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[硕士论文] 刘洋
药剂学 黑龙江中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:制备消渴渗透泵片,并对其释药机理进行研究。消渴渗透泵片是在消渴丸组方基础上进行改良,兼有起效快,化学药疗效确切以及中药协同降血糖作用,调理治本和增效减毒双重作用。为将消渴丸进行现代化改造,本研究将传统的丸剂改为渗透泵片剂,并对其质量检测方法、药动学和药效学进行研究。
  方法:应用纤维素酶法提取葛根素等有效成分,在单因素试验考察纤维素酶的质量浓度、提取液pH值、提取温度、料液质量浓度等因素对葛根素提取率影响的基础上,采用响应面法优化了消渴渗透泵片中葛根药材的提取工艺,得到最佳提取工艺参数。研究了含药层处方、助推层处方、包衣处方和压片工艺,制备消渴渗透泵片;考察了渗透泵片释药行为,并对其释放格列本脲控释机理进行了研究。采用高效液相色谱法,建立消渴渗透泵片中葛根素、黄芪甲苷和格列本脲的含量测定方法。采用高效液相色谱法,建立家兔口服消渴渗透泵片后血浆中格列本脲含量的定量分析方法,测定血浆中的药物浓度,计算相关药动学参数。考察口服消渴渗透泵片后对大鼠空腹血糖,糖负荷后血糖变化。
  结果:通过响应面法进一步优化得到最佳提取工艺条件:提取温度50℃,提取液pH值3.9,纤维素酶质量浓度3.6mg/mL,料液质量浓度15mg/mL;用高效液相测定在此优化条件下葛根中葛根素的提取率为9.5%;与传统的水提取、酸提取葛根素的方法相比,采用该优化的酶法提取工艺条件葛根素的提取率显著提高(P<0.01)。在体外溶出试验中,分别在pH2.0、pH4.5、水溶出介质中,制备控释片不受pH值影响,呈现零级线性释放,控释效果良好。实验结果表明消渴渗透泵片在体内起到了延迟释药的作用。根据大鼠血糖影响药效学实验结果表明,消渴渗透泵片能明显抑制动物的糖负荷后的血糖升高,其作用有明显的剂量关系。消渴渗透泵片使正常大鼠空腹血糖水平有所降低,作用在2h消失。与胰岛素相比,消渴渗透泵片不会引起低血糖反应,适用于2型糖尿病控制血糖不理想患者。与胰岛素治疗相比,消渴渗透泵片无低血糖副作用,降糖作用安全有效,动物实验结果表明使用消渴渗透泵片24小时血糖浓度平稳。
  结论:实验确定的提取方法提取效率高,质量控制方法方便可行,能很好控制制剂质量;消渴渗透泵片可以降低血糖,抑制糖负荷后血糖升高,可安全有效的降低血糖,对糖尿病的治疗有较好应用前景。
[硕士论文] 黄媛
药物分析学 延边大学 2018(学位年度)
摘要:手性是生物体系的基本特征,生物体内存在氨基酸、乳酸等光学异构体低分子的代谢物,它们的合成和分解涉及到多种疾病,例如:D-丝氨酸存在于大脑的海马区,它的合成与分泌与阿尔兹海默症有关。在诸多手性拆分方法中,柱前衍生化方法是较为有效的方法之一,虽操作繁琐,但是灵敏度高,可以用廉价的反相柱进行分离,重现性好。鉴于此,本研究利用超高效液相(UPLC)-荧光(FL)法,开发合成高灵敏度、且易于手性拆分的新型荧光手性衍生化试剂,发展和建立高灵敏度、高选择性的生物体内微量氨基官能团手性代谢物的分析方法。
  本研究着眼于带有荧光基团的4-(N,N-二甲基胺磺酰基)-7-氟苯并呋喃(DBD-F)化学结构为母体,导入具有手性中心和羧基结构的(S)-2-甲基脯氨酸(M-L-Pro),合成了具有氨基官能团靶向识别能力、且具有手性拆分能力的荧光手性试剂DBD-trans-2-methyl-L-prohne(DBD-M-Pro),利用UPLC-FL法,以19种手性氨基酸和苯乙胺为氨基化合物模型进行手性拆分效能评价,以C18为色谱柱,以10mM乙酸铵-0.05%的甲酸水溶液(pH3)和0.1%的甲酸乙腈或0.1%的甲酸甲醇溶液为流动相,梯度洗脱,柱温为40℃,在激发波长(Ex):460 nm,荧光波长(Em):550 nm处进行了检测。结果表明在分离的19种D,L-氨基酸和苯乙胺中,除组氨酸(Rs1.32)和丝氨酸(Rs1.47)外,其余17种氨基酸和苯乙胺的分离度(Rs)为1.59-24.11,达到完全分离,观察发现氨基化合物随着疏水性绝对值的增大分离度有增大的趋势。并且以D,L-Pro,D,L-Val,D,L-Trp,D,L-Phe,D,L-Leu,D,L-Lys为例,在30分钟内6种D,L-氨基酸的分离度为2.80-14.03,达到完全分离,方法学考察结果表明在2.5-500 pmol范围内线性关系良好(R2≥0.9990);最低检测限(S/N=3)为0.5-3.75 pmol,D,L-氨基酸日内日间精密度为2.31-11.73%,1.75-11.26%;唾液添加平均回收率为95.99-106.97%,均满足生物样品测定的要求。40名健康志愿者(男性15名、女性25名)唾液中D,L-Pro,D,L-Val,D,L-Trp,D,L-Phe,D,L-Leu,D,L-Lys的定量分析,男女唾液中D-Pro男性含量高于女性具有差异性(p<0.05),而D-Lys的含量女性显著高于男性(p<0.001)。
  本研究新开发了具有氨基官能团靶向识别能力、且具有手性拆分能力的荧光手性衍生化试剂DBD-M-Pro,利用UPLC-FL法,以19种手性氨基酸和苯乙胺为氨基化合物模型进行手性拆分效能评价,并对人体唾液中的六种手性氨基酸进行了定量分析。本试剂可在反相柱延长衍生化产物的保留时间实现良好的手性拆分,为发展和建立高灵敏度的手性氨基代谢物分析方法提供一种有效的荧光衍生化试剂,为手性代谢代谢组学提供了一个新的方法学策略。
[硕士论文] 高小风
药剂学 长春中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:本课题研究的目的是优化缬沙坦速释缓释双层片的最佳处方、制备工艺,建立双层片质量标准,探讨其释药机制。
  方法:建立原料药物缬沙坦体外分析方法;采用单因素考察法及正交试验法,以缓释层的释放度、速释层的溶出度作为考察指标,优化缬沙坦速释缓释双层片的最佳处方、制备工艺参数;依据《中国药典》2015年版第四部通则9013“缓释、控释和迟释制剂指导原则”,建立缬沙坦速释缓释双层片的质量标准;采用数学模型进行拟合,探讨其缓释层释药机制。
  结果:缬沙坦体外分析方法稳定可行。缬沙坦缓释层的最佳处方为:缓释材料为HPMC K4M,用量为30%,填充剂为淀粉,制粒目数为16目,黏合剂为5%PEG6000水溶液,干燥时间为20分钟,压片压力为2-4kgf,片剂规格为0.3g/片;缬沙坦速释片的最佳处方为:崩解剂为CMS-Na,用量为7%,干黏合剂为MCC,用量为20%,填充剂为预胶化淀粉,制粒目数16目(筛分法),压片压力为4-7kgf,片剂规格为0.15g/片;验证试验表明工艺稳定可行;进一步研究了缬沙坦速释缓释双层片之间的相互影响,以及对双层片的释放介质进行了考察,建立了缬沙坦速释缓释双层片的质量标准。确定缬沙坦双释双层片缓释层释药行为与Ritger-Peppas拟合最好,释药机理符合non-Fickina扩散。
  结论:缬沙坦速释缓释双层片制备工艺简单稳定可行。
[博士论文] 肖亚若
生物学 重庆大学 2017(学位年度)
摘要:恶性脑胶质瘤(malignant gliomas,MG)是成人中枢神经系统中最常见的癌症,也是原发性脑肿瘤中预后最差的肿瘤。MG手术难以完全切除,复发率较高,生存期短,预后差,对人类的健康构成了极大的威胁。正因如此,迫切需要研制出一种更加有效且副作用较小的治疗剂。而具有多功能和多目标特征的天然化合物或其衍生物具有被开发成癌症最佳药物的潜力。
  近年来,姜黄素(curcumine)因其在高剂量下对人体无毒并具有广泛和确切的生物活性及药理作用而受到了广泛关注。研究表明,姜黄素具有抑制多种细胞系的致癌作用,其作为治疗胶质瘤的潜在抗癌剂具有较高的研究价值。但是,由于姜黄素的一些性质致使其生物利用度很低,药代动力学不足,其在治疗 MG方面的应用也受到一定的限制。
  将化学治疗剂递送到实体瘤以及提高其生物利用度的有效方法一直是当前生物医学研究中的主要挑战。在最近几十年里,基于纳米载体和纳米技术在医学成像和靶向药物递送领域里的迅速发展。脂质体(liposome)作为一类药物递送系统在抗肿瘤药物的传递中具有很大的优势。此外,通过表面修饰亲水性分子如聚乙二醇(PEG),脂质体的循环时间会进一步增加,并能通过实体瘤的高通透性和滞留(EPR)效应被动靶向肿瘤细胞。
  目前,虽然对靶向脂质体已经有了较为深入的研究,但针对脑靶向脂质体的研究很少。血脑屏障(BBB)使治疗药物无法进入中枢神经系统(CNS)。临床上,CNS药物递送失败主要是由于缺乏适当的靶向递药系统(TDDS)。狂犬病病毒具有高度的嗜神经性,而衍生自狂犬病病毒糖蛋白(RVG)的多肽(Rabies-derived peptide,RDP)作为药物递送至大脑的靶向配体的出现,已经显示出其有作为非侵入性地克服BBB,从而用于靶向治疗的潜力。
  综合以上可以看出,开发安全有效并能靶向到达肿瘤部位的抗脑肿瘤制剂,采用主动靶向递药策略,对于治疗恶性脑胶质瘤具有重要意义。
  课题研究目的在于,开发一种安全有效的靶向脑胶质瘤递药系统,采用RDP多肽主动脑靶向和长循环脂质体在肿瘤部位的EPR效应被动靶向治疗恶性胶质瘤。本文在第一章简要介绍了该研究的背景和意义,并重点综述了RDP脑靶向序列研究的进展。随后,在主体实验部分,主要研究内容包括三个相互关联的部分:
  (1)RDP多肽修饰靶向姜黄素长循环脂质体(RDP-Lip/CUR)的制备与表征;
  (2)RDP-Lip/CUR体外靶向性及药效评价;
  (3)RDP-Lip/CUR体内靶向性及药效评价三个方面。具体研究内容及结果如下。
  首先,采用固相合成法合成 RDP多肽并利用NHS-PEG2000-DSPE中活性基团NHS与RDP多肽N端游离氨基反应,合成靶向材料RDP-PEG2000-DSPE。通过HPLC监测连接反应进程,用MALDI-TOF-MS对其进行表征,结果表明靶向材料连接成功。继而采用薄膜分散法,通过设计优化工艺分别制备了非靶向姜黄素长循环脂质体(mPEG-Lip/CUR)和RDP修饰的靶向姜黄素长循环脂质体(RDP-Lip/CUR),其平均粒径分别为98.3nm和102.7,分散系数为0.205和0.239,Zeta电位分别为-32.5mV和-30.8mV,包封率为89.56%和88.72%。透射电镜和原子力显微镜观察RDP-Lip/CUR外观圆整,分散均匀。体外释放结果表明所制备的脂质体上是否修饰RDP多肽对CUR的释放没有影响。在4度放置1个月后,能维持较好的稳定性。
  在成功合成了靶向药物之后,需要考察其细胞靶向性和体外抑瘤作用。我们选用神经细胞人脑胶质瘤U87细胞和非神经细胞人肺腺癌上皮细胞A549细胞,通过荧光显微镜观察U87和A549细胞对RDP-Lip/CUR及mPEG-Lip/CUR的摄取情况,结果表明在U87细胞中,RDP-Lip/CUR组的荧光强度明显强于mPEG-Lip/CUR组且与游离姜黄素(CUR)组接近,而在A549细胞中,RDP-Lip/CUR组的荧光强度与mPEG-Lip/CUR组无明显差别,同时荧光共定位实验结果表明RDP-Lip/CUR组相比mPEG-Lip/CUR组能更快的进入U87细胞核,这说明RDP-Lip/CUR具有同RDP相同的神经细胞靶向性。研究得出该过程主要由网格蛋白介导的内吞途径入胞,并具有时间、浓度和温度依赖性,可以被GABA配体抑制。通过细胞抑制实验(CCK8)分析空白脂质体材料的细胞毒性以及载药脂质体的体外抗肿瘤活性可知,RDP修饰的长循序空白脂质体细胞毒性较低;在神经细胞U87上,RDP-Lip/CUR(IC50=16)较于mPEG-Lip/CUR(IC50=30)的细胞毒性更高,且与CUR的细胞抑制效果接近。而RDP-Lip/CUR(IC50=32.5)和mPEG-Lip/CUR(IC50=36.8)在非神经细胞A549的细胞毒性区别不大。这些结果说明RDP-Lip/CUR具有良好的抗胶质瘤活性。通过流式细胞仪定量分析姜黄素脂质体诱导细胞凋亡和细胞周期分布的改变情况以及用Western Blot分析检测凋亡相关蛋白的表达变化结果可知,RDP-Lip/CUR能通过上调Bax、caspase-3促凋亡蛋白,下调Bcl-2抗凋亡蛋白的表达,诱导U87细胞凋亡并阻滞细胞周期于G2/M期,其药效与CUR接近(P>0.05),与mPEG-Lip/CUR相比有显著性的提高(P<0.01),这充分表明RDP-Lip/CUR具有良好的体外抗脑胶质瘤作用。
  最后,需要对RDP-Lip/CUR体内靶向性及药效进行评价。首先建立了良好的脑肿瘤药效模型。通过脑立体定位仪体外建立 U87裸鼠原位脑胶质瘤动物模型,模型成瘤率100%,术后2周内死亡率0%,平均生存期23日左右。接着以生理盐水作为实验对照组,考察并比较了CUR,mPEG-Lip/CUR和RDP-Lip/CUR的体内抗肿瘤药效。通过荧光成像系统进行离体器官的荧光分布观察可知,分别在荷瘤小鼠和正常小鼠通过尾静脉注射4h后,RDP-Lip/CUR可以大量入脑并通过肿瘤EPR效应富集于胶质瘤部位;mPEG-Lip/CUR只有少量入脑且肿瘤部位富集较少;而CUR在脑内未见分布,仅分布于胆囊处。说明RDP-Lip/CUR具有良好的脑胶质瘤靶向性和长循环效应。分组给药后,多方面的考察RDP靶向姜黄素脂质体抗脑胶质瘤药效情况,包括核磁共振(MRI)检测肿瘤大小,脑组织切片HE染色观察肿瘤恶性程度,TUNEL检测脑内胶质瘤凋亡情况,免疫组化检测肿瘤组织相关蛋白表达水平以及比较荷瘤小鼠的生存周期。MRI结果显示,相对于mPEG-Lip/CUR和CUR组,RDP-Lip/CUR组小鼠脑肿瘤抑瘤率明显增高;HE染色结果表明RDP-Lip/CUR组相对于其它组脑肿瘤恶性程度最低。免疫组化实验结果表明相对于生理盐水组、mPEG-Lip/CUR组和CUR组,RDP-Lip/CUR组的Bax和cleaved caspase3阳性细胞表达数量显著增多,而Bcl-2,Ki67阳性细胞表达数量显著降低;TUNEL实验也得出 mPEG-Lip/CUR组肿瘤细胞凋亡率最高,说明RDP-Lip/CUR促进脑肿瘤组织细胞凋亡作用最强。生存期实验结果显示,RDP-Lip/CUR组小鼠生存期中位数较其它三组均明显增加,为30天,相比生理盐水组的22天延长了约36%。以上结果表明RDP-Lip/CUR具有较好的体内抗胶质瘤药效。最后,病理切片、血液及血清生化指标考察的结果表明RDP-Lip/CUR体内安全性良好。
  通过以上章节的步骤,本研究设计并制备了RDP多肽修饰的姜黄素长循环脂质体靶向递药系统,同时构建了可用于胶质瘤药效评价的良好体内模型。该系统借助RDP主动脑靶向和脂质体被动肿瘤靶向的递药策略,能有效提高脑肿瘤靶向性和抗胶质瘤疗效,并具有良好的体内安全性。我们认为,RDP-Lip/CUR在脑胶质瘤的综合治疗中可能具有很高的应用前景。
[博士论文] 吴建兵
纺织工程 苏州大学 2017(学位年度)
摘要:生态环境恶化、人口老年化均会引发许多慢性疾病,增加病人痛苦的同时提高治疗成本。服用药物是目前的主要解决方式。然而部分药物存在稳定性差、易降解。毒副作用大、药代动力学差及无靶向组织选择性。需要可降解材料作为药物递送载体(运载体)解决。药物运载体能保留原药物生物活性,延长药物在体内作用时间,控制药物释放速率,提高药物在病灶组织药物浓度进而提高药物制剂的有效性和安全性。相比于传统运载体而言,高聚物纳微米球具有灵活的给药途径和长效的治疗效果,减少给药次数,提高病人顺应性。但是仍然存在很多不足。首先,材料以合成聚合物为主,体内降解不可控,降解产物会引起炎症反应;其次,方法复杂,绝大部分还需添加有机溶剂,降低蛋白多肽药物活性的同时生物安全性难以保证。最后,疏水性小分子药物需经化学修饰才能提高体内的生物利用度增加了治疗成本。因此开发绿色安全,简便高效,可扩大规模化生产的纳微米球药物控释技术具有重要的研究价值。
  丝素是少有的几种满足药物控释条件的天然高分子材料之一。首先,水溶液下易加工成型,无需化学交联。其次,体内降解速率可控,产物无炎症反应。最后,独特的纳微米结构可装载不同分子量的药物,提高其稳定性的同时可以调控药物释放速率。
  聚乙二醇是经FDA批准的最常用的药用辅料。亲水性、柔顺性好,无免疫原性。可与疏水性化合物、肽链、抗体、酶等活性物偶联,提高药物溶解度,延长药物体内循环半衰期,减少非特异性摄取,增加靶向性,从而改善药物的药代动力学和药效学特性。
  本文选择了亲水性药用辅料聚乙二醇与丝素溶液共混一步法即聚乙二醇(PEG)乳化-沉淀法制备丝素纳微米球,在疏水氨基酸占多数的丝素纳微米球基质中引入亲水性成分,并以此为基础深入研究药物控释行为和机理,为进一步研发丝素基药物缓控释制剂打下基础。首先,通过扫面电镜观察了丝素纳微米球的形貌,并在此基础上利用Image J软件对丝素纳微米球的粒径进行统计分析,发现聚乙二醇的分子量、浓度、丝素溶液的浓度、不同温度孵育均可影响丝素纳微米球的成球性能,进而优化了制备丝素纳微米球的条件。添加甲醇、提高孵育温度、盐离子处理均能加快丝素自组装成高β-折叠结构的微球,进而提高了其热稳定性,接着探究了丝素纳微米球的成球机理。其次,在此基础上通过改变丝素溶液pH值制备了不同β-折叠含量的丝素微球进而调控丝素微球的稳定性及体外降解性。另外在制备载药丝素微球时发现,pH值同样可调控载药丝素微球的β-折叠含量进而影响丝素微球的载药性能和体外释药行为。相比于pH7.0,pH3.6时形成丝素微球中的姜黄素的封装率提高了27%,并显著延缓了盐酸阿霉素及姜黄素药物的释放。将释放数据进行Riteger-peppas方程拟合,发现均满足球体一级扩散。然后,利用与丝素相容性好的姜黄素制备了高装载量(0.44mg/mg微球)的姜黄素-丝素纳微米球。通过体外释放数据发现,不同粒径大小的丝素纳米球可实现对姜黄素药物释放调控,并且丝素纳米球可提高姜黄素的溶出度。通过体内药代动力学研究发现,相比于纯姜黄素颗粒,丝素纳米球(229.3nm)加快了姜黄素被体内的吸收,延长了体内的血液循环时间(1.51h)。另外相比于大粒径丝素纳米球(831.4nm),姜黄素体内生物利用度提高了3倍。最后,横向比较了该方法和聚乙烯醇(PVA)相分离法制备的丝素-量子点微球,研究发现PEG乳化-沉淀法制备流程简单,高浓度(20%)时丝素成球性好,量子点装载效率高(>96%),且粒径大的丝素微球(30μm)可提高量子点在体内外的稳定性(体外>26h,体内>24h淬灭)的同时还可降低细胞毒性。
  综上所述,本文研发了一种绿色安全,重现性好,简单高效的制备纳微米球的技术。在此基础上通过调控微球的β-折叠含量实现了药物的可控释放,并将制备的姜黄素-丝素纳米颗粒首次用于口服给药提高了体内生物利用度。另外,首次选择量子点成功装载到纳微米球中,降低了细胞毒性,提高了体内外稳定性。有望研发贴近临床实用、缓释效果可控的新型纳微米球载体系统,从而更好的服务于临床疾病诊断治疗、组织工程、营养制剂及日用化妆品等多领域。
[博士论文] 胡青
药剂学 苏州大学 2017(学位年度)
摘要:骨关节炎(OA)是一种以关节软骨的退行性病变和继发性骨质增生为主的常见慢性关节疾病,在世界各地有数以百万计的人患有关节炎。关节腔注射药物分子可以有效减缓或阻止OA的病程进展,但是关节腔内注射的小分子或生物大分子会被滑膜下的淋巴系统快速清除,同时致密的关节软骨细胞外基质阻碍药物分子的进入,这些都限制了OA治疗药物的研究应用。因此,本研究拟构建新型的关节腔注射递送系统用于OA的治疗,尤其是用于关节软骨损伤的修复以及软骨内靶向和滞留。
  本课题分为两部分,第一部分是设计一个“Nano in Gel”的复合系统,即温敏凝胶负载KGN纳米粒双重缓释递送系统,用于体内软骨损伤修复的研究。首先,构建基于聚酰胺-胺树状大分子(PAMAM)的Kartogenin(KGN)递送系统。KGN是一种小分子化合物,它可以促使间充质干细胞(MSCs)向软骨细胞分化。将KGN与PAMAM相连,制备三种载药方式不同的PAMAM-KGN纳米粒,研究和比较PAMAM-KGN纳米粒诱导MSCs向软骨细胞分化的能力并对其作用机制进行初步探讨;然后将优化的PAMAM-KGN纳米粒与温敏水凝胶相结合形成长效缓释复合系统,关节腔注射该复合系统可以归巢滑膜以及骨髓来源的间充质干细胞于水凝胶支架上并通过KGN纳米粒诱导其向软骨方向分化来修复损伤软骨。
  第二部分是结合软骨结构的特殊性,软骨是由软骨细胞和丰富的软骨细胞外基质(ECM)组成,ECM是一个带有负电荷的具有~60 nm孔隙的富含透明质酸的致密3D网状结构。以正电荷的PAMAM作为基础载体,通过静电作用结合ECM,引入软骨亲和肽(CAP)增强软骨靶向性,构建关节软骨内靶向递送系统,以期实现骨关节炎治疗基团在软骨内的高效转运。
  第一部分温敏凝胶负载KGN纳米粒缓释系统诱导MSCs分化修复软骨损伤的研究
  以邻苯二甲酸酐和4-胺基联苯为起始原料,通过一步法合成小分子化合物KGN。通过1H NMR、13C NMR、FTIR和MS对KGN进行结构确认和表征,同时测定KGN的溶解特性和油水分配系数,结果表明KGN可以初步确定为低溶解度、高透过性的药物。接着将KGN与PEG化的PAMAM相连,制备三种不同载药方式的PAMAM-KGN纳米粒,分别为物理包埋组PEG-PAMAM/KGN(PP/K),化学键合组PEG-PAMAM-KGN(PPK)和KGN-PEG-PAMAM(KPP)。三种纳米粒PEG偶联个数相近,约为20个;平均粒径在30~40 nm之间,分布均匀,球形或类球形;Zeta电位+5 mV左右;载药量在5.2-5.5%(wt.%)之间。
  采用全骨髓贴壁法获得性状稳定、生长活跃的骨髓 MSCs(BMSCs)。MTT实验证明 PAMAM-KGN纳米粒不影响 BMSCs的正常生长。采用流式细胞术考察RAW264.7巨噬细胞对载体的摄取情况,结果表明PEG化的PAMAM递送系统增强了对抗巨噬细胞吞噬的能力。在体外诱导BMSCs分化成软骨细胞实验中,KGN和PAMAM-KGN纳米粒均可诱导BMSCs向软骨细胞分化,其中KPP纳米粒组软骨相关蛋白和mRNA表达水平量最高,提示KPP诱导软骨分化能力最强。通过流式细胞仪和共聚焦显微镜考察纳米载体的摄取、摄取机制和胞内分布情况,结果表明递送载体PEG-PAMAM在BMSCs上的摄取速度快,是一个消耗能量的内吞过程,主要通过小窝蛋白介导的内吞途径入胞,摄取后的载体只有部分分布于溶酶体,并且能够很快从溶酶体逃逸进入细胞质。进入细胞质的KGN和PAMAM-KGN纳米粒会竞争性结合细胞内的信号分子,诱导成软骨分化,其中,KPP组竞争性结合能力最强。
  通过开环聚合反应合成PLGA-PEG-PLGA嵌段共聚物,采用1H NMR、FTIR和GPC对其结构进行确认。考察共聚物溶液的理化性质,制备温度敏感水凝胶负载KPP纳米粒的复合递送系统(“Nano in Gel”)。结果表明浓度20 wt.%的温敏凝胶复合物相转变温度为29℃,常温下流动性、通针性好,可用于关节腔注射。体外释放实验结果显示温敏凝胶对KGN和KPP纳米粒的释放时间长达27 d,起到了对药物的缓释作用。
  通过体内实验评价温敏凝胶负载KPP纳米粒诱导体内MSCs分化修复损伤软骨的能力。通过体外BMSCs细胞增殖实验,皮下和关节腔内注射纳米粒凝胶复合物初步评价其生物安全性,结果表明复合物生物相容性较好。活体成像结果显示纳米给药系统结合温敏凝胶延长了药物在大鼠膝OA关节腔内的滞留时间,从而有助于药效的发挥。经膝关节腔注射木瓜蛋白酶诱导大鼠OA模型后,关节腔注射KGN递送系统可诱导MSCs向软骨表型分化来修复损伤的软骨。软骨大体和组织切片观察结果显示,温敏凝胶负载KPP纳米粒组(KPP/Gel)形成了组织结构和功能与正常软骨最为接近的组织工程化软骨。
  第二部分软骨亲和肽修饰PAMAM递送系统构建及其软骨内靶向和滞留作用研究
  首先通过流式细胞术筛选在软骨细胞上具有较高摄取效率的软骨亲和肽(CAP);然后通过双功能的 Mal-PEG-NHS分别偶联靶向头基 CAP和载体PAMAM,为了便于细胞内的示踪和生物学评价,同时将罗丹明B异硫氰酸酯(RBITC)键合到PAMAM表面,最后通过控制CAP/PAMAM投料摩尔比,制备一系列CAP偶联数目不同的CAP-PEG-PAMAM-RB(CAP-PP-RB)聚合物,分别为CAP4-PP-RB、CAP8-PP-RB和CAP16-PP-RB。通过1H NMR峰面积计算得到每个PEG-PAMAM上平均共价结合了3.7、6.6和12.4个CAP。CAP-PP-RB聚合物粒径在50-60 nm之间,Zeta电位+4.5-+5.5 mV。细胞摄取实验结果表明随CAP修饰比例的升高细胞摄取量反而减少,故选择CAP4-PP-RB用于进一步评价CAP修饰对体内外软骨靶向的影响。
  通过流式细胞仪和共聚焦显微镜考察CAP4-PP-RB和PP-RB的摄取、摄取机制、胞内分布以及对体外软骨球的穿透能力。结果表明CAP-PP-RB和PP-RB聚合物在软骨细胞上的摄取是一个时间、剂量依赖且耗能的动态过程,主要通过网格蛋白和小窝蛋白介导的内吞入胞,摄取后的聚合物分布于溶酶体。CAP肽的偶联增强了聚合物向软骨三维球内部渗透的速率和强度。
  活体成像结果显示,与游离的Cy7组相比,纳米载体组在大鼠膝关节内的滞留时间均延长,可达21 d;纳米载体在关节内的生物相容性较好,没有引起明显的软骨损伤和滑膜炎症;体内软骨靶向和穿透实验结果表明CAP肽的修饰可以协助阳离子的纳米载体进入软骨,甚至软骨细胞内。
[硕士论文] 吕晓敏
药剂学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:马来酸氟吡汀(FM)是非阿片类镇痛药,作用于中枢神经系统,目前临床治疗效果明确,主要用于治疗各种急慢性疼痛,包括由于肌肉紧张增高引起的疼痛、关节疾病导致的疼痛、紧张型头痛、癌痛、痛经、骨伤科、外科手术后或运动损伤后疼痛等。FM的不良反应少且一般不严重,最常见的不良反应是疲倦,其他还有眩晕、口干、嗜睡。长期服用不产生耐受性和依赖性,而且副反应症状与剂量有关,当停止服药一段时间后,由副反应表现出来的症状会逐渐减轻直至消失。目前FM的市售剂型为普通型胶囊剂,口服剂型,每日3-4次,每次用量100mg,每日最大剂量600mg,目前国内作为进口药,暂时还没有其他剂型上市。查阅文献,有制备FM口服固体速释剂型、FM缓释片,并考察其相关制剂在动物体内的药动学指标,暂无其他相关剂型的研究。
  FM现有剂型少,难以满足临床用药需求,故需要开发出安全高效的FM新剂型。在成功制备FMSSD的基础上,本实验建立生物样品中FM的HPLC测定方法,在灌胃给予FMSSD后,对大鼠血浆经时浓度和小鼠各组织中浓度以及药效考察,了解FMSSD在大鼠体内的药动学特征及小鼠体内组织分布情况,为研究FM新剂型提供基础实验依据。主要研究内容和结果如下:
  1.建立生物样品中FM的HPLC检测方法
  色谱条件:色谱柱:Symmetry C18(5μm,4.6×250mm);流动相:甲醇∶水=50∶50(V/V),用1mol/L的甲酸调pH值至6.70;柱温:25℃;流速:0.5ml/min;检测波长:320nm;进样量:20μl。FM在大鼠血浆中0.015~5.00μg/ml浓度范围内,在小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑各组织中0.064~21.33μg/g浓度范围内均呈现良好的线性关系(R2>0.9991)。该方法具有良好的专属性、精密度RSD均小于6%、稳定性RSD均小于6%、回收率大于90%,均符合相关检测要求,可用于生物样品中FM的测定。
  2.FMSSD药动学及组织分布研究
  采用大鼠血药浓度测定法研究FMSSD在大鼠体内的药动学特征,以三个剂量(9mg/kg、27mg/kg、54mg/kg)大鼠灌胃给药后,采用二室模型对数据进行处理,确定药动学参数。三组剂量血药浓度的达峰时间分别为(3.318±0.308)、(3.326±0.548)、(3.333±0.516)h;达峰时FM的血药浓度依次为(0.740±0.031)、(1.825±0.083)、(4.014±0.183)μg/ml;大鼠血浆中药物吸收半衰期t1/2kα分别为(0.837±0.364)、(0.835±0.055)、(0.831±0.057)h;分布半衰期t1/2α分别为(4.463±1.984)、(4.477±2.186)、(4.474±2.429)h;消除半衰期t1/2β分别为(6.417±3.155)、(6.333±0.326)、(6.332±0.329)h;消除率CL/F分别为(1.004±0.034)、(1.202±0.035)、(1.546±0.017)L/h/kg;时间-血药浓度曲线下面积AUC0-24分别为(8.244±0.198)、(21.624±0.453)、(45.134±0.803)μg·h/ml。
  小鼠按78mg/kg灌胃给予FMSSD后,HPLC测定2、4、8、12、24h小鼠各组织(心、肝、脾、肺、肾、脑)中FM浓度,比较药物在小鼠各组织中的分布量;同时利用FM具有荧光特性,对同等剂量灌胃给药后的小鼠组织进行冰冻切片,将切片置于荧光显微镜下观察,统计出FM在组织中的大体分布趋势,其结果与用HPLC测定FMSSD在各组织中分布的定量分析结果一致。给药后各组织各时间点药物分布有显著差异,各组织药物分布量随时间变化而变化,在4h时达最大值,FM在各组织分布量:肝>脑>肾>心>脾>肺。
  3.自制FMSSD与市售胶囊剂的生物等效性研究
  对自制FMSSD及市售胶囊剂进行生物等效性评价,分别对主要药动学参数Cmax、TmaxAUC0-t、AUC0-∞采用方差分析、双单侧t检验及(1-2α)%置信区间的方法进行生物等效性统计学分析,结果表明两种FM不同剂型间存在着显著性差异(P<0.01)。以AUC0-∞计算的相对生物利用度F为(144.388±18.400)%,在参比制剂的80.0%~125.0%范围外,说明两种制剂在大鼠体内不具有生物等效性,自制FMSSD与胶囊剂相比,具有缓慢释放、缓速分布与消除的特点。
  4.FMSSD的药效学研究
  小鼠分别灌胃给予生理盐水阴性对照、低中高(13mg/kg、39mg/kg、78 mg/kg)剂量的FMSSD、(78mg/kg)剂量的市售胶囊,采用小鼠热板法、醋酸扭体法考察各组药物镇痛效果。结果显示各给药组均能提高小鼠痛阈值、减少由醋酸导致的小鼠疼痛扭体反应次数,与生理盐水对照组比较具有显著性差异(P<0.05)。在给药后0.5~2h内,高剂量FMSSD组的小鼠痛阈提高率(36.14%~61.47%)、扭体抑制率(19.71%~49.97%)都低于市售胶囊组(45.85%~85.53%)、(28.82%~72.16%),但是高剂量FMSSD组在给药4h后小鼠痛阈提高率(95.38%)、扭体抑制率(81.64%)达最大值,市售胶囊组在给药2h后小鼠痛阈提高率(85.53%)、扭体抑制率(72.16%)达最大值。同时给药4~24h后,高剂量FMSSD组的小鼠痛阈提高率维持在(12.23%~95.38%)、扭体抑制率维持在(15.42%~81.64%);市售胶囊组的小鼠痛阈提高率维持在(1.02%~48.47%)、扭体抑制率维持在(9.84%~68.77%)。综合分析两种镇痛模型,表明在相同给药剂量下, FM市售胶囊在给药2h前迅速发挥药效,高于FMSSD,但是在2h达到最大药效后其镇痛效果下降速度快,各FMSSD组镇痛效果下降平缓,体现了缓释镇痛的优越性。同时FMSSD随着给药剂量的增加,小鼠痛阈提高率、扭体抑制率也逐渐增加,说明FMSSD的镇痛效果与剂量成正比,剂量越大,镇痛效果越明显。
[硕士论文] 徐洋
药学 江苏大学 2017(学位年度)
摘要:高良姜或“ Kha”,作为姜科植物的干燥根茎,具有温胃散寒,消食止痛等作用,是一种具有辛辣味的芳香根茎。有两种不同的高良姜:一种是小姜,是原产于中国的多年生草本植物(高良姜),有白玫瑰的锥体状花序;另一种是较大的姜科,一个无茎的多年生植物亚洲东南部草本。其已作为香料用在传统食品中,这种姜科植物,富含黄酮和酚酸类等酚类化合物。近年来对高良姜的生物活性进行了深入研究,据报道,其具有抗癌、抗细菌、杀虫、抗溃疡、抗真菌等生物活性。在许多国家高良姜现已经成为比较便宜易得的药材,且已经被广泛应用于驱风、健胃、解痉、镇痛、抗炎、抗菌药物等医疗目的。
  高良姜素作为高良姜醇提物中主要活性物质,具有某些药理活性;本实验研究表明,高良姜的醇提物及高良姜素具有降尿酸、抗痛风性关节炎的作用,但由于其在体外的水溶性较差,导致在机体内的生物利用度低,所以在临床上治疗疾病时应用会受到限制。本课题以颗粒剂为研究对象,增加水难溶性药物高良姜素的溶解度,促进其在体内外的溶解性;所以全文主要分为以下五个部分:
  第一章综述
  本部分主要针对痛风的危害,高良姜的基本理化性质、药理活性,抗痛风制剂以及颗粒剂的研究进展进行综述,并阐述了颗粒剂在治疗痛风中的应用概况,为本课题后续开展的药动、药效学及制剂学研究奠定理论基础。
  第二章高良姜提取工艺的研究
  据文献报道,高良姜醇提物中的高良姜素为高良姜中主要活性成分;所以本章首先对高良姜进行水提和醇提,再通过单因素及正交试验法,以高良姜素为检测指标,筛选出高良姜的最佳提取工艺;本章还通过紫外全波长扫描,确定了高良姜素的检测波长,建立了高良姜素的体外高效液相色谱(HPLC)测定法并进行高良姜素的方法学验证。
  第三章高良姜有效部位的分离纯化
  本章实验考察了不同型号的大孔吸附树脂对高良姜素的吸附以及解附能力,从而筛选出合适型号的大孔吸附树脂;确定能够高效分离纯化高良姜素的方法以简便、快捷、高效的方法从高良姜醇提初提物中分离纯化出高良姜素。
  第四章高良姜的提取物的降尿酸作用研究
  本章实验建立高良姜素HPLC体内分析方法,通过建立降尿酸模型确定大鼠取血时间为造模后3h即尿酸浓度最高时;分别对对照组给秋水仙碱,实验组分别给一定剂量的高良姜水提物以及醇提物,实验结果表明高良姜醇提物的降尿酸作用显著高于高良姜水提物,说明高良姜的醇提物是高良姜降尿酸作用的主要活性部位。考察并确定了高良姜醇提物降尿酸作用的高、中、低剂量,说明高良姜醇提物降尿酸时具有一定的剂量依赖性;在此基础上还检测了高良姜素的降尿酸作用,与高良姜醇提物的高剂量相比两组数据无显著性差异,说明高良姜素是高良姜醇提物中降尿酸的主要活性成分。
  第五章高良姜提取物的抗痛风性关节炎研究
  本章实验通过对大鼠的足踝关节注射一定剂量的尿酸钠,致关节肿胀,建立痛风性关节炎模型,造模后1h后分别给药高良姜素、高良姜醇提高、中、低剂量,并通过游标卡尺测量造模前后及给药后各组大鼠足踝关节处的周长,计算足踝关节的肿胀度;通过大鼠眼眶取全血并用适当的方法处理后,用试剂盒方法检测大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α和COX-2相关炎症因子的浓度,证明高良姜素与高良姜醇提物具有抗痛风性关节炎的。
  第六章高良姜速溶颗粒的制备及体内外评价
  本章实验通过湿法制粒将高良姜醇提物与辅料以一定比例混合后,并且采用正交设计筛选出高良姜颗粒剂的最佳处方。最后,从圆整度、收率、吸湿性及装量差异等方面对高良姜颗粒剂进行了体外质量评价,并且验证高良姜颗粒剂的降尿酸作用。
[硕士论文] 刘丹
药学 江苏大学 2017(学位年度)
摘要:枸橼酸喷托维林(Pentoxyverine Citrate)属于非依赖性中枢镇咳药,临床上多用于上呼吸道感染引起的咳嗽和百日咳,其镇咳效果大约相当于可待因的1/3,但无成瘾性,有轻度的阿托品样和局麻作用,对儿童患者的疗效优于成人。盐酸溴己新(Bromine Hydrochloride)适合各种支气管炎、支气管哮喘、肺气肿、支气管扩张等有黏痰而不易咳出的患者,对白色黏痰效果优于其他痰液症状。目前国内针对儿童的剂型不足药物总量的十分之一,专门用于儿童的止咳祛痰类药物数量有限。针对当前呼吸系统疾病发病率越来越高的现状,本课题以枸橼酸喷托维林、盐酸溴己新为模型药物,制备出适合儿童服用的缓释混悬液。
  一、PC/BH药物树脂的制备
  本章建立了PC/BH体外分析方法,对分析方法的精密度、稳定性、回收率进行考察,均符合要求。考察了PC/BH的平衡溶解度、油水分配系数。测定了BH的pH溶解度曲线。考察了树脂类型、药物浓度、温度对静态载药的影响。确定了PC药物树脂的制备工艺为:200 mL浓度为3.0 mg·mL-1的PC溶液,500 mg Amberlite? IRP69,温度为25℃±0.5℃,载药平衡时间为2.5 h。BH药物树脂的制备工艺为:200 mL浓度为0.4 mg·mL-1的BH溶液,80 mg Amberlite? IRP69,载药温度为25℃±0.5℃,平衡时间3 h。静态载药动力学和热力学表明PC/BH载药过程均属于一级模型,药物树脂制备过程为吸热反应。
  二、PC/BH树脂的结合机制与体外释放
  本章通过SEM、DSC、XRD等分析方法确定PC/BH与Amberlite? IRP69是以共价键进行化学结合,而非简单的物理吸附。采用f2相似因子分析法,考察了温度、介质体积、转速、离子强度和种类等因素对PC/BH药物树脂体外释放的影响。分别对PC/BH释放机制进行研究,通过Viswanathan方程拟合PC/BH树脂释放过程,结果表明 PC/BH药物树脂释放过程受到粒扩散控制。
  三、PC/BH树脂的包衣工艺及处方研究
  本章采用流化床包衣法以EC为包衣材料,乙醇为溶剂,制备了PC/BH包衣微囊。通过单因素方法考察了风量、包衣温度、包衣液流速对PC/BH微囊释放的影响,优化了包衣工艺。在此条件下,考察了包衣材料种类、包衣液浓度、药物树脂与EC的质量比、增塑剂浓度对微囊释放的影响。进一步采用正交设计优化处方,制备出具有明显缓释效果的包衣微囊。确定了PC最佳包衣处方:EC浓度为5.5%,药物树脂与EC的质量比为6:1,增塑剂用量为EC的14%。BH最佳包衣处方:EC浓度为4%,药物树脂与EC的质量比为7:1,增塑剂用量为EC的8%。考察了缓释微囊的形态、密度、粒径、含药量和释放曲线。结果表明,微囊缓释效果及重现性良好。PC/BH缓释微囊释放行为符合一级动力学,释药机制为膜控为主,粒扩散为辅。
  四、PC/BH缓释混悬液的制备
  本章测定了微囊和助悬剂的相关性质,以沉降体积比和再分散性为指标筛选助悬剂,确定助悬剂为黄原胶。考察了温度、pH、加热时间对其黏度的影响。并筛选填充剂、润湿剂,确定了最佳处方:蔗糖1.0 g、黄原胶0.8 g、丙二醇1 mL加水至100 mL,其沉降体积比为0.99。考察了PC/BH缓释混悬液的体外释放行为和稳定性。结果表明,混悬剂的释放与微囊相比,整体释放行为相似,PC/BH f2因子均大于70,且PC/BH相互之间无释放干扰。稳定性实验结果表明,其性状、药物含量和泄漏量、再分散性、沉降体积比和释放情况在放置规定时间均符合要求,说明稳定性良好。
  五、PC/BH缓释混悬液大鼠体内药物动力学研究
  本章建立了PC/BH的SD大鼠体内分析方法,考察了方法的专属性、稳定性、精密度、提取回收率、方法回收率,结果表明均符合要求。分别给予大鼠一定剂量的PC/BH缓释混悬液和普通片,研究给药后的药时浓度曲线和相关参数,对两者的相对生物利用度进行评价。由药动学参数可以看出,PC普通片和缓释混悬液的Cmax分别为659.134和403.660 ng·mL-1,Tmax分别为2 h和6 h。t1/2分别为2.841 h和4.024 h,AUC0-24分别为4180.703 ng·h·mL-1和3975.431 ng·h·mL-1。BH普通片和缓释混悬液的Cmax分别为462.648和322.104 ng·mL-1,Tmax分别为1 h和4 h,t1/2分别为4.251 h和8.222 h,AUC0-24分别为3518.678 ng·h·mL-1和3325.089 ng·h·mL-1。说明PC/BH混悬剂可降低血药浓度峰值,延长药物作用时间。PC/BH缓释混悬液相对普通片的相对生物利用度分别为95.09%和94.50%。
[硕士论文] 孙从永
药学 江苏大学 2017(学位年度)
摘要:睡眠是人体重要的生理功能,高质量而充足的睡眠可以有效恢复人体机能。睡眠由中枢神经系统发生并受之调控,同时也受机体与外界多种因素影响。随着现代社会压力的不断增加,失眠现象普遍发生,失眠发病率逐年提高,严重影响着人们的工作生活。西医药物治疗主要为镇静催眠药,存在较大的副作用,如安全性低、依赖性、成瘾性和戒断性等,因而其应用受到限制。近年来研究发现,许多天然药物(中药组方、中药提取物、中药活性成分及天然活性单体)具有良好的镇静催眠作用,而且副作用小,具有良好的开发研究价值。因此,本课题从传统中药中探寻具有改善睡眠作用的活性物质,并对活性成分的纳米制剂进行研究。
  第一章综述
  本章对天然药物治疗失眠的研究现状进行综述,重点总结分析了近10年来天然来源的镇静催眠单体及其作用机制的研究进展,展望了镇静催眠中药单体的研究新方向。随着天然产物研究的不断深入,从天然产物中寻找天然助眠活性成分将成为今后失眠研究的重要方向。
  第二章助眠天然药物 JD-XM1提取工艺及活性部位药效研究
  本章以药效跟踪法,从天然药物 JD-XM1中筛选镇静催眠活性部位,并对活性部位药效进行评价。单因素法筛选 JD-XM1的提取工艺,优选提取工艺为:乙醇浓度70%、提取温度90℃、提取时间2 h、液固比12:1。JD-XM1提取物依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯及正丁醇萃取,以阈剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠试验评价各极性部位药效,与空白组相比,正丁醇组部位能够显著缩短睡眠潜伏期(182.7±7.6 vs227.7±29.7 s,P<0.01),延长睡眠时间(5518.7±1558.3 vs2265.8±606.0 s,P<0.01)。小鼠自主活动试验和 PCPA致小鼠失眠模型评价 JD-XM1正丁醇部位药效,结果表明,正丁醇部位能够显著减少活动距离(P<0.01)和活动时间(P<0.05),且呈现剂量相关性。正丁醇部位可恢复PCPA导致的小鼠失眠行为,与模型组相比,正丁醇部位(300 mg/kg)可缩短戊巴比妥钠诱导的睡眠潜伏期,延长睡眠时间(P<0.01)。
  第三章 JD-XM1助眠活性成分的筛选及其结构分析研究
  本章采用活性跟踪法,从 JD-XM1的正丁醇活性部位中,系统分离纯化具有镇静催眠作用的活性单体,并进行结构解析。采用硅胶层析柱对 JD-XM1正丁醇活性部位进行分离纯化,得到多种流分。阈剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠试验筛选,发现 Fr6流分(二氯甲烷:甲醇=2:1)能够缩短戊巴比妥钠诱导的睡眠潜伏期,延长睡眠时间。C18柱对 Fr6继续纯化,得到白色粉末 Compound A,通过 NMR和 MS进行结构鉴定,为3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸(丁香酸)。镇静催眠药效实验显示,高剂量丁香酸(200 mg/kg)能够显著延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间(P<0.01),缩短睡眠潜伏期(P<0.05),并呈现剂量相关性。
  第四章丁香酸脂质体的制备及其体外评价
  针对本文筛选出来的 JD-XM1活性成分丁香酸,本章建立了 HPLC丁香酸的体外分析方法,并进行了方法学考察。结果表明,建立的体外分析方法,系统适用性好,制剂辅料对分析无干扰;在0.5-100μg/mL范围内线性关系良好;48 h内稳定性良好;方法日内/日间精密度高(RSD<2%);方法回收率高,可用于丁香酸的定量分析。平衡溶解度实验表明,丁香酸在各种介质中的溶解度均较低,在 pH7.4磷酸缓冲液中的溶解度最大,但仅为78.82±4.68μg/mL,而在水和 pH1.2盐酸溶液中的溶解度接近,分别为66.05±2.65μg/mL和66.86±2.19μg/mL,表明丁香酸的溶解度较差。此外,油水分配系数测定表明,丁香酸log P为1.31,表明丁香酸口服后不易在胃肠道内吸收。以薄膜分散法制备丁香酸脂质体,单因素法筛选处方,优选处方为丁香酸100 mg,大豆磷脂1200 mg,胆固醇200 mg,胆酸钠800 mg,肉豆蔻酸异丙酯800 mg,水化介质为20 mL的PBS(pH7.4),制得的丁香酸脂质体澄清,包封率高(82.20±2.30%)。体外表征表明,制备的丁香酸脂质体呈类球形,分布均匀,平均粒径为154.67±7.09 nm,粒径分布较窄,分散性系数(PDI)为0.14±0.04,Zeta电位为-27.61±3.65 mV。稳定性试验表明,丁香酸脂质体15天稳定性良好,未出现明显的絮凝或浑浊现象,且包封率未有明显变化。
  第五章丁香酸脂质体大鼠体内药动学及小鼠组织分布研究
  本章以 HPLC建立了测定大鼠血浆及小鼠组织中丁香酸含量的体内分析方法,并进行了方法学考察。在不同生物样品中,线性均良好(r2>0.99),日内、日间精密度均小于5%,样品回收率良好,符合体内药物检测的方法学要求。丁香酸脂质体的大鼠药动学研究表明,丁香酸脂质体可以提高口服生物利用度。与丁香酸原料药相比,丁香酸脂质体提高了 Cmax,给药95 min之后的血药浓度均高于原料药(1.81±0.94 vs0.12±0.03μg/mL),表明脂质体能够增加药物吸收,且延缓了丁香酸在体内的消除;t1/2显著延长(116.67±14.40 vs25.36±1.99 min),平均滞留时间显著延长(286.27±18.32 vs37.98±1.02 min),说明脂质体能够延长丁香酸在体循环时间;丁香酸脂质体显著提高了口服生物利用度,药时曲线下面积AUC0-360min显著提高,为原料药的237.30%。丁香酸脂质体的小鼠组织分布研究表明,丁香酸原料药在血浆中的浓度随着时间的延长快速下降,而脂质体在0.5 h和2 h的血药浓度均显著高于原料药,说明脂质体能够减缓药物消除过程,延长药物在体时间;丁香酸及丁香酸脂质体在各组织器官中药物浓度大小依次为:肾>肝>肺>脾>心>脑,均趋向于向肾、肝分布;脑部能够检测到丁香酸,说明丁香酸能够透过血脑屏障(BBB),脂质体可减缓药物在脑部的消除,延长药物在脑部的滞留时间,以发挥镇静催眠作用。
[硕士论文] 阮秀清
药学 江苏大学 2017(学位年度)
摘要:苯妥英钠(Phenytoinum Natricum,PN)为广谱抗癫痫药,癫痫大发作首选药物,副作用小,临床应用广泛。国内现有的上市剂型有普通片和注射剂,此外,美国药典中收载的剂型还有苯妥英钠缓释胶囊。口服给药时,PN主要通过小肠吸收,且个体吸收差异性较大;其有效血药浓度范围为10~20 mg/L,当浓度超过20 mg/L时易产生毒性反应;PN的体内半衰期较长,一般为7~42小时,患者需逐渐增加服药的剂量,待血药浓度达到稳态时,再使用维持剂量;此外,当癫痫发作频繁时还应根据病情调整服药剂量;因此有必要制备出具有一定的缓释效果又便于分取剂量的PN药物制剂。针对以上现状,本课题以PN为模型药物,以阴离子交换树脂作为药物载体,围绕缓释混悬剂的制备工艺及体内外释药进行了系统的研究,主要可分为以下五个部分:
  一、PN药物树脂的制备
  参考美国药典关于PN的体外测定方法,对PN及各辅料进行紫外全波长扫描,最终选择的紫外检测波长为258 nm,同时建立了PN在不同溶液中的体外分析方法。通过对静态法载药和动态法载药过程的各影响因素进行考察,对比实验结果,最终选用静态法制备载药树脂,并确立了最佳的载药工艺。对PN树脂制备的动力学和热力学进行研究表明,PN与阴离子树脂的离子交换反应符合一级动力学模型,该过程为吸热过程,且反应可自发向右进行。
  二、PN树脂的结合机制与体外释放
  通过SEM、XRD、DSC等方法的分析和验证,结果表明PN与树脂是通过离子交换反应所进行的化学结合。参考美国药典及相关文献,本课题选择在转速为50 rpm,温度为37.0℃±0.5℃条件下,以900 mL0.15 mol/L NaCl溶液作为标准释放介质进行体外溶出实验。并考察了溶出过程中的各实验条件对释放行为的影响。对PN树脂的释药动力学行为进行数学拟合,结果表明PN树脂的体外释放属于粒扩散过程。
  三、PN树脂的包衣工艺及处方研究
  为避免因树脂的溶胀而造成药物的突释,首先对载药树脂进行浸渍处理,再采用乳化溶剂挥干法进行包衣制备成缓释微囊;此外,对包衣过程中的各处方及工艺因素的影响进行考察;同时利用正交设计优化处方,最终确定以RL100作为包衣材料,用量为PN树脂的10%,另外,增塑剂PEG400的用量为囊材用量为的10%,在35℃条件下包衣4.5 h,最终制备出具有明显缓释效果的树脂微囊。对数据进行分析表明,PN微囊的释药行为遵循一级动力学过程,即以膜控为主,离子交换控释为辅。
  四、PN缓释混悬剂的制备
  以混悬剂的沉降体积比和再分散性作为考察指标,最终筛选出能使混悬液具有较好物理稳定性和化学稳定性的处方组成。对PN树脂微囊及自制混悬液的体外释放行为进行对比分析,结果表明混悬介质基本不影响药物的释放。此外,对最终处方进行稳定性试验考察,结果显示自制PN缓释混悬剂的稳定性良好。
  五、PN缓释混悬剂大鼠体内药物动力学研究
  本章以SD大鼠作为动物模型并建立了PN的体内液相分析方法。用PN普通片及自制混悬液对大鼠进行灌胃给药,并采用非房室模型对两者的药物动力学参数进行研究;由药时曲线可知普通片和自制混悬液的Cmax分别为24.97和16.22μg·mL-1,Tmax分别为4h和6 h;自制样品的Tmax具有一定的延后,Cmax则降低较多,表明自制PN混悬液可有效减缓血药浓度的波动幅度;降低了患者服药的风险。此外PN普通片与PN缓释混悬剂的AUC0-24分别为181.165μg·h·mL-1和172.176μg·h·mL-1,两者的的相对生物利用率为95.04%。
[硕士论文] 李文芳
药剂学 青岛科技大学 2017(学位年度)
摘要:本课题以暗黑鳃金龟性信息素L-异亮氨酸甲酯盐酸盐和芳樟醇,及对其有增效作用的植物源挥发物乙酸顺式-3-己烯酯和乙酸反式-2-己烯酯为目标药物,进行气体增效缓释凝胶剂的制备和工艺优化,并制定了四种增效缓释凝胶剂的质量标准体系草案,具体分为五部分。
  第一部考察了暗黑鳃金龟性信息素的吸湿性和挥发性,确定其有较强的吸湿性和挥发性,具有制备气体缓释凝胶剂的可行性。并以暗黑鳃金龟性信息素主药复合成分1为代表确定了所用凝胶基质为羧甲基纤维素钠、溶剂为无水乙醇,并确定了其比例范围和药物比例范围。
  第二部分为暗黑鳃金龟性信息素增效缓释凝胶剂的处方和工艺优化,以药物残余量为指标,采用正交实验法筛选出最优处方,结果表明四种暗黑鳃金龟性信息素增效缓释凝胶剂30d内缓释效果良好。采用红外色谱法对所制备的缓释凝胶剂进行结构表征,表明所用辅料不影响药物的化学结构。
  第三部分将四种暗黑鳃金龟性信息素增效缓释凝胶剂在自然环境中的释放数据与6种释药模型(零级、一级、 Higuchi、Ritger-Peppas、Baker-Lonsdale和Hixon-Crowell模型)相拟合,表明四种暗黑鳃金龟性信息素增效缓释凝胶剂中活性成分的释放分别符合Baker-Lonsdale、Hixon-Crowell、Hixon-Crowell和一级模型,释药机制以扩散为主,溶蚀为辅。
  第四部分建立了暗黑鳃金龟性信息素增效缓释凝胶剂的质量标准检测体系,参照《中国药典》2015版制剂质量标准的内容,对四种增效缓释凝胶剂的性状、鉴别、酸碱度、粘度、粒度等项目进行了考察,采用紫外分光光度法和气相色谱法对活性成分进行含量分析方法的建立,方法学考察结果表明,两种方法操作简单准确,精密度、稳定性和回收率均良好,紫外分光光度法适用于工业化生产,气相色谱法适用于精密分析。
  第五部分对所制备暗黑鳃金龟性信息素增效缓释凝胶剂进行了稳定性研究,结果表明,四种增效缓释凝胶剂的影响因素、加速和长期试验中,四种增效缓释凝胶剂的外观形状、pH值、含量等指标均无显著变化,低温条件下保存9个月性质稳定。
  综上所述,本课题成功研制的四种暗黑鳃金龟性信息素增效缓释凝胶剂,外观均匀细腻,性质稳定,pH值、粒度等均符合药典要求,分析方法简便准确,适用于工业化生产。
[硕士论文] 孙桐
药剂学 青岛科技大学 2017(学位年度)
摘要:骨关节是发生在人体关节及其周围组织的炎性疾病,临床表现为关节的红、肿、热、痛、功能障碍及关节畸形。糖皮质激素抗炎药通过抑制巨噬细胞和白细胞等炎症细胞在炎症部位的集聚,从而抑制吞噬作用、溶酶体酶的释放以及炎症介质的合成和释放,以减轻炎症的表现。中长效糖皮质激素地塞米松是治疗骨关节炎疗效较好的药,因此选择其作为治疗骨关节炎凝胶剂的主药。
  1.本研究以β-环糊精(β-CD)装载地塞米松,形成增加药物缓释效果的微胶囊剂型,通过紫外光谱分析法,硫酸显色荧光光谱分析法和热重分析法对微胶囊形成进行了验证。以单因素考察和正交试验进行了制备条件的优化,得到的微胶囊的药物包载率达到93.6%。以壳聚糖和β-甘油磷酸钠(β-GP)结合制备温敏凝胶,将上述制备的微胶囊载入温敏凝胶中,形成微胶囊-温敏凝胶复合体系,通过单因素考察优化制备条件,得到最优方案的微胶囊-温敏凝胶复合体系,发生凝胶化的时间为5min,凝胶化的温度为35℃。
  2.在释放介质去离子水、生理盐水、pH=5.8的PBS和pH=7.4的PBS中,对微胶囊的释放行为进行研究,结果表明地塞米松微胶囊在释放介质生理盐水、pH=5.8的PBS和pH=7.4的PBS中均是18h释放完全,具有一定的缓释作用,可以起到对地塞米松初步的缓释效果。将微胶囊在各个释放介质中的释放曲线进行模型拟合,拟合结果符合药典中缓释剂型规定的1级释放方程,拟合度在0.99左右。对微胶囊-温敏凝胶复合体系的释放行为进行研究,结果表明地塞米松微胶囊-温敏凝胶复合体系在释放介质去离子水、生理盐水、pH=5.8的PBS和pH=7.4的PBS中分别是96h释放90%以上,与微胶囊相比,微胶囊-温敏凝胶复合体系在以上释放介质中的缓释效果较好。将微胶囊-温敏凝胶复合体系在各个释放介质中的释放曲线进行模型拟合,拟合结果符合药典中缓释剂型规定的1级释放方程,拟合度在0.9以上。
  3.地塞米松微胶囊-温敏凝胶复合体系需直接注入关节腔中发挥作用,且具有特殊的温敏特性,所以需要选择合适的灭菌方式。本文对紫外灭菌、臭氧灭菌、电子束辐照灭菌的微胶囊-温敏凝胶复合体系分别进行了无菌检查和无菌检查的验证,对样品进行定性和定量两方面的评价,结果表明电子束辐照灭菌可以保证微胶囊-温敏凝胶复合体系处于无菌状态。
  4.用一定比例的胰酶和II型胶原酶消化大鼠乳鼠的关节软骨,进行原代软骨细胞的培养,观察软骨细胞原代培养和传代培养后的细胞的生长趋势。对高、中、低剂量微胶囊-温敏凝胶复合体系的生物相容性,关节腔给药、全身给药剂量微胶囊-温敏凝胶复合体系的生物相容性进行评价,结果显示微胶囊-温敏凝胶复合体系的生物相容性良好。
[硕士论文] 赵乐乐
药学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:右旋布洛芬(Dexibufropen,S(+)-IBU)属于有机酸类化合物,是一种临床上普遍使用的解热镇痛抗炎药,主要用于缓解类风湿关节炎,也可用于头痛、牙痛、痛经及感冒发热等。由于其半衰期短,维持血药浓度需频繁给药,长期应用易发生胃肠道溃疡和出血。本课题利用蒙脱土(montmorillonite,MMT)作为药物载体与S(+)-IBU制成12小时缓释干混悬剂,从而减少用药次数,提高患者顺应性。
  目的:
  利用MMT作为药物载体和S(+)-IBU制成S(+)-IBU/MMT缓释干混悬剂,考察其体外释放影响并分析释放特性。利用星点设计效应面法优化酸改性MMT条件,制备载药量更高、释药性适宜的S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂,同时考察其体外释放影响并分析释放机制。通过口服灌胃给予大鼠S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂,以市售S(+)-IBU混悬液为参比制剂,研究其在大鼠体内的生物利用度和药物代谢动力学特征。
  方法:
  1.处方前研究工作
  根据2015年版中国药典配制不同pH的释放介质,利用紫外分光光度法确定S(+)-IBU的最大吸收波长并测定其在不同释放介质的稳定性和平衡溶解度。
  2. S(+)-IBU/MMT缓释干混悬剂的制备及体外释放研究
  采用溶液插层法制备S(+)-IBU/MMT干混悬剂;并利用XRD和FTIR进行表征。并考察其体外释放特性,以零级动力学方程、一级动力学方程、Higuchi方程和Peppas方程拟合释放曲线,推测其释放机制。
  3. S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂的制备及体外释放研究
  筛选最适合改性MMT的无机酸;利用单因素结合星点设计效应面法优化酸改性酸化条件,以期制备负载量更高的S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂,并利用XRD、SEM对复合物进行表征。采用透析法研究介质的pH对S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬的影响,拟合释放曲线研究释放机制。
  4. S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂在大鼠体内药物动力学研究
  以市售S(+)-IBU混悬液为参比制剂,自制S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂为受试制剂,经口服灌胃,按剂量60 mg/kg分别给予大鼠参比制剂和受试制剂,测定其不同时间的血药浓度,绘制药-时曲线,并用DAS2.0药代动力学软件程序采用非隔室模型分析数据。
  结果:
  1.处方前研究工作
  S(+)-IBU在264 nm有最大吸收。初步理化性质,研究结果表明,平衡溶解度的顺序为:pH6.8磷酸缓冲液(4.28 mg/ml)>pH4.5醋酸缓冲液(0.22mg/ml)>0.1mol/L HCl(0.084 mg/ml),并且在各种介质中稳定性良好。
  2. S(+)-IBU/MMT缓释干混悬剂的制备及体外释放研究
  通过XRD和FTIR对S(+)-IBU/MMT缓释干混悬剂表征,从XRD图可知,2θ角从7.07o减少到6.72o,MMT层间距由原来1.25 nm增大到1.31 nm。从FTIR可知, S(+)-IBU/MMT的红外光谱上既有MMT和S(+)-IBU的共同特征吸收峰,也出现一些新的吸收峰,如在2390 cm-1处;同时3623cm-1、3425 cm-1、1030 cm-1处峰强度减弱。S(+)-IBU/MMT复合物的体外释放受pH影响较大,12h累积释放百分量大小为:pH6.8磷酸盐缓冲液(88%)>pH4.5醋酸盐缓冲液(36%)>pH1.0稀盐酸(18%),其释放动力学符合一级动力学过程。
  3. S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂的制备及体外释放研究
  采用硫酸改性MMT,随着硫酸浓度增大其板层结构被逐渐剥离;采用磷酸改性MMT,样品在室温下有很大吸水性,不便后续试验;采用盐酸板层结构保持完整且比表面积大;综合分析,盐酸最适合作为本实验的改性酸。星点设计最后确定的酸化条件为:盐酸浓度11%,处理时间5.5 h,温度55℃,在酸处理条件下,制备的Acid-MMT比表面积可达318.8 m2/g,孔容0.498 cm2/g。S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂体外释放受pH影响较大,12 h时pH6.8磷酸盐缓冲液中的累积释放百分量(92%)>pH1.0稀盐酸(33%)。
  4. S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂在大鼠体内药代动力学研究
  大鼠经口服给药后,测定在不同时间血浆中的S(+)-IBU浓度,应用DAS2.0药物代谢动力学分析软件处理实验数据,结果显示,市售 S(+)-IBU混悬液和自制S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂的t1/2分别为2.36±0.05 h、5.58±0.55 h;Cmax分别为123.5±41.74μg/ml、86.05±5.96μg/ml;tmax分别为0.5 h、2±0.20 h;AUC0-24分别为439.88±84.41μg/ml·h、644.49±73.26μg/ml·h;相对生物利用度为154.11%±27.41%。通过t检验进行统计分析,两种制剂药动学参数具有统计学差异(P<0.05)。
  结论:
  1. S(+)-IBU平衡溶解度随介质pH增大而增大;在不同pH释放介质中24 h内稳定。
  2. S(+)-IBU分子通过插层、物理和化学吸附方式进入MMT基层间和表面形成了稳定的药物缓释系统。S(+)-IBU/MMT缓释干混悬剂的释放有一定的pH依赖性,体外释药特征符合一级动力学模型,根据Peppas方程(释放指数n=0.41),释药机制为药物扩散。
  3.盐酸化后的MMT比表面积、孔容增大,S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂释放有一定的pH依赖性,体外释药特征符合Higuchi模型,释药机制为药物扩散与骨架溶蚀同时进行。体外释药行为更符合Higuchi模型,根据Peppas方程(释放指数n=0.86),释放机制为不规则转运。
  4. S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂 Cmax比市售的 S(+)-IBU混悬液小,而AUC0-24、tmax大、t1/2长,具有一定的缓释效果。
[硕士论文] 贾爱宇
药剂学 江苏大学 2017(学位年度)
摘要:蛋白多肽类药物具有分子量大、理化性质不稳定等特点,其高级结构易遭到破坏从而造成药物失活。此外,突释量较高、包封率差、药物累积释放量低也成为微球制剂研究的难点。静电纺丝工艺的制备过程在无水条件下进行,对蛋白药物的包封率较高,并且在低温下作业,没有添加表面活性剂和乳化剂,对制备过程中蛋白类药物的活性有极好的保护作用。纳米生物活性玻璃的碱性降解产物碳酸羟基磷灰石可对释放过程中微球内部的低pH值起到同步中和作用,从而可同步提PLGA微球储存和释放过程中蛋白类药物的活性。
  一、综述
  从高分子材料PLGA的研究进展、重组人干扰素的研究进展、微球制备技术的研究进展、静电纺丝技术在医药领域的应用、生物活性玻璃的研究进展等6个方面进行了综述。
  二、静电喷雾法制备干扰素微球及其处方工艺考察
  本章首先建立了重组人干扰素α-2b PLGA微球的体外释药量、包封率、载药量、粒径、活性的测定方法,并对方法学进行了考察。其次,通过单因素实验考察电压、溶液流速、接收距离、溶液浓度、PLGA分子量、BG加入量等因素对微球形态、载药量、包封率、干扰素活性等的影响。确定了制备PLGA微球的最佳静电纺丝工艺和处方为:电压控制在10~15 kV,PLGA溶液浓度为8%,注射泵流速为0.5 mL/h,接收距离为10~15 cm,PLGA分子量为30000,LA/GA比例为75/25,BG加入量为50 mg。
  三、重组人干扰素微球的质量评价及其稳定性考察
  本章使用优化得到的处方工艺分别制备了重组人干扰素α-2b PLGA微球及PLGA-BG微球,并通过粒径分布、药物累积释放量及活性变化等理化指标对两种微球的差异性进行了比较。结果表明,重组人干扰素α-2b PLGA微球及PLGA-BG微球圆整度良好,且没有黏连现象,粒径分布较均一,包封率、载药量分别为无明显差别。在体外降解实验发现,重组人干扰素α-2b PLGA-BG微球释放介质的pH在整个释放周期相对较为稳定,因而其重组人干扰素α-2b活性保持率较高,而PLGA微球释放介质pH下降较多,导致重组人干扰素α-2b活性相比下降比较快。说明BG的加入能改善微球的外环境从而使蛋白类药物保持较高的活性。且重组人干扰素α-2b PLGA累积释放率(82%)也明显高于重组人干扰素α-2b PLGA微球的累计释放量(76%),其主要原因是,由于加入BG使得PLGA微球的释药机理发生改变。最后,通过长期试验和加速试验考察了重组人干扰素α-2b PLGA-BG微球的稳定性。
  四、干扰素微球体内药动学及药效学研究
  本章首先建立了大鼠血浆重组人干扰素α-2b的酶联免疫测定法,并对该方法进行了考察。结果显示,其标准曲线方程为lg(OD)=lg(C)1.0625-2.2576精密度和回收率符合要求。进行了大鼠体内药动学研究,肌内注射给予大鼠重组人干扰素粉针、重组人干扰素α-2b PLGA微球混悬液、重组人干扰素α-2b PLGA-BG微球混悬液。实验结果显示,大鼠肌内注射重组人干扰素粉针后,Tmax为1.5h,Cmax为15390 pg/ml,血药浓度浓度可以维持48 h。PLGA微球组Tmax在8 h左右,明显高于粉针组的1.5 h。同时,血药浓度可以维持408 h,远远大于粉针组的12 h,说明微球有着明显的缓释作用。PLGA-BG微球组的Tmax也维持12 h左右,但Cmax小于微球组,血浓度可以维持552 h,明显大于微球组的408 h,说明其缓释效果比微球组更好。最后进行了重组人干扰素PLGA微球对人肾细胞癌裸鼠移植瘤生长抑制实验。比较了重组人干扰素α-2b粉针、重组人干扰素α-2b PLGA微球混悬液、重组人干扰素α-2b PLGA-BG微球混悬液3组制剂的抑瘤效果,证明了PLGA微球组和PLGA-BG微球组均有抑瘤效果, PLGA-BG微球的抑瘤效果相对显著。
[硕士论文] 陈璐
药剂学 青岛科技大学 2017(学位年度)
摘要:南极冰藻DNA光修复酶是从南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L体内发现的一种酶类,它可以修复紫外线损伤的DNA使其恢复正常空间结构。本文以从南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L体内发现的 DNA光修复酶为目标药物,制备以脂质体形式的冻干制剂,从而使其发挥日用防晒品的作用。
  1.进行了南极冰藻DNA光修复酶的提取、分离和纯化工艺的研究。研究表明,得到有效剂量蛋白的工艺条件为DNA光修复酶工程菌5000rpm离心20min,冰浴中超声破碎20min。对诱导表达和纯化后的蛋白进行SDS-PAGE检测,在66KDa附近有目的蛋白条带。加入甘露醇对DNA光修复酶的活性有保护作用。
  2.对南极冰藻DNA光修复酶脂质体制备工艺进行了探讨。结果表明,以逆向蒸发法为脂质体的制备方法,固态大豆卵磷脂和胆固醇为膜材,氯仿-乙醚的混合溶剂为有机相。以包封率(%)为指标,经单因素考察和正交试验确定了脂质体的制备工艺的最佳处方:膜材比为3:1,油相与水相比为4:1,药脂比为1:10,超声时间6min,水化温度为30℃,按最优处方制得的脂质体包封率为44.13±2.90%。
  3.探讨了脂质体的冻干工艺,以外观形态、包封率、粒径、再分散性为指标,得到最佳制备工艺条件:脂质体在-80℃预冻12h,真空冷冻干燥24h,海藻糖为冻干保护剂,所制得的冻干脂质体包封率为42.89±1.44%。冻干脂质体在4℃保存30d后粒径和包封率无明显变化且酶活稳定。
  4.建立以脂质体的外观形态、包封率、粒径和Zeta电位为指标的质量标准检测体系。所得DNA光修复酶脂质体形态呈圆形或椭圆形球体,脂质体及其冻干制剂粒径为490.9±2.3nm和591.3±1.6nm,Zeta电位在-30mV~-60mV。采用紫外分析法对脂质体制剂进行含量测定,方法学考察表明紫外分析法专属性、精密度、稳定性和重复性良好。脂质体冻干制剂的回收率在98%~102%,RSD小于2%,证明该方法准确可靠。
  本课题完成了南极冰藻DNA光修复酶的脂质体冻干制剂的研制,制备方法简便可行,冻干制剂的质量标准符合2015版中国药典要求,为DNA光修复酶在日用防晒中的应用提供了可靠的理论依据。
[硕士论文] 宋小雨
药剂学 青岛科技大学 2017(学位年度)
摘要:褐藻多糖硫酸酯是一类来源于褐藻的海洋硫酸多糖,具有抗凝血与促凝血、抗氧化、抗炎、降血脂、抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等多种药理学活性。目前,以褐藻多糖硫酸酯为主药的上市产品只有海昆肾喜胶囊(国药准字 Z20030052)。该药在临床中主要用于治疗慢性肾功能衰竭及尿毒症。然而该药只有胶囊剂型,不能满足日益增长的临床需求。因此,基于其化学特性开发新型缓释制剂对拓宽该药的临床应用具有重要意义。
  基于上述研究目的,本课题首先对所得褐藻多糖硫酸酯进行基本理化性质表征。通过高效凝胶渗透色谱与多角度激光散射仪联用测定其分子量为2.271×105Da;采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生高效液相色谱法测定其单糖组成摩尔百分比为甘露糖(Man):氨基葡萄糖(GlcN):鼠李糖(Rha):葡萄糖醛酸(GlcA):葡萄糖(Glc):半乳糖(Gal):木糖(Xyl):岩藻糖(Fuc)=0.08:0.02:0.03:0.08:0.04:0.16:0.02:0.56。通过比较粉末直接压片、湿法及熔融法三种不同制粒方法,从片重差异、硬度及脆碎度等方面对所制得的褐藻多糖硫酸酯缓释片进行考察,得出褐藻多糖硫酸酯缓释片的最佳制备方法为湿法制粒。在此基础上,本研究进一步采用正交和响应面设计实验分别对缓释片的处方进行优化,经过优化筛选,最终得出缓释片的最佳工艺处方为:主药褐藻多糖硫酸酯占片重41%,羟丙甲基纤维素(HPMC-K4M)占片重的20%,羧甲基纤维素钠占片重的20%,十八醇占片重的13%,乳糖占片重的5%,硬脂酸镁占片重的1%。
  通过对所得缓释片进行体外释放考察发现,在最优处方条件下,批内释放及批间释放均具有良好的重现性。最优处方制备所得缓释片在2h、6h及12h内平均药物累积释放分别为32%,64%和92%。模拟人工胃液及肠液的体外释放结果表明,褐藻多糖硫酸酯缓释片能够在人工胃液中保持稳定,在小肠液的弱碱性环境中有缓释效果。利用Origin9.1软件对体外释放进行分析,通过研究零级释放、一级释放、Higuchi释放及 Ritger-Peppas释放,发现褐藻多糖硫酸酯缓释片体外释放动力学符合一级释放模型,具有明显的缓释释放特征。进一步释药机理研究发现,褐藻多糖硫酸酯缓释片 Ritger-Peppas释放模型中指数 n=0.6015(0.45  通过对所得缓释片进行外观、性状、鉴别、检查、含量测定及体外释放度研究,我们初步建立了褐藻多糖硫酸酯缓释片的质量标准。制备所得三批不同批号的缓释片外观光滑,内容物为浅褐色粉末,无臭,气微。通过鉴别检查,批内及批间体外释放度均符合《中国药典》2015版要求。上述研究结果为褐藻多糖硫酸酯缓释片的进一步生产提供了理论依据。
  综上所述,本课题对褐藻多糖硫酸酯缓释片的制备工艺方法、辅料的选择对药物释放的影响及缓释片处方优化等三方面进行了系统地研究,成功制备了褐藻多糖硫酸酯缓释片。结果表明,褐藻多糖硫酸酯缓释片体外释放符合一级释放模型,在该模型下,药物释放以Fick扩散和骨架溶蚀释放为主。此外,基于上述研究,本文初步建立了褐藻多糖硫酸酯缓释片的质量标准草案。本研究为褐藻多糖硫酸酯及其它海洋多糖药物的缓释制剂应用开发利用提供了理论依据。
[硕士论文] 丁洋洋
药学 江苏大学 2017(学位年度)
摘要:漆黄素具有广泛的药理活性,在抗炎、抗氧化、抗凝血、抗肿瘤、抗血栓和糖尿病肾损伤的治疗等方面具有较好的作用,且来源广泛、价廉易得,对人体的毒副作用小,但是漆黄素存在难溶于水、生物利用度低的缺点,从而限制了其进一步的开发和临床应用。纳米粒制剂可以改善难溶性药物的溶解度,提高药物的物理化学稳定性、生物利用度及靶向性。本研究拟制备壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒,在对其体外释放特性和表征进行研究同时,考察其体外抗肿瘤效果及大鼠体内药代动力学特性,以期提高漆黄素的溶解度、生物利用度以及抗肿瘤效果。本文研究主要分为以下五个部分:
  第一章综述
  本章主要针对漆黄素、纳米制剂、聚乳酸纳米粒、壳聚糖进行回顾总结。内容分为五个部分,第一部分主要介绍了漆黄素的结构性质、提取分离方法,并总结了漆黄素的药理活性及其制剂研究进展。第二部分讲述了纳米制剂的优势、纳米制剂的载体材料、纳米粒包封率的测定方法及其体外释放研究方法。第三部分主要介绍聚乳酸纳米粒,介绍了聚乳酸及其在医药领域的应用以及聚乳酸纳米粒的制备方法。第四部分主要概括了壳聚糖的理化特性及其在制剂方面的应用。第五部分介绍本课题的研究目的和主要内容。这些内容为本研究得开展提供了重要参考。
  第二章漆黄素聚乳酸纳米粒的制备
  本章采用自乳化溶剂扩散法制备漆黄素纳米粒。首先建立体外漆黄素含量HPLC测定方法,该方法精密度良好,测定结果准确,日间日内精密度考察RSD<2%。随后以包封率为指标,在单因素试验基础上确定因素对应的水平,采用正交实验进行漆黄素聚乳酸纳米粒处方优化,获得最佳处方为:药载比为1:10, O/W比为1:7,F68浓度为0.5%,丙酮与乙醇体积比为3:3。因素影响顺序:药载比>O/W比>泊洛沙姆188浓度>丙酮与乙醇体积比。方差分析结果表明,药载比对包封率具有显著性影响。最后,通过使用马尔文粒径仪测定漆黄素纳米粒的粒径和Zeta电位,超滤离心法测定纳米粒的包封率对最佳处方的漆黄素聚乳酸纳米粒进行表征:平均包封率为90.35%,平均粒径为226.85nm,平均载药量为3.12%,平均Zeta电位为-15.63 mV,且RSD均小于5%,表明由正交试验筛选的最佳处方制备的漆黄素纳米粒具有良好质量和重现性。
  第三章壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒的制备、表征及其体外释放
  本章在漆黄素聚乳酸纳米粒的基础上进行壳聚糖修饰,制备壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒,以期提高抗肿瘤效果,减缓漆黄素从纳米粒突释的现象。通过考察壳聚糖含量对纳米粒粒径和电位的影响,确定修饰漆黄素聚乳酸纳米粒的壳聚糖加入量为0.2%。透射电镜观察显示聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒的外观呈现球形,表面圆整光滑,且与漆黄素聚乳酸纳米粒相比,壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒的表面明显有壳聚糖包裹,粒径也随之稍微变大,纳米粒之间无黏连现象,分散性较好,且粒径在200nm左右,分布均匀。傅里叶红外光谱分析结果可知,漆黄素和载体之间可能存在氢键缔合作用;差示扫描量热法测定结果显示,漆黄素是以非晶态形式存在于载体中。以漆黄素平衡溶解度最好的pH6.8的PBS溶液(0.5%Tween)为体外释放介质,采用动态透析法考察纳米粒体外释药特性,结果显示原料药在1 h左右释放约78%,壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒制剂释放约27%,表明与原料药相比,壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒具有显著的缓释效果。
  第四章壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒体外抗肿瘤活性研究
  本章以结肠癌HCT116细胞为模型,采用MTT法考察壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒的体外抗肿瘤效果。实验结果显示,200μg/mL的漆黄素原料药作用48h后,细胞抑制率达到68.43%,漆黄素聚乳酸纳米粒对细胞的抑制率为75.18%,而壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒对细胞的抑制率达到81.34%。而且细胞形态显著发生改变,细胞皱缩、显著变小,细胞数量减少。由此可见,与漆黄素原料药和漆黄素聚乳酸纳米粒相比,壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒具有对结肠癌细胞更好的抑制效果。
  第五章壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒大鼠体内药代动力学研究
  为考察壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒在大鼠体内的药代动力学特征,本章建立了漆黄素在血浆中的含量 HPLC测定体系,标准曲线方程为:A=0.39701C+0.04538,R2=0.9939,表明漆黄素浓度在0.1~10μg/mL范围内与峰面积比(漆黄素和内标峰面积比)呈良好线性关系,日间、日内精密度考察显示RSD均小于10%,符合体内分析测定方法的要求。雄性SD大鼠尾静脉给药后药动学参数显示,壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒制剂将漆黄素的半衰期从1.84 h延长至3.42h,减缓漆黄素在体内的清除速度。原料药在体内的平均滞留时间为4.86±0.16 h,而壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒延长到10.67±1.81 h。原料药的药时曲线下面积为8.31±1.92 hμg/mL,而壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒的药时曲线下面积为19.28±2.15hμg/mL,相对生物利用度为232%,表明本研究制备的壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒可以有效提高漆黄素在体内的生物利用度,延长体内的滞留时间。
[硕士论文] 栾淑娟
药剂学 河南大学 2017(学位年度)
摘要:肿瘤组织与正常组织相比具有酸性的微环境,其需要pH敏感性载药系统靶向给药以达到增强治疗效果,降低副作用的目的。纳米凝胶具有特殊的网状结构,具有载药量高、水容量大等优点,可用来作为药物的传递载体。透明质酸(hyaluronic acid,HA)作为阴离子型天然可降解生物聚合物,具有可修饰的羟基和羧基功能基团,是较完美的药物载体材料。因此,制备pH敏感性的透明质酸纳米水凝胶作为的抗肿瘤药物传递系统具有很大的意义。
  本文主要完成了两部分内容,具体如下:
  1.含缩酮透明质酸纳米凝胶的制备与载药性能研究
  以甲基丙烯酸酐修饰HA的羟基,即以甲基丙烯酸化的透明质酸(MAHA)为聚合单体,以具有pH敏感性、含缩酮的二甲基丙烯酸酯为交联剂(DMAEP),通过自由基聚合反应一步形成具有pH敏感性的纳米凝胶(pH-NG)。控制交联剂加入比例,可以得到不同粒径大小的纳米凝胶,所制备的纳米凝胶的粒径在75-160nm之间,Zeta电位在-15mV以下。采用原子力显微镜观察其形貌为类球形结构,且分布均匀。该纳米凝胶作为难溶性药物阿霉素(doxorubicin,DOX)的药物载体,其载药量与交联剂的含量密切相关,最高可达12.15%。体外释放结果显示pH敏感性载药纳米凝胶具有明显的pH依赖性,在pH为7.4的溶液中,载阿霉素的纳米凝胶在72小时内的释放量仅为35%;在pH为5.0时,72h内释放量高达83.34%。体外的毒性试验证明了空白纳米凝胶具有良好的生物相容性。同时,pH敏感性载阿霉素纳米凝胶体系较非敏感性纳米凝胶体系呈现更强的肿瘤细胞抑制能力。最后,体内抗肿瘤试验也验证了pH敏感性载药纳米凝胶优异的肿瘤抑制效果。
  2.载硼替佐米透明质酸纳米凝胶的制备与pH敏感特性
  以用甲基丙烯酸修饰的HA分子结构中引入多巴胺基团,得到多巴胺修饰的甲基丙烯酸化的透明质酸(DOPA-MAHA),以甲基丙烯酸乙二醇酯为交联剂,通过自由基聚合一步得到含多巴胺基团的纳米凝胶(NGs)。所制备的纳米凝胶用激光粒度仪测定其粒径在100-200nm之间,且表面带有负电荷,原子力显微镜观察其形貌为类球形结构,且分布均匀。借助硼替佐米(bortezomib,BTZ)分子中硼酸基团能与多巴胺的邻二酚基团形成硼酸酯键的特性,制备出载硼替佐米的HA纳米凝胶。X射线粉末衍射(XRD)分析了BTZ、BTZ和NGs的物理混合物、NGs以及NGs-BTZ的晶型状态,结果显示BTZ、BTZ和NGs的结晶度较高,而NGs以及NGs-BTZ呈无定型状态。体外释放研究表明,BTZ从含多巴胺纳米凝胶中的释放依赖环境的pH大小:在pH5.0的环境下,24h内释放量达76.06%,是pH7.4环境中释放量的3.4倍。体外细胞实验研究表明纳米凝胶具有较好的生物相容性,载药之后对肿瘤细胞的毒性呈剂量依赖性。体内抗肿瘤试验结果显示,载BTZ纳米凝胶对肿瘤抑制效果明显优于游离BTZ。
[硕士论文] 马园园
中药学 河南大学 2017(学位年度)
摘要:复方抗病毒颗粒处方来源于板蓝根和化学药拉米夫定组成。这种中西药配伍的复方制剂,发挥着中药有效成分和西药化学成分协同作用的治疗效果。化学药虽然治疗效果显著,但是存在着明显的毒副作用,而中药的加入可以减少其毒副作用,提高用药安全性。随着医学技术的深入发展,临床上中西药结合使用已成为普遍现象,中西药复方制剂在医药学领域也占有一席之地。本文所研究的复方抗病毒颗粒中的拉米夫定,是第一个用于乙肝病毒感染者治疗的核苷类似物,疗效显著的同时存在着耐药性的问题。而板蓝根是公认的有较好的抗病毒效果的中药之一,与拉米夫定的结合可以有效的降低耐药性以及减少不良反应的发生。本课题主要对复方抗病毒颗粒进行系统的研究。
  经初步药效学、毒理学研究表明,本品主成分拉米夫定、板蓝根最优比例为1:10。通过筛选处方,最后确定处方组成及比例为:拉米夫定3g,板蓝根30.0g,玉米淀粉66.9g,硬脂酸镁0.1g,水45.6g。
  通过分析处方中拉米夫定的理化性质及特点,对其溶出度及异构体制定了相应的检查法,并确定了本品的含量测定方法。本品的溶出度根据溶出度与释放度测定法,以0.1mol/L的HCL900mL为溶出介质,转速为50r/min,经30min,取溶液10mL,加溶出介质使之为6μg/mL,然后进行检测。含量测定依据高效液相色谱法(中国药典2015版通则0512),使用C18色谱柱,配制0.025M的CH3COONH4溶液(pH3.8)为水相A,CH3OH为有机相B,流动相A:B=95:5(v/v);检测波长:277nm;流速:1.0mL·min-1;柱温:35℃。异构体检测依据高效液相色谱法,用β环糊精色谱柱,0.1mol/L的CH3COONH4为水相A,CH3OH为有机相B,流动相A:B=95:5(v/v);检测波长:270nm;流速:1.0mL·min-1;柱温:15~30℃。通过对处方中板蓝根的分析,按2015版中国药典对其进行薄层色谱法定性试验研究,控制板蓝根的质量。
  参照药物稳定性试验指导原则的要求,本研究对复方抗病毒颗粒进行影响因素试验(5000 lx光照、60℃高温及RH92.5%高湿)、加速试验(温度42℃±2℃,RH75%±5%)。各项考察指标结果表明均未发生明显变化,说明该制剂有良好的稳定性。
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