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[博士论文] 牟旆
眼科学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  甲状腺相关眼病(thyroid-associated ophthalmopathy,TAO)又名Graves眼病、甲状腺功能亢进突眼、内分泌眼病等,是graves病在甲状腺以外的表现,属于自身免疫性器官特异性疾病。大量研究认为,促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)和胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor1receptor,IGF-1R)是TAO的自身抗原,两者形成结构和功能的复合体,在TAO发病的分子机制中起至关重要的作用,但其余分子是否亦在TAO的病程中扮演重要角色,目前仍不清楚。本文第一部分采用第二代高通量测序中的转录组测序的方法,对甲状腺相关眼病患者和健康对照人群来源的眼眶脂肪结缔组织中的转录组信息进行提取和分析,探讨除TSHR和IGF-1R以外,其余可能参与TAO疾病发生发展的分子和信号通路。
  基于转录组测序分析结果,穿透素-3(Pentraxin-3,PTX3)在甲状腺相关眼病患者眼眶脂肪结缔组织中的表达高于健康对照组来源的眼眶脂肪结缔组织。PTX3属于长链穿透素家族,该家族还包括C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)和血清P蛋白(serum amyloid P component,SAP)。在系统性红斑狼疮、多发性硬化等其他自身免疫性炎症性疾病中,PTX3在疾病极早期就有较高浓度表达,灵敏度高于CRP和SAP,且PTX3在血清中的表达值与疾病的严重程度呈正相关,对疾病的预后有重要的启示作用。本课题组在之前的研究中发现,甲状腺刺激激素(thyroid stimulating hormone,TSH)可以作用于纤维细胞(Fibrocytes,Fc),刺激其高表达PTX3,这种效应是通过增加PTX3的mRNA稳定性达到的,且可以被抗炎药物和抗IGF-1R药物所阻断。本文第二部分计划在转录组测序的基础上,取TAO患者和健康人来源的眼眶脂肪结缔组织和血清样本,比较不同来源的组织和血清中PTX3的表达差异,探讨PTX3作为TAO潜在生物学标志物的可能性。
  日前,一项多中心、双盲、平行随机对照的临床试验证实了抗IGF-1R抗体teprotumumab对于TAO治疗的有效性和安全性,改变了TAO目前治疗局限于对症治疗的窘境。但teprotumumab产生作用的分子机制仍在进一步探索中。本文第三部分计划采用teprotumumab处理共培养的纤维细胞和Th1细胞,并用PMA等抗原加以刺激,观察Ⅱ类主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex,classⅡ,MHCⅡ)和干扰素伽马(Interferon-γ,IFN-γ)的表达量变化等,了解teprotumumab对于纤维细胞抗原呈递作用和Th1细胞活化的影响及机制。
  方法:
  1.对纳入的对照组和病例组眼眶脂肪结缔组织进行mRNA质量检测;符合要求的样本各5例进一步采用RNA测序(RNA sequencing,RNA-seq)获得其转录组信息,得到原始数据Rawdata;
  2.对Rawdata进行基因表达定量和校正,得到两组间差异表达的基因Dif-gene;
  3.对Dif-gene进行基因本体分析(Gene Ontology Analysis,GO)和通路分析;
  4.根据得到的显著性GO条目,做功能树分析(GO-tree)。根据显著性信号通路做信号通路网络(Path-Act-Network)构建;
  5.选取表达丰度高、差异倍数有统计学意义的上调基因和下调基因各2个,在TAO患者和健康对照人群眼眶脂肪结缔组织上,通过Real-time PCR验证Dif-gene的差异表达。
  6.分别取TAO患者和健康对照人群眼眶脂肪结缔组织和其培养的成纤维细胞,通过Real-time PCR和免疫组织化学技术(immunohistochemistry,IHC)分别验证PTX3在细胞mRNA和蛋白层面的表达;
  7.分别取TAO患者和健康对照人群来源的血液样本,通过酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测样本中PTX3蛋白的表达;
  8.分别取TAO患者和健康对照人群来源的血液样本,在外周血纤维细胞培养环境中加/不加teprotumumab,通过Real-time PCR和流式细胞技术分别检测细胞表面MHCⅡ表达的变化;
  9.分别取TAO患者和健康对照人群来源的血液样本,在外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)培养环境中加/不加teprotumumab,细胞成熟后用P/I抗体加以刺激,流式细胞技术检测Th1细胞内IFN-γ产量;
  10.收集上述样本培养过程中的培养液,ELISA检测加/不加teprotumumab时培养液中IFN-γ的表达量;
  11.分别取TAO患者和健康对照人群来源的血液样本,在外周血单核细胞培养环境中加/不加teprotumumab,待细胞成熟后加入IFN-γ中和抗体,流式细胞技术检测纤维细胞表面MHCⅡ的表达。
  结果:
  1.TAO患者和健康对照人群来源的脂肪结缔组织,转录组测序得到的原始数据质量评分均大于20,mappedrate最低为0.895,最高为0.931。数据主要来源于外显子区域。转录组测序共得到784个差异表达基因;
  2.PTX3等445个基因在TAO患者眼眶脂肪结缔组织中表达上调明显。CTHRC1等339个基因在TAO患者眼眶脂肪结缔组织中表达下调明显。差异具有统计学意义;
  3.细胞因子和细胞因子受体相互作用、趋化因子等19条通路在TAO患者眼眶脂肪结缔组织中上调明显;细胞粘附、细胞外基质受体等20条通路在TAO患者眼眶脂肪结缔组织中下调明显;
  4.差异表达的基因和信号通路主要涉及以下功能:炎症反应、免疫反应、疤痕修复、T细胞调节等;PTX3基因主要参与炎症反应、免疫反应等生物学过程。
  5.在TAO患者来源的眼眶脂肪结缔组织中,PTX3在mRNA和蛋白水平表达均高于健康对照人群;
  6.PTX3在TAO患者来源的血液样本中,表达高于健康对照人群;但TAO活动期和稳定期表达无明显差异。
  7.无论是否有抗原刺激,teprotumumab均可降低外周血纤维细胞表面的MHCⅡ基因水平和蛋白水平的表达。且这种效应在TAO患者和健康对照人群来源的外周血纤维细胞中均可观测到;
  8.Teprotumumab可明显降低Th1细胞内的IFN-γ水平,无论细胞来源于TAO患者或健康对照人群;
  9.Teprotumumab可明显降低细胞培养液中IFN-γ的蛋白水平,无论细胞来源于TAO患者或健康对照人群;
  10.当加入IFN-γ中和抗体处理后,外周血纤维细胞表面MHCⅡ的表达明显降低,且这种效应在TAO患者和健康对照人群来源的外周血纤维细胞中均可观测到。
  结论:
  1.PTX3等基因可能与TAO的发生和进展过程相关。细胞因子和细胞因子受体相互作用、趋化因子通路可能参与了TAO的病理过程;TAO患者的炎症反应、免疫反应、疤痕修复、T细胞免疫活性等生物学过程增强。多种炎症相关基因和自身免疫相关基因在TAO患者来源的眼眶脂肪结缔组织中表达升高,再次证实TAO与自身免疫、炎症的相关性;
  2.炎性分子PTX3在TAO患者的眼眶脂肪结缔组织和血液中表达均增高,可能涉及了TAO的炎性进展过程,PTX3可能是TAO病程诊断和预后的潜在生物学标志;
  3.Th1细胞通过分泌IFN-γ,刺激纤维细胞表面MHCⅡ分子的表达,teprotumumab可减少Th1细胞分泌的IFN-γ并减弱纤维细胞表面MHCⅡ分子的表达;
  4.Teprotumumab可减弱抗原刺激时Th1细胞的活化效应,并减弱纤维细胞的抗原呈递作用,这种效应在TAO患者和健康对照人群来源的外周血纤维细胞中没有明显差异。说明teprotumumab有效治疗TAO的机制,一部分可能是通过减弱Th1细胞和纤维细胞对自身抗体的免疫效应来实现的。
[硕士论文] 江文捷
眼科学 西南医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  1.通过形态学观察的方式探讨眼调节对葡萄膜巩膜房水外流途径的影响。
  2.探讨眼调节对正视眼和不同类型近视眼眼压的影响。
  3.比较静态调节和动态调节对眼压的影响。
  方法:
  1.对14只日本大耳白兔双眼分别滴用硝酸毛果芸香碱滴眼液和硫酸阿托品眼用凝胶以模拟眼调节态和非调节态,于点眼后30min将5μl异硫氰酸荧光素牛血清白蛋白(FITC-BSA)注入前房,于前房注射后0.5h、1.5h、2.5h、3.5h、4.5h各处死2只兔,摘取双眼作冰冻切片,在荧光显微镜下观察调节态和非调节态葡萄膜巩膜途径的荧光强度等级及其分布形态;于点眼后30min处死4只兔,摘取双眼通过HE染色和抗平滑肌抗体染色(α-SMA染色)在普通光镜下观察兔眼睫状肌形态、肌间隙。
  2.纳入志愿者共88人,其中正视眼组28人(28眼),近视眼组60人(60眼),近视眼组根据屈光稳定情况分为稳定性近视组34人(34眼)和进展性近视组26人(26眼),根据近视程度分为低度近视组17人(17眼)、中度近视组28人(28眼)和高度近视组15人(15眼),采用回弹式眼压计对所有受试者分别在调节放松(0D)和诱导3D调节两种状态下进行眼压测量,并对各组调节前后的眼压值进行统计分析。
  3.纳入志愿者共45人,随机分为A组(22人)、B组(23人)。A组分别在调节放松(0D)、诱导2D和4D静态调节(睫状肌持续收缩)三种状态下进行眼压测量,B组分别在调节放松(0D)、诱导2D和4D动态调节(睫状肌交替舒缩)三种状态下进行眼压测量,并对两组调节前后的眼压值进行统计分析。
  结果:
  1.兔眼拟调节后眼压下降(P<0.05),调节组睫状体、脉络膜上腔和前巩膜荧光强度较非调节组均显著减弱(P<0.05),而后巩膜、脉络膜无显著差异(P>0.05)。光镜观察见非调节组放射肌区域有明显肌间隙,而在调节组未发现此间隙。
  2.非调节状态下,各组间眼压差异无统计学意义(P>0.05);诱导3D调节后,进展性近视组和高度近视组眼压明显上升(P<0.05),稳定性近视组、低度近视组、中度近视组眼压下降不明显(P>0.05)。
  3.A组静态诱导调节后眼压下降不明显(P>0.05),B组动态诱导调节后眼压显著降低(P<0.01)。在不同程度(2D、4D)的调节刺激下,B组眼压下降的幅度均大于A组(P<0.05,P<0.01)。
  结论:
  1.非调节状态下,睫状肌放射肌区域有明显的肌间隙,拟调节时此肌间隙消失,葡萄膜巩膜通道的房水外流减少。
  2.眼调节可引起进展性近视眼或高度近视眼患者眼压升高;眼调节诱导的眼压升高可能和成年人近视持续性发展有关。
  3.动态调节可显著降低眼压,睫状肌交替舒缩比持续收缩对房水外流的影响更大。
[硕士论文] 姜妍芳
内分泌与代谢病 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  探讨2型糖尿病患者尿白蛋白/尿肌酐与糖尿病眼部病变的关系以及相关因素,为临床诊断提供依据。
  方法:
  回顾性分析2015年6月至2016年6月于安徽省立医院内分泌科病房住院,明确诊断为T2DM的所有患者总共472例患者的临床资料。按照尿白蛋白/尿肌酐(UALB/UCr∶ UACR)≥30mg/g为标准分为升高与否两组;再按照眼部情况分为3组:糖尿病视网膜病变(DR)组、白内障组、眼部正常组。统计UACR和眼部病变发生率;比较各组研究对象的一般资料、指标,包括年龄、性别、糖尿病病程、血压、体重指数(BMI)、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、尿酸(UA)、尿素氮(BUN)、UACR。统计学分析采用SPSS22.0进行处理。
  结果:
  (1)472例患者中,UACR增高发生率为35.38%,DR的发生率为5.30%,白内障发生率为35.59%。
  (2) UACR正常患者均无视网膜病变,UACR增高组中DR的发生率14.07%。UACR正常组白内障发生率30.49%,UACR升高组白内障发生率44.91%,差异有统计学意义,P=0.028。
  (3)①病程:与UACR正常组比较,UACR增高组糖尿病病程明显延长,差异具有统计学意义,P=0.025<0.05。UACR升高患者中,与眼部正常组比较,白内障组和糖尿病视网膜病变组糖尿病病程明显延长,差异有显著统计学意义,P值分别为0.001和0.002(均<0.01);与UACR正常组相比,伴UACR增高的眼部正常组,糖尿病病程差异无统计学意义,P=0.699,提示可能部分患者UACR与糖尿病关系不密切。
  ②年龄:与UACR正常组比较,UACR增高组年龄差异无统计学意义,P=0.054。UACR升高患者中,眼部正常组和白内障组的年龄差异有显著统计学意义,P=0.001;白内障组和DR组的年龄差异有显著统计学意义,P=0.001;眼部正常组和DR组的年龄差异有统计学意义,P=0.044;白内障组的年龄明显大于DR组,DR组的又大于眼部正常组。
  ③血压:与UACR正常组比较,UACR增高组合并高血压差异具有显著统计学意义,P=0.002。而UACR升高患者中,眼部正常组、白内障组和糖尿病视网膜病变组间否合并高血压差异无统计学意义,P=0.477。
  ④血尿素氮(BUN):与UACR正常组比较,UACR增高组血尿素氮差异无统计学意义,P=0.08。UACR升高患者中,DR组与白内障组、眼部正常组之间的BUN差异存在显著统计学意义,P值分别为0.007和0.006;而白内障组与眼部正常组之间的BUN差异无统计学意义。提示糖尿病患者肾脏功能与视网膜病变有一定的关联性,而与白内障关系不大。
  ⑤性别、体重指数(BMI)、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、尿酸(UA): UACR正常组与UACR增高组之间、DR组与白内障组和眼部正常组3组间差异均无统计学意义。
  ⑥尿白蛋白/肌酐(UA1b/Cr):UACR增高患者中DR组与白内障组、眼部正常组3组间差异均无统计学意义,P=0.495。
  结论:
  (1)2型糖尿病患者糖尿病肾脏疾病的发生率远高于糖尿病视网膜病变发病率,二者均随病程延长而增高;与性别、BMI无明显相关。
  (2)糖尿病视网膜病变者均存在不同程度尿白蛋白排泄增加,提示尿白蛋白/尿肌酐升高可能可预测糖尿病视网膜病变的发生。
  (3)糖尿病患者白内障发生与病程长、增龄及肾功能变化有关。
  (4)高血压是肾脏损害的重要危险因素,与糖尿病眼部病变无关。
[硕士论文] 魏荣
眼科学 南昌大学;南昌大学医学院 2017(学位年度)
摘要:微循环是指微动脉、微静脉和毛细血管间的微血管循环和淋巴循环,是循环系统的中心环节。近年来随着微血管分析和测量的仪器和技术不断发展,对球结膜微循环的认识与研究也逐步深入,我们可使用光学相干断层扫描血管造影、视网膜功能成像仪、功能裂隙灯生物显微镜等仪器对球结膜微循环进行定性及定量测量,进一步了解球结膜微循环在眼科相关疾病的作用。目前的研究证实球结膜微循环已被用于评估全身性疾病,如阿尔茨海默氏病、镰状细胞病、心肺复苏等。越来越多的研究表明球结膜微循环在糖尿病相关眼病、高血压相关眼病、干眼症、青光眼等多种眼科相关疾病诊治上也有重要作用。本文将就球结膜微循环的影像学进展及在上述疾病的诊断上的作用作简要综述。
[硕士论文] 王凯
临床医学 天津医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:运用全外显子测序技术对两个来自不同地区的常染色体显性眼前节发育不良家系进行致病基因突变的筛查,以及预测软件对突变可能造成的危害进行预测。
  方法:1.临床检查:对2个分别来自河南和河北的常染色体显性眼前节发育不良家系进行临床检查,包括全身一般检查以及眼科专科检查。眼部专科检查包括:最佳矫正视力,裂隙灯眼前节、玻璃体和眼底检查,眼底照相,超声生物显微镜等。2.实验室研究:在获得受检者同意后,抽取受检者静脉血5ml,提取全基因组DNA。选择合适的个体样本(家系1中选取2名患者及1名正常对照、家系2中2名患者及1名正常对照)进行全外显子组测序。筛选测序结果,排除非致病基因以及非编码基因后得到候选基因,将候选基因的结果在整个家系中进行直接测序,验证可能的突变基因。在整个家系中扩增突变位点所在片段,并进行限制性内切酶消化,以进一步确认突变位点与患者的关系。运用Polyphen-2,SIFT以及Human splicing founders软件对突变危害性进行预测。
  结果:家系1中共有4代17名成员,患者占9例,连续3代均有患者发病,符合常染色体显性遗传特征。临床检查证实9例患者均有不同程度的双眼眼前节发育异常。家系1中所有的患者眼前节检查和UBM表现为无虹膜,眼底像可见后部脉络膜缺失,以及黄斑发育不良,最佳矫正视力为光感到0.1。随着年龄的增长,第二代1例患者和第三代2例患者出现角膜浑浊和继发性青光眼,最终完全失去视力。家系2中共有8名成员,患者2例,表现为无虹膜,黄斑发育异常,最佳矫正视力可达0.1到0.2。在家系1的候选基因PAX6中,发现一已知错义突变T2A(p.M1K),家系2中相同的基因上发现一已知剪切位点突变c.357+1g>c。内切酶消化实验中,家系1每例患者酶切产物电泳所得的DNA条带均比正常对照多一条,患者之间无明显差异,可认为此位点与患者出现共分离现象,确认此位点为杂合突变位点。错义突变T2A(p.M1K)Polyphen-2评分为0.0分,SIFT软件评分为0分(有害)以及Human splice founders软件预测T2A(p.M1K)和c.357+1g>c两个突变位点均有可能改变剪切位点的位置。故两突变都有极大概率影响相应mRNA剪切位点以及蛋白质结构。
  结论:外显子测序技术联合直接测序技术快速检测出PAX6基因中T2A(p.M1K)和 c.357+1g>c两个突变。限制性内切酶消化实验确认突变位点,并确认位点为杂合位点,符合之前认为家系1为常染色体显性遗传家系的结论。生物功能预测软件Polyphen-2,SIFT和Human splicing founders预测两ASD家系筛选出的致病突变,作出突变会影响mRNA剪切以及蛋白质结构的危害性预测。故确认T2A(p.M1K)和c.357+1g>c突变分别为两个ASD家系的致病突变。全外显子测序技术为此种临床表现复杂多样、分型困难的常染色体显性眼前节发育不良家系的致病基因检测提供了一种方便快捷的检出手段。
[硕士论文] 刘强
眼科学 南昌大学;南昌大学医学院 2017(学位年度)
摘要:随着眼科领域技术的进步,目前已经可以顺利的完成复杂的眼科手术,但患者拥有一个良好的眼表状态是所有术后视觉质量的一个重要保证。眼表疾病有很多种,本文主要讨论近年来比较受关注的由蠕形螨引起的眼表疾病在诊断、致病机制、临床表现及治疗预防等方面的研究进展,旨在为眼部蠕形螨感染患者提供一种安全、舒适、有效的诊断及治疗方案。
[硕士论文] 葛力铭
内科学 大连医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:甲状腺相关性眼病(Thyroid associated ophthalmopathy,TAO)为最常见的自身免疫性疾病的甲状腺外并发症,在Graves病(Graves’Disease,GD)患者中,发病率可高达25%[1],TAO的早期诊断可以使疾病得到有效的治疗,大剂量糖皮质激素静脉治疗是活动期的TAO的一线治疗方法[2],目前静脉激素治疗应用较为广泛的方案:前6周,每周应用500mg甲泼尼龙,后6周,每周应用250mg甲泼尼龙,共计12周,累积剂量达4.5mg[3]。本研究将探讨甲状腺相关性眼病大剂量激素冲击治疗前后疗效及安全性。
  方法:
  1、选取2013年1月至2017年1月在我院内分泌2科住院,符合TAO活动期诊断、入组标准及排除标准的患者共计17例为病例组,收集患者的姓名、年龄、性别、身高、体重、腹围、是否吸烟、既往主要病史、TAO病史及家族史。
  2、冲击前后行眼科检查,明确患者治疗期间眼部变化,包括:突眼度、双眼的视力、眼压,冲击前后对患者进行CAS评分,通过对以上几项的对比来观察治疗的有效性。
  3、检测患者冲击治疗前后血常规、尿常规、电解质、肝功能、OGTT实验、皮质醇节律以及骨量的变化,并持续观察患者有无反酸、烧心、嗳气、呃逆、腹胀、腹痛等消化道溃疡等症状;患者有无咳嗽咳痰等呼吸系统感染的症状;有无尿频、尿急等;泌尿系感染的症状;通过对以上几项的对比来评估治疗的安全性。
  4、所有数据使用SPSS17.0统计软件进行统计分析,符合正态分布的资料采用均数±标准差(X(-)±S)表示,组间比较采用T检验进行分析。不符合正态分布的数据,采用M(Q25-Q75)表示,组间比较采用Mann-Whitney秩和检验。采用Pearson相关分析进行相关性分析。P<0.05为差异有统计学意义。
  结果:
  1、大剂量激素冲击治疗后与治疗前相比较,突眼度及CAS评分显著降低。左突眼度为[P<0.01;16(15-17) vs18(16.5-19.5)mm],右突眼度为[P<0.01;16(14-18) vs17(16-20)mm],CAS评分为[P<0.01;8(7.5-9) vs5(4-6)],另外,患者眼压明显降低,视力也有明显好转,差异具有统计学差异(P<0.05);右眼压[P<0.01;16(14.5-17) vs18(17-19)mmHg],左眼压为[P<0.01;16(14-18.5) vs18(17-21.5)mmHg],左眼视力[P<0.01;0.80(0.55-1.00) vs1.00(0.85-1.00)],右眼视力改变也有统计学差异[P<0.01;1.00(1.00-1.00) vs0.80(0.45-0.90)]。
  2、CAS评分的改善程度与TAO的病程呈正相关(r=0.840,P=0.000),而与GD的病程、BMI指数以及年龄无关;
  3、治疗后恢复情况所占在人数以及百分比:其中 CAS评分降低了1~2分的有4人,占了23.53%,CAS评分降低了3~4分的有12人,占了70.59%,,CAS评分降低了5分以及以上的有1人,占了5.88%。
  4、治疗前后对比,患者血压、BMI、肝功能、皮质醇(8点、16点、24点)、血糖、离子代谢、PTH的变化未见统计学差异。
  5、激素冲击引起不同副作用的人数以及所在百分数:结合患者实验室检查以及相关体征,经过治疗后,有1人出现骨量减低,占总人数5.88%,有2人出现了泌尿系统感染,占总人数11.76%,有2人出现了消化道的症状,占总人数11.76%,有2人出现了轻微库欣貌,占总人数11.76%,有4人出现了新发的糖代谢异常,占总人数的23.53%,其余呼吸道感染、新发糖尿病、肌痛以及肌无力、低钾血症以及抑郁症等副作用未有发生。
  结论:大剂量糖皮质激素冲击治疗甲状腺相关性眼病的有效性和安全性优于治疗前,尤其是在缓解眼部软组织炎症方面,对于提高视敏度、减少眼压、减低突眼度等方面均有较明显的作用。
[博士论文] 邱巧昀
整形外科 浙江大学 2016(学位年度)
摘要:本文主要从以下几方面进行论述:
  第一部分 泪槽相关测量指标的探讨
  目的:利用计算机辅助照
  相测量法,对泪槽相关表面解剖结构的各项指标进行测量研究,在Barton分级系统的基础上,为泪槽畸形的严重程度提供可量化的数据评价参考系统。
  方法:按Barton分级(0-Ⅲ级)选取就诊于我科的求美者为研究对象。每级50例(伴眼袋组25例,无眼袋组25例),共200例,其中男12例,女188例,平均年龄27.6岁。使用数码相机拍摄标准数码照片,应用Image-Pro Plus7.0图像分析软件,处理分析拍摄合格的照片,测量泪槽区域表面结构之线性与角度测量指标的值,所得数据采用方差检验、独立样本T检验进行分析。
  结果:①无眼袋组与伴眼袋组之间的内眦间距、睑裂宽度、下睑缘长、睑裂倾斜度无显著差异(P>0.05),不同程度泪槽畸形(0-Ⅲ级)之间的内眦间距、睑裂宽度、下睑缘长、睑裂倾斜度也无显著差异。②BartonⅠ级泪槽长、泪槽高分别为14.74±1.73mm、14.51±1.47mm; BartonⅡ级泪槽长、泪槽高分别为20.98±2.23mm、18.38±0.85mm; BartonⅢ级泪槽长、泪槽高分别为23.68±2.70mm、19.18±0.87mm。③BartonⅢ级之泪槽长度,有眼袋组大于无眼袋组,其差异具有统计学意义(p<0.05)。
  结论:本研究测量了泪槽区域表面解剖结构的各线性与角度测量指标的值,结合Barton分级系统,将泪槽畸形的严重程度量化,为泪槽畸形的治疗提供了一组较系统的数据体系。
  第二部分 改良术式矫正泪槽畸形的临床应用与客观测量指标在术后效果评价中的意义
  背景与目的:现有文献报道关于泪槽畸形的手术治疗方法多种多样,从过去的手术去除眶隔脂肪,到眶隔膜的折叠、收紧加固,转变为以保留并重置眶隔脂肪为主的术式。然而,我们在临床工作中发现,部分患者术后仍存在泪槽畸形纠正不足的情况。本研究对现有术式进行改良,采用“改良经结膜入路眶脂释放并眶隔重置法”手术矫正泪槽畸形,并将泪槽相关测量指标应用于术后效果评估中,结合Barton分级系统及满意度调查,以全面客观探讨该方法之临床疗效。
  方法:针对存在眶隔脂肪突出,皮肤松弛不明显或仅有轻度皮肤松弛,下睑部皱纹、皱折不明显,以眶缘凹陷、眶睑沟明显为主要美容缺陷的年轻患者,采用“改良经结膜入路眶脂释放并眶隔重置法”手术矫正,并从Barton分级系统、泪槽相关表面解剖结构测量及满意度调查等方面对术后效果进行评价。
  结果:①术前评估34例BartonⅠ级中,术后0级为30例(88.2%)、无改善4例(11.8%);44例Ⅱ级中,术后0级为35例(79.5%)、Ⅰ级为9例(20.5%);24例Ⅲ级中,术后0级为20例(83.3%)、Ⅰ级为3例(12.5%)、Ⅱ级为1例(4.2%)。②各分级之睑裂宽度、下睑缘长及睑裂倾斜度,术后相对于术前无显著改变,差异无统计学意义(p>0.05)。③术后眼袋长、泪槽长、眼袋高、泪槽高、眼袋高/睑裂宽度、泪槽高/睑裂宽度等指标相对术前均明显减少,差异具统计学意义(p<0.05)。
  结论:改良经结膜入路眶脂释放并眶隔重置术式能有效矫正泪槽畸形及眼袋,术后无严重并发症,总体满意度高。泪槽表面解剖结构测量指标对术后效果评价有指导意义。
  第三部分 三种经结膜入路术式临床疗效的系统评估与对比分析
  背景与目的:目前泪槽畸形手术治疗方式包括两大类:眶脂释放转移法及眶隔重置法。两种术式皆能取得一定疗效,但现有文献中关于两者的对比分析较少。本研究将两种术式进行对比,并将我们的改良术式与之进一步比较,系统评估其治疗效果,以作为临床治疗选择的参考。
  方法:回访2010年8月至2015年9月间在本院接受过泪槽畸形手术治疗的有效随访1年以上之患者,共136位,8位男性,128位女性,年龄20-46岁(平均年龄31.1岁)。根据手术方式分为三组,组1采用经结膜入路单纯眶脂释放法,组2采用经结膜入路单纯眶隔重置法,组3采用改良经结膜入路眶隔释放并眶脂重置法。结合Barton分级系统、满意度调查及并发症发生率,全面评价术后效果,并使用T检验、秩和检验分析评价结果。
  结果:①术后评分比较:组1与组2相比,对BartonⅠ级无统计学差异(p>0.05),对BartonⅡ、Ⅲ级有统计学差异(p<0.05)。组2与组3相比,对BartonⅠ级无统计学差异(p>0.05),对BartonⅡ、Ⅲ级有统计学差异(p<0.05)。②术后总体疗效比较:组1与组2、组1与组3有统计学差异(p<0.05),组2与组3无统计学差异(p>0.05)。
  结论:三种经结膜入路保留并重置眶隔脂肪术式对轻度泪槽畸形疗效无明显差异,但对中、重度的泪槽畸形,改良眶隔释放并眶脂重置法治疗效果最显著。
  第四部分 泪槽畸形的注射充填与手术治疗之疗效分析
  目的:泪槽畸形的矫正在下睑区域在面部年轻化的治疗中极具挑战性,随着人们对治疗效果的要求不断提高,创伤的程度、恢复期的长短、疗效的持久性,都成为影响患者满意度的因素。故本研究分析了注射充填与手术疗效,为泪槽畸形的治疗提供参考。
  方法:回访2013年9月至2015年9月在本院接受过泪槽畸形治疗的有效随访患者,共144位,8位男性,136位女性,年龄20-45岁(平均29.6岁)。根据治疗方式将患者分为三组,组1采用透明质酸注射充填,组2给予自体脂肪移植充填,组3使用改良经结膜入路眶脂释放并眶隔重置术式。结合Barton分级系统、满意度调查,全面评价术后效果,并使用T检验、秩和检验分析评价结果。
  结果:①术后评分比较:组1与组2相比,对BartonⅠ级无统计学差异(p>0.05),术后6个月对BartonⅡ、Ⅲ级有统计学差异(p<0.05),术后1年对BartonⅢ级有统计学差异(p<0.05)。组1与组3相比,术后6个月对BartonⅠ、Ⅱ级无统计学差异(p>0.05),对BartonⅢ级有统计学差异(p<0.05)。术后1年各级差异均有统计学差异(p<0.05)。组2与组3相比,术后6个月及术后1年对BartonⅠ级均无统计学差异(p>0.05),对于BartonⅡ、Ⅲ级有统计学差异(p<0.05)。②术后总体疗效比较:组1、组2、组3术后6个月无统计学差异(P>0.05),术后1年组1与组2无统计学差异(P>0.05),组1与组3、组2与组3有统计学差异(p<0.05)。
  结论:注射充填治疗更适合用于轻、中度泪槽畸形。其中,透明质酸注射、自体脂肪移植两种注射填充方法对轻度泪槽畸形皆有良好效果,但对于中度或以上的泪槽畸形,透明质酸注射充填近期效果较好,而自体脂肪移植充填远期效果相对较佳。手术治疗对中、重度泪槽畸形均有较好的优势,其改善程度大、维持时间长。
[硕士论文] 汪鹏
眼科学 第二军医大学 2016(学位年度)
摘要:研究目的:
  1、探讨经结膜入路Müller's肌切除术对TAO上睑退缩患者的眼表及眼睑位置的影响;2、分析实验组和对照组Müller's肌间的病理组织学差异,试图阐述TAO发生上睑退缩的可能机制。
  研究方法:
  1、前瞻性收集2015年4月至2015年7月至上海长征医院就诊的轻中度上睑退缩的TAO患者20例(22只眼),所有患者均在表面麻醉+局部浸润麻醉下行结膜入路Müller's肌切除术。于术前1天、术后1天、术后2周、术后45天、术后3月对相关数据进行采集,采用相机拍摄外观照、直尺法和Image J软件法测量眼睑指标(MRD1、实际重睑宽度、SFH、中央睑裂高度、上睑肌力、眼睑闭合不全程度等)、采集眼表指标(BUT、SIT、FL)、计算眼表面积,统计OSDI量表和TAO生活质量量表问卷评分。2、11例(13只眼)TAO患者的Müller's肌作为实验组标本,4例(4眼)行先天性上睑下垂矫正术患者的Müller's肌作为对照组标本,福尔马林固定所有标本,石蜡做组织包埋,继而切片、HE染色,光镜下观察病理组织切片的脂肪浸润和纤维化情况。
  研究结果:
  1、(1)直尺法、Image J软件法均可以对眼睑指标进行有效测量。
  (2)经结膜入路Müller's肌切除术术后3月TAO患者实际上睑重睑宽度平均增加2.00mm、SFH平均增加2.02mm。
  (3)经结膜入路Müller's肌切除术术后3月上睑肌力与术前无明显差异。
  (4)经结膜入路Müller's肌切除术术后3月TAO患者仍有上睑迟落和眼睑闭合不全。
  (5)经结膜入路Müller's肌切除术术后2周中央睑裂高度、OSA与术后3月差异不明显。
  (6)局部麻醉药剂量与MRD1、实际重睑宽度、SFH、OSA等无相关性。
  (7)经结膜入路Müller's肌切除术矫正TAO上睑退缩后3月,BUT减小、OSDI问卷评分降低、TAO生活质量量表评分增高;
  2、实验组Müller's肌纤维化与对照组之间有统计学差异(P<0.001),Müller's肌脂肪浸润状态与对照组之间无统计学差异(P=0.188)。
  研究结论:
  1、经结膜入路Müller's肌切除术是无疤痕、愈合快、并发症少的矫正轻中度TAO上睑退缩的手术方式,术后重睑宽度平均增加2.0mm,该术式可以减轻上睑迟落和眼睑闭合不全程度。虽然术后BUT减小,但FL、SIT手术前后无变化,OSDI问卷评分显示患者自我感觉良好,生活质量有提高。
  2、Müller's肌发生纤维化可能是部分TAO患者发生上睑退缩的原因之一。
[硕士论文] 崔欣
临床医学 天津医科大学 2016(学位年度)
摘要:目的:探讨生后早期双眼形觉剥夺对大鼠视觉传导通路电生理学特性的影响。
  方法:选取50只8d龄健康SPF级Wistar大鼠,雌雄不限,随机分为双眼形觉剥夺组与正常对照组。其中,双眼形觉剥夺组在出生后睁眼前缝合双侧眼睑制作双眼形觉剥夺模型。另一组作为正常对照组不做任何处理。将两组在同一昼夜交替环境下饲养(12h白天/黑夜)。于视觉发育关键期后期(生后38-44d)利用图形视觉诱发电位(pattern visual evoke potential,PVEP)观察比较两组大鼠图形视觉诱发电位P100波潜时值与振幅的差异,并利用全细胞膜片钳记录技术观察两组大鼠视皮层单个椎体神经元细胞固有膜特性值并分析其差异。
  结果:双眼形觉剥夺组PVEP中P100波的潜时值为(95.67±14.67)ms,大于正常对照组的(83.66±10.82)ms,差异有统计学意义(t=-3.338,P=0.002);双眼形觉剥夺组PVEP中P100波的振幅峰值为(3.02±1.02)μV,低于正常对照组的(7.42±1.65)μV,差异有统计学意义(t=11.275,P=0.000)。正常对照组的视皮层神经元细胞的膜电容值(45.18±19.09)pF、膜电阻值(55.84±12.03)MΩ、时间常数值(37.52±10.84)ms与双眼形觉剥夺组视皮层神经元细胞的膜电容值(50.01±15.86)pF、膜电阻值(58.85±14.15)MΩ、时间常数值(43.60±12.09)ms之间分别比较,差异无统计学意义( P>0.05,t=-1.534),( P>0.05,t=0.688),(P>0.05,t=-1.103)。
  结论:1.生后早期双眼形觉刺激不足可以使大鼠PVEP的P100波振幅降低及潜时值较正常组延长,表明异常视觉环境使视觉传导通路信号传递延迟。
  2.生后早期进行双眼形觉剥夺对视皮层单个神经元细胞的固有膜电生理特性的影响较小,单个神经元细胞电学特性的成熟并不依赖于视觉环境。
[博士论文] 李三明
生理学 厦门大学 2016(学位年度)
摘要:文章从以下三部分进行论述:
  第一部分:睑板腺功能障碍诱导的小鼠干眼动物模型的建立
  目的:睑板腺功能障碍(MGD)是引起蒸发过强型干眼最常见的病因,但是MGD引起的眼表面病变的病理生理过程目前还知之甚少。本研究的主要目的是建立蒸发过强型干眼的动物模型,并观察该类型干眼的眼表病理变化过程。
  方法:用裂隙灯显微镜观察外异蛋白基因(EctodysplasinA,EDA)突变鼠(Tabby鼠)的眼表病变过程,用荧光素钠染色方法检测Tabby鼠的角膜上皮缺损状况,用酚红棉线检测小鼠的水性泪液分泌,对角膜和眼睑进行H&E染色和油红染色。用扫描电镜观察眼表面上皮细胞的微绒毛变化。用蛋白质电泳(Western blot)和/或实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测眼表上皮K12、K10、SPRR1B、MUC5AC、MUC1、MUC4、MUC13和MUC15等基因或蛋白的表达情况。
  结果:8周龄至16周龄Tabby鼠的眼表相继出现角膜上皮缺损,角膜基质混浊,角膜新生血管长入以及角膜血管翳形成等病变。Tabby鼠的水性泪液分泌没有减少,但体外泪液蒸发时间显著变短。Tabby鼠角膜上皮细胞表面微绒毛明显减少、缩短。Tabby鼠的结膜杯状细胞分布密度没有变化,但其MUC5AC和MUC5B表达显著增加。Tabby鼠角膜上皮K10和SPRR1B的表达于出生后第4周开始上升,并随时间逐渐增强,这说明Tabby鼠角膜出现鳞状上皮化生。
  结论:Tabby鼠的眼表病变与蒸发过强型干眼的眼表病变相似,可以作为睑板腺功能障碍诱导的干眼小鼠动物模型。对Tabby鼠眼表病变的研究将有助于我们更深入地了解睑板腺在维持眼表健康中的作用,为今后开发筛选新药物治疗这类疾病提供帮助。
  第二部分:外异蛋白(Eda)促进角膜上皮细胞增殖
  目的:EDA基因编码Ectodysplasin A(Eda)蛋白,该基因突变会导致X染色体连锁外胚层发育不良综合征(X-linked anhidrotic-hypohidrotic ectodermal dysplasia,XLHED)。XLHED患者可出现睑板腺发育障碍,但Eda蛋白在眼表的作用并不清楚。
  方法:裂隙灯显微镜下观察EDA基因突变鼠(Tabby鼠)的眼表病变。采用ELISA方法检测人泪液、血浆中的Eda浓度。用蛋白质电泳(Western blot)和/或免疫荧光(IF)以及实时定量PCR(qRT-PCR)检测Eda、Eda受体Edar、Ki67、EGFR、磷酸化EGF(p-EGFR)、磷酸化ERK1/2(p-ERK)的表达。用划痕实验检测Eda蛋白对人角膜上皮细胞系HCE细胞的迁移作用,用CCK8试剂检测Eda蛋白对HCE细胞的促增殖作用。
  结果:Eda蛋白高表达于小鼠睑板腺腺泡上,人泪液中含有Eda蛋白,但血浆中未检测出Eda蛋白。在4-8周龄Tabby鼠,角膜上皮存在缺损,角膜上皮厚度较薄。Tabby鼠角膜上皮的增殖细胞较少,角膜上皮损伤愈合速度较慢,在体外培养眼球中发现Eda蛋白促进角膜上皮损伤愈合。Tabby鼠角膜上皮EGFR、p-EGFR、p-ERK1/2的表达水平较同龄野生型小鼠低,体外细胞培养显示Eda蛋白促进HCE细胞Ki67、EGFR、p-EGFR和p-ERK1/2的表达,且变化趋势与Eda蛋白浓度正相关。
  结论:睑板腺分泌Eda蛋白进入泪液,并促进角膜上皮细胞增殖。Eda重组蛋白有望在临床上用于治疗角膜上皮损伤。
  第三部分:外异蛋白(Eda)通过激活SHH信号通路调控上皮屏障
  目的:探讨Eda蛋白对角膜和皮肤上皮屏障功能的作用。
  方法:裂隙灯显微镜下用荧光素钠染色观察Tabby鼠的眼表病变。用羧基荧光素(carboxy fluorescein)做角膜渗透性实验,用蛋白质电泳(Western blot)和/或实时定量PCR(qRT-PCR),以及免疫荧光(IF)方法检测角膜、皮肤,以及人角膜上皮细胞系HCE细胞的ZO-1、Claudin-1、Gli-1、Shh的表达。用LB固体培养基进行角膜组织匀浆的细菌培养。
  结果:饲养在普通级环境的Tabby鼠的角膜血管翳形成和尾部皮肤溃疡的发病率高于SPF级饲养环境。Tabby鼠的角膜和皮肤上皮紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-1表达水平明显低于同龄野生型小鼠。Eda蛋白可以显著改善Tabby鼠的角膜上皮屏障破坏。体外皮肤培养以及HCE细胞培养实验证实Eda蛋白可以通过激活Shh信号通路来调节ZO-1和Claudin-1的表达。
  结论:Eda蛋白调控表皮细胞间紧密连接的形成,对表皮屏障至关重要。我们的发现不仅揭示了EDA基因新的功能,也对XLHED相关疾病的发病机制提供新的视角。
[硕士论文] 娄恒
眼科学 第二军医大学 2016(学位年度)
摘要:目的:
  甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)是弥漫性毒性甲状腺肿(Graves' disease,GD)最常见的甲状腺外表现,是累及眼眶的一种自身免疫性炎症性疾病。TAO具体发病机制十分复杂,至今仍不十分清楚,目前仍缺乏有效性治疗手段。目前证据表明眼眶成纤维细胞(orbital fibroblasts,OFs)在TAO发病机制中起核心作用,参与TAO眼眶炎症、组织重塑和纤维化等多种病理过程。骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种分泌型磷酸化糖蛋白,在一些自身免疫性疾病中发挥重要作用,具有多种生物学效应,可诱导成纤维细胞增殖,并且和组织纤维化有密切关系,最近研究发现,GD患者血清中OPN水平明显增高。为了探究OPN和TAO发病的关系,首先拟检测TAO眼眶脂肪结缔组织中OPN mRNA和蛋白表达情况,相关细胞因子mRNA表达情况以及和OPN mRNA表达量之间的关系。然后进行细胞实验,用OPN刺激TAO患者来源OFs,观察OPN对OFs增殖、移行以及对VEGF和CollagenⅠ mRNA表达量的影响并探究其相关机制。
  方法:
  1.OPN在TAO患者眼眶脂肪结缔组织中的表达情况
  活动期或稳定期TAO患者行眼眶减压手术时,取眼眶脂肪结缔组织,用行眼整形手术患者的正常眼眶脂肪结缔组织作为对照组,每组6例。实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)法和Western blotting法分别检测OPN mRNA和蛋白表达情况。然后通过RT-PCR检测相关细胞因子包括CD40L、CollagenⅠ、HAS2、NF-κB、CCL20、CD44、IFN-α和IFN-γ mRNA表达情况,并和OPN mRNA表达量进行相关性分析。
  2.OPN对TAO患者OFs的影响及其作用机制探讨
  排除其它免疫性及炎症性疾病的TAO患者,行眼眶减压手术时,无菌条件下取眼眶脂肪结缔组织,组织块法培养OFs细胞。用OPN(5uM)进行预处理后,采用MTT法观察OFs增殖速率,并通过细胞划痕实验观察OPN对OFs移行的影响,再通过RT-PCR法检测OFs的VEGF和CollagenⅠ mRNA表达量。
  同法培养OFs细胞,用PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002(20uM)、MAPK/ERK信号通路抑制剂PD98059(20uM)、LY294002和PD98059(20uM+20uM)以及OPN单克隆抗体1A12(20μg/ml)分别联合OPN对OFs进行预处理,通过MTT法、细胞划痕实验和RT-PCR法分别观察对OFs增殖、移行速率的影响,并检测OFs的VEGF和CollagenⅠ mRNA表达量的变化。
  结果:
  1.活动期TAO患者眼眶脂肪结缔组织OPN mRNA和蛋白表达量及相关细胞因子mRNA表达量升高
  活动期TAO患者组眼眶脂肪结缔组织中OPN mRNA比稳定期TAO患者组和正常对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);OPN蛋白表达量也明显增加,和稳定期TAO患者OPN蛋白表达量相比有统计学差异(P<0.05),但和正常对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。
  活动期TAO患者组眼眶脂肪结缔组织中CD40L、CollagenⅠ mRNA表达量比稳定期TAO患者组和正常对照组高,存在统计学差异(P<0.05); HAS2 mRNA表达量也升高,但和稳定期TAO患者组和正常对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);活动期和稳定期TAO患者组CD44 mRNA表达量均低于正常对照(P<0.05)。TAO患者OPN mRNA表达量和CD40L、CD44、HAS2 mRNA表达量之间存在明显的线性相关关系(P<0.05)。
  2.OPN可促进OFs的增殖、移行速率,并增加VEGF和CollagenⅠ mRNA表达量。
  经过OPN处理后,OFs增殖和移行速率加快,加入1A12和LY294002后,OFs增殖和移行速率变慢,而加入PD98059后对这些效应无明显影响。
  经OPN预处理后,OFs的VEGF和CollagenⅠ mRNA表达量明显增加,加入1A12和LY294002后,VEGF和CollagenⅠ mRNA表达量降低,加入PD98059后对两种基因mRNA表达量无明显影响。
  结论:
  活动期TAO患者眼眶脂肪结缔组织OPN mRNA和蛋白表达水平明显升高,同时CD40L、CollagenⅠ和HAS2 mRNA表达量也增加,且CD40L、CD44、HAS2mRNA表达量和OPN mRNA表达量之间呈明显的线性相关关系。OPN可以通过PI3K/Akt信号通路促进OFs增殖和移行,刺激OFs高表达CollagenⅠ和VEGFmRNA,说明OPN可能在活动期TAO发病机制中发挥重要作用,通过PI3K/Akt信号通路,协同CD40L、HAS2活化OFs以促进眼眶炎症的发生发展以及眼眶组织重塑和纤维化。
[博士论文] 陈禾君
眼科学 上海交通大学 2016(学位年度)
摘要:目的:
  探究慢性肾衰患者血透前后眼部变化,不同原发病因肾衰及血透过程对眼部变化的影响,寻找影响这些改变的基础因素,为肾功能不全患者血透前后眼部防护提供科学的建议。
  方法:
  将2014年2月至2014年10月上海交通大学医学院附属瑞金医院终末期肾病的血液透析治疗患者45例,共90眼纳入研究,对照组47例,共94眼,血透组于单次血透前后一小时行全面眼科检查,包括电脑验光、最佳矫正视力、干眼评估、眼压、前房、角膜、晶状体、视网膜和脉络膜的相关生物数据测量,对照组行相同检查一次,再将血透组按病因分为原发性肾病、高血压肾病、和糖尿病肾病亚组,收集所有患者的血压、肾功能指标、血电解质等资料。采用独立样本t检验、配对t检验、单因素方差分析、最小显著差检验、多元线性回归分析等方法对数据进行统计学分析。
  结果:
  血透组血透前除部分(A4、A5区)视网膜厚度及角结膜钙盐沉积情况外,其余眼科指标均与对照组无显著性差异。血透后,泪膜破裂时间由(7.603±6.502)秒降至(5.852±5.681)秒,P=0.003;Schirmer's I实验结果由(12.056±8.762)毫米降至(10.006±7.721)毫米,P=0.010;眼压由(12.77±2.67mmHg)降至(12.21±2.41)mmHg,P=0.034;前房深度由(2.630±0.458)毫米降至(2.601±0.516),P=0.034;晶状体厚度血透前(4.153±0.413)毫米,血透后(4.056±0.389)毫米,P小于0.001;PNS分级由(0.6067±0.7009)升至(0.7079±0.7262),P=0.019;A3、A4、A6、A7区平均视网膜厚度上升,P均小于0.05;视网膜神经纤维层厚度血透前后(94.20±14.00)微米