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[硕士论文] 吕晓敏
药剂学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:马来酸氟吡汀(FM)是非阿片类镇痛药,作用于中枢神经系统,目前临床治疗效果明确,主要用于治疗各种急慢性疼痛,包括由于肌肉紧张增高引起的疼痛、关节疾病导致的疼痛、紧张型头痛、癌痛、痛经、骨伤科、外科手术后或运动损伤后疼痛等。FM的不良反应少且一般不严重,最常见的不良反应是疲倦,其他还有眩晕、口干、嗜睡。长期服用不产生耐受性和依赖性,而且副反应症状与剂量有关,当停止服药一段时间后,由副反应表现出来的症状会逐渐减轻直至消失。目前FM的市售剂型为普通型胶囊剂,口服剂型,每日3-4次,每次用量100mg,每日最大剂量600mg,目前国内作为进口药,暂时还没有其他剂型上市。查阅文献,有制备FM口服固体速释剂型、FM缓释片,并考察其相关制剂在动物体内的药动学指标,暂无其他相关剂型的研究。
  FM现有剂型少,难以满足临床用药需求,故需要开发出安全高效的FM新剂型。在成功制备FMSSD的基础上,本实验建立生物样品中FM的HPLC测定方法,在灌胃给予FMSSD后,对大鼠血浆经时浓度和小鼠各组织中浓度以及药效考察,了解FMSSD在大鼠体内的药动学特征及小鼠体内组织分布情况,为研究FM新剂型提供基础实验依据。主要研究内容和结果如下:
  1.建立生物样品中FM的HPLC检测方法
  色谱条件:色谱柱:Symmetry C18(5μm,4.6×250mm);流动相:甲醇∶水=50∶50(V/V),用1mol/L的甲酸调pH值至6.70;柱温:25℃;流速:0.5ml/min;检测波长:320nm;进样量:20μl。FM在大鼠血浆中0.015~5.00μg/ml浓度范围内,在小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑各组织中0.064~21.33μg/g浓度范围内均呈现良好的线性关系(R2>0.9991)。该方法具有良好的专属性、精密度RSD均小于6%、稳定性RSD均小于6%、回收率大于90%,均符合相关检测要求,可用于生物样品中FM的测定。
  2.FMSSD药动学及组织分布研究
  采用大鼠血药浓度测定法研究FMSSD在大鼠体内的药动学特征,以三个剂量(9mg/kg、27mg/kg、54mg/kg)大鼠灌胃给药后,采用二室模型对数据进行处理,确定药动学参数。三组剂量血药浓度的达峰时间分别为(3.318±0.308)、(3.326±0.548)、(3.333±0.516)h;达峰时FM的血药浓度依次为(0.740±0.031)、(1.825±0.083)、(4.014±0.183)μg/ml;大鼠血浆中药物吸收半衰期t1/2kα分别为(0.837±0.364)、(0.835±0.055)、(0.831±0.057)h;分布半衰期t1/2α分别为(4.463±1.984)、(4.477±2.186)、(4.474±2.429)h;消除半衰期t1/2β分别为(6.417±3.155)、(6.333±0.326)、(6.332±0.329)h;消除率CL/F分别为(1.004±0.034)、(1.202±0.035)、(1.546±0.017)L/h/kg;时间-血药浓度曲线下面积AUC0-24分别为(8.244±0.198)、(21.624±0.453)、(45.134±0.803)μg·h/ml。
  小鼠按78mg/kg灌胃给予FMSSD后,HPLC测定2、4、8、12、24h小鼠各组织(心、肝、脾、肺、肾、脑)中FM浓度,比较药物在小鼠各组织中的分布量;同时利用FM具有荧光特性,对同等剂量灌胃给药后的小鼠组织进行冰冻切片,将切片置于荧光显微镜下观察,统计出FM在组织中的大体分布趋势,其结果与用HPLC测定FMSSD在各组织中分布的定量分析结果一致。给药后各组织各时间点药物分布有显著差异,各组织药物分布量随时间变化而变化,在4h时达最大值,FM在各组织分布量:肝>脑>肾>心>脾>肺。
  3.自制FMSSD与市售胶囊剂的生物等效性研究
  对自制FMSSD及市售胶囊剂进行生物等效性评价,分别对主要药动学参数Cmax、TmaxAUC0-t、AUC0-∞采用方差分析、双单侧t检验及(1-2α)%置信区间的方法进行生物等效性统计学分析,结果表明两种FM不同剂型间存在着显著性差异(P<0.01)。以AUC0-∞计算的相对生物利用度F为(144.388±18.400)%,在参比制剂的80.0%~125.0%范围外,说明两种制剂在大鼠体内不具有生物等效性,自制FMSSD与胶囊剂相比,具有缓慢释放、缓速分布与消除的特点。
  4.FMSSD的药效学研究
  小鼠分别灌胃给予生理盐水阴性对照、低中高(13mg/kg、39mg/kg、78 mg/kg)剂量的FMSSD、(78mg/kg)剂量的市售胶囊,采用小鼠热板法、醋酸扭体法考察各组药物镇痛效果。结果显示各给药组均能提高小鼠痛阈值、减少由醋酸导致的小鼠疼痛扭体反应次数,与生理盐水对照组比较具有显著性差异(P<0.05)。在给药后0.5~2h内,高剂量FMSSD组的小鼠痛阈提高率(36.14%~61.47%)、扭体抑制率(19.71%~49.97%)都低于市售胶囊组(45.85%~85.53%)、(28.82%~72.16%),但是高剂量FMSSD组在给药4h后小鼠痛阈提高率(95.38%)、扭体抑制率(81.64%)达最大值,市售胶囊组在给药2h后小鼠痛阈提高率(85.53%)、扭体抑制率(72.16%)达最大值。同时给药4~24h后,高剂量FMSSD组的小鼠痛阈提高率维持在(12.23%~95.38%)、扭体抑制率维持在(15.42%~81.64%);市售胶囊组的小鼠痛阈提高率维持在(1.02%~48.47%)、扭体抑制率维持在(9.84%~68.77%)。综合分析两种镇痛模型,表明在相同给药剂量下, FM市售胶囊在给药2h前迅速发挥药效,高于FMSSD,但是在2h达到最大药效后其镇痛效果下降速度快,各FMSSD组镇痛效果下降平缓,体现了缓释镇痛的优越性。同时FMSSD随着给药剂量的增加,小鼠痛阈提高率、扭体抑制率也逐渐增加,说明FMSSD的镇痛效果与剂量成正比,剂量越大,镇痛效果越明显。
[硕士论文] 赵乐乐
药学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:右旋布洛芬(Dexibufropen,S(+)-IBU)属于有机酸类化合物,是一种临床上普遍使用的解热镇痛抗炎药,主要用于缓解类风湿关节炎,也可用于头痛、牙痛、痛经及感冒发热等。由于其半衰期短,维持血药浓度需频繁给药,长期应用易发生胃肠道溃疡和出血。本课题利用蒙脱土(montmorillonite,MMT)作为药物载体与S(+)-IBU制成12小时缓释干混悬剂,从而减少用药次数,提高患者顺应性。
  目的:
  利用MMT作为药物载体和S(+)-IBU制成S(+)-IBU/MMT缓释干混悬剂,考察其体外释放影响并分析释放特性。利用星点设计效应面法优化酸改性MMT条件,制备载药量更高、释药性适宜的S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂,同时考察其体外释放影响并分析释放机制。通过口服灌胃给予大鼠S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂,以市售S(+)-IBU混悬液为参比制剂,研究其在大鼠体内的生物利用度和药物代谢动力学特征。
  方法:
  1.处方前研究工作
  根据2015年版中国药典配制不同pH的释放介质,利用紫外分光光度法确定S(+)-IBU的最大吸收波长并测定其在不同释放介质的稳定性和平衡溶解度。
  2. S(+)-IBU/MMT缓释干混悬剂的制备及体外释放研究
  采用溶液插层法制备S(+)-IBU/MMT干混悬剂;并利用XRD和FTIR进行表征。并考察其体外释放特性,以零级动力学方程、一级动力学方程、Higuchi方程和Peppas方程拟合释放曲线,推测其释放机制。
  3. S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂的制备及体外释放研究
  筛选最适合改性MMT的无机酸;利用单因素结合星点设计效应面法优化酸改性酸化条件,以期制备负载量更高的S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂,并利用XRD、SEM对复合物进行表征。采用透析法研究介质的pH对S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬的影响,拟合释放曲线研究释放机制。
  4. S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂在大鼠体内药物动力学研究
  以市售S(+)-IBU混悬液为参比制剂,自制S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂为受试制剂,经口服灌胃,按剂量60 mg/kg分别给予大鼠参比制剂和受试制剂,测定其不同时间的血药浓度,绘制药-时曲线,并用DAS2.0药代动力学软件程序采用非隔室模型分析数据。
  结果:
  1.处方前研究工作
  S(+)-IBU在264 nm有最大吸收。初步理化性质,研究结果表明,平衡溶解度的顺序为:pH6.8磷酸缓冲液(4.28 mg/ml)>pH4.5醋酸缓冲液(0.22mg/ml)>0.1mol/L HCl(0.084 mg/ml),并且在各种介质中稳定性良好。
  2. S(+)-IBU/MMT缓释干混悬剂的制备及体外释放研究
  通过XRD和FTIR对S(+)-IBU/MMT缓释干混悬剂表征,从XRD图可知,2θ角从7.07o减少到6.72o,MMT层间距由原来1.25 nm增大到1.31 nm。从FTIR可知, S(+)-IBU/MMT的红外光谱上既有MMT和S(+)-IBU的共同特征吸收峰,也出现一些新的吸收峰,如在2390 cm-1处;同时3623cm-1、3425 cm-1、1030 cm-1处峰强度减弱。S(+)-IBU/MMT复合物的体外释放受pH影响较大,12h累积释放百分量大小为:pH6.8磷酸盐缓冲液(88%)>pH4.5醋酸盐缓冲液(36%)>pH1.0稀盐酸(18%),其释放动力学符合一级动力学过程。
  3. S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂的制备及体外释放研究
  采用硫酸改性MMT,随着硫酸浓度增大其板层结构被逐渐剥离;采用磷酸改性MMT,样品在室温下有很大吸水性,不便后续试验;采用盐酸板层结构保持完整且比表面积大;综合分析,盐酸最适合作为本实验的改性酸。星点设计最后确定的酸化条件为:盐酸浓度11%,处理时间5.5 h,温度55℃,在酸处理条件下,制备的Acid-MMT比表面积可达318.8 m2/g,孔容0.498 cm2/g。S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂体外释放受pH影响较大,12 h时pH6.8磷酸盐缓冲液中的累积释放百分量(92%)>pH1.0稀盐酸(33%)。
  4. S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂在大鼠体内药代动力学研究
  大鼠经口服给药后,测定在不同时间血浆中的S(+)-IBU浓度,应用DAS2.0药物代谢动力学分析软件处理实验数据,结果显示,市售 S(+)-IBU混悬液和自制S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂的t1/2分别为2.36±0.05 h、5.58±0.55 h;Cmax分别为123.5±41.74μg/ml、86.05±5.96μg/ml;tmax分别为0.5 h、2±0.20 h;AUC0-24分别为439.88±84.41μg/ml·h、644.49±73.26μg/ml·h;相对生物利用度为154.11%±27.41%。通过t检验进行统计分析,两种制剂药动学参数具有统计学差异(P<0.05)。
  结论:
  1. S(+)-IBU平衡溶解度随介质pH增大而增大;在不同pH释放介质中24 h内稳定。
  2. S(+)-IBU分子通过插层、物理和化学吸附方式进入MMT基层间和表面形成了稳定的药物缓释系统。S(+)-IBU/MMT缓释干混悬剂的释放有一定的pH依赖性,体外释药特征符合一级动力学模型,根据Peppas方程(释放指数n=0.41),释药机制为药物扩散。
  3.盐酸化后的MMT比表面积、孔容增大,S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂释放有一定的pH依赖性,体外释药特征符合Higuchi模型,释药机制为药物扩散与骨架溶蚀同时进行。体外释药行为更符合Higuchi模型,根据Peppas方程(释放指数n=0.86),释放机制为不规则转运。
  4. S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂 Cmax比市售的 S(+)-IBU混悬液小,而AUC0-24、tmax大、t1/2长,具有一定的缓释效果。
[硕士论文] 谢雪梅
生物化学与分子生物学 聊城大学 2017(学位年度)
摘要:热熔挤出技术是一种新的制药工艺,具有可连续化操作、不使用有机溶剂、药物适用范围广、能达到高度分散等特点。本研究采用热熔挤出技术研究制备难溶性药物利托那韦固体分散体,考察该技术在制备固体分散体、提高难溶性药物溶解度方面的应用。
  目的:利托那韦临床上用于治疗HIV病人,目前中国批准上市的利托那韦制剂大部分都是雅培公司基于热熔挤出技术制备的,而国内尚未有自主研发的利托那韦片剂,因此本课题旨在探究利托那韦固体分散体在制备过程中的辅料及工艺条件,为后续利用热熔挤出技术制备利托那韦的仿制药提供借鉴。
  方法:⑴处方前研究。建立利托那韦的高效液相色谱及紫外分光光度测量法,通过对利托那韦、Soluplus、Kollidon VA64及不同质量比的混合物进行热分析,考察药物、载体的热稳定性及两者的相容性,并建立利托那韦体外溶出方法。⑵玻璃化转变温度是热熔挤出工艺中重要的参数之一,以Soluplus、Kollidon VA64为载体,采用热分析法探究不同类型的物质(水分、灰黄霉素、利托那韦、改性豆磷脂、胆固醇)对其Tg值的影响。⑶薄膜法初步筛选热熔挤出处方。以Kollidon VA64为载体,采用薄膜法制备利托那韦固体分散体。探究了不添加剂改性豆磷脂,DOPC, DPPC,Span20,PEG-6000对利托那韦固体分散体玻璃化转变温度及溶出度的影响。⑷热熔挤出技术制备利托那韦固体分散体。制备了利托那韦-Kollidon VA64、利托那韦-Kollidon VA64-改性豆磷脂、利托那韦-Kollidon VA64-Span20固体分散体,并对其各种性质进行了鉴定。
  结果:①建立了简单灵敏的高效液相色谱及紫外分光光度法,用以测定利托那韦的体外溶出度;通过对药物及辅料分解点、熔点及玻璃化转变温度分析,表明两种辅料可作为利托那韦的载体。②由结果可知,5种物质均可作为增塑剂降低Soluplus、Kollidon VA64的Tg值。含水量为2.4%的Soluplus Tg值降低约12.4℃,含水量为4%的Kollidon VA64 Tg值降低约57.6℃。50%的灰黄霉素/利托那韦/改性豆磷脂/胆固醇-Soluplus Tg降低值分别为3.6,20.8,15.5和30.5℃;50%的灰黄霉素/利托那韦/改性豆磷脂/胆固醇-Kollidon VA64 Tg降低值分别为11.0,41.1,8.9和35.4℃。利托那韦、胆固醇对Soluplus、Kollidon VA64的增塑作用均强于灰黄霉素和改性豆磷脂。③薄膜法制备的利托那韦-Kollidon VA64-DOPC/DPPC/改性豆磷脂/EPCS/Span20/PEG-6000固体分散体溶出度结果表明,添加改性豆磷脂、Span20的固体分散体溶出度更高。④热熔挤出技术制备的利托那韦-Kollidon VA64-改性豆磷脂/Span20固体分散体,能降低熔融温度,且溶出度更好。
  结论:利用Kollidon VA64为挤出物载体,改性豆磷脂及Span20为添加剂,通过热熔挤出技术制备利托那韦固体分散体,能提高其溶解度,为后续制备利托那韦仿制片提供了依据。
[硕士论文] 格日乐
应用化学 内蒙古大学 2017(学位年度)
摘要:RNA干扰(RNAi)是双连RNA诱导的转录后水平上的基因调控,把特异性靶mRNA降解,从而下调疾病有关的基因。它已经表现出了治疗基因的异常表达导致的各种疾病的巨大潜力。在RNAi的临床应用中,研究出高生物相容性、高效率递送载体极为关键。
  本研究前期工作中,已经制备出的核酸载体有DoGo2、DoGo3、DoGo4α2δ2、DoGo4α3δ1脂质复合物等。它们都通过调控DoGo1的亲水头部而合成出来的。本论文以天然氨基酸原料构建了三种脂质化类肽,经过调节氨基酸组成、多肽氨基酸数、胺类合成出DoGo6、DoGo311、DoGo121。我们通过1H-NMR和质谱物性确定化合物的结构与分子量等,通过透射电镜、电动电势及激光粒度等方法对脂质复合物进行表征。对DoGo6、DoGo311、DoGo121脂质复合物的生物活性进行研究。实验结果表明,它们的生物相容性均比商用的转染试剂Lipofectamine2000更好。DoGo6、DoGo311脂质复合物在较低的氨基(N)/磷酸基团(P)比例下可以与dsDNA结合。在体外转染实验中,转染质粒、siRNA(siGAPDH、siPLK1)。实验结果表明,随α氨基数的增加,能够增加DNA/siRNA转染效率,同时,DoGo6脂质复合物对293T、HeLa、HepG2等细胞株具有潜在的靶向性。
[硕士论文] 陈思
兽医学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:目前,临床上使用的溶栓药有尿激酶、人组织纤溶酶原激活剂等,纤溶酶原激活剂类溶栓药已经发展到第3代,以重组人纤溶酶原激活剂为代表。重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)是天然t-PA重组突变体,保留了K2和P区,提高了溶栓效果、纤维蛋白的亲和力特异性高、半衰期延迟、使用剂量减少、全身出血和颅内出血发生率降低等特点。利用乳腺生物反应器生产rhPA,大大提高生产量、目的蛋白质可以在机体内翻译,磷酸化、羧化等修饰,生物活性高,成本低,样品纯化简单等优点。通过沉淀法、超滤法、层析法等技术相结合,有效的从乳汁中分离和纯化到表达蛋白。
  本实验通过体细胞核移植技术制备了乳腺特异性表达rhPA转基因山羊,重组人纤溶酶原激活剂cDNA在山羊乳腺中特异性表达。通过ELISA、Western Blot,检测rhPA的表达产物分泌到乳汁内;经FAPA检测,表达产物有较高的比活性。
  rhPA转基因山羊制备:无菌手术取30日龄的羊胎儿,分离提取山羊胎儿成纤维细胞培养,电转染乳腺特异性表达载体BCL14/rhPA基因到胎儿成纤维细胞。用含有G418600μg/mL的细胞培养液筛选7-10天后,挑取单克隆细胞株经PCR检测筛选出阳性细胞株24株,其中选取7株作为供核细胞。用含0.5%FBS的DMEM/F12培养液饥饿72h阳性细胞株作为供核细胞。活体输卵管冲洗法获取MⅡ期的卵母细胞,去核后作为核受体进行体细胞核移植,重构胚移植到同期发情的受体羊输卵管内。
  30天、60天进行B超检查受体羊的妊娠情况,出生的小羊PCR检测是否整合rhPA基因。超数排卵供体羊42只,获得MⅡ期卵母细胞438枚,受体羊26只,移植重构胚256枚,7只受体羊妊娠,其怀孕率为26.9%,出生2只小羊,提取基因组进行PCR检测为rhPA转基因山羊(BP21、BP22)。
  获得的转基因山羊进行饲养、性成熟后,与正常公羊配种、妊娠、分娩,出生的小羊提取基因组,PCR检测为rhPA转基因山羊。收集乳汁,高速离心取乳清,ELISA免疫原性检测,半定量分析转基因山羊乳清中rhPA表达量约是92.2μg/mL。SDS-PAGA电泳和Western Blot检测克隆羊乳清,出现了约39kD大小的特异性目的条带。FAPA与ELISA检测结合显示,BP21转基因羊乳清中所含rhPA的比活性大约为阿替普酶的40倍。
  表达产物rhPA的分离和鉴定:羊乳经过超速离心、酸碱沉淀去除脂肪和酪蛋白后,上样到赖氨酸亲和层析株进行分离和纯化。SDS-PAGA电泳和Western Blot检测有纯化样品中有39kDa的特异性目的条带,FAPA检测具有溶栓活性,说明羊乳经过L-赖氨酸亲和层析纯化后依然具有溶栓活性。
  本实验利用体细胞核移植技术获得转rhPA山羊,乳汁中rhPA特异性表达含量为大约73.6μg/mL,具有高比活性。表达产物能够通过L-赖氨酸亲和层析分离和纯化出来,纯化产物回收率高、生物学活性高,为后续进一步纯化奠定基础。目前未见关于重组人纤溶酶原激活剂在山羊乳腺上表达的相关报道。
[博士论文] 刘柯兰
材料科学与工程 北京化工大学 2017(学位年度)
摘要:多功能荧光材料结合荧光物质的灵敏性和功能材料实用性,具有跨领域的应用前景。苝酰亚胺衍生物(PDIs)作为一种光、热和化学稳定性优异的化合物,已被广泛应用于光电、染料、自组装和生物成像等多个领域。PDI自身的优异特性使其成为一种潜在的多功能荧光材料。通过化学修饰向PDI的“海岛”和酰亚胺位上引入官能团或聚合物可实现PDI的多功能化。与聚合物修饰特别是树枝状聚合物修饰相比,官能团修饰的PDI分子更加灵巧、精确。本论文介绍多功能PDI分子的设计合成,通过取代、加成等化学反应将具有特定官能团修饰到PDI上,得到多功能的荧光化合物。并进一步探索其在分子、离子检测,生物荧光成像,基因载体和抗癌研究方面的多功能应用。本论文研究内容总体分为以下三部分:
  1.为探索PDI在分子检测方面的应用,设计合成一种多功能荧光探针MAPDI,并研究其用于亲核性检测和还原性无机物检测的性能和机理。通过向PDI的“海岛”位引入四个具有亲核性响应的小共轭结构,抑制PDI的聚集从而提高MAPDI的荧光量子产率。MAPDI能快速实现对多种亲核试剂的检测(胺类、氨基酸类和无机物类),同时实现对检测物亲核性强弱的颜色指示。此外,MAPDI检测还原性无机物质时伴随着紫外吸收光谱的显著红移。综上,MAPDI是一种多功能荧光探针,可同时用于检测并区分不同亲核试剂及还原性无机物。
  2.为研究PDI在离子检测和生物领域中的应用,设计合成一种多功能苝酰亚胺衍生物DTPDI,并将其用于汞离子检测及荧光基因载体。通过在PDI的“海岛”位引入能够特异性与汞离子反应的“碳-硫”键及八个阳离子胺基盐酸盐,得到一种既可作为汞离子荧光探针又可作为基因载体的水溶性苝酰亚胺衍生物DTPDI。DTPDI实现对高度专一性和超敏感检测汞离子(检测极限为0.1 nM)的特点。细胞毒性实验表明DTPDI具有很好的生物相容性,能安全地在细胞内进行汞离子检测。DTPDI还能够在细胞和活体水平运载核酸并使其成功表达。综上,DTPDI是一个多功能荧光探针,可应用于汞离子的检测及基因载体中。
  3.为探索PDI作为抗癌试剂和药物载体研究等领域的应用,设计制备一种多功能的载体RGD-PDI。在PDI的酰亚胺位引入双离子基团得到DNA嵌插剂,并通过可断裂的酯键将其与RGD多肽相连接,得到RGD-PDI。RGD-PDI具有抗癌效果,可作为前药应用于生物领域。此外,利用RGD-PDI分子与抗癌药物CPT的疏水作用及π-π堆积作用,将二者共组装得到药物传递系统。在细胞内,该系统可实现双离子型PDI嵌插剂及CPT的同时释放,实现“双重化疗”。进一步研究发现,通过改变体系的组装形貌可有效地调控药物释放速率。综上,RGD-PDI是一种多功能抗癌试剂,既能作为靶向前药又能作为药物载体应用于肿瘤治疗领域。
[硕士论文] 丁丽娜
材料工程 中北大学 2017(学位年度)
摘要:介孔二氧化硅纳米颗粒(MSNs)除了具有表面易功能化、细胞易于吸收、可生物降解、低毒性和优良的生物相容性这些传统的性能外,还具有独特的性能,例如高比表面积、大的孔体积、可调的孔结构和良好的物理化学稳定性等,因此MSNs在生物医学方面的应用受到了研究者的特别关注,已经被广泛应用于靶向药物输送、诊断、治疗等其他的生物医学方面。近二十年来,有大量的研究将荧光蛋白和荧光染料等不同种类的荧光物质与介孔硅掺杂,但是这些材料容易光漂白,不适合在血液内长期循环以及实时追踪。碳点(CDs)作为一种新型的荧光纳米材料,其制备方法简单,原料成本低,具有可调的发光范围、良好的光稳定性、易功能化以及良好的生物相容性和水溶性等性质,和半导体量子点比较,其最大的优点就是毒性低,使其在光催化、传感器、太阳能电池和生物成像等方面具有广泛的应用。本论文将MSNs和CDs复合得到碳基荧光介孔硅材料,不仅同时具有CDs和MSNs的优良性能,还可以作为良好的药物载体对病变细胞达到靶向治疗的目的。本论文主要通过两种不同的方法制备具有不同荧光性能的碳基荧光介孔硅,以实现生物成像与靶向治疗一体化,主要工作如下:
  (1)通过原位合成法将荧光碳点和靶向剂同时作用到MSNs上,此方法制备过程简单,原料成本低,将叶酸(FA)和氨基化MSNs(MSNs-NH2)混合,一步微波法制备出具有靶向性的荧光介孔硅(FA-CDs-MSNs),其中FA既为CDs来源又可以作为靶向剂。通过系统的研究,其产物具有低毒性、良好的荧光性能和细胞靶向性,被应用于细胞成像和靶向治疗,也被用来区别癌细胞和正常细胞,为了验证FA-CDs-MSNs对癌细胞有治疗的效果,将其承载药物阿霉素(DOX),DOX@FA-CDs-MSNs有选择性地靶向肿瘤组织和抑制癌细胞的生长,作为药物载体提高了其药物利用率和抗癌能力,减小了对其他组织的毒副作用。本论文合成的具有靶向性的的荧光介孔硅为细胞靶向和治疗构建了一个新的纳米平台。
  (2)通过共缩聚法将近红外碳点(NIR-CDs)合成到MSNs的骨架结构里,再在其表面嫁接线粒体靶向剂(3-羧丙基)三苯基溴化磷(TPP),得到具有线粒体靶向性的近红外介孔硅(NIR-MSNs-TPP)。首先将近红外碳点与异氰酸丙基三乙氧基硅烷(IPTS)共轭得到NIR-硅烷,再与TEOS共缩聚反应合成近红外介孔硅(NIR-MSNs),将其氨基化后和TPP通过酰胺反应得到最终产物。NIR-CDs在近红外区域同时具有激发和发射双光子性能,毒性非常低,可用来双光子生物成像,近红外光还具有高组织渗透性和生物友好型等特性,比低渗透性的紫外或者可见光具有非常大的优势,能够克服紫外可见光在光活化等生物应用方面的局限性。将其与MSNs复合之后,其产物不仅可以用来高渗透双光子成像还可以用于药物输送,将其修饰靶向剂TPP之后,可将药物输送至线粒体从而实现更高效的靶向治疗。
[硕士论文] 郭婷婷
药学 北京化工大学 2017(学位年度)
摘要:口崩片在服用时不必用水,无需咀嚼,仅靠口腔中唾液便可快速崩解,直接吞咽入胃,可显著提高患者用药的依从性和治疗效果。冻干口崩片更因其富含孔隙及可溶性基质而具有崩解迅速和口感良好的优势。盐酸非索非那定(FEX)在临床上主要用于治疗过敏性鼻炎、特发性慢性荨麻疹等,其口崩片在美国已上市,但国内尚属空白。盐酸氟西汀(Flu)是临床上治疗抑郁症的一线药物,已有分散片制剂,但其口崩片在国内外均未批准上市。这两种药均具有强烈苦麻味,本论文的目的是研究和开发具有良好口感的口腔崩解片,为临床应用提供多样化的剂型选择。主要包括以下内容:
  1、掩味方法的筛选:分别采用卡波姆络合法、HP-β-CD包合法、丙烯酸树脂微囊法,以苦味掩盖和药物溶出为考察指标,对FEX进行掩味,结果表明,丙烯酸树脂微囊法可以达到良好的掩味效果和溶出度;FEX和Flu分别以丙烯酸树脂EPO和L100-55为掩味材料时结果最好。
  2、冻干口崩片的处方工艺及制剂学研究:以口崩片的外观性状、崩解时间、分散均匀性等为考察指标,采用单因素实验对基质、冻干保护剂和溶质质量分数等进行了筛选和优化,结果显示,以1%水解明胶为基质,甘露醇为冻干保护剂,溶质的质量分数为16%时,可得到外观洁白完整、崩解快速的FEX冻干口崩片;以1%明胶-黄原胶(4∶1)混合胶为基质,以PEG6000为助溶剂时,可得到含量均匀、溶出快速的Flu冻干口崩片。采用XRD对冻干口崩片进行表征,结果显示,FEX的掩味粉末制成冻干口崩片后,药物晶型没有发生改变;Flu的掩味粉末制成冻干口崩片后,药物特征峰消失,药物变成无定型或者被完全包裹。体外溶出测定结果显示,两种药物的冻干口崩片与普通口崩片(压制)相比,药物溶出度均有显著提高。
  3、冻干口崩片的稳定性研究:分别对FEX和Flu冻干口崩片进行影响因素和加速试验,结果表明两种药物的冻干口崩片稳定性良好,药物含量、有关物质和溶出度均符合要求,质量稳定。
  4、冻干口崩片的质量研究:采用HPLC分析方法分别对两种药物的冻干口崩片进行含量测定和溶出度测定,参照美国USP和中国药典有关标准对冻干片进行质量控制研究,结果表明,两种药物的冻干口崩片外观洁白平整、30 s内崩解、30 min溶出度大于85%、含量均匀度好、有关物质等均符合规定。
[硕士论文] 赵嫣
药学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  多西他赛是一种多西紫杉烷类抗癌药物,属于难溶性药物,目前上市剂型仅有注射剂,经过处方调研,上市产品均通过吐温80、乙醇等增溶剂的联合使用达到增溶效果,本文采用脂肪乳作为载体,提高多西他赛的溶解性,并对其进行冻干工艺研究,以期制成更加安全、有效的给药系统。
  方法:
  通过文献调研及处方前研究确定多西他赛相关理化性质,为后续处方工艺研究及储存条件提供依据。通过单因素考察,星点设计效应面法优化,筛选最优处方工艺,并进行灭菌可行性研究。通过对预冻温度,一次干燥、二次干燥工艺考察,预冻过程中退火技术的应用,确定冻干工艺,制备冻干乳。
  结果:
  1、通过处方前研究,建立了多西他赛体外分析方法,经方法学初步验证,符合检测要求。强降解实验结果表明:多西他赛在几种条件下稳定性顺序为:光照>氧化>高温>强酸>强碱。溶解度实验表示:多西他赛在含有soybean oil/MCT1:4油相中溶解度为2.31 mg/g。
  2、本文通过处方工艺筛选及优化,多西他赛最优处方工艺为:按质量百分比,水相组成为0.35%泊洛沙姆188加注射用水至全量;油相组成为多西他赛1%、大豆磷脂1.0%、soybean oil2.0%和MCT8.0%;初乳制备时水相油相温度均为60℃;均质前调pH值5.0左右;初乳制备高剪切速度8.0×103 r/min,高剪切时间为10 min,均质压力为10000 psi,均质次数为3次。进行灭菌工艺可行性研究考察,最终采用高压均质技术与冷冻干燥技术结合,采用10%蔗糖作为冻干保护剂,进行预冻温度、时间、一次干燥、二次干燥温度时间考察,并采用退火工艺,制备冻干乳剂,复溶后粒径变化较小,均在180 nm范围内,其不会引起血管栓塞。
  结论:
  采用脂肪乳剂作为载体,可以在一定程度上提高多西他赛溶解性,并避免有机溶剂的加入,减少对人体的刺激性;为难溶性药物的开发提供新的方向与可能,但仍需后续进行更全面考察。
[硕士论文] 周云
药剂学 湖北中医药大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  盐酸奈必洛尔(Nebivolol hydrochloride,NBH)作为美国Johnson and Johnson公司研发的新型第三代β-受体阻滞剂,主要用于轻、中度高血压的治疗,也可用于充血性心衰和心绞痛等病症[1]。NBH不仅对β1受体选择性强,而且还能够通过精氨酸-NO通道的调节而发挥扩血管的作用。目前,盐酸奈必洛尔已上市的剂型为普通片剂,部分患者口服时生物利用度较低,对于强代谢型患者,其生物利用度仅为12%[2],可能与其肝脏首过效应及溶解度差有关。为提高盐酸奈必洛尔的生物利用度,本课题在采用环糊精包合技术改善药物水溶性的基础上,通过研制新型口腔黏膜给药缓释制剂—口腔黏附双层片,以期避开肝脏的首过作用,延缓药物在口腔黏膜的滞留时间,提高生物利用度,减少个体差异。方法:
  (1)盐酸奈必洛尔处方前研究:采用 HPLC法测定盐酸奈必洛尔溶液的含量,采用饱和水溶液法测定盐酸奈必洛尔在纯水、0.1mol·L-1盐酸溶液及 pH2.0、pH6.8、pH7.4、pH8.0磷酸盐缓冲液中的平衡溶解度;通过摇瓶法测定盐酸奈必洛尔在正辛醇-水/缓冲液体系中的表观油水分配系数(Log P);通过原料药的影响因素实验,考察了盐酸奈必洛尔的吸湿性以及供试品在高温(60℃)、高湿(RH=75%±5)、强光(4500lx±500)破坏条件下的稳定性。
  (2)盐酸奈必洛尔-HP-β-CD包合物的制备与表征:以溶液搅拌-冷冻干燥法制备包合物;采用 L9(34)正交实验设计,以盐酸奈必洛尔-HP-β-CD投料比(摩尔比)、包合温度、包合时间、乙醇浓度为考察因素,以包封率为指标筛选最佳工艺;通过相溶解度法、红外吸收光谱法、X-射线粉末衍射法、核磁共振法对包合物进行验证;运用HPLC方法测定盐酸奈必洛尔-HP-β-CD包合物的包封率和载药量。最后,运用饱和水溶液法分别测定盐酸奈必洛尔和包合物在纯水、pH6.8磷酸盐缓冲液中的溶解度,以考察包合物的增溶性能。
  (3)包合物口腔黏附双层片的制备和处方优化:本研究采用粉末直接压片法制备内层片,为减少异物感对患者带来的不适,拟将其制成直径为6mm,片重约为60mg的口腔黏附双层片。首先通过单因素实验,以黏附剂的种类、黏附剂的用量和比例以及黏膜促渗剂的用量为考察对象,以体外黏附力、体外累计释放度和体外溶胀率为考察指标,筛选内层片处方。然后根据单因素实验结果,确定黏附剂种类,并选择对黏附力和释放度影响较大的两个因素,每个因素设置5个水平,采用中心组合设计-效应面法安排实验,优化处方工艺。
  (4)包合物口腔黏附双层片的质量评价:建立 HPLC法作为本制剂的含量测定方法,并进行系列方法学验证。依据《中国药典》四部制剂通则(2015版),分别对本品性状和含量均匀度进行药剂学表征;根据力矩平衡原理,采用自制装置对口腔黏附片的体外黏附力进行测定;运用紫外分光光度法建立体外释放度测定方法,并对其释药曲线进行零级、一级、Higuich、Ritger-Peppas方程拟合,以拟合优度最大,确定最佳拟合模型,推测其释药特性。
  结果:
  (1)通过对盐酸奈必洛尔进行处方前研究,结果表明:在37±0.5℃下,盐酸奈必洛尔在纯水中和0.1mol·L-1盐酸的平衡溶解度分别为722.53μg·mL-1和56.07μg·mL-1,在正辛醇-水/盐酸体系中的油水分配系数分别为1.17和1.32。盐酸奈必洛尔的平衡溶解度和油水分配系数对pH变化呈现出依赖性。在pH2.0~pH7.4的范围内,随着pH的升高, NBH的平衡溶解度降低,表观油水分配系数增加;而当pH从7.4增加至8.0时,平衡溶解度增加,油水分配系数降低;盐酸奈必洛尔在相对湿度75%±5的条件下,其平均增重百分率为2.67%,根据“引湿性特征与引湿性增重”的界定,NBH属于有引湿性的药物;影响因素实验结果表明,盐酸奈必洛尔在高温条件下较稳定,强光和高湿条件下,药物含量有所降低,有关物质基本无变化,提示盐酸奈必洛尔原料药及其制剂在生产、运输和贮存过程中,应阴凉、干燥处保存,以保证药物的安全、稳定、有效。
  (2)盐酸奈必洛尔-HP-β-CD最佳包合工艺为:主客分子投料比(摩尔比)1:1,包合温度40℃,磁力搅拌时间4h,乙醇浓度80%;包合物验证结果表明,盐酸奈必洛尔、物理混合物与包合物的图谱之间存在显著差别,盐酸奈必洛尔-HP-β-CD包合物形成,相溶解度图呈AL型,且包合比为1:1;包合物经HPLC测定后,包封率为(73.69±0.10)%,载药量为(16.70±0.22)%,与理论值基本吻合,工艺重现性良好;盐酸奈必洛尔和包合物增溶效应研究结果表明,药物经包合后,其溶解度在纯水和pH6.8磷酸盐缓冲液中分别增大了3.18倍和11.10倍。
  (3)由单因素实验结果可知,选择黏附力较大、膨胀率适中的CP和HPMC联合作为生物黏附材料,以CP和HPMC总量为A因素,CP和HPMC比例为B因素,各因素的取值范围分别为:5%~25%和0.20:1~1:1,进行效应面法优化。最终,优化得到的内层片处方为:包合物占处方总量的50%(相当于盐酸奈必洛尔5mg),CP和HPMC占处方总量的11.45%,二者比例为0.32:1,填充剂甘露醇占处方总量的37.15%,硬脂酸镁和微粉硅胶分别占处方总量的0.8%和0.6%,保护层一侧涂以10%的乙基纤维素乙醇溶液,自然干燥后即得。
  (4)对自制的包合物口腔黏附片进行相关药剂学评价,结果如下:本品为内层白色或类白色,外层一侧覆透明薄膜,表面光滑的双层片。含量均匀度结果表明,A+1.80S均小于15.0,符合药典的规定。三批样品的黏附力适中,符合口腔黏附制剂的规定。本制剂在8h内的释药曲线与 Ritger-Peppas方程具有最佳拟合度, LnQ=0.5649lnt-1.3442, R2=0.9776,推测其释放机制为non-fick扩散,即药物释放是由于药物扩散和骨架溶蚀的共同作用。方法学验证结果表明,用高效液相法作为本品含量测定方法,精密度、回收率高,线性、稳定性好,快速、简便的优点。
  结论:
  本研究应用溶液搅拌-冷冻干燥法制备包合物,工艺先进,合理可行,制备的包合物包封率高,既解决了盐酸奈必洛尔的溶解度问题,又得到了性状疏松的固体粉末,可为进一步研究打下基础。
  以包合物为压片主药,CP和 HPMC联合作为生物黏附材料,采用直接压片法制备用于口腔黏膜给药的盐酸奈必洛尔双层片,制备工艺简便、可行,可以满足单向释药的要求。药物经口腔黏膜给药,既可避免胃肠液中酶、酸的影响及肝首过效应,又能提高药物的生物利用度,可为为盐酸奈必洛尔新剂型的研究开发提供有益参考。
  通过系列方法学验证表明 HPLC法作为本品的含量测定方法具有回收率高,专属性强,线性、精密度、重复性好等优点。质量评价结果表明,本制剂主要性能指标均符合药典规定。体外实验研究结果表明,体外释放度和体外黏附力的测定方法科学、简便,黏附力理想和释药速率适宜,符合口腔黏附制剂的相关规定。
[硕士论文] 郭偲
药剂学 湖北中医药大学 2017(学位年度)
摘要:阿尔茨海默症(简称AD)是一种潜伏期长、起病隐匿、进行性发展的神经系统退行性疾病,临床上症状主要表现为记忆障碍,认知和运动能力受损,人格行为改变的全面性痴呆。通常发病于老年人群体,是当今世界上威胁老年人身体健康的一个重要因素。目前研究发现,导致 AD的主要原因是神经细胞的损失或退化,特征性病理改变为淀粉样斑块和神经纤维缠结[1]。
  石杉碱甲(Huperzine-A)是1986年由我国科学家首次从中国石杉科植物蛇足石杉所提取的倍半萜天然生物碱,是一种可逆的乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChE),常用来缓解疼痛、解毒以及缓解肿胀。石杉碱甲能有效穿过血脑屏障,在治疗AD、改善记忆和认知的作用等方面具有显著疗效[2]。目前市售的石杉碱甲制剂有片剂、胶囊剂和(肌肉内)注射剂等剂型。片剂及胶囊剂均在体内消除较快,而注射剂经肌肉注射会造成一定疼痛感,患者顺应性差,且市售制剂均需每日给药,认知记忆障碍的患者会难以按时服用或注射。
  为了延长药物在给药部位的滞留性,减少给药次数提高患者顺应性,提高药物的生物利用度达到缓释及局部给药的目的,本课题制备研究了石杉碱甲(Huperzine-A)溶致液晶制剂,即是以高纯度二油酸甘油酯(GDO)和大豆磷脂(SPC)作为液晶材料、少量无水乙醇作为溶剂、石杉碱甲作为主药,研制出石杉碱甲溶致液晶制剂。
  采用匀速旋转混合法制备石杉碱甲溶致液晶制剂,通过抗稀散性初步筛选处方组成范围,通过通针性实验进一步缩小其处方中各成分的适宜浓度范围,再通过流变学来进行其注射性能的考察,结果发现石杉碱甲溶致液晶制剂和空白溶致液晶制剂其注射性能良好。
  通过偏光显微镜对不同SPC和GDO比例的石杉碱甲溶致液晶制剂进行刚吸水、吸水溶胀一天及充分溶胀后三个时间点的偏光纹理的观察,结果发现不同SPC和GDO比例的石杉碱甲溶致液晶制剂其偏光纹理并不相同,具有一系列的相变化行为。
  建立石杉碱甲溶致液晶制剂含量测定的方法,采用高效液相色谱法测定药物含量,通过精密度试验、重复性试验以及回收率试验检测,显示该检测方法精密度好,方法测定结果符合规定。
  体外释放实验采取pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS7.4溶液)作为制剂溶出的释放介质进行无膜释放,结果表明:SPC:GDO=70:30时的石杉碱甲溶致液晶制剂在168小时体外累积释放率可达93.29%。具有一定的缓释作用,释放曲线符合 Ritger-Peppas模型:LnQ=0.50984Lnt-1.0289,r2=0.98771,特征指数n=0.50269,即0.45  通过影响因素试验和长期稳定性试验,对制剂进行初步稳定性考察。实验结果表明高温、光照及高湿对于石杉碱甲溶致液晶制剂的稳定性影响很大,所以试剂应避光低温密封保存,而长期稳定性实验结果则表明在3个月内石杉碱甲溶致液晶制剂低温避光密封保存,其含量测定结果符合规定要求。
  综上所述,本文所制备的石杉碱甲溶致液晶制剂流动性良好,制剂稳定,缓释效果较好,有望成为一种石杉碱甲新型给药传递系统。
[博士论文] 马陈晨
药物化学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:由PI3K介导的PI3K/AKT信号通路是细胞中关键的信号通路之一,在细胞的生命进程中发挥着至关重要的作用,包括细胞的存活、生长、增殖、分化及凋亡。该信号通路的失调将会引发多种肿瘤的发生,因而,PI3K激酶成为肿瘤治疗的重要的靶点之一。目前,PI3K激酶主要分为三类,其中Ⅰ型PI3K与肿瘤的发展紧密相关。根据催化亚基和调节亚基的不同,Ⅰ型PI3K又被进一步分为PI3Kα,β,δ和γ四个亚型。其中PI3Kα和β在各组织器官中广泛分布。PI3Kα的编码基因PIK3CA是目前在人类癌症中最常见的突变和扩增基因,从而使得PI3Kα成为肿瘤治疗的一个有效的靶点。PI3Kβ在PTEN缺失或失活的癌症患者中对肿瘤的形成发挥着重要的作用,并能够激活血小板引起血栓类疾病。PI3Kδ主要分布在造血器官的细胞中,与自身免疫性疾病有关。PI3Kδ失调容易导致骨髓和淋巴结微环境内恶性B细胞的增殖和存活,引起淋巴瘤和骨髓瘤。PI3Kγ主要分布在白细胞和T淋巴细胞中,也与炎症反应和免疫性疾病有关。随着对不同亚型PI3K的结构和生物功能的探索,大量具有不同结构母核和选择性的PI3K抑制剂相继被发现,对人类肿瘤、炎症及免疫相关疾病的治疗提供了很大的帮助。
  本论文致力于发现新型PI3K抑制剂,研究内容主要分为以下两个部分:
  一、作为PI3K/AKT信号通路抑制剂,先导化合物BENC-511在体外对多种肿瘤细胞具有显著的抗增殖活性,且可以通过抑制AKT的磷酸化,诱导细胞发生凋亡。在多发性骨髓瘤和前列腺癌异种抑制模型中,口服给药BENC-511均显示了良好的体内抗肿瘤活性。但BENC-511对PI3K激酶并没有明显的抑制活性,具体作用靶点并不明确,而且体内代谢不稳定。为了探索靶点明确、代谢更稳定的PI3K抑制剂,在香豆素母核上连接吡啶脲基结构片段,期望能提供氢键受体或供体,与铰链区的缬氨酸产生氢键结合,提高化合物的活性和亚型选择性。在构建香豆素环的过程中,发现N-Boc保护基在浓硫酸条件下,可以形成叔丁基碳正离子,作为叔丁基化试剂,发生傅克烷基化反应,这在文献中是鲜有报道的。另外,在香豆素C-7位羟基上引入不同的烷基,考察其对活性的影响。该部分共合成了36个化合物,包括6-叔丁基取代衍生物A系列,7-羟基香豆素衍生物B系列(6位无取代)和7-烷氧基衍生物C系列。多数化合物对A549,MCF-7,K562和Hela细胞表现出良好的抗增殖活性,化合物A2、A8、A11、A13、B2、B7、B9、B10、B14、C4、C7的活性优于BENC-511或与其相当。在A系列化合物中,脲基上含有卤素取代的苯基,或3,4-双卤素取代的苯基时,化合物对肿瘤细胞的抗增殖活性最好。与A系列化合物相比,去除香豆素C-6位叔丁基后,B系列化合物抗增殖活性更加显著。在B系列化合物中,脲基氮原子被2,5-二甲氧基苯基、对位卤素取代的苯基、3,4-双卤素取代的苯基或环丙基取代时,抗增殖活性较好。在香豆素C-7位羟基上引入不同烷基后,大部分C系列化合物对肿瘤细胞的抗增殖活性呈现不同程度的下降,个别化合物的活性略有提高,如化合物C8对肿瘤细胞的抗增殖活性高于B8。在30μM浓度下,化合物A2、A5、A8、A9和A11对PI3Kα的抑制率均在在69%至85%之间,其中A2具有P13Kα/β选择性,A8具有PI3Kα/β/δ选择性。另外,化合物A8能抑制AKT的磷酸化,诱导caspase3的活化和PARP的剪切,促进肿瘤细胞凋亡。
  二、PI3Kδ的异常激活容易导致B细胞恶性肿瘤,如白血病和淋巴瘤等。CAL-101是一个选择性的PI3Kδ抑制剂,临床上用于治疗CLL、FL和SLL。本研究以CAL-101的结构基础,采用骨架跃迁策略,用4-氨基吡唑并嘧啶环代替CAL-101的嘌呤环,并在其C-3位引入含有氢键受体或供体的芳环或芳杂环;在喹唑啉酮的3位氮原子上引入邻甲基苯基(D系列)、2,6-二甲基苯基(E系列)或环己基(F系列),考察其对疏水性口袋的诱导作用;将CAL-101的结构进行简化,去掉其手型碳,以亚甲基将喹唑啉酮片段与4-氨基吡唑并嘧啶环连接。共合成了新型喹唑啉酮衍生物19个。大部分化合物对PI3Kδ抑制活性显著,在浓度为1μM时,抑制率在90%左右,其中化合物E4和E5的活性最好,IC50值分别为8.6和8.4 nM。在同一系列中,4-氨基吡唑并嘧啶环3位的取代基对化合物的PI3K8抑制活性影响较大,5-吲哚、3,4-二甲氧基苯取代活性最好,优于5-邻甲氧基吡啶、3-喹啉或5-苯并1,3-二氧戊环,而6-羟基萘或间三氟甲氧基苯基取代导致活性明显下降。喹唑啉酮环3位的苯环对活性保持十分重要,2,6-二甲基苯衍生物(E系列)对PI3K8抑制活性最好,优于邻甲基苯衍生物D系列,而环己基衍生物(F系列)的活性较弱。其中,吲哚衍生物E4为PI3Kδ选择性抑制剂,3,4-二甲氧基苯取代衍生物E5为PI3Kδ/γ选择性抑制,二者的亚型选择性均明显优于CAL-101,尤其是E4,对PI3K8的选择性是PI3Kα、β和γ亚型的3630、390和40倍,是目前选择性最好的PI3Kδ选择性抑制剂。E4和E5还能够有效抑制SU-DHL-6细胞的增殖,其IC50值分别为0.149和0.222μM,具有进一步研究开发价值。
[硕士论文] 李霏霏
药剂学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:肿瘤免疫治疗是指激发或调动机体的免疫系统,增强机体抗肿瘤免疫应答,从而控制和杀伤肿瘤免疫细胞,抑制肿瘤生长[1-3]。近年来,肿瘤免疫疗法已发展成为继手术治疗、放射治疗、化学疗法之后的第四种肿瘤治疗模式。大多数实体瘤微环境中都伴有肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages,TAMs),它们与肿瘤的生成、发展和转移密切相关。TAMs可以分为M1和M2两种表型。M1型TAMs可引起炎症反应、激活免疫反应,具有肿瘤抑制作用。M2型TAMs具有抗炎作用,且可促进血管生成和组织重塑,抑制免疫反应,促进肿瘤的生成、发展及转移。
  由于肿瘤细胞分泌白介素-10、集落刺激因子(Colony Stimulating Factor,CSF-1)、转化生长因子β(Transforming-Growth Factorβ,TGFβ)等,肿瘤部位大多数TAMs表现为M2表型。杀伤M2型TAMs或促进M2型TAMs向M1表型的转化成为基于M2型TAMs肿瘤免疫治疗的有效手段。M2型TAMs成为肿瘤免疫治疗的有效靶点。目前作用于M2型TAMs的药物主要有单抗、小分子抑制剂和siRNA。其中,siRNA可以选择性沉默靶基因,对基因进行高度、特异性的调控,且具有特异性调节巨噬细胞和细胞内信号转导通路的潜能,可作用于M2型TAMs,发挥免疫疗效。
  目前,一些研究构建树状大分子、阳离子聚合物、胶束等载体用于siRNA的递送,这些载体将M2型TAMs的靶向因子修饰于载体表面,从而发挥主动靶向作用。但是由于巨噬细胞分布范围广,将siRNA递送至其他正常组织的M2型巨噬细胞,可能会引起免疫系统破坏等毒副作用。因此,设计一种载体以增加siRNA在M2型TAMs的积累,减少siRNA在正常组织的分布,具有十分重要的意义。本课题构建pH敏感逐级靶向纳米载体通过组织透过性增强及滞留效应(enhanced permeation and retention effect,EPR effect)和转胞吞作用的双重一级靶向作用,到达肿瘤组织,增加纳米载体在肿瘤部位的蓄积;pH敏感一级靶向材料在肿瘤部位脱落,暴露二级靶向内核,靶向M2型TAMs,将siRNA特异性递送至M2型TAMs。
  本课题选择靶向肽天冬酰胺-甘氨酸-精氨酸(asparagines-glycine-arginine,NGR)作为一级靶向因子,羧甲基壳聚糖(O-carboxymethyl-chitosan,CMCS)作为pH敏感材料,以聚乙二醇[poly(ethylene glycol),PEG]为连接,合成pH敏感一级靶向材料CMCS-PEG-NGR(CPN);选取甘露糖作为二级靶向因子,聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)作为基因压缩材料,合成α-D吡喃甘露糖基苯基异硫氰酸酯(α-D-Mannopyranosylphenyl,MPITC)-PEI(M-PEI)作为二级靶向材料。M-PEI压缩siRNA形成表面荷正电的二级靶向内核M-PEI/siRNA(MPR),通过静电作用吸附在生理条件下(pH7.4)荷负电的CPN,构成pH敏感逐级靶向纳米载体CPN/M-PEI/siRNA(CMPR)。本课题选取siR-RiboTMNegative Control作为模型基因制备PEI/siRNA(PR)、MPR、CPN/PEI/siRNA(CPR)和CMPR,筛选处方并对最优处方进行理化性质评价,考察其稳定性、细胞摄取及分布,对CPN的pH敏感性进行验证,考察MPR、CMPR的体内靶向性,对PR、MPR、CPR、CMPR的体内安全性进行初步评价。主要研究方法和结果包括:
  第一章一级靶向纳米载体的构建及其理化性质研究
  本章合成pH敏感一级靶向材料CPN,以siR-RiboTM Negative Control为模型基因,采用室温孵育的方法制备PR及CPR。采用琼脂糖凝胶电泳对PEI压缩siRNA的能力及CPN静电吸附形成CPR的情况进行考察,确定最优处方;采用透射电镜观察PR、CPR的形态,Malvern粒度电位分析仪测定其粒径、粒度分布及电位;最后采用琼脂糖凝胶电泳对PR、CPR抗RNase A能力及血清稳定性进行考察。
  实验结果表明,CPN的核磁共振氢谱(Nuclear Magnetic Resonance,1H NMR)出现CMCS、PEG、NGR特征峰,确证CPN的成功合成;PR的最优处方为PEI与siRNA质量比为2∶1,CPR最优处方为CPN与siRNA质量比为4∶1,最优处方工艺制备的PR和CPR形态较为圆整,均成球形或类球形,平均粒径分别为83.7±4.9 nm和154.5±2.1 nm,平均电位分别为20.97±1.53 mV和-14.10±0.90 mV,多分散系数均小于0.2;在12 h内,PR、CPR对siRNA具有一定的保护能力,可以保护siRNA免受RNaseA的降解及血清成分的破坏。
  第二章pH敏感逐级靶向纳米载体的构建及其理化性质研究
  本章合成二级靶向材料M-PEI,以siR-RiboTM Negative Control为模型基因,采用室温孵育的方法制备MPR及CMPR。采用琼脂糖凝胶电泳对M-PEI压缩siRNA的能力及CPN静电吸附形成CMPR的情况进行考察,确定最优处方;采用透射电镜观察MPR、CMPR的形态,Malvern粒度电位分析仪测定其粒径、粒度分布及电位;采用琼脂糖凝胶电泳对MPR、CMPR抗RNase A能力及血清稳定性进行考察;采用Malvern粒度电位分析仪对MPR、CMPR的存储稳定性及血浆稳定性进行考察;建立siRNA在不同pH PBS中的测定方法,采用动态膜透析法对siRNA的释放行为进行考察;采用酸碱滴定法测定CPN的等电点。
  实验结果表明,M-PEI的1H NMR图谱出现MPITC、PEI的特征峰,确证M-PEI成功合成,傅里叶变换红外光谱(Fourier Transform Infrared Spectroscopy,FTIR)进一步验证M-PEI的合成;MPR的最优处方为M-PEI与siRNA质量比为2∶1,CMPR最优处方为CPN与siRNA质量比为4∶1,最优处方工艺制备的MPR和CMPR形态较为圆整,均成球形或类球形,平均粒径分别为93.2±4.1 nm和146.4±6.9 nm,平均电位分别为16.40±0.92 mV和-17.00±0.10 mV,多分散系数均在0.2左右;在12h内,MPR、CMPR对siRNA具有一定的保护能力,可以保护siRNA免受RNaseA的降解及血清成分的破坏,在血浆中CMPR比MPR具有更高的稳定性;体外释放结果显示在pH5.0和pH6.5条件下 siRNA从CMPR中的累计释放量显著高于pH7.4条件,siRNA从CMPR中的释放具有一定的pH敏感性;CPN的等电点为6.33。
  第三章pH敏感逐级靶向纳米载体的体内、外靶向性评价及初步安全性评价
  本章以F4/80抗体标记巨噬细胞,以CD206抗体标记M2型TAMs,以Cy3和Cy5标记的siR-RiboTM Negative Control作为模型基因,对PR及MPR的细胞摄取进行考察。采用激光共聚焦显微镜对PR、MPR在小鼠腹腔巨噬细胞上的摄取进行观察和定量,对siRNA及CD206进行共定位及定量分析;对MPR在小鼠腹腔巨噬细胞上的竞争性摄取进行观察和定量分析;对CMPR在pH6.5、pH7.4培养基条件下的摄取进行观察和定量分析;采用小鼠活体成像的方法对CMPR在小鼠的体内分布进行观察和定量分析;采用免疫荧光技术观察小鼠肿瘤组织冰冻切片,对PR、MPR、CMPR在肿瘤组织中的细胞摄取情况进行考察;采用溶血实验对PR、MPR、CPR、CMPR的溶血情况进行考察;最后对给药小鼠组织进行HE染色评价PR、MPR、CPR和CMPR的初步安全性。
  细胞摄取实验结果显示,细胞与PR、MPR孵育1h、4h后,M2型TAMs对PR、MPR的摄取无明显差异(p>0.1);竞争性抑制实验结果显示,在未经游离甘露糖孵育的细胞内,细胞与MPR孵育1h后,siRNA与CD206的共定位效率为事先与游离甘露糖孵育细胞中共定位效率的1.63倍,存在一定差异(p<0.05),表明MPR可通过M2型TAMs表面CD206受体介导的内吞途径入胞,细胞与MPR孵育4h后,二者共定位效率无明显差异(p>0.3);在pH6.5条件下,siRNA与CD206共定位效率为pH7.4条件下的1.40倍,存在显著差异(p<0.01),表明CPN可在pH6.5条件下响应性脱落;小鼠活体成像结果显示,CMPR组在肿瘤组织的平均荧光强度是游离siRNA组的4.65倍,表明CMPR可增加siRNA在肿瘤组织的蓄积;肿瘤组织冰冻切片实验结果表明CMPR可增加siRNA在M2型TAMs中的蓄积,MPR可特异性靶向M2型TAMs;溶血实验结果显示,PR、MPR、CPR、CMPR均不会引起溶血现象,可静脉注射;小鼠给予PR、MPR、CPR、CMPR后,对小鼠组织进行HE染色观察发现,各组织器官与生理盐水组比较无显著差异,无明显病理变化。上述实验结果表明,CMPR可增加siRNA在肿瘤组织的蓄积,CPN可在肿瘤组织微酸性条件下响应性脱落,MPR可通过M2型TAMs表面CD206受体介导的内吞途径入胞。PR、MPR、CPR、CMPR具有良好的初步安全性。
  本课题以CPN作为pH敏感一级靶向材料,M-PEI作为二级靶向材料,构建pH敏感型逐级靶向纳米载体CMPR。CMPR可通过一级靶向增加载体在肿瘤组织的蓄积,通过二级靶向增强M2型TAMs中siRNA的蓄积。CMPR具有良好的稳定性和初步安全性,具有进一步开发的巨大潜力,为开发siRNA向M2型TAMs的递送载体提供了新思路、新方法。
[硕士论文] 周萌萌
药剂学 湖北中医药大学 2017(学位年度)
摘要:药物载体作为药物的传递中介,能对药物起保护作用,并使之能够被人体吸收,同时可实现药物的靶向作用,使其释放速率可控。随着科学技术的不断发展,许多新剂型逐渐被开发出来,例如微乳、亚微乳、脂质体、醇质体、微球、纳米材料、凝胶等药物载体的研究已取得重大进展。
  溶致液晶(Lyotropic liquid crystals,LLCs)作为一种新型的药物载体,也开始受到关注。作为药物载体时,溶致液晶能够提高药物的稳定性,防止蛋白、多肽等生物活性分子的酶解,并实现其在体内的持续释放,从而减少给药次数,给患者带来极大的便利。
  胃肠胰内分泌肿瘤(gastroenteropancreatic neuroendocrine tumors, GEP-NETs)是由胃、肠和胰腺中的神经内分泌细胞,在致癌因素的作用下所引发的疾病。通过药物治疗的方法,缓解肿瘤所造成的疾病症状,并抑制肿瘤的增长,控制原发病灶向周围部位转移,对于胃肠胰内分泌肿瘤疾病的缓解和治疗有较好的作用。醋酸奥曲肽是治疗该类肿瘤的常用药物之一。
  醋酸奥曲肽(octreotide acetate,OA)是一种生长抑素类似物,能结合胃、肠、胰中的生长抑素受体,并抑制这些部位多种激素的过度分泌,停药后不会引起激素分泌的反弹现象。目前,醋酸奥曲肽上市的剂型主要为注射剂型,常通过皮下注射和静脉滴注方式给药,但药物在体内的半衰期较短,需要频繁给药,因此给患者带来不便和痛苦,也造成经济上的负担。
  为了延长药物在给药部位的作用时间,增加其生物利用度,并降低用药的次数,本课题拟以具有良好的生物相容性的天然物质大豆卵磷脂(soya phosphatidyl choline,SPC)和二油酸甘油酯(glycerol dioleate, GDO)为原材料,并添加乙醇以降低体系的黏度,研制出一种具有药物缓释作用、遇水可发生胶凝反应的醋酸奥曲肽液晶前体制剂。
  本研究通过单因素实验,考察了乙醇用量以及SPC/GDO的配比对醋酸奥曲肽液晶凝胶前体的性质的影响。通过所形成体系的外观性能,确定了体系中无水乙醇的用量为15wt%,并通过对体系的成胶能力、通针性、流变学性质等进行考察,初步筛选出SPC和GDO的质量比的范围在70:30至30:70之间。通过偏光显微镜对体系的液晶结构进行了表征,同时结合不同体系的体外释放性质,对处方进行优化,最终确定该体系中SPC/GDO的配比为7:3(wt/wt)。
  经过处方优化得到的醋酸奥曲肽液晶凝胶前体为淡黄色、澄清透明的液体,在贮存条件下,具有良好的流动性和注射性能,经皮下给药注射到体内后,与体液接触即可形成凝胶状的半固体,从而延缓药物释放。
  通过旋转流变仪测定结果发现,加水前后该制剂的复数黏度(η*)值具有显著差异。在剪切应力为20Pa、频率为0.1Hz的条件下,加水前制剂的η*值仅为9.86×10-2Pas,而加水相变后其η*值可达到6.22×103Pas,表明该制剂在体内具有较好的粘附性。
  建立醋酸奥曲肽液晶凝胶前体的质量控制方法,采用 HPLC方法测定制剂中的药物含量,并对该方法的专属性、精密度、重复性、回收率等进行考察,经检验,该方法专属性强,且具有较好的精密度和重复性,通过该方法测得的样品含量符合规定。
  影响因素试验显示,醋酸奥曲肽液晶凝胶前体受到温度和光照的影响比较大,因此,应将制剂在避光的条件下冷藏保存。同时,为了避免空气中的水分对制剂造成的细微影响,可将制剂置于干燥的环境中保存,使制剂能够有更好的稳定性。
  本研究通过影响因素实验和长期稳定性实验,对醋酸奥曲肽液晶凝胶前体的外观性状和制剂中药物的含量进行了考察,从而考察不同因素对制剂稳定性的影响情况。实验结果显示,光照和温度对醋酸奥曲肽液晶凝胶前体的稳定性有较大影响,同时结合制剂本身的性质,应将其密封避光冷藏保存在干燥的贮存环境中。
  综上所述,本研究所制备的醋酸奥曲肽液晶凝胶前体具有较好的注射性能,经皮下给药后,形成的凝胶结构稳定,具有良好的药物缓释性能。
[硕士论文] 毕诗涛
药剂学 湖北中医药大学 2017(学位年度)
摘要:口腔溃疡是临床上十分常见的口腔黏膜疾病,而且极易反复发作,口腔溃疡发作时整个溃疡面会有明显的烧灼感并伴有疼痛。氨来呫诺(Amlexanox)是FDA批准的唯一用于治疗口腔溃疡的药物,具有促进溃疡愈合和预防复发的作用。但是该药的止痛效果还不令人满意。盐酸罗哌卡因(Ropivacaine Hydrochloride)亲水性较强,脂溶性低,再加上其内在的血管收缩作用使其容易在局部滞留,是一种较理想的局部麻醉药。传统的口腔粘附片为了延长药物在口腔的滞留时间,需要加入生物粘附性材料,这在一定程度上阻碍了药物的快速起效。
  基于上述原因,本课题将氨来呫诺与盐酸罗哌卡因组合,并通过新颖的速释/缓释双层片剂型设计充分发挥药物的各自特点,更好发挥快速止痛、促进愈合的治疗目的。本课题研制的口腔粘附速释缓释双层片,局麻药盐酸罗哌卡因位于速释层,可发挥快速起效的作用;氨来呫诺位于缓释粘附层,速释层崩解药物释放的同时,氨来呫诺缓释层能较持久地粘附于溃疡面,发挥保护病灶和缓慢释放药物的作用。
  本课题研究内容主要包括:盐酸罗哌卡因速释层的处方优化、粘附材料的粘附特性研究、氨来呫诺粘附层的处方优化,盐酸罗哌卡因氨来呫诺速释缓释双层口腔粘附片的制备和质量评价,速释缓释双层口腔粘附片的初步稳定性研究,速释缓释双层口腔粘附片的口腔释药研究。
  本课题首先在盐酸罗哌卡因速释层的处方优化中,以口感、崩解时限和溶出度为指标,对填充剂、崩解剂的种类和用量,进行了筛选。优化后的处方为盐酸罗哌卡因2mg、L-HPC1.65mg(5%)、MCC14.67mg、甘露醇14.67mg、阿斯巴甜0.5mg、硬脂酸镁0.5mg,崩解时限约为19.4s,体外释放度试验表明当溶出时间约为5min时盐酸罗哌卡因速释片的溶出度达95%以上。
  对生物粘附材料CP974p和HPMC K4M的粘附性进行单因素考察,以口腔粘附片的粘附力、溶胀率和粘附时间为指标进行影响因素的考察。结果发现CP974p与HPMC K4M之间的比例与片剂的粘附力、溶胀率和粘附时间存在一定的关系,当CP974p与HPMC K4M之间的配比在1:2~2:1之间时,空白口腔粘附片的粘附力较大、溶胀率适宜、粘附时间也较长。
  采用粉末直接压片法制备氨来呫诺缓释粘附层片,以口腔粘附片的粘附力、溶胀率和粘附时间为指标,单因素考察生物黏附制剂CP974p与HPMC K4M的比例,在此基础上采取直接粉末压片制备氨来呫诺单层口腔粘附片,确立最优的处方,并建立了含量测定方法。
  本文采用粉末直接压片和二次压片法制备盐酸罗哌卡因氨来呫诺速缓释双层口腔粘附片,通过对片剂的粘附力、崩解时限、释放度的测定,确定了盐酸罗哌卡因氨来呫诺速缓释双层口腔粘附片的最终处方。结果显示最优处方的片剂粘附力较大,崩解时限较快,释放度较好,而且具有良好的口感、工艺稳定可控。本文还建立了双层口腔粘附片的质量控制方法。
  通过对口腔粘附片的影响因素实验和加速试验进行初步的稳定性考察,结果显示质量稳定,为其后期的包装储存提供参考。通过对健康志愿者研究双层口腔粘附片在人体口腔内的释药情况,可知双层口腔粘附片的盐酸罗哌卡因速释层能快速起效,氨来贴诺缓释粘附层在口腔内维持较长时间的药物浓度,试验过程中志愿者的口腔黏膜未产生刺激或者疼痛感,具有较好的舒适性和顺应性。
[硕士论文] 马娜新
药剂学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:随着空气质量的恶化和人类生活方式的改变,癌症的发病率和致死率正逐年上升,寻求有效的癌症治疗手段刻不容缓。化疗是有效而经典的治疗手段,但是大多数化疗药物如多柔比星具有选择性低,毒副作用尤其是心脏毒性严重,半衰期短,易产生多药耐药等缺点。因此为了提高药物的治疗效果,最大化的减轻毒副作用,开发新型有效的药物载体至关重要。2004年有学者首次报道了石墨烯,凭借其独特的结构特征,优良的机械、热力学及光学特征,在各个领域都引起了极大地研究热忱。氧化石墨烯(GO)是石墨烯的氧化衍生物,具有超大的比表面积和优良的光热效果,已经成为纳米医学领域的研究热点。GO在水中可以分散,但在生理溶液中易聚集产生沉淀,极大地限制了其在药物载体方面的应用,因此必须对其进行合适的表面功能化修饰提高其在生理溶液中的稳定性和分散性。一般可以利用GO大的共轭结构及其表面和边缘存在的丰富的含氧官能团对其进行非共价或共价功能化修饰,共价键修饰在引入化学反应和有机溶剂的同时,GO的共轭结构和物理性质也会发生变化,而非共价键修饰可以避免繁琐的化学反应,最大化的保留GO的性质,因此非共价键修饰得到了越来越多的关注。
  理想的药物传递系统应该是使运载的药物在血液循环和正常组织中不释放,通过主动或被动靶向作用浓集于肿瘤部位,然后进入细胞,受细胞内环境影响快速释放药物,才会使药物具有最好的抗肿瘤效果和最小的副作用。因此环境刺激响应型药物传递系统得到了广泛的关注,我们可以利用肿瘤细胞内部的环境特征(低pH,高GSH浓度等)设计药物载体,使载药系统在肿瘤细胞内由于环境变化而释放药物发挥治疗效果。
  本课题以充分发挥GO自身的功能和性质为目的,采用两种不同的生物相容性的大分子通过非共价键方式修饰GO,分别获得的pH敏感的主动靶向药物传递系统和氧化还原敏感的药物传递系统,并分别对其进行了体内外评价。本课题的研究内容如下:
  (1)利用某些肿瘤细胞表面过度表达的叶酸受体,制备了叶酸受体介导的主动靶向的药物传递系统。将主动靶向分子FA通过酰胺反应与生物相容性的BSA结合,获得的FA-BSA通过非共价方式修饰GO制备主动靶向药物载体FA-BSA/GO,其中FA-BSA既可作为稳定剂,分散剂,又具有靶向功能。通过TEM,AFM,DLS观察其形貌,片层尺寸及厚度,Zeta电势监测其稳定性,溶血实验初步判定其良好的生物相容性。
  (2)将抗肿瘤药物DOX通过π-π和氢键作用吸附到FA-B SA/GO表面获得pH敏感的主动靶向药物传递系统。当DOX与FA-BSA/GO的质量比为3∶1时,载药量达到最大为30.43%,即1 mg FA-BSA/GO可以吸附437.43μg DOX,远高于传统制剂。体外释放实验表明,与游离DOX相比,该药物传递系统具有明显的pH敏感性和缓释行为。体外细胞毒性及细胞摄取结果表明,FA可以进一步提高肿瘤细胞对FA-BSA/GO/DOX的摄取,从而使肿瘤细胞内DOX浓度增高,提高DOX治疗效果,降低其对正常组织的毒副作用。
  (3)为了进一步解决GO在生理溶液中的稳定性及基于GO药物传递系统的不完全的,缓慢的药物释放行为,本课题利用肿瘤细胞内外GSH浓度的差异,采用氧化还原敏感的前药分子mPEG2K-PCL2K-SS-DOX作为稳定剂、分散剂、通过非共价键修饰GO,获得了氧化还原敏感的药物传递系统GOPN,并对其体内外抗肿瘤活性进行了研究。
  (4)前药分子的存在使得制备的GOPN在生理溶液中能够稳定存在,同时由于PEG的长循环作用,可延长GOPN在体内循环时间,从而避免重复用药。同时通过TEM观察其形貌,DLS测定其粒径,并通过粒径观察其在血浆中的稳定性,结果表明GOPN具有良好的稳定性。
  (5)体外释放结果表明GOPN具有良好的氧化还原敏感性,并且与NGO/DOX相比,释药更完全。体外细胞毒性实验结果表明GOPN的抑制率高于游离DOX和NGO/DOX,这是由于氧化还原敏感的GOPN通过内吞作用进入细胞,在细胞内高的GSH浓度下,二硫键断裂,释放药物,快速杀死癌细胞,因此我们制备的GOPN具有更好的治疗效果。体外细胞摄取实验结果表明A549细胞对GOPN的摄取量高于游离的DOX,高的摄取量可以保证药物浓集于肿瘤部位,是提高肿瘤杀伤力的重要原因。
  (6)最后通过荷瘤小鼠对GOPN的体内抗肿瘤活性进行了评价,通过相对肿瘤体积变化可以看出,GOPN对肿瘤增长有一定的抑制作用。通过考察荷瘤小鼠相对体重变化和组织切片对GOPN的用药安全性进行了评价,结果表明GOPN可以明显降低DOX导致的心脏毒性,因此我们制备的GOPN具有有效的体内抑瘤效果和良好的生物安全性。
  综上所述,本课题首次成功将两种生物相容性的大分子(FA-BSA和mPEG2K-PCL2K-SS-DOX)通过非共价方式修饰GO,分别构建了pH敏感的主动靶向药物载体和氧化还原敏感的药物传递系统,不仅成功地解决了GO在生理溶液中不稳定的问题及基于GO的药物传递系统释放缓慢和不完全的问题,而且可以提高DOX的治疗效果,降低毒副作用,提高病人的耐受性,同时还拓宽了GO在生物医学领域中的应用,因此本课题具有重要研究意义。
[硕士论文] 张佩
制药工程 山东大学 2017(学位年度)
摘要:癌症已经成为危害人类身体健康的主要因素之一,在世界范围内引起了广泛关注。目前,在临床上用于治疗癌症的主要方法包括化学治疗、放射治疗、手术治疗等。多西他赛(DTX)是一种在临床上已得到广泛应用的化疗药物,它是紫杉醇的半合成衍生物,是一种广谱抗癌药,对乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、头颈癌等癌症均具有治疗作用。但是,由于DTX的水溶性差,在临床应用中,通常在其注射液中加入一定量的吐温-80等增溶剂以增加其溶解性,易引起严重的副反应,如过敏反应等。另外,由于DTX的组织选择性差,容易对正常细胞造成毒副作用。
  为了增加DTX的溶解性,增加其对肿瘤组织的靶向性,人们近些年研究了多种药物传递系统,如囊泡、纳米粒、聚合物胶束、聚合物-药物结合物胶束等。其中,聚合物胶束是由两亲性嵌段共聚物在水中自组装形成的纳米级别的核壳结构,亲水性嵌段形成聚合物胶束的外壳,而疏水性嵌段组成其疏水性的内核,该疏水内核可以装载疏水性的药物。如果将药物与亲水性或者两亲性嵌段共聚物通过化学键结合,则可形成聚合物-药物结合物胶束。聚合物-药物结合物胶束具有载药量高、稳定性好、药物释放缓慢等优点,具有较好的抗肿瘤效果。另外,可通过环境敏感的化学键将聚合物与药物结合,使聚合物-药物结合物胶束具有氧化还原敏感性、pH敏感性、酶敏感性等等。
  为了增加DTX的溶解性,降低其毒副作用,本课题将DTX通过一个含有二硫键的连接臂与两亲性嵌段共聚物mPEG-PBLG相连,合成了氧化还原敏感的mPEG-PBLG-SS-DTX嵌段。该嵌段可以在水中自组装形成胶束,并通过对此胶束进行进一步修饰,形成多功能的mPEG-PBLG-SS-DTX/mPEG-FA混合胶束,该混合胶束同时具有氧化还原敏感性和主动靶向性,表现出更好的抗肿瘤效果。
  本课题的主要研究内容包括以下三点:
  (1)两种具有不同分子量的 mPEG-PBLG-SS-DTX(mPEG2000-PBLG1750-SS-DTX和mPEG5000-PBLG1750-SS-DTX)的合成和表征。以具有不同分子量的mPEG-NH2为大分子引发剂,与γ-Bzl-L-Glu-NCA单体发生开环聚合反应,生成具有不同分子量的两亲性嵌段共聚物mPEG-PBLG(mPEG2000-PBLG1750和mPEG5000-PBLG1750)。然后,通过一个含有二硫键的连接臂将DTX与mPEG-PBLG结合,得到氧化还原敏感的聚合物-药物结合物mPEG-PBLG-SS-DTX。并分别利用1H-NMR和FT-IR确定中间产物和mPEG-PBLG-SS-DTX的合成成功。
  (2)氧化还原敏感的mPEG-PBLG-SS-DTX胶束的制备、表征和体外抗肿瘤评价。由于聚合物-药物结合物mPEG-PBLG-SS-DTX具有两亲性,在水溶液中可以自组装形成具有核壳结构的胶束,所以在本实验中我们通过透析法将其制备成胶束。该胶束在TEM下呈现出粒径均一、圆整的球形,利用DLS测得的粒径分别为101.3±1.4和148.9±1.4 nm,且粒径布均匀,这两种胶束的Zeta电势分别为-20.1±0.1和-14.5±0.1 mV,表明这两种mPEG-PBLG-SS-DTX胶束具有较好的稳定性。紫外分光光度计法测得的这两种胶束的载药量分别为(13.9±0.8)%和(9.2±0.4)%。利用芘探针法测得的CMC均较低,分别为3.98和6.94μg/mL,这表明这两种胶束即使在血液循环系统中被稀释,仍可以保持结构稳定。该胶束具有氧化还原敏感性,药物的体外释放实验结果表明,在不存在还原性DTT的环境中,120 h后,约有10%的DTT从胶束中释放出来,而在DTT存在的条件下,DTX的释放速率明显加快,120 h后,DTX的累积释放量达到40%左右,这说明DTX的释放具有氧化还原敏感性。溶血性实验结果表明,这两种胶束的溶血率均较小(<5%),具有较好的血液相容性。在胶束的体外抗肿瘤评价中,以A549和MCF-7/ADR细胞为模型细胞。与DTX相比,mPEG-PBLG-SS-DTX胶束对这两种细胞表现出更好的细胞抑制率,mPEG-PBLG-SS-DTX胶束对MCF-7/ADR细胞24 h的IC50值约为DTX的十五分之一。另外,体外摄取实验结果表明,A549和MCF-7/ADR细胞对mPEG-PBLG-SS-DTX/C-6胶束的摄取效率要强于对C-6的摄取效率,这与细胞毒性实验的结果一致。
  (3)多功能的mPEG-PBLG-SS-DTX/mPEG-FA混合胶束的制备、表征和体外抗肿瘤评价。本部分选用具有较大载药量的mPEG2000-PBLG1750-SS-DTX与含有主动靶向分子的mPEG-FA混合,通过透析法制备了多功能的mPEG-PBLG-SS-DTX/mPEG-FA混合胶束,该混合胶束不仅具有氧化还原敏感性,还具有主动靶向性。在加入mPEG-FA后,mPEG-PBLG-SS-DTX/mPEG-FA混合胶束呈现出粒径均一、形态圆整的球形,且粒径和载药量分别为129.7±2.1nm和(9.0±1.7)%。利用芘探针法测得的CMC为5.08μg/mL,这与mPEG-PBLG-SS-DTX胶束的相似,表明该混合胶束在血液循环系统中可保持结构的稳定。溶血实验结果表明,不同浓度的mPEG-PBLG-SS-DTX/mPEG-FA混合胶束溶液的溶血率均小于5%,说明该混合胶束不会引起红细胞的溶血。药物的体外释放实验结果表明,mPEG-PBLG-SS-DTX/mPEG-FA混合胶束仍然具有氧化还原敏感性。另外,将叶酸受体(FR)低表达的A549细胞和FR高表达的MCF-7细胞作为模型细胞,对mPEG-PBLG-SS-DTX/mPEG-FA混合胶束的抗肿瘤效果进行评价。细胞毒性实验结果表明,对于A549细胞,mPEG-PBLG-SS-DTX/mPEG-FA混合胶束的抑制率与mPEG-PBLG-SS-DTX胶束无明显差别,而对于MCF-7细胞,前者要明显高于后者,这说明mPEG-PBLG-SS-DTX/mPEG-FA混合胶束具有主动靶向性,对FR高表达的肿瘤细胞具有更好的抗肿瘤效果。在细胞摄取实验中,A549细胞对mPEG-PBLG-SS-DTX/C-6胶束、mPEG-PBLG-SS-DTX/mPEG-FA/C-6混合胶束和mPEG-PBLG-SS-DTX/mPEG-FA/C-6混合胶束+2 mM FA的细胞摄取效率无明显的差别,而在MCF-7细胞中,mPEG-PBLG-SS-DTX/mPEG-FA/C-6混合胶束进入细胞的效率要明显高于其他两者,这表明mPEG-PBLG-SS-DTX/mPEG-FA/C-6混合胶束可通过FR介导的细胞内吞作用进入细胞,这使其细胞摄取效率得到了显著的提高。细胞凋亡实验展现出了类似的结果,mPEG-PBLG-SS-DTX胶束和mPEG-PBLG-SS-DTX/mPEG-FA混合胶束孵育12h后,A549细胞的凋亡并无明显差异,而在MCF-7细胞中,后者的凋亡效率要明显高于前者。这些结果均表明,mPEG-PBLG-SS-DTX/mPEG-FA混合胶束具有主动靶向性,对FR高表达的肿瘤细胞表现出更好的抑制效果。
[硕士论文] 刘婧
药剂学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:白血病是一种造血干细胞恶性增殖性疾病,我国白血病的发病率呈逐年上升趋势。阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)是一类抗代谢类抗肿瘤药物,是急性淋巴性白血病的首选治疗药物。但Ara-C由于分子极性很大,脂溶性低,膜透过性差,且口服后极易被胃肠道中的脱氨酶代谢失活成无活性的阿糖尿嘧啶(Ara-U),因此口服生物利用度低。静脉注射后体内血浆半衰期极短,临床上主要以持续静脉滴注方式来维持有效血药浓度,剂量大且毒副性强。以上缺点极大限制了Ara-C的临床应用,因此开发载药量高、安全有效的Ara-C药物递送系统具有重要的研究意义和应用价值。
  两亲性小分子前药是一类药物与其极性不同的低分子量材料共价结合形成的前药分子,由于分子结构自身的两亲性,合成的前药分子可在水中自组装形成纳米聚集体,通过EPR效应被动靶向至肿瘤组织,实现药物自递送;同时药物本身参与载体形成,可极大提高载药量,减少惰性材料引起的毒副作用;药物与载体材料通过化学键结合,缓释效果更加明显。
  根据Ara-C临床应用缺点,本文选择了两种疏水脂肪链-油酸(oleic acid,OA)和正己酸(hexanoic acid,HA),共价结合到Ara-C的4位氨基上,设计并合成了两种阿糖胞苷两亲性小分子前药油酸-阿糖胞苷(OA-Ara)和正己酸-阿糖胞苷(HA-Ara)。前药分子的优势主要有以下几点:(1)由于脂肪链的引入,前药分子可提高Ara-C脂溶性和生物膜透过性;(2)保护原药4-NH2不被脱氨酶代谢失活,延长血浆半衰期;(3)两亲性前药分子可在水中自组装形成纳米聚集体,提高载药量,实现药物自递送。本文分别就两种前药分子自身特性将其开发为口服给药制剂和主动靶向药物递送系统,主要研究内容如下:
  1.OA-Ara前药的合成及其口服制剂的制备与生物学评价
  本课题将生物相容性的油酸与阿糖胞苷以酰胺键共价结合,合成两亲性小分子前药油酸-阿糖胞苷(OA-Ara),核磁共振氢谱结果证实前药分子合成成功,产率较高(61.3%)。油水分配系数和平行人造膜通透性实验结果表明,与Ara-C相比,前药分子脂溶性和膜透过性显著增大,更易被胃肠道吸收。同时,稳定性实验结果表明,OA-Ara在不同pH条件及人工胃肠液中稳定性良好,适用于口服给药。在探头超声作用下,以牛血清白蛋白为稳定剂,OA-Ara可在水中通过“自顶向下”和“自底向上”两种方式形成纳米螺旋聚集体。通过透射电镜表征螺旋结构形貌,圆二色谱和红外光谱推测螺旋结构形成机制。体外细胞毒性实验结果表明,OA-Ara由于脂溶性增大,入胞能力增强,对人白血病细胞K562和HL60的细胞毒性显著增强,表现出优异的抗肿瘤活性。OA-Ara口服制剂可提高阿糖胞苷白血病治疗效果,为其临床应用提供更为安全有效的治疗方案。
  2.叶酸修饰的HA-Ara纳米药物递送系统研究
  本课题将六个碳的正己酸共价结合到阿糖胞苷的4-NH2上,首次合成正己酸-阿糖胞苷前药分子(HA-Ara),利用核磁共振氢谱和质谱技术证实前药分子合成成功。由于前药分子适宜的两亲性结构,HA-Ara可通过纳米沉淀法在水中形成粒径在90 nm左右的纳米聚集体(HA-Ara NAs),载药量高达71%。分别表征HA-Ara NAs形貌,粒径,zeta电势,临界聚集浓度(CAC)等理化性质。为实现药物靶向递送,合成高接枝率的叶酸-牛血清白蛋白(FA-B SA)接枝物为主动靶向分子,吸附到前药纳米聚集体表面,制备叶酸受体(FR)靶向的纳米聚集体(NAs/FA-B SA),同样制备BSA吸附的非靶向纳米聚集体(NA s/B SA)。采用溶血试验结果初步判断前药纳米聚集体溶血毒性,结果表明所制备纳米聚集体生物相容性良好,可用于静脉注射给药;体外释放实验结果表明,在中性介质中,前药纳米聚集体具有明显缓释效果。选用FR高表达的K562细胞和FR低表达的A549细胞进行体外细胞实验,细胞毒性实验结果表明,与Ara-C相比,前药纳米聚集体均能提高细胞杀伤能力,且对于K562细胞,NAs/FA-BSA的细胞生长抑制率最强;运用FITC标记纳米聚集体,并通过荧光显微镜和流式细胞仪分别定性和定量检测体外细胞摄取情况,实验结果表明,前药纳米聚集体可通过细胞内吞作用促进细胞的摄取,且K562细胞对叶酸修饰的靶向纳米聚集体的摄取明显强于普通纳米聚集体,体外细胞实验结果表明叶酸受体介导作用可增加NAs/FA-BSA在靶细胞中的细胞毒性和摄取率。以上结果说明,两亲性前药设计与靶向递送结合可进一步提高白血病治疗效果。
  综上所述,本文设计并合成了两种新型两亲性小分子前药,用于阿糖胞苷的递送。结果表明,两亲性前药分子可改善原料药脂溶性和膜透过性,并在水中自组装成纳米聚集体,提高Ara-C载药量。前药分子均可有效增强原药抗肿瘤活性,其中OA-Ara纳米螺旋聚集体适于口服给药,而叶酸修饰HA-Ara纳米聚集体更能将Ara-C靶向递送至肿瘤细胞内,提高白血病治疗效果。因此,本文对两种前药进行的性质研究为两亲性小分子前药的构建奠定理论基础,具有重要的实践意义。
[硕士论文] 袁萍
药剂学 湖北中医药大学 2017(学位年度)
摘要:辛苯聚醇(Octoxynol-9,O-9)是应用广泛的壬苯醇醚(Nonoxynol-9, N-9)的类似物,也是一种非离子型表面活性剂类阴道用杀精剂,但其毒性较 N-9小[1-2]。而现今的外用避孕制剂多存在易于泄漏,难以铺展覆盖阴道表面,在阴道内滞留时间短,生物利用度低的问题。温敏凝胶是在位凝胶的一种,可响应温度变化发生相变而具有独特的溶液-凝胶转变性质,从而有着给药方便、黏附力强、长时间滞留的特点,因此尤其适用于黏膜给药[3-4]。壳聚糖(Chitosan,CS)也是温敏凝胶体系中一种常见的材料,有着良好的生物降解性、生物相容性、无毒与抑菌性,是一种优良的生物粘附性材料,有延缓药物释放的作用[5-6]。因此本研究将安全性更高的O-9与优良的生物粘附材料CS结合,制备具有温度敏感性的新型阴道用制剂,可使制剂在阴道表面广泛覆盖,延长药物在阴道中的滞留时间,得到更安全、有效、使用方便的新型外用避孕制剂。
  本研究选择药用辅料泊洛沙姆(Poloxamer)与CS结合作为温敏凝胶基质,采用冷溶法制备辛苯聚醇阴道用温敏性凝胶[(O-9)-VTG],并用星点设计-效应面法优化处方,筛选出最优处方的基质配比为 P407:P188:甘油:CS=16.3:5.7:5:0.6,按处方制备的(O-9)-VTG的胶凝温度为33℃,胶凝时间约1.6min。
  采用高效液相色谱法建立了(O-9)-VTG质量控制方法,并对3批样品进行了质量评价,含量分别为标示量的99.83%、100.69%、99.31%(n=3)。
  为探讨(O-9)-VTG的体外释放行为,采用无膜溶出法进行体外释放度的研究。结果表明,(O-9)-VTG释药模型拟合遵循零级方程。
  通过影响因素试验、加速实验及长期稳定性试验,以外观性状、pH、胶凝温度、O-9含量为指标对制剂进行初步稳定性考察,结果表明(O-9)-VTG具有良好的稳定性。
  采用试管倒置法可测得胶凝完全时的胶凝温度,但无法对凝胶的相变行为及凝胶强度等进行表征,因此采用动态流变学实验测定温敏凝胶在相变过程中的流变参数,可测得(O-9)-VTG的胶凝温度为32.6℃,与试管倒置法测得结果基本一致,其在室温下(25℃)具有良好的流动性,粘度小,为牛顿流体,易于注射入阴道内;置于阴道后可迅速铺展,在一定时间内胶凝后,凝胶粘度增大,具有假塑性流体特征。另外模拟了阴道液的稀释作用对(O-9)-VTG胶凝行为的影响,证实了(O-9)-VTG在体温条件下仍可形成凝胶。
  通过分别阴道给予雌性大鼠自制辛苯聚醇普通凝胶[(O-9)-gels]及(O-9)-VTG,收集含药阴道冲洗液,建立阴道冲洗液中药物含量测定方法,并采用 DAS软件对阴道冲洗液中药物量进行处理得到(O-9)-gels和(O-9)-VTG的阴道内滞留时间,结果与(O-9)-gels相比,制备的(O-9)-VTG具有明显的阴道内粘附滞留性能。
  为评价制剂的有效性,以市售壬苯醇醚凝胶(N-9 Jelly)为对照,采用改良的Sander-cramer方法观察(O-9)-VTG的最低有效杀精浓度(MEC)对大鼠精子的作用,结果表明,(O-9)-VTG的 MEC为0.50mg·ml-1,与N-9 Jelly的效果相当。大鼠阴道内给药后,使雌雄鼠合笼,观察避孕效果,得到(O-9)-VTG与N-9 Jelly均有较高的避孕率的结论,与自然对照组及空白凝胶组之间的差异具有显著性,表明(O-9)-VTG阴道用药具有较好的抗生育作用。
  阴道粘膜刺激性试验及阴道急性毒性试验以SD雌性大鼠为对象,通过肉眼和阴道病理切片观察,采用Eckstein刺激性评价标准评价刺激性,结果显示(O-9)-VTG对大鼠阴道无明显的刺激作用,局部急性毒性实验表明经阴道用药也无毒性。
  综上所述,本研究制备的(O-9)-VTG胶凝温度适宜,温度敏感性好,制剂质量稳定,具有一定的缓释作用,体内滞留时间长,组织相容性好,制备得到更安全、有效、使用方便的新型外用避孕药,也为辛苯聚醇阴道局部用药制剂的进一步开发研究提供依据和基础。
[硕士论文] 岳琳琳
口腔临床医学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:背景:
  脉管畸形好发于颈面部,是一种由于胚胎时期脉管的错误发育而形成的血管或者淋巴管系统的先天性疾病。依据构成脉管畸形的管道成分的不同又分为淋巴管畸形、微静脉畸形、静脉畸形、动脉畸形、动静脉畸形以及混合畸形。随着科学技术发展和药物的研发,脉管畸形的治疗方法丰富多样,现阶段临床常用的治疗方法有手术切除、激光照射、硬化治疗及多种方式的联合治疗等。近年来,泡沫硬化剂血注射因其具有操作简单、疗效佳的特点,逐渐成为脉管畸形的重要治疗方法。与传统的液体硬化剂相比,泡沫硬化剂因其具有泡沫性,从而临床应用中具有硬化剂用量少,硬化作用时间长,疗效显著,并发症少等优点。泡沫硬化剂的稳定性对其硬化效果具有重要影响,并与术后相关并发症的产生有重要关系。泡沫硬化剂的稳定性问题得到了临床医生的关注。大量研究发现,泡沫硬化剂稳定性与硬化剂性质、制备方法、液气比等因素有关,有学者研究发现低温可以增加泡沫的稳定性;泡沫的制备速度可能与硬化剂的稳定性有关。聚桂醇注射液作为临床治疗中广泛用于制作泡沫硬化剂的药物,其制备的泡沫稳定性与临床治疗效果有重要联系,但温度和制备速度与聚桂醇泡沫的稳定性的关系尚不明确。
  目的:
  1.通过研究不同温度下聚桂醇泡沫的半衰期变化情况,探讨温度变化对泡沫硬化剂稳定性的影响。通过对泡沫制备前行温度处理与泡沫制备后行温度处理所获的泡沫半衰期值进行统计分析,研究温度处理方式对泡沫硬化剂稳定性的影响。
  2.通过研究不同制备速度获得的泡沫半衰期的变化情况,探讨制备速度与泡沫硬化剂稳定性的相关性。
  方法:
  1.温度变化对聚桂醇泡沫稳定性的影响
  将实验分为2组:预处理组—将盛有聚桂醇注射液的注射器及盛有空气的注射器通过医用三通管连接后,置于不同温度中(5、15、25、35、45、55和65℃),预处理10min后,根据Tessari法制备聚桂醇泡沫。记录泡沫在室温(T=25℃)条件下的半衰期;后处理组—先在室温条件下制备聚桂醇泡沫,然后记录泡沫在不同温度下(5、15、25、35、45、55和65℃)的半衰期。利用SPSS19.0软件包进行统计学分析,应用Pearson相关性检验,分析各处理组中温度与泡沫半衰期的相关性;并采用独立样本t检验研究2组之间即温度处理方式对泡沫半衰期的影响。
  2.制备速度对聚桂醇泡沫稳定性的影响将盛有聚桂醇注射液的注射器及盛有空气的注射器通过三通管连接,选用5组不同的推注速度在室温下制备聚桂醇泡沫,并记录环境温度为25℃条件下的泡沫半衰期值,利用SPSS19.0软件包进行统计学分析,通过Pearson相关性检验,分析泡沫制备速度对泡沫稳定性的影响。
  结果:
  1.在预处理组和后处理组中,温度变化与聚桂醇泡沫的半衰期之间均存在负相关性(预处理组: r=-0.984,P<0.05;后处理组: r=-0.969,P<0.05)。T=25℃时,预处理组与后处理组之间的泡沫半衰期无显著差异(P=0.428>0.05); T>25℃时,预处理组半衰期高于后处理组;T<25℃时,预处理组半衰期低于后处理组,差异具有显著性(P<O.05)。
  2.不同制备速度获得的硬化剂泡沫的半衰期存在差异,通过统计学分析发现,随着制备速度的增加,泡沫的半衰期逐渐增加(r=0.983,P<0.05)。当推注速度达到本实验最大值(10s/20次)时,硬化剂泡沫的半衰期最长。
  结论:
  1.温度是影响聚桂醇泡沫稳定性的一个重要因素,低温预处理和低温环境均可以提高泡沫的稳定性;泡沫制备前的温度与制备后的环境温度对泡沫稳定性的影响存在差异。
  2.硬化剂泡沫的制备速度对其稳定性具有显著影响,增加制备速度可以提高硬化剂泡沫的稳定性。
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