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[硕士论文] 肖希灵
耳鼻咽喉科学 广西医科大学 2018(学位年度)
摘要:炎症和感染是肿瘤的十大特征之一。既往的研究表明,鼻咽黏膜持续的炎症和感染会增加鼻咽部的肿瘤易感性,耳、鼻、咽喉的慢性炎症及相关药物的使用史可能与鼻咽癌的发病风险存在关联。但是,由于研究方法学上存在不同程度的缺陷,既往研究的结论并不一致。
  目的:
  探索耳鼻咽喉疾病史和相关药物使用史与鼻咽癌发病风险之间的可能关联。
  方法:
  分析由美国国立卫生院资助的多中心合作开展于中国广东肇庆地区和广西壮族自治区的梧州、桂平和平南地区,包括13个市/县(德庆、封开、高要、怀集、四会、肇庆、广宁、梧州、岑溪、苍梧、藤县、平南和桂平),覆盖人口约800万,名为“基因-环境-EB病毒的交互作用与鼻咽癌的病因学”的基于人群的病例对照研究在2010-2014年所招募的年龄在20至74岁之间的2532名鼻咽癌患者和2597名正常对照人群的生活史问卷调查数据,使用非条件逻辑回归模型计算多因素调整后的OR值(odds ratio)和95%可信区间(confidence intervals,CI),评价耳鼻咽喉疾病(慢性鼻窦炎、慢性中耳炎、慢性咽炎、鼻息肉和鼻中隔偏曲)史及相关药物(阿司匹林、滴鼻剂)使用史与鼻咽癌发病风险之间的关联。
  结果:
  曾患耳鼻咽喉疾病(慢性鼻窦炎、慢性中耳炎、慢性咽炎、鼻息肉和鼻中隔偏曲)可增加34%的鼻咽癌发病风险(OR=1.34,95%CI:1.12-1.59);曾使用滴鼻剂或者阿司匹林可引起鼻咽癌发病风险增加一倍(OR=1.98,95%CI:1.31-3.01;OR=1.91,95%CI:1.52-2.41)。为了排除反向因果关联,排除了诊断/招募时五年之内有慢性耳鼻咽喉疾病史及药物使用史的人群,并进行二次分析,发现除了有未治愈的耳鼻咽喉疾病史(OR=1.28,95%CI:1.00-1.64)、未治疗的鼻息肉患病史(OR=3.26,95%CI:1.14-9.34)、在更年长的年龄(>23岁)罹患慢性中耳炎(OR=2.05,95%CI:1.06-3.97)、在较年轻的年龄(<31岁)初次诊断耳鼻咽喉疾病(OR=1.35,95%CI:1.04-1.76)、较年轻的年龄初次使用(<37岁)和最近使用(<50岁)阿司匹林(OR=1.68,95%CI:1.13-2.52;OR=1.68,95%CI:1.08-2.60)增加鼻咽癌发病风险外,慢性鼻窦炎、慢性中耳炎、慢性咽炎、鼻息肉或鼻中隔偏曲和鼻咽癌的发病风险之间并无关联,且相关药物使用(滴鼻剂、阿司匹林)与鼻咽癌发病风险之间也无关联。
  结论:
  本研究结果表明耳鼻咽喉疾病和相关药物的使用可能轻度增加鼻咽癌的发病风险,但这一结果可能受到反向因果关联和回忆偏倚的影响。
[硕士论文] 李晴
中西医结合临床 黑龙江中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  探究生脉散合增液汤加减联合放疗治疗气阴两虚型鼻咽癌的临床疗效。
  方法:
  将入组的80例气阴两虚型鼻咽癌患者随机分为治疗组40例、对照组40例,两组均接受放疗,治疗组在放疗开始同时服用生脉散合增液汤加减方,共观察7周。运用统计学方法评价放疗前后肿瘤病灶大小、卡氏评分、中医证候评分、放疗后毒副反应等变化。
  结果:
  1.在实体瘤近期疗效方面,治疗组瘤体缓解有效率高于对照组,但两组间比较无统计学意义(P>0.05)。
  2.在卡氏评分方面,两组患者治疗后KPS评分均升高,且治疗组的升高程度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。
  3.在中医证候积分方面,治疗组在鼻塞、口干咽燥、头痛、耳聋耳鸣、神疲乏力、自汗盗汗等证候的缓解方面均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。
  4.在放疗引起的毒副反应方面,治疗组和对照组相比,口腔黏膜损伤、唾液腺损伤、皮肤损伤的发生率均明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)。
  结论:
  1.生脉散合增液汤加减联合放疗能够在一定程度上缩小气阴两虚型鼻咽癌患者的瘤体。
  2.生脉散合增液汤加减联合放疗能够缓解气阴两虚型鼻咽癌患者的临床症状,提高患者KPS评分,改善患者生活质量。
  3.生脉散合增液汤加减可降低放疗引起的口腔黏膜损伤、唾液腺损伤、皮肤损伤的发生率。
[硕士论文] 黄广如
耳鼻咽喉头颈外科 广西医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:评判窄带成像内镜在鼻咽癌诊断中的应用价值。
  方法:对2017年8月至2018年4月在广西医科大学第一附属医院接受鼻咽镜检查疑似鼻咽癌的103名患者分别采用白光模式及窄带成像(NBI)模式电子鼻内镜检查,并进行活检。依据病理组织学诊断结果,对鼻咽内镜中的传统白光模式和窄带成像模式对鼻咽癌诊断能力进行分析。
  结果:103例患者中,鼻咽癌69例,非恶性病变34例。白光模式对鼻咽癌诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确率分别为94.2%、70.6%、86.6%、85.7%及72.8%。NBI模式的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确率分别为66.7%、76.5%、85.2%、53.1%及52.4%。白光内镜对鼻咽癌诊断的敏感度(94.2%)高于NBI内镜的敏感度(66.7%)。白光内镜对鼻咽癌诊断的准确性高于NBI内镜的准确性,具有统计学意义(x2=9.237,P<0.005)。
  结论:NBI内镜能够帮助鉴别那些难与鼻咽癌鉴别的淋巴组织增生病变,其在鼻咽癌诊断中有一定的应用价值。但是对于鼻咽癌的诊断,NBI内镜并不比白光内镜有优势。单独使用NBI内镜诊断鼻咽癌,会导致一定漏诊、误诊。
[硕士论文] 王金婷
肿瘤内科 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是头颈部的常见肿瘤,它的分布具有明显的区域性,尤其是在我国南方地区,是发病率比较高的恶性肿瘤之一[1]。虽然,放射治疗是治疗鼻咽癌的主要手段,但是这只能对早期和分化程度比较好的鼻咽癌,这类患者经过放射治疗其5年生存期可以达到90%以上;对于中晚期的患者,单纯使用放射治疗效果并不好,其中远处转移以及局部复发率比较高,是导致治疗效果不好的主要原因,也是患者的主要死因。因此,探索以及阐明导致鼻咽癌局部复发及转移的可能机制,寻找有效的分子治疗靶点,有助于寻求有效的鼻咽癌治疗策略以改善患者的预后和延长患者的无病生存期。
  纤维链接蛋白1(Fibronectin1,FN1)是一种重要的细胞外基质蛋白(extracellular matrix,ECM)分子。参与细胞粘附和迁移过程,包括胚胎发生,伤口愈合,凝血,宿主防御和转移[2]。文献报道称:FN1的过表达是口腔鳞状细胞癌和甲状腺癌的一个不良信号[3,4]。它是头颈鳞状细胞癌放射抗性的潜在生物标志物。当出现铂类抗药性时,其在卵巢癌中的表达出现明显的升高[5,6]。同时FN1在乳腺癌细胞和间质中的表达可以明显高于癌旁腺上皮以及间质[7]。近期研究表明,FN1在鼻咽癌组织中的表达明显高于癌旁组织,并且和鼻咽癌的分期,转移以及生存期呈负相关[8]。
  虽然有学者对FN1在鼻咽癌中的表达进行了报道,但是仅仅是做了差异表达的分析,未对FN1在鼻咽癌中迁移侵袭及凋亡的作用进行探讨,同时其机制更是不明确的,所以本课题旨在对FN1在鼻咽癌细胞的迁移侵袭以及凋亡中的作用以及其发生机制进行探讨。希望我们的研究可以为将来的临床应用提高有效的参考。
  目的:
  探讨FN1在鼻咽癌细胞增殖、粘附、迁移、侵袭以及凋亡的影响。为逆转鼻咽癌的恶性生物行为,丰富鼻咽癌的治疗策略提供理论基础。
  方法:
  1.我们从GEO数据库中下载GENE数据,这些组织的载入数为GSE12452,从GSM312896到GSM312905为正常的健康鼻咽组织,GSM312906为GSM312936为鼻咽癌组织。用于分析的芯片为Affymetrix Human Genome U133Plus2.0阵列,平台为GPL570。为了使数据更容易分析和获得高质量的基因,我们使用数据标准化的中值方法。设置基因过滤器为:(1)探针的基因表达不低于中位数的3倍,变化应大于总样本的20%。(2)缺失值应小于基因表达值的50%。(3)如果与几个探针相对应的基因,则只保留最高的IQR。最后,我们发现FN1明显上调,折叠变化为9.12。
  2.细胞培养
  将鼻咽癌细胞株5-8F和C666-1细胞置于37℃,含5%浓度的CO2,相对湿度为50%的细胞培养箱内培养,用含10%胎牛血清的RPMI-1640和高糖DMEM细胞培养基进行培养。
  3.细胞生物学实验
  1)慢病毒转染鼻咽癌细胞株5-8F和C666-1,干扰FN1基因的表达;
  2)荧光定量PCR检测FN1的干扰情况;
  3)免疫印迹(western blot)检测鼻咽癌细胞株的FN1的干扰情况;
  4)细胞划痕实验和迁移、侵袭(transwell实验)实验检测FN1基因对细胞迁移能力的变化的影响;
  5)细胞粘附实验检测FN1对细胞粘附能力和迁移侵袭的影响;
  6)细胞增殖实验及克隆形成实验检测FN1对鼻咽癌细胞增殖能力的影响;
  7)细胞凋亡TUNEL实验以及流式实验检测细胞凋亡情况的变化;
  8)裸鼠皮下成瘤实验
  9)数据分析
  结果:
  1.转染效率的检测
  用针对FN1基因的慢病毒进行稳定转染,下调鼻咽癌细胞中FN1的表达,用实时定量Q-PCR和蛋白免疫印迹检测FN1蛋白表达明显降低。
  2.划痕愈合实验和迁移侵袭实验检验各组细胞的迁移能力
  划痕愈合实验表明:下调了FN1的细胞组鼻咽癌细胞的划痕愈合能力明显降低,和对照组相比干扰组的划痕宽度明显宽一些。每组之间的差异具有统计学意义。
  Transwell实验表明:下调了FN1的鼻咽癌细胞和对照组相比,迁移侵袭能力明显降低,穿过小室的细胞数明显减少。
  3.细胞功能学检测鼻咽癌细胞的恶性行为
  细胞功能实验表明:在下调了FN1的表达以后,细胞的增殖能力、粘附能力,增殖能力均出现了明显的降低;克隆形成数明显少于对照组。细胞的凋亡率明显增加。差异具有统计学意义。
  4.下调FN1对鼻咽癌细胞在裸鼠皮下成瘤能力的影响。
  小鼠肿瘤生长速度:在下调了FN1基因表达的组中,肿瘤体积小于对照组,生长速度明显减慢。
  5.Western blot检测细胞中MMP9、MMP2、BCL2、Caspase3的表达情况
  蛋白印迹结果显示:下调了FN1以后,与肿瘤迁移侵袭相关的蛋白MMP9和MMP2出现了明显的降低。和凋亡相关的蛋白BCL2的表达降低,Caspase3的表达出现了明显升高。同时NF-kB通路上的基因在FN1的调节通路中出现了明显的改变。差异具有统计学意义。
  结论:
  1.FN1在鼻咽癌中呈现过度表达状态。
  2.下调了FN1的表达可以抑制鼻咽癌细胞的迁移侵袭并且可以降低迁移侵袭相关蛋白MMP2和MMP9的表达;
  3.下调了FN1的表达可抑制裸鼠的皮下肿瘤的生长速度和体积,可以通过上调BCL2,下调Caspase3,来抑制NPC细胞的凋亡;
  4.NF-kB/P65通路参与FN1对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的调控,在下调了FN1的表达的基础上激活NF/kB的表达可以抑制细胞的凋亡,可能NF-kB/P65通路在FN1对鼻咽癌细胞的凋亡调控中发挥着重要作用。
  综上所述,我们的研究的创新点主要是指明了FN1是鼻咽癌细胞迁移侵袭增殖的促进因素,是凋亡的抑制因素,并且其对凋亡的抑制主要是通过NF-kB通路来起作用的。所以下调了FN1的表达可能对鼻咽癌细胞的恶性生物学行为起到一定的调控作用,从而为鼻咽癌的治疗提供一个新的方向。
[博士论文] 翁成荫
临床医学(肿瘤学) 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:鼻咽癌(Nasopharyngeal cancer,NPC)是我国南方常见的恶性肿瘤之一,目前鼻咽癌的治疗首选方案是放射治疗,根据肿瘤的分期采用放射治疗、放疗联合化学治疗以及靶向治疗等。近年来化学治疗及分子靶向治疗在鼻咽癌的治疗中也发挥了重要作用,但是所取得的效果仍不是很理想。早期鼻咽癌患者根治性放疗后完全缓解率高,但是大部分患者在就诊时已属于局部晚期或者伴有颈部淋巴结转移,因此,鼻咽癌患者总的五年生存率在50%左右。这与鼻咽癌容易出现复发及转移相关,且鼻咽癌缺乏特异性的、有效的靶向治疗药物。因此研究鼻咽癌不良预后的相关靶点,寻找新的治疗靶点,对于提高鼻咽癌治疗疗效并延长生存期,具有重要意义。
  泛素是存在于真核细胞内一个高度保守的蛋白质,参与了体内很多重要生命活动的过程。在泛素.蛋白酶体系统的调控下,泛素参与了细胞周期分布、细胞分化和细胞的凋亡等。近年的研究发现一个新的泛素酶(Ub链组装因子)E4,可以通过泛素融合降解(UFD)对某些蛋白进行降解。UBE4B,是与酵母UFD2蛋白同源的哺乳动物蛋白。目前关于UBE4B在肿瘤中的作用仍存在争议,在神经母细胞瘤及乳腺癌中的研究显示UBE4B是一个潜在的抑癌候选基因;但是在肝细胞癌的一些研究却表明UBE4B具有癌基因的潜能。目前并没有关于UBE4B在鼻咽癌中的表达及其作用的研究。因此,在本课题中我们研究鼻咽癌肿瘤组织中UBE4B mRNA及蛋白水平的表达情况,并进一步明确UBE4B对鼻咽癌细胞的作用和相关的作用机制。我们的研究结果发现,较配对的正常鼻咽上皮组织,绝大部分的鼻咽癌组织表达UBE4B蛋白水平明显增高。除此之外,在24例组织标本中,检测到了UBE4B mRNA的扩增。采用siRNA技术沉默鼻咽癌细胞UBE4B表达后发现,沉默UBE4B能抑制鼻咽癌细胞的生长并促进肿瘤细胞的凋亡。沉默UBE4B后能诱导裂解的caspase 3以及p53的表达,且Caspase3抑制剂能抑制沉默UBE4B所诱导的细胞凋亡。我们的研究结果提示UBE4B在鼻咽癌肿瘤组织中的表达明显高于配对的正常鼻咽上皮组织。沉默UBE4B后可以通过激活Caspase 3以及p53,从而抑制肿瘤细胞的增殖和促进肿瘤细胞的凋亡。因此,UBE4B在鼻咽癌中具有类似于癌基因的作用,可以被用作为鼻咽癌治疗的潜在靶点。
[硕士论文] 段元元
肿瘤学 山东大学 2018(学位年度)
摘要:随着社会经济的改善及医疗水平的提升,目前恶性肿瘤治疗的目标已不仅是关注生存率或无病生存率,提高病人的生活质量也成为现代医学重要的课题之一。放射治疗在头颈部肿瘤治疗中占有很重要的地位,尤其在鼻咽癌(Nasopharyngealcarcinoma,NPC)的治疗中。NPC是我国高发恶性肿瘤之一,且肿瘤细胞生长十分活跃,对放疗敏感,目前放射治疗为其公认和首选的根治性治疗手段,放射治疗所致的损伤,如口干、疼痛、吞咽、进食、张口问题等,引起了人们越来越多的关注。近年来以放射治疗为基础同步放化疗逐渐应用于NPC的临床治疗,并取得了一定疗效。局部晚期NPC常用的同步放化疗方案包括顺铂+多西他赛或铂类单药联合放疗,比如卡铂。随着放射治疗技术的进步,IMRT已成为目前NPC放疗的主要手段,与传统的二维常规放疗(Two-dimensional conventional radiationtherapy,CRT)相比,IMRT具有较好的适形度,在提高靶区剂量的同时,还能降低临近正常组织的受照剂量。2D-CRT以面颈联合野及耳前野为主,双侧野对穿照射,对周围正常组织影响较大。由于NPC放疗的疗效好,生存期延长,患者对生存质量的要求也在不断提高。
  目的:
  本研究的目的:(1)比较IMRT与2D-CRT对鼻咽癌患者生存质量的影响。(2)采用SPECT唾液腺动态显像定量比较两种放疗方式下腺体摄取、分泌功能的变化,同时用Phadeba法测定不同时段下患者的唾液腺分泌质量,比较IMRT与2D-CRT对NPC患者唾液腺功能损伤的程度的差异,为临床勾画危及器官(organ atrisk,OAR)时腮腺的剂量限制提供了一些临床指导价值。
  方法:
  选择2005~2014山东大学齐鲁医院放疗科收治初诊的NPC患者48例,进行放疗后的生存质量问卷调查。根据治疗方式不同将患者分为IMRT组(25例)及2D-CRT组(23例),采用欧洲癌症研究与治疗组织(EORTC)研制的生存质量核心调查问卷(EORTC QLQ-C30),及其头颈部癌疾病专表(EORTC QLQ-H&N35)作为NPC放疗患者生存质量研究的测评工具。分析48例NPC患者放疗后的生存质量现状。采用SPECT唾液腺动态显像定量比较了IMRT组患者及2D-CRT组患者腺体摄取、分泌功能的变化。同时用Phadeba法测定不同时段下患者的唾液腺分泌质量。
  结果:
  NPC放疗后长期存活者的生存质量领域总得分为66.32±19.25分。症状领域得分最高的为唾液黏稠55.42±31.05分。发生率最高的为唾液黏稠45例(95.83%)。IMRT组患者及2D-CRT组患者在疼痛、吞咽、感觉、进食、性生活、口干、张口问题、唾液粘稠、病态感方面的差异有统计学意义(P<0.05)。2D-CRT组患者的两侧腮腺平均受照剂量及D50均相同;IMRT组患者的健侧腮腺平均受照射的剂量、D50,都较患侧低,差异显著,且IMRT患者患者患侧腮腺平均受照射的剂量、D50,也较2D-CRT组患者低。SPECT唾液腺动态显像定量显示放疗结束12个月后IMRT组双侧腮腺摄取、排泄功能正常;2D-CRT组患者双侧腮腺摄取及排泄功能降低。放射剂量达20Gy、40Gy、60Gy时及放疗后12个月两组患者唾液流速及淀粉酶分泌速度的比较也有统计学意义(P<0.01)。
  结论:
  IMRT在改善NPC放疗患者生存质量方面优于2D-CRT。IMRT使腮腺受照剂量明显减少,后期反应较少,且在一定程度下可恢复分泌功能。为临床制定合适的治疗方案提供依据。
[博士论文] 刘学军
耳鼻咽喉科学 山东大学 2018(学位年度)
摘要:在本项课题研究中,我们分别从mRNA及蛋白水平检测了ETS2在HSCC肿瘤组织和癌旁粘膜组织中的表达情况,并对患者进行定期规范的术后随访,详细记录相关的数据并分析探讨ETS2的表达与下咽鳞状细胞癌患者的年龄、性别、发病部位,肿瘤分级,颈部淋巴结转移情况,组织病理学分级,临床分期和预后之间的关系。利用小干扰RNA技术在人HSCC FaDu细胞系中敲掉ETS2,设计多项实验检测ETS2的低表达对人下咽鳞状细胞癌FaDu细胞周期、增殖、凋亡、侵袭与转移的影响,并探讨其可能的机制。
  第一部分 ETS2在下咽鳞状细胞癌中的表达及其临床意义
  目的:
  研究ETS2在下咽鳞状细胞癌中的表达,并对ETS2的表达与患者临床病理特征以及预后之间的关系进行分析。
  方法:
  1.所有的组织学标本均来自山东大学齐鲁医院耳鼻咽喉头颈外科住院的患者,收集下咽鳞状细胞癌手术患者术后的肿瘤组织标本和距离肿块2cm以上的形态学正常的黏膜组织样本,并详细记录患者的临床病历资料。
  2.应用免疫组化染色的方法检测ETS2在癌组织及癌旁非肿瘤的黏膜组织标本中的表达。
  3.肿瘤组织和非肿瘤粘膜组织中的总RNA使用Trizol法来提取,利用Real-time PCR方法比较癌组织及癌旁非肿瘤的黏膜组织标本中ETS2在mRNA水平上的表达差异。
  4.从组织标本中提取总蛋白,应用蛋白质免疫印迹(Western Blot)的方法检测并比较癌组织及癌旁非肿瘤的黏膜组织标本中ETS2在蛋白水平上的表达差异。
  结果:
  1.共计58例下咽鳞状细胞癌手术患者入选此次研究,共收集到肿瘤标本58例,收集到癌旁非肿瘤的正常黏膜组织52例,其中梨状窝癌44例,环状软骨后区及下咽后壁区癌共计14例。T3和T4期患者共40例,占比69%,伴有淋巴结转移的患者有45例,占总患者数的77.6%,病理检查结果为高分化鳞癌16例,占27.6%,中等分化与低分化病例共42例,占72.4%,Ⅲ-Ⅳ期的患者共有43例接近所选病例的3/4(74.1%)。所有入选的患者术后均经病理证实为鳞状细胞癌,所有患者标本的切缘均为阴性。
  2.免疫组化检查结果显示: ETS2在细胞核和细胞质中呈阳性表达,但主要表达在细胞核上, ETS2在81.0%(47/58)的癌组织中呈现阳性表达,在23.1%(12/52)的癌旁正常粘膜组织中表达阳性(p<0,001),统计结果表明:ETS2在下咽鳞状细胞癌肿瘤组织中的表达明显高于癌旁正常黏膜组织。
  3.Real-time PCR检查结果显示ETS2 mRNA在下咽癌肿瘤组织中的相对表达量(2.497±0.163)较癌旁非肿瘤黏膜组织中(1.095±0.058)明显增高,统计学分析表明,其差异具有统计学意义(p<0.001)。
  4.Western Blot结果显示:ETS2在下咽癌肿瘤组织中的相对的蛋白表达量为0.674±0.026,较癌旁非肿瘤的黏膜组织中相对的蛋白表达量(0.211±0.035)显著升高,经过统计分析,其差异具有统计学意义(P<0.001)。
  结论:
  ETS2在下咽鳞状细胞癌肿瘤组织中的表达显著增加,这种ETS2异常的表达与HSCC原发肿瘤的分级、区域性的淋巴结转移情况、组织病理学分级和肿瘤的临床TNM分期有关。ETS2的阳性表达与患者预后不良相关,此外,肿瘤标本的ETS2的阳性表达是影响患者预后的独立的危险因素,这些实验结果提示ETS2基因有可能成为治疗HSCC的新的靶向分子。
  第二部分 基因敲除ETS2对下咽鳞状细胞癌FaDu细胞系的细胞周期、增殖、凋亡、侵袭与转移的影响及机制研究。
  目的:
  将ETS2-siRNA转染至人下咽鳞状细胞癌FaDu细胞系中,从而研究基因敲除ETS2对细胞周期、增殖、凋亡、侵袭与转移的影响及机制。
  方法:
  1.培养下咽癌细胞株FaDu细胞系,设计合成3组siRNA,siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3,并设置了阴性对照组NC siRNA,采用的是Lipofectamin2000脂质体法进行转染。实验分三种浓度进行,分别为25nM,50nM,100nM依次进行,转染成功后,应用Real-time PCR及Western blot实验的方法检测siRNA的转染效率,从而筛选最适合的siRNA进行下一步实验。
  2.实验分为Control组、NC组、siRNA-ETS2组三组,应用CCK8和Brdu法,检测各组细胞的增殖情况,研究敲出ETS2后对HSCC FaDu细胞系细胞增殖的影响。
  3.应用流式细胞仪检测敲出ETS2后对HSCC FaDu细胞系细胞周期的影响。
  4.应用流式细胞仪和Hoechst染色检测三组细胞细胞凋亡的情况,研究敲除ETS2后对HSCC FaDu细胞系细胞凋亡的影响。
  结果:
  1.成功设计并合成了3组siRNA,siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3,并设置了阴性对照组NC siRNA,为了找寻最佳的实验浓度提高转染的效率,实验分三种浓度进行,分别为25nM,50nM,100nM依次进行,采用Lipofectamin2000脂质体法进行转染,应用Real-time PCR的方法检测siRNA的转染效率,实验表明:最佳的转染浓度在100nM,在100nM时NC-siRNA组、siRNA-1组,siRNA-2组,siRNA-3组中ETS2的相对表达量分别为1.000±0.046、0.561±0.034、0.334±0.023和0.156±0.016各组之间的差异具统计学意义(p<0.001),其中,siRNA-3瞬时转染效率可达80%左右。Western blot实验结果显示:经过siRNA-3转染下咽癌FaDu细胞系后,细胞的ETS2蛋白表达受到明显的抑制, ETS2蛋白在Control组、NC组、siRNA3转染组的相对表达量为1.012±0.031、0.992±0.022和0.213±0.015,差别具有统计学意义(p<0.001)。
  2.应用Brdu染色检测各组细胞增殖情况,结果显示:相较对照组而言,siRNA-ETS2组染色细胞数量明显减少,表明细胞的增殖活性受到明显的抑制;应用CCK8法检测各组细胞增殖情况,结果显示:分别与Control组和NC组相比较,敲除ETS2后在12h内FaDu细胞增殖未见明显差异,但在48h和72h后,FaDu细胞增殖受到明显的抑制(p<0.05)。实验表明:通过ETS2-siRNA转染FaDu细胞系造成ETS2的低表达,对FaDu细胞增殖活性产生了明显的抑制。
  3.应用流式细胞仪检测ETS2对FaDu细胞周期的影响,结果显示:Control组、NC组和siRNA-ETS2组细胞周期位于G0/G1期的比例依次为59.4%、57.2%、69.3%,细胞周期位于S期的比例依次为31.4%、33.4%、21%,细胞周期位于G2/M期的比例依次为9.2%、9.4%、9.7%,由此可见,行ETS2基因敲出的实验组siRNA-ETS2组相对于对照组,能够显著的诱导FaDu细胞聚集于G0/G1期,从而减少了S期的细胞比率(p<0.01)。
  4.使用Hoechst检测三组细胞凋亡,显微镜下发现细胞核呈蓝色团块状,凋亡发生后,可以发现蓝色团块及细胞核的碎裂,染色质因皱缩而发生的高亮。采用流式细胞仪检测了三组细胞凋亡率分别为:4.65%±0.53%、4.52%±0.48%和29.12%±1.02%,siRNA-ETS2组细胞的凋亡率较对照组明显升高(p<0.01)。
  5.应用Western Blot技术检测凋亡相关蛋白Bcl2/Caspase3的表达情况,结果显示:Control组,NC组和siRNA-ETS2组的Caspase3的相对表达量分别为1.012±0.033,1.098±0.064和2.859±0.102,三者相比,siRNA-ETS2组的Caspase3的相对表达量明显升高,差异有显著统计学意义(p<0.001);Control组,NC组和siRNA-ETS2组的Bcl2的相对表达量为1.119±0.029,1.090±0.018和0.549±0.013,三者相比,siRNA-ETS2组的Bcl2的相对表达量明显降低,差异有统计学意义(p<0.05)。
  6.应用Transwell侵袭实验检测敲除ETS2基因后,FaDu细胞转移侵袭能力的变化,镜下观察transwell下室中细胞迁移及侵袭情况并计数,统计学分析表明:与Control组、NC组相比较,siRNA-ETS2组细胞的侵袭及迁移数量明显减少(p<0.01);细胞划痕实验显示:被敲掉ETS2基因后的FaDu细胞48h后的细胞迁移距离小于Control组和NC组,两者之间的差异具有统计学意义(p<0.01),实验表明:当FaDu细胞被敲掉ETS2基因后,显著减弱了细胞的侵袭和转移能力。
  结论:
  通过ETS2-siRNA转染人下咽鳞状细胞癌FaDu细胞系从而敲除ETS2后,与对照组相比可诱导FaDu细胞聚集于G0/G1期,显著抑制细胞的增殖,并促进了FaDu细胞的凋亡;通过抑制了MAPK/p38/ERK/JNK的信号通路,抑制了细胞间充质转化的进程,从而减弱了细胞的侵袭和转移能力。
[博士论文] 卢仲明
耳鼻咽喉科学 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  口咽鳞癌的发病率明显上升,主要是人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染导致的。HPV E6蛋白可结合并降解p53,从而导致了口咽癌。与HPV阴性口咽癌相比,HPV阳性的口咽癌具有独特的流行病学、分子生物学特点和更好的预后。
  肿瘤复发是口咽癌预后不良和死亡的主要原因。研究表明单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)可作为可靠的预后分子标志物,然而目前仍缺乏与口咽癌复发相关的特征性SNP。鼠双微体4(MDM4)是p53通路中的重要癌蛋白,在许多肿瘤的发生发展中发挥了重要作用。
  由于MDM4和HPV E6蛋白均作用于p53,我们对MDM4的三个功能SNP变异与口咽癌中HPV状态以及肿瘤复发之间的相关性进行研究,旨在探讨MDM4的SNP是否可用作预测口咽癌中HPV状态以及肿瘤复发的生物标志物。
  方法:
  1.收集在美国德克萨斯州大学(U.T.)M.D.安德森癌症中心就诊的552例口咽癌患者的年龄、性别、种族、吸烟、饮酒状况等资料。提取其石蜡包埋肿瘤组织DNA,采用PCR技术明确肿瘤HPV状态。
  2.使用HapMap SNP公共数据库选择三个标记MDM4SNPs:rs11801299G>A、rs10900598G>T和rs1380576C>G。从血标本中提取DNA,使用ABI TaqMan genotyping基因分析平台对MDM4SNPs进行基因分型。MDM4SNPs与HPV状态的相关性采用logistic回归分析,并进一步分层分析。
  3.对1008例患者进行随访,主要终点事件是肿瘤复发。提取血标本中的DNA,对三个MDM4SNPs进行基因分型。采用单因素和多元Cox回归对单个/三个MDM4基因变异组合与复发状况进行相关性分析。
  4.进一步对HPV阳性口咽癌患者的复发情况与MDM4SNPs分别或组合后的高/低风险组的相关性进行分析。
  5.构建质粒、转染、荧光素酶实验检测MDM4rs11801299A/G和MDM4rs10900598T/G基因型的HPV阳性和HPV阴性细胞株中MDM4表达水平的差异。
  结果:
  1.在552例可明确HPV状态的口咽癌患者中,HPV阳性占多数。HPV阳性患者更常见于男性和非吸烟者。
  2.单个仨个MDM4基因变异组合均与口咽癌的HPV状态显著相关,多元回归分析中差异仍显著,而且在年轻、非吸烟者和不饮酒患者中相关性更显著。
  3.1008例口咽鳞癌患者中共181例肿瘤复发,总的精算复发率约20%。年龄、种族、吸烟或饮酒、合并症、治疗方式均与无瘤生存期显著相关。单因素和多元Cox回归分析发现单个仨个MDM4基因变异组合均与肿瘤复发风险显著相关。
  4.324例HPV阳性口咽癌患者中45例肿瘤复发,MDM4基因变异与复发风险显著相关,而且比全部口咽癌的分析结果更为明显。
  5.当MDM43'UTR荧光素酶报告质粒共转染到HPV阳性的UMSCC47细胞系或HPV阴性的UMSCC4细胞系后,携带rs11801299不同等位基因的细胞中的荧光素酶活性水平存在显著差异,而携带rs10900598不同等位基因的细胞中的荧光素酶活性水平则呈临界的显著差异。
  结论:
  1.口咽癌患者中HPV阳性者占大多数。
  2.MDM4SNPs可能成为预测口咽癌中HPV状态的分子标记物,特别是在非西班牙裔白人、从不吸烟者和从不饮酒者中。
  3.三个MDM4SNPs可单独、或联合地作为口咽癌复发的独立危险因素。
  4.在HPV阳性患者中,MDM4SNPs与口咽癌复发风险的相关性更为明显。
  5.MDM4中的SNP变异可能通过改变MDM4的表达水平从而影响了口咽癌的复发风险。
[硕士论文] 王臻妮
耳鼻咽喉科学 山东大学 2018(学位年度)
摘要:翼腭窝(Pterygopalatine Fossa,PPF)位置深在,虽然体积较小,但其解剖结构复杂,有自然的管道和裂隙沟通鼻腔、鼻咽、口腔、眼眶、中颅窝和颞下窝(Infratemporal Fossa,ITF),是鼻眼、鼻颅底沟通性病变常累及的地方。累及翼腭窝的病变以肿瘤多见,良性肿瘤常见神经源性肿瘤(神经鞘瘤、神经纤维瘤)和鼻咽纤维血管瘤,恶性肿瘤中鳞状细胞癌(Squamous-cell carcinoma,SCC)、腺样囊性癌(Adenoid cystic carcinoma,ACC)、淋巴瘤、肉瘤、恶性黑色素瘤(Malignant melanoma,MM)和肌上皮癌(myoepithelial carcinoma,MC)等均有见报道,患者的临床表现根据肿瘤的主要部位和累及周围结构的不同而有所差异,分析患者的不同的临床表现形式一般可提示肿瘤病变的原发部位及可能累及的重要结构。良性肿瘤以手术切除为主,恶性肿瘤除对放化疗敏感的肿瘤外主要的治疗方式仍是以手术为主的综合治疗。因为该部位结构深在,结构复杂,且毗邻颈内动脉和中颅窝底,如何有效切除肿瘤并减少手术并发症,尤其是避免大血管和颅神经的损伤,是国内外各学者专家一直关注并讨论的重点问题,特别是近年来,随着影像学技术的发展和鼻内镜手术的进步,对累及翼腭窝的沟通性病变的诊断和手术入路的经验总结逐渐深入。
  目的:
  通过探讨累及翼腭窝肿瘤患者的临床表现、影像学诊断资料、手术入路及经验、预后,为临床诊疗翼腭窝肿瘤性病变提供一定的经验及指导。
  方法:
  回顾性分析2012年11月至2017年11月山东大学齐鲁医院耳鼻咽喉科收治的经影像学诊断、手术切除及术后病理确诊的30例累及翼腭窝肿瘤患者的临床资料。其中,12例患者临床症状较单一,以头痛为主诉者2例,以颌面部肿物逐渐增大就诊者2例,以颌面神经分布区感觉异常及鼻塞1例,以渐进性鼻塞伴或不伴反复鼻出血6例,以耳闷为主要症状者1例;另有18例患者临床表现呈多样性,与肿瘤不同程度侵犯上颌窦各壁而导致的临床表现类似。30例患者术前均经鼻窦鼻咽部CT平扫+增强检查,其中16例患者行MRI平扫+增强扫描,3例加行CTA检查,6例加行DSA检查,证实为翼腭窝不同程度受累的占位性病变:5例考虑为神经源性肿瘤,瘤体主要位于翼腭窝、颞下窝;6例瘤体主要位于鼻咽鼻腔,向外侧不同程度累及翼腭窝,术前诊断为鼻咽纤维血管瘤;19例术前诊断为恶性肿瘤,其中18例原发于上颌窦,1例原发于颞下窝,均侵袭翼腭窝。手术均采用经口气管插管静吸复合式麻醉,根据瘤体原发部位、侵犯范围以及距离体表的远近选择合适手术入路,经鼻内镜入路14例(其中2例怀疑神经源性肿瘤,因瘤体巨大且侵犯中颅窝者,术中应用影像导航仪),上颌骨部分或扩大切除入路14例,下颌下入路1例,下颌骨劈开入路1例,鼻内镜联合耳前颈侧入路1例。术后通过电话随访、鼻内镜复查及影像学检查,观察患者术后并发症及转归情况。
  结果:
  30例患者手术过程顺利,无术中大出血(大于1000ml的出血)等重大并发症出现。11例良性患者均彻底切除肿瘤。19例恶性患者除1例黑色素瘤颅内部分无法全切外,其余患者均肉眼全切。手术后经组织病理学检查证实良性肿瘤11例,恶性肿瘤19例,符合术前大体评估;分别为神经鞘瘤5例,血管纤维瘤6例,鳞状细胞癌8例,腺样囊性癌3例,上皮-肌上皮癌2例,肌上皮癌1例,平滑肌肉瘤1例,软骨肉瘤1例,黑色素瘤3例(见图1)。术后随访4个月至64个月不等,平均随访22个月,至随访终末时间,良性肿瘤患者无复发,2例患者有颌面神经分布区麻木感,其中1例术后半年恢复,1例患者有患侧口角略歪斜。19例恶性肿瘤患者术后均进行放化疗,其中13例至今生存,3例放疗后出现口鼻漏。2例黑色素瘤患者术后半年死亡,1例鳞状细胞癌及l例黑色素瘤患者术后8个月死亡,1例腺样囊性癌患者术后2年死亡,1例鳞状细胞癌患者术后4年死亡。
  结论:
  1、累及翼腭窝的肿瘤以多部位沟通性肿瘤多见,早期累及翼腭窝的良性肿瘤,缺乏典型的临床特征;累及翼腭窝的恶性肿瘤临床表现以上领神经分布区感觉或功能异常多见。
  2、CT及MRI是诊断翼腭窝肿瘤的主要方法,CTA可很好的显示颅内血管与瘤体的关系,脑血管造影(DSA)及超选择性供血动脉栓塞可有效诊断纤维血管瘤并减少瘤体血供。
  3、术前根据影像学检查明确肿瘤的原发部位及受累范围,选择距离肿瘤径路较短、功能性结构破坏较少的手术入路。其中鼻内镜入路适用于原发肿瘤主要位于近颅底中线者,如上颌窦后壁、鼻腔后段及鼻咽腔或肿瘤累及中颅窝的翼腭窝神经鞘瘤和鼻咽纤维血管瘤、翼腭窝和颞下窝局限性恶性肿瘤,且具有损伤小、术后无面部瘢痕形成、恢复快等优点。颈侧、下颌下或下颌骨劈开入路主要适用于瘤体接近体表、远离颅底及中线者,如颞下窝原发性肿瘤累及翼腭窝者。上颌骨切开入路:适用于上颌窦原发恶性肿瘤侵袭翼腭窝、颞下窝者。术中应用影像导航仪、多学科合作及术者的精确操作可有效切除翼腭窝巨大良性肿瘤并预防周围重要结构(颈内动脉、视神经)损伤等严重并发症。对于累及咀嚼肌、颅神经、眶内的患者,功能性结构的破坏有时不可避免;累及颅内者,手术难以彻底切除,术后需辅助放/化疗。
[博士论文] 冯晓华
肿瘤学 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)是一种主要发生在东南亚、中国南部的一种恶性程度非常高的肿瘤。鼻咽癌的发生可能与遗传(基因易感性)、EB病毒感染、环境因素、饮食习惯以及各种促癌因素有关。大部分病人被诊断时都产生了局部浸润或者远处早期转移等晚期表现,所以鼻咽癌患者的生存率不高。因此,研究与鼻咽癌发生、发展、预后的有关分子机制是非常重要的,这可以促进鼻咽癌的诊断、预测以及采取准确的治疗手段。
  细胞周期调节蛋白E1(Cyclin E1)表达于细胞周期的G1-S期,它通过结合以及激活CDK2(cyclin-dependent kinase2)来调节哺乳动物细胞的分裂。CCNE1-CDK2这一复合物的磷酸化在诱导DNA复制的同步性、中心体的复制和调控、染色体的重构以及组蛋白的合成中起了非常重要的作用。CCNE1的高表达与多种恶性肿瘤比如乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、子宫内膜癌及结肠癌患者的不良临床预后紧密相关。其在不同肿瘤中发挥不同的作用,如在乳腺癌中CCNE1可导致耐药的发生,在胃癌中促进EMT(Epithelial-Mesenchymal Transition)的发生,在食管癌中促进细胞增殖,而CCNE1在鼻咽癌中的作用有待去研究。
  目的:
  1.分析CCNE1在鼻咽癌组织中的表达及对鼻咽癌患者临床参数的影响;
  2.体内外功能实验研究CCNE1在鼻咽癌中的作用;
  3.探究CCNE1在鼻咽癌中发挥作用的机制。
  方法:
  1.分析CCNE1在鼻咽癌组织中的表达及及对鼻咽癌患者临床参数的影响
  (1)免疫组化观察CCNE1在鼻咽癌组织表达定位和表达量差异;
  (2)分析CCNE1对预后的影响;
  (2)分析CCNE1对鼻咽癌患者其它临床参数的影响。
  2.体内外功能实验研究CCNE1在鼻咽癌中的作用
  (1)在HONE1和SUNE1中构建稳定敲除CCNE1的细胞株;
  (2)体外实验验证CCNE1对细胞增殖、侵袭和迁移的影响;
  (3)裸鼠皮下成瘤;
  (4)构建稳定过表达CCNE1的细胞株进行功能回复实验。
  3.探究CCNE1在鼻咽癌中发挥作用的机制:Western Blot检测增殖和EMT相关蛋白表达改变并找到相关通路。
  结果:
  1.在鼻咽癌组织中,CCNE1呈核高表达且CCNE1核高表达的患者预后最差;
  2.CCNE1在体内外均促进鼻咽癌细胞增殖、侵袭迁移;
  3.CCNE1激活PI3K/AKT通路及下游周期、EMT相关因子。
  结论:
  CCNE1在鼻咽癌中发挥一个潜在的促癌基因的作用,它通过使PI3K/AKT通路激活,从而促进鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移。
[硕士论文] 赵倩
临床医学 河北工程大学 2018(学位年度)
摘要:目的:对比择区性与改良性颈清扫在治疗cN0期声门上型鳞癌患者中的临床效果;观察其对术中颈淋巴结清扫时间、术中出血、术后引流管拔管时间、平均住院时间、颈清扫并发症、术后淋巴结病理阳性转移率及生存率有无统计学差异。
  方法:回顾性分析2008年06月至2012年06月期间邯郸中心医院耳鼻喉科45例声门上型鳞癌患者,按照择区性颈淋巴结清扫术与改良性颈淋巴结清扫术随机分为择区组与改良组,进行临床分析总结;记录两组患者术中颈淋巴结清扫时间、术中出血、术后引流管拔管时间、平均住院时间、颈清扫并发症、术后淋巴结病理阳性转移率及生存率。
  结果:两组数据经对比分析,颈淋巴结清扫时间择区组为(66.32±20.31)min,改良组为(106.35±20.68)min,(P<005);术中出血量择区组为(121.09±41.61)ml,改良组为(196.09±31.44)ml,(P<0.05);颈引流管拔管时间择区组为(3.82±0.66)d,改良组为(591±159)d,(P<0.05);平均住院时间择区组为(15.64±1.36)d,改良组为(17.61±1.56)d,(P<0.05);颈淋巴结清扫术术后并发症择区组为0%,改良组为17.40%,(P<0.05);术后颈淋巴结病理阳性转移率择区组为13.64%,改良组为17.40%,(P>0.05);术后3年、5年生存率择区组vs改良组为(86.36%vs86.96%),(77.27%vs73.91%)(P>0.05)。
  结论:与改良组相比,择区性颈淋巴结清扫术用于cN0期声门上型鳞癌患者治疗中效果最佳,能较好的缩短手术时间、降低术中出血量,降低并发症发生风险;能显著改善患者术后恢复情况,大大缩短患者平均住院时间,为患者节省费用的同时也提高了医院病房床位的有效利用率。
[硕士论文] 杨沛霖
药理学 广西医科大学 2018(学位年度)
摘要:目前,迷迭香酸具备的低毒性和抗肿瘤活性特性已经成为肿瘤治疗的热点化合物之一。然而由于其水溶性较RA-C1肿瘤活性较低限制了其应用,同时由于鼻咽癌的预后不佳,迫切需要新的治疗方法。因此,课题组通过参照迷迭香酸结构,将其酯键用酰胺键取代提高水溶性、羧酸酯化以提高膜渗透性,从而合成了新的迷迭香酸类似物。
  目的:通过体外实验探讨迷迭香酸类似物RA-C1是否通过激活依赖于Caspase的线粒体通路抑制鼻咽癌CNE-1细胞的增殖,诱导其凋亡,并探索RA-C1的抗肿瘤机制。
  方法:通过参照迷迭香酸结构式合成了迷迭香酸类似物,命名为(R,E)-3-(3,4-二羟基苯基)-2-(3-(3,4-二羟基苯基)丙烯酰氨基)丙酸甲酯,简称RA-C1。采用MTT法测定RA-C1对鼻咽癌细胞系CNE-1、CNE-2以及HONE-1细胞的选择抑制作用,同时测定其对人体正常的人血管内皮细胞(HUVEC)和人类胚胎肾细胞293(HEK293)的毒副作用。再者进一步拟探讨RA-C1对鼻咽癌CNE-1细胞的抑制的药理学机制。分别采用Hoechst33342染色和Annexin-V FITC/PI双染检测细胞凋亡,随后采用JC-1荧光探针检测线粒体膜电位并采用Western blotting检测细胞色素C、Bax、Bcl-2、Caspase3、Caspase9的表达情况。
  结果:随着RA-C1的浓度逐渐增大,对CNE-1细胞的增殖抑制率也增大。同时Hoechst33342染色和Annexin-V FITC/PI双染检测细胞凋亡结果显示,随着RA-C1浓度增大,凋亡特征越明显,早期凋亡率越大。此外,随着细胞色素C的释放和Caspase-9和Caspase-3的激活,RA-C1能够使线粒体膜电势的下降,且加入抗氧化剂NAC能够逆转线粒体膜电位的下降趋势。Western blotting结果显示RA-C1能够降低Bcl-2蛋白、升高Bax蛋白的表达。
  结论:RA-C1有效地抑制鼻咽癌细胞CNE-1细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制很可能是通过激活依赖Caspase的线粒体通路促进CNE-1细胞的凋亡。
[硕士论文] 陈婷
外科学 广西医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我国的南方好发的恶性肿瘤,广东和广西两省是该肿瘤的流行地区。NPC预后不良,严重危害人们生命和健康,因此对其预后的判断尤为重要。近年来许多研究显示,外周血中中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)与许多恶性肿瘤的预后紧密相关,但其与NPC相关性的研究报道较少,且各个报道结果不完全一致。本文旨在研究NLR与NPC患者预后的相关性,进一步评估其在预测NPC复发死亡风险中的作用。
  方法:选取自2006年7月至2007年6月因确诊为鼻咽癌而在广西医科大学肿瘤医院治疗的212例患者,并对其临床资料进行回顾性分析。这些患者均为来源于广西地区的长住居民。利用SPSS软件分析其年龄、性别、烟酒史、NLR、T分期、N分期、临床分期和是否化疗对其无疾病生存时间(disease-free survival,DFS)及总生存时间(overall survival,OS)的影响。随访方法主要通过本课题组和广西医科大学附属肿瘤医院流程办公室电话随访,部分患者随访资料通过我院门诊诊治记录及住院诊疗记录获得。
  结果:单因素分析显示:对于男性、年龄大于等于44岁、高NLR水平(>=2.14)、T3-T4期、Ⅲ-Ⅳ期的NPC患者来说,其OS显著低于女性、年龄小于44岁、低NLR水平(<2.14)、T1-T2期、Ⅰ-Ⅱ期的NPC患者(p值分别为0.034、0.039、0.000、0.001、0.024);高NLR水平(>=2.14)、T3-T4期和Ⅲ-Ⅳ期的NPC患者的DFS显著低于低NLR水平(<2.14)、T1-T2期和Ⅰ-Ⅱ期的患者(p值分别为0.004、0.006、0.024);年龄、性别与DFS无明显相关性(p值分别为0.317、0.068);吸烟史、饮酒史、是否化疗、N分期和临床分期与鼻咽癌患者的OS(p值分别为0.189、0.203、0.468、0.892、0.159)及DFS(p值分别为0.329、0.477、0.632、0.232、0.156)均无明显相关性。多因素分析结果显示:NLR水平(HR=2.421,95%CI=1.135-5.155,p=0.022)、年龄(HR=2.066,95%CI=1.018-4.202,p=0.044)是独立影响NPC患者OS的危险因子,但只有NLR水平是影响NPC患者DFS的独立危险因子(HR=1.901,95%CI=1.076-3.355,p=0.027)。
  结论:高NLR水平与鼻咽癌患者较差的OS和DFS存在关联性,可能是独立影响NPC患者死亡风险及复发转移风险的危险因子。
[硕士论文] 邓永然
肿瘤学 广西医科大学 2018(学位年度)
摘要:研究目的:本实验研究通过利用高通量测序技术对热疗前后的鼻咽癌CNE-2细胞株进行转录组基因测序,利用IPA(Ingenuity Pathway Analysis)技术对测序结果进行注释、比对,并使用基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析方法对差异表达基因进行功能富集分析,从而探讨鼻咽癌CNE-2细胞株热疗前后基因的差异表达情况及进行功能分析,为下一步研究鼻咽癌热疗的分子作用机制奠定实验基础。
  研究方法:将鼻咽癌CNE2细胞分为空白对照组和实验组。实验组CNE2细胞恒温42℃水浴1小时后,置于37℃、5%CO2的培养箱中继续培养24小时。空白对照组不作加温只在37℃、5%CO2的箱中进行培养。然后两组均分别提取总RNA进行文库构建,采用高通量Illumina HiSeqTM2500测序平台对样本进行转录组基因测序,再利用IPA软件进行转录数据的分析,对转录组测序结果进行参考基因组注释、比对,并使用GO(基因本体)和KEGG(京都基因与基因组百科全书)富集分析方法对差异表达基因进行功能富集分析。
  实验结果:1.通过采用DESeq软件分析差异表达基因,按|FC|>1.5,P-value<0.05的筛选标准一共筛选出3184个表达差异基因。其中2712个为上调的差异表达基因,472个为下调的差异表达基因。2.差异基因涉及90条信号通路和466个上游调控分子。GO分析结果显示差异表达基因与肿瘤相关的生物过程功能、细胞组成功能、分子功能等相关;KEGG富集分析结果显示以上差异表达基因主要涉及14个信号通路或生化途径,其中参与PI3K-Ak信号通路、MAPK信号通路等通路的基因较多。IPA在经典通路、相互作用网络、上游调控因子三个方面进行分析,分别筛选出IL-8信号通路、NF-κB信号通路等5个信号通路、相互作用网络核心基因CCND1和CDK4/6及上游调控因子SMARCA4、TGF-β1等。
  结论:本研究筛选出热疗前后的鼻咽癌CNE-2细胞株差异表达最高的20个基因、5个上游调控因子和评分最高的调控网络的2个核心基因及相关的7条信号通路,为下一步研究鼻咽癌热疗的机制奠定实验基础。
[硕士论文] 冯婧
肿瘤学 西南医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:探讨TIGAR(TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator)基因沉默后对鼻咽癌5-8F细胞自噬、凋亡、线粒体降解及线粒体形态、功能的影响。
  方法:1、体外培养鼻咽癌5-8F细胞系;通过慢病毒介导的特异性shRNA干扰TIGAR表达,并通过免疫荧光分析、Western blot检测TIGAR在胞质及线粒体内表达水平变化;2、流式细胞仪分析沉默TIGAR基因后细胞内代谢产物还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)及活性氧(ROS)含量变化,评估细胞内氧化应激水平;3、Western blot检测主要的细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin-1及P62表达水平变化,分析细胞自噬活性变化;4、JC-1染色细胞检测线粒体膜电位变化;5、分离细胞质蛋白及线粒体蛋白通过Western blot检测凋亡蛋白细胞色素c在线粒体与胞质内表达水平变化;流式分析检测Annexin V/PI染色细胞凋亡率;6、Western blot检测线粒体自噬蛋白PINK1及Parkin表达水平变化;线粒体绿色荧光探针标记线粒体,通过流式分析线粒体数量变化,Western blot验证线粒体管家基因编码的蛋白——mtHSP70表达水平变化,分析细胞内线粒体数量变化;7、电镜下观察细胞超微结构,特别是线粒体的形态结构变化;高效液相色谱法检测细胞内ATP含量变化,评估线粒体功能。
  结果:1、通过慢病毒介导的shRNA转染5-8F细胞,成功构建TIGAR基因沉默的细胞株(sh TIGAR)及对照组细胞株(sh scramble),Western blot及免疫荧光分析均显示在干扰组细胞胞质及线粒体内TIGAR表达水平明显降低;2、TIGAR干扰导致细胞内NADPH产生减少,细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)比例降低,ROS水平明显升高,细胞氧化还原状态改变;3、干扰组细胞中自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1表达显著上升,同时P62表达下降,表明细胞自噬增强;4、沉默TIGAR引起细胞线粒体膜电位下降;5、干扰组细胞中细胞色素c在胞质内含量明显增加而在线粒体内含量减少,且干扰组细胞凋亡率明显升高,表明细胞凋亡增加;6、沉默TIGAR后,细胞胞质中PINK1水平上升,线粒体内Parkin表达增加,表明PINK1/Parkin途径介导的线粒体自噬被激活,但干扰组细胞内线粒体数量却较对照组细胞增多;7、电镜下观察到TIGAR干扰组细胞线粒体呈现出肿胀,脊瓦解,空泡形成的异常形态,同时高效液相检测显示干扰组细胞内ATP生产较对照组细胞减少,表明线粒体的结构与功能完整性遭到破坏。
  结论:沉默TIGAR后5-8F细胞内GSH/GSSG比例降低,ROS积聚,使细胞不能维持正常的氧化还原状态,氧化应激增加,细胞自噬活性增强,细胞凋亡率上升,线粒体膜电位降低,线粒体膜通透性转运孔(MPTP)开放,使PINK1/Parkin介导的线粒体自噬途径被激活,但最终线粒体降解被阻碍,导致细胞内受损线粒体堆积,表现为线粒体结构紊乱及生理功能障碍,进一步造成细胞损伤。
[硕士论文] 陈芳
耳鼻咽喉科学 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是一种起源于鼻咽上皮细胞的恶性肿瘤,其恶性程度较高,具有极强的转移能力。早期鼻咽癌患者的症状往往缺乏或非特异性,显著降低了诊断和预测鼻咽癌发展的准确性,临床NPC经常在晚期诊断,诊断后存活率相对较低。因此,研究鼻咽癌发病发展的分子机制,寻找用于鼻咽癌早期诊断、个体化治疗及预后评估的分子标记物有着极其重要的的临床指导意义。
  近年来,用于分析基因表达的高通量平台,如微阵列技术,广泛用于获取肿瘤发生过程中的主要遗传突变。根据文献报道,鼻咽癌的许多基因表达分析涉及微阵列技术,并鉴定了许多差异表达基因的信号通路,分子功能或生物过程。然而,比较分析表明独立研究中的DEGs(Differentially expressed genes)几乎没有重叠,从正常组织中没有确定鼻咽癌组织的可靠生物标志物。尽管取得了这样的进展,相互作用网络中的DEGs与信号通路的相互作用机制仍不清楚。因此,利用大数据生物信息学分析方法,挖掘和整合数据,获取鼻咽癌相关的差异表达基因和信号通路,预测主要生物标记物来促进鼻咽癌的早期诊断和治疗,具有重要的现实意义。生物信息学研究方法是分析生物数据,发掘与疾病发生、发展相关的基因或基因集,再进行实验验证的高效的研究途经。
  本研究以含有56个鼻咽癌样品和13个正常对照样品的两个基因表达谱(GSE12452和GSE13597)为分析材料,利用在线分析工具GEO2R筛选出鼻咽癌组织和正常组织样品之间的差异表达的基因。再结合生物信息学在线分析工具(DAVID,KEGG,STRING等)和文献检索等方法对差异表达基因的分子功能、生物过程及信号通路进行系统分析,总共鉴定获得了10个中枢基因:TOP2A(拓扑异构酶(DNA)Ⅱα),CDK1(细胞周期蛋白依赖性激酶1),CCNB1(细胞周期蛋白B1),PCNA(增殖细胞核抗原),MAD2L1(有丝分裂停滞缺陷型2如1),BUB1(苯并咪唑1同系物不发芽),CCNB2(细胞周期蛋白B2),AURKA(Aurora激酶A),CCNA2(细胞周期蛋白A2),CDC6(细胞分裂周期6同源物),这些中枢基因相关分子途径在鼻咽癌中的上调可能激活鼻咽癌发病机制。然后,通过STRING数据库检索分析,Mad1与c-Myc是竞争关系,Mad1可能通过干扰c-Myc结合从而绑定到hTERT启动子并抑制端粒酶表达。p53与c-Myc是协同表达关系,p53作为反式激活因子参与细胞周期调控,起着肿瘤抑制剂的作用。hTERT是端粒酶催化亚基,是端粒酶活性关键的限速酶。端粒酶在包括鼻咽癌在内的绝大多数人类恶性肿瘤中高表达。PinX1(Pin2/TRF1interacting protein X1)基因及其端粒酶抑制域TID域可以直接结合于人端粒酶,可特异性抑制端粒酶活性,导致端粒缩短,诱导肿瘤细胞凋亡。因此,本研究在前期课题组关于PinX1基因靶向端粒酶抑制鼻咽癌干细胞活性及其TRFs调控机制研究的基础上,研究了Mad1/c-Myc/p53轴在PinX1基因靶向端粒酶抑制鼻咽癌CD133+肿瘤干细胞中的作用。在前期分选获得的鼻咽癌CD133+肿瘤干细胞中转染PinX1过表达质粒、空载体质粒及PinX1siRNA,通过qPCR和WB方法观察PinX1、hTERT、Mad1、c-Myc、P53等基因的表达,进一步研究了Mad1/c-Myc/P53信号通路的调控机制,结果表明Mad1/c-Myc/p53轴可能在PinX1基因靶向抑制鼻咽癌肿瘤干细胞端粒酶中发挥着重要的作用。
[硕士论文] 张梦雅
肿瘤学 广西医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:探讨千金藤碱对鼻咽癌CNE-1细胞和CNE-2细胞的放疗增敏作用及其作用机制,为千金藤碱能够作为鼻咽癌临床放疗的增敏剂提供科学理论依据。
  方法:以人鼻咽癌CNE-1细胞和CNE-2细胞为研究对象。(1)不同浓度千金藤碱作用于CNE-1细胞和CNE-2细胞,采用CCK-8法检测千金藤碱对这2种细胞的药物毒性;(2)克隆形成实验观察千金藤碱对鼻咽癌CNE-1细胞和CNE-2细胞的放疗增敏作用,计算各组存活分数和放射增敏(S ER),比较放射线单独作用与放射线和千金藤碱联合作用后细胞的增殖能力。(3)采用细胞流式仪检测千金藤碱和放射线单独作用及两者联合作用后对鼻咽癌CNE-1细胞和CNE-2细胞的周期及凋亡的影响;(4)Western-blot法检测千金藤碱和放射线单独作用以及放射线与千金藤碱联合应用后鼻咽癌CNE-1细胞和CNE-2细胞中DNA相关修复蛋白RAD51和XRCC1的表达情况。
  结果:(1)CCK-8结果显示千金藤碱对鼻咽癌CNE-1细胞和CNE-2细胞株生长均有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性;(2)克隆形成实验显示,CNE-1细胞和CNE-2细胞的SER(放疗增敏比)分别为1.26和1.23。CNE-1细胞和CNE-2细胞的单纯照射组(D0)、(Dq)、SF2均较联合处理组降低,分别为:CNE-1细胞单纯照射组与联合处理组平均致死剂(D0)(2.7∶2.22)、准域剂量(Dq)(1.8∶1.3)、2Gy照射的存活分数(SF2)(0.71∶0.63);而CNE-2细胞单纯照射组与联合处理组平均致死剂(D0)(3.34∶3.15)、准域剂量(Dq)(2.96∶1.94)、2Gy照射的存活分数(SF2)(0.84∶0.74)。千金藤碱明显增强了CNE-1细胞和CNE-2细胞的的放疗敏感性;(3)流式细胞仪检测细胞周期结果提示:联合处理组与空白对照组、千金藤碱组、单纯照射组比较,细胞周期显著阻滞于放射相对较敏感时相的G2/M期(CNE-1周期阻滞比:36.29±6.24比9.64±4.98、14.35±2.8、19.19±1.93;CNE-2周期阻滞比:36.43±12.59比8.21±3.3、10.74±5.16、21.78±3.23。组间比较差异有统计学意义P<0.05);(4)流式细胞仪检测细胞凋亡率变化结果显示,单细胞按不同处理组处理48h后检测细胞凋亡变化。与空白对照组、单纯照射组相比,联合处理组无论是CNE-1细胞还是CNE-2细胞,其凋亡细胞比例都明显增加(CNE-1细胞凋亡率比:15.57±2.59比4.4±1.81、10.97±0.45;CNE-2细胞凋亡率比:13.23±2.7比1.55±0.83、9.07±2.2,均P<0.05);(5)应用western blotting测定发现,千金藤碱联合放射线中RAD51和XRCC1的表达均低于单纯药物组和单纯照射组(CNE-1细胞RAD51灰度值比较:1.08±0.01比1.3±0.07、1.42±0.03;XRCC1灰度值比较:0.50±0.07比0.59±0.04、0.88±0.09。CNE-2细胞RAD51灰度值比较:0.54±0.05比0.66±0.05、0.80±0.09;XRCC1灰度值比较:0.52±0.01比0.84±0.02、0.96±0.03。组间比较均P<0.05)。
  结论:千金藤碱能增加鼻咽癌CNE-1细胞和CNE-2细胞的放射敏感性,其机制可能与阻滞鼻咽癌细胞周期在G2/M期、诱导鼻咽癌细胞的凋亡、抑制鼻咽癌细胞损的伤修复相关。
[硕士论文] 刘珊珊
肿瘤学 西南医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:探讨阿帕替尼对CNE-2裸鼠鼻咽癌移植瘤是否有抗肿瘤作用,以及阿帕替尼与放疗联合治疗CNE2鼻咽癌裸鼠移植瘤时是否有协同抗肿瘤的作用及其可能的作用机制。
  方法:将CNE-2鼻咽癌细胞接种至裸鼠右大腿皮下,当裸鼠移植瘤体积增长至约150-200mm3时将实验裸鼠随机分为6组,每个实验组8只裸鼠,分为:1)空白对照组(NS0.1ml/d,ig,d1-7),2)单独阿帕替尼治疗组(Apatinib200mg/kg/day,ig,d1-7),3)单独放疗12gy组(12gy radiotherapy,d1),4)单独放疗18gy组(18gy radiotherapy,d1),5)阿帕替尼联合12gy放疗组(Apatinib200mg/kg/day,ig,d1-7+12gyradiotherapy,d8),6)阿帕替尼联合18gy放疗组(Apatinib200mg/kg/day,ig,d1-7+18gy radiotherapy,d8)。实验裸鼠分组后,每天观察裸鼠一般状态,每3天测量裸鼠移植瘤的体积,察看各组肿瘤组织体积的变化,并绘制各实验组肿瘤生长曲线,治疗结束后第18天用颈椎脱臼法处死每组裸鼠,剥离每个瘤体,计算各组肿瘤抑瘤率和联合效应Q值;VEGFR-2抗体通过免疫组织化学法检测肿瘤组织VEGFR-2的表达情况,CD31抗体经过免疫组织化学法检测肿瘤组织微血管密度(MVD),从而判断肿瘤血管生成情况,免疫组织化学法检测γ-h2ax阳性细胞比例,评价肿瘤细胞的DNA损伤水平,Unisense溶氧微电极直接测量肿瘤组织的氧分压,比较各实验组肿瘤组织的乏氧状态,小动物PET/CT通过检测肿瘤组织18F-脱氧葡萄糖摄取值(T/M值),评价肿瘤代谢情况。
  结果:治疗完成后,各治疗组小鼠肿瘤的生长均不同程度地被抑制,对照组、单用阿帕替尼组、单次放疗12gy组、单次放疗18gy组裸鼠一般情况尚可,饮食、饮水、大便和治疗前相比没有异常,没有明显消瘦或者皮下脂肪显著减少,阿帕替尼+12gy放疗组、阿帕替尼+18gy放疗组裸鼠出现一过性消瘦,精神差,但在实验期间,裸鼠均能耐受,没有裸鼠死亡。空白对照组肿瘤生长最快,第18天时的肿瘤体积约2042mm3,其生长速度明显快于其他各组,差别具有统计学意义(P<0.05);单次放疗18gy对肿瘤的抑制作用比单次放疗12gy强,差别具有统计学意义(P<0.05)。阿帕替尼+12gy放疗组对肿瘤生长的抑制作用比单阿帕替尼和单次放疗12gy组强,差别具有统计学意义(P<0.05)。阿帕替尼+18gy放疗组对肿瘤生长的抑制作用比单阿帕替尼和单次放疗18gy组强,差别具有统计学意义(P<0.05)。阿帕替尼组、12gy组、18gy组、阿帕替尼+12gy组、阿帕替尼+18gy组的肿瘤抑制率分别为33.3%、61.5%、79.3%、85.9%、92.8%。阿帕替尼+放疗对肿瘤的抑制率比单独阿帕替尼或单独放疗组高,差别具有统计学意义(P<0.05)。阿帕替尼+12gy的联合效应Q值为1.156,其Q值>1.15,表明阿帕替尼联合单次12gy放疗的治疗作用具有增效作用。阿帕替尼+18gy的联合效应Q值为1.077,其Q值处于0.85与1.15的范围内,表明阿帕替尼联合单次18gy放疗的治疗作用为两种治疗方式作用的相加,而两个联合治疗组Q值均>0.85,表明阿帕替尼与放疗联合治疗鼻咽癌移植瘤时具有协同作用。空白对照组肿瘤组织的肿瘤代谢明显高于其他各治疗组,差别具有统计学意义(P<0.05),单独放疗18gy组肿瘤组织的肿瘤代谢低于单独放疗12gy组,差别具有统计学意义(P<0.05),阿帕替尼+12gy组肿瘤代谢低于单独阿帕替尼和单独12gy放疗组,差别具有统计学意义(P<0.05),阿帕替尼+18gy组肿瘤代谢低于单独阿帕替尼和单独18gy放疗组,差别具有统计学意义(P<0.05)。在肿瘤组织氧分压检测中,空白对照组氧分压显著高于其余各组,差别具有统计学意义(P<0.05),单独放疗18gy组肿瘤组织的氧分压低于单独放疗12gy组,差别具有统计学意义(P<0.05),阿帕替尼+12gy组肿瘤组织氧分压低于单阿帕替尼和单独12gy放疗组,差别具有统计学意义(P<0.05),阿帕替尼+18gy组肿瘤组织氧分压低于单独阿帕替尼和单独18gy放疗组,差别具有统计学意义(P<0.05)。VEGFR-2阳性细胞比例空白对照组最高,与其它各组相比,差别具有统计学意义(P<0.05),阿帕替尼+12gy组肿瘤组织VEGFR-2阳性细胞比例低于单独阿帕替尼和单独12gy放疗组,差别具有统计学意义(P<0.05),阿帕替尼+18gy组肿瘤组织VEGFR-2阳性细胞比例低于单独阿帕替尼和单独18gy放疗组,差别具有统计学意义(P<0.05)。肿瘤组织微血管密度在空白对照组中最高,与其它各组相比,差别具有统计学意义(P<0.05),阿帕替尼+12gy组肿瘤组织微血管密度低于单独阿帕替尼和单独12gy放疗组,差别具有统计学意义(P<0.05),阿帕替尼+18gy组肿瘤组织微血管密度低于单独阿帕替尼和单独18gy放疗组,差别具有统计学意义(P<0.05)。空白对照组肿瘤组织中的γ-h2ax阳性细胞比例最低,与其它各组相比,差别具有统计学意义(P<0.05),单独18gy放疗组比单独12gy放疗组的阳性细胞比例高,差别具有统计学意义(P<0.05),阿帕替尼+12gy组γ-h2ax阳性细胞比例高于单独阿帕替尼和单独12gy放疗组,差别具有统计学意义(P<0.05),阿帕替尼+18gy组肿瘤组织γ-h2ax阳性细胞比例高于单独阿帕替尼和单独18gy放疗组,差别具有统计学意义(P<0.05)。
  结论:1.阿帕替尼对CNE-2鼻咽癌裸鼠移植瘤模型具有抗肿瘤作用,联合放疗时具有协同抗肿瘤作用。2.阿帕替尼的抗肿瘤作用主要是通过减少VEGFR-2的有效表达量、减少肿瘤组织微血管密度、引起肿瘤组织细胞DNA损伤、降低肿瘤组织氧分压、降低肿瘤代谢达到的。3.阿帕替尼联合放疗时能更强地减少VEGFR-2有效表达量、减少肿瘤组织微血管密度、促进肿瘤组织细胞DNA损伤、降低肿瘤组织氧分压、降低肿瘤代谢。4.阿帕替尼联合放疗治疗CNE-2鼻咽癌裸鼠移植瘤模型时无论是单独治疗还是联合治疗,毒副反应都可耐受。
[硕士论文] 李奕萱
耳鼻咽喉科学 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:原胶原赖氨酸,2-酮戊二酸5-双加氧酶(PLOD2)是一种功能性酶,存在于细胞质的粗面内质网中,参与蛋白的翻译、修饰、纤维化和组织重塑过程。研究表明,PLOD2蛋白与肿瘤的进展、预后、转移、复发均有密切的关系。PLOD2蛋白的高表达与胶质瘤、肝癌、膀胱癌和宫颈癌等肿瘤的不良预后相关,可能成为肿瘤的预后指标。然而,PLOD2蛋白在喉癌组织中的表达情况及与喉癌预后的相关性尚不清楚。因此,本研究拟通过收集临床喉癌组织和癌旁正常组织,运用聚合酶链式反应(PCR)、蛋白印迹、免疫组化等技术对PLOD2蛋白进行测定,并采用生存分析和回归分析等统计方法分析影响喉癌预后的独立因素,进而为喉癌的预后提供标记物。
  第一部分 PLOD2蛋白在喉癌及喉癌旁正常组织中的表达
  目的:
  研究测量PLOD2蛋白在喉癌及喉癌旁正常组织中的表达情况,为喉癌的诊断及治疗提供实验依据。
  方法:
  收集广东省广州市广东省人民医院耳鼻咽喉头颈外科2008年至2015年临床诊断为喉癌的患者的肿瘤组织标本共114例,所有标本均有对应的癌旁正常组织(距离癌组织5cm以上的组织)。所有组织标本均经甲醛固定,石蜡包埋。运用聚合酶链式反应(PCR)、蛋白印迹、免疫组化等技术对喉癌组织中和癌旁正常组织中PLOD2蛋白的表达情况进行定性、定量研究。
  结果:
  (1) PLOD2蛋白在114例喉癌组织中免疫染色阳性物质呈棕色颗粒,主要存在于细胞的胞质中;显色为不同深浅的棕色,且临床分期越晚,颗粒数量越多、颜色越深。
  (2)8组喉癌组织和癌旁正常组织在PCR指标上的差异有统计学意义(p<0.05),喉癌组的PCR水平要高于癌旁正常组。
  (3)8组喉癌组织和癌旁正常组织在蛋白印迹指标上的差异有统计学意义(p<0.05),喉癌组织中PLOD2蛋白质表达水平要高于癌旁正常组织。
  结论:
  喉癌组织中PLOD2蛋白的表达水平要高于癌旁正常组织。
  第二部分 PLOD2蛋白与喉癌预后的相关性研究
  目的:
  研究PLOD2蛋白表达与喉癌预后的相关性,为喉癌的预后判断提供实验和理论依据。
  方法:
  收集广东省广州市广东省人民医院耳鼻咽喉头颈外科2008年至2015年临床诊断为喉癌的患者的手术标本共114例,所有喉癌的标本均有对应的癌旁正常组织。所有组织标本均经甲醛固定,石蜡包埋。生存时间从病理确诊日开始至随访日截止,或由于肿瘤的复发、转移等多种原因导致患者死亡的日期。收集喉癌临床标本病理参数(如:临床分期、TNM分期等)进行统计。利用生存分析和Cox回归分析等统计学方法分析PLOD2蛋白与喉癌预后的相关性。
  结果:
  (1) POLD2蛋白表达的高低,与临床分期、T分期有关,与N分期、M分期无关。
  (2)对喉癌患者进行生存分析发现,PLOD2蛋白低表达患者的3年和5年总生存率均为93.01%; PLOD2蛋白高表达患者的3年和5年生存率分别为70.65%和65.11%,生存率有统计学差异。
  (3)单变量Cox回归模型分析显示M分期,PLOD2蛋白表达,临床分期,T分期均是影响喉癌患者生存的高风险因素。再将与喉癌患者生存有统计学意义的风险因素进行多变量Cox回归分析显示:PLOD2蛋白表达和M分期与喉癌患者的不良预后高度相关。
  结论:
  PLOD2蛋白表达直接影响患者的生存率,而且PLOD2蛋白的高表达水平与喉癌患者的不良预后高度相关,可能成为新的喉癌预后的分子标记物。
[硕士论文] 文果
肿瘤学 广西医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:观察接受调强放疗(IMRT)的鼻咽癌患者的听力变化情况,评估调强放疗模式下鼻咽癌患者的中内耳受照剂量,探索影响听力的相关因素及风险因子,为听功能保护提供理论依据。
  方法:收集2017年2月至2017年8月在广西医科大学第一附属医院放疗科就诊的鼻咽癌患者32例(64耳)。所有患者接受根治性调强放疗,在治疗前、放疗结束及放疗结束后3月采集听力学信息,观察患者的听力变化情况,通过DVH图评估中耳及内耳不同结构的辐射剂量,探索影响听力的相关因素及风险因子。
  结果:截止放疗结束后3月,本研究最终纳入病例32例(共64耳)。治疗前传导性听力下降(CHL)、感音神经性听力下降(SNHL)、混合性听力下降(MHL)共同存在(以CHL为主)。纯音听阈测试结果显示:治疗后气导、骨导听力存在不同程度下降;气导低频听力(250Hz-4000Hz)呈现先好转再恶化趋势,高频听力(8000Hz)则随时间逐渐恶化,以8000Hz听力下降最明显(10.9dB);骨导各频率听力(250Hz-4000Hz)随时间呈恶化趋势,以250Hz、4000Hz听力下降最明显(4.9dB、3.8dB)。声导抗结果显示:声顺、宽度、鼓室峰压、咽鼓管功能、鼓室图等五个指标治疗前后的变化无统计学意义(P>0.05)。耳部结构照射剂量评估结果显示:耳蜗、前庭、内听道、鼓室腔、骨性咽鼓管平均照射剂量分别为4739.1±952.8cGy、3733.7±719.8cGy、4440.5±898.4cGy、4257.3±730.9cGy、5922.2±747.9cGy,随着T分期增加耳部各结构照射剂量增加,其中耳蜗(P=0.024)、前庭(P=0.040)、内听道(P=0.004)、骨性咽鼓管受照剂量(P=0.042)有统计学意义,鼓室腔平均照射剂量无明显统计学意义(P=0.202)。对放疗结束后3月高频SNHL的可能影响因素进行筛选,单因素分析显示性别(P<0.001)、顺铂累计剂量(P=0.013)有统计学意义,多因素分析显示性别有统计学意义(OR=0.043)。
  结论:1、鼻咽癌患者治疗前CHL、SNHL及MHL混合存在(以CHL为主);治疗后3月气导、骨导听力存在不同程度下降(以高频听力损伤明显),气导听力呈先好转再恶化趋势,骨导听力随时间呈恶化趋势。
  2、调强放疗模式下鼻咽癌患者的中耳及内耳仍受到较高剂量照射,合理的耳部限制剂量仍需进一步研究。
  3、鼻咽癌治疗后高频SNHL的发生与性别存在相关性,女性是高频SNHL的保护因素。
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