患者临床特征、治疗疗效及转归。
  方法:回顾性分析伴有异常巨核细胞的获得性再生障碍性贫血患者临床资料。
  结果:共纳入48例患者,其中男25例,女23例,中位年龄14.5(5-66)岁。中位随访71.99(5.40-175.53)个月。6例为治疗前出现巨核细胞异常,42例治疗后出现巨核细胞异常,巨核细胞首次出现异常的中位时间为35.95(1.27-404.67)个月。48例患者中10例(20.83%)发生疾病转化,其中5例为MDS(10.42%),4例AML(8.33%),1例AA-PHN(2.08%)。中位转化时间66.23(15.73-187.90)个月。结果提示单元核、双元核巨核细胞的比例与疾病转化相关(p<0.05)。其中单元核巨核细胞占所有巨核细胞比例为独立预后因素。治疗后疗效与细胞遗传学、G-CSF应用时间、G-CSF应用与否相关。年龄小于等于20岁的患者双核巨核细胞(p=0.04)、单元核巨核细胞(p=0.03)占全部巨核细胞比例明显高于大于20岁患者组。治疗分组、细胞遗传学,G-CSF应用、性别、年龄分组、淋巴样巨核细胞出现、诊断分型均不是影响转化时间的危险因素。
  结论:1.再生障碍性贫血患者中出现异常巨核细胞患者的疾病转化率为20.83%;2.双核巨核细胞、单元核巨核细胞更容易出现在小于20岁的患者人群中,单元核巨核细胞比例与疾病转化相关,但与治疗疗效无明显相关性;3.出现不良细胞遗传学异常以及存在G-CSF应用、G-CSF应用时间长均提示治疗疗效不佳。
[硕士论文] 高文愈
内科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  本实验主要检测再生障碍性贫血(简称再障)患者骨髓脂肪组织中血管紧张素原(Angiotensinogen,AGT)的表达情况,并分析其对再障骨髓造血的影响。进一步探讨其在再障骨髓脂组织增多的病理发展进程中所起的作用,为研究再障脂肪组织增多的病理机制提供实验基础。
  方法:
  采用免疫组织化学技术(Immunohistochemistry,IHC)检测20例再障患者和20例骨髓象正常的白细胞减少症患者骨髓组织中AGT的表达,运用半定量分析软件检测AGT含量,并且分别对AGT与LYM、LYM%、NEU、HGB、PLT两变量进行相关性分析。
  结果:
  再障组血管紧张素原AGT表达水平(0.86±0.32)较对照组(0.23±0.16)明显升高,其中t=7.88,P<0.001,差异有统计学意义。再障组AGT表达水平与患者LYM、LYM%呈现正相关关系(r分别为0.838、0.877,P均<0.05),与患者NEU、HGB、PLT呈负相关关系(r分别为-0.667、-0.875、-0.860,P均<0.05)。
  结论:
  AGT在再障患者骨髓脂肪组织中表达显著增加,且AGT与LYM、LYM%呈正相关关系,与NEU、HGB、PLT呈负相关关系。抑制再障患者脂肪组织AGT的表达可能为再障患者提供一个新的治疗方向。
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