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[硕士论文] 刘延
食品科学与工程 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:我国淡水鱼产量大且种类丰富,但大多地区以鲜销为主,在低温保鲜条件下贮藏,加工水平较低,这导致了淡水鱼在死后易腐败,对淡水鱼产业造成了巨大的经济损失,以及极大的资源浪费。前人研究表明淡水鱼的腐败变质变主要由腐败菌造成,大部分革兰氏阴性腐败菌的生长及腐败能力由其自身分泌的群体感应AHLs信号分子调控。本文以内蒙古地区常见的鲫鱼、鲤鱼、鲈鱼为研究样品,揭示其在4℃腐败过程中品质变化,并结合高通量测序手段探究鱼体在新鲜点、鲜度终点、腐败点的菌相变化。分离筛选内蒙古淡水鱼的特定腐败菌(SSO),接种鱼汁模型模拟腐败,并构建了以RBL-2H3为生物识别元件的丝网印刷电化学传感器,用于监测、评价AHLs水平变化,为淡水鱼的腐败监测提供新的、高效的技术与手段,为淡水鱼在低温贮藏过程中的腐败预防研究提供理论依据与基础。本文主要的方法与结果如下:
  (1)淡水鱼于4℃贮藏,随着低温腐败的进行,淡水鱼的pH值、电导率、菌落计数、TVB-N值和感官QI分数显著上升(P<0.05),其中腐败速度最快的为鲈鱼,其次是鲤鱼,鲫鱼最慢。鲫鱼鲜度终点选定为第12d,鲤鱼和鲈鱼为第8d,三种淡水鱼腐败点均为第16d。高通量测序表明鲜度终点菌相构成比新鲜点和腐败点更具有多样性,内蒙古淡水鱼新鲜点优势菌属包括Aeromonadaceae、Ochrobactrum、Shewanella、Acinetobacter、Rhodococcus等;鲜度终点优势菌属包括Aeromonadaceae、Pseudomonas、Shewanella、Vagococcus、Carnobacterium、Moraxellaceae等;腐败点优势菌为Aeromonadaceae、Pseudomonas、Shewanella、Vagococcus等;整个贮藏过程中,Aeromonadaceae占比减少,Shewanella与Pseudomonas比重逐渐增加,Pseudomonas和Shewanella为4℃冷藏下内蒙古淡水鱼腐败过程中的优势腐败菌。
  (2)从内蒙古地区三种淡水鱼的腐败样品中,通过4℃生长测试与菌落形态观察结合生理生化鉴定,共分离筛选到候43株选菌株。提取菌株DNA,进行16S rDNA测序,发现候选菌株中气单胞菌属、希瓦氏菌属、假单胞菌属占据主要构成部分。其中气单胞菌属有11株,希瓦氏菌属13株,假单胞菌属8株,另外得到嗜冷杆菌4株,热杀索氏菌2株,肉食杆菌2株,类香味菌属2株以及芽孢杆菌属1株。判断Pseudomonas fluorescens strain L228荧光假单胞菌与Shewanella baltica OS678希瓦氏菌是内蒙古鲫鱼、鲈鱼、鲤鱼在4℃腐败过程中的特定腐败菌。
  (3)选用8mg/mL多壁碳纳米管(MWNTs)修饰丝网印刷电极(SPCE),扫描电镜以及电化学表征证明MWNTs修饰后SPCE电极基础电阻大幅降低,灵敏度提高。优化氧化石墨烯(GO)在海藻酸钠(NaAlg)凝胶中比例,结果表明最优浓度为0.1mg/mL。多晶体X射线衍射和傅里叶红外光谱检测发现GO和NaAlg形成凝胶后良好融合,扫描电镜观察到凝胶呈3D网状结构,能稳固的包裹高浓度的RBL-2H3细胞。传感器的电化学表征结果中CV、DPV和EIS测试结果证明细胞传感器的构建成功。电极上细胞在1×103~1×108cells/mL浓度范围内的电阻值线性上升,线性方程为y=720.04x+397.35,R2=0.9853,选择1×107cells/mL作为最优细胞浓度进行后续的实验。
  (4)经过CCK-8细胞活力检测、Ca2+荧光探针检测以及流式细胞术检测,发现5种AHLs对RBL-2H3细胞均有着不同程度的损伤作用,并诱导细胞凋亡。透射电镜以及扫描电镜观察到AHLs对细胞损伤主要为细胞膜破损,细胞释放内容物伴随颗粒脱出,损伤严重的细胞皱缩甚至破碎,细胞核消融。使用RBL-2H3细胞构建电化学传感器检测Pseudomonas以及Shewanella的主要信号分子3OC12-HSL与C4-HSL标准品,3OC12-HSL浓度在0.1~1.0μM范围内,ΔRet与3OC12-HSL浓度具有线性关系,线性方程为y=-1530.5x+3789.6,R2=0.9904;C4-HSL浓度在0.2~1.0μM范围内,线性方程为y=-1321.5x+4340.5,R2=0.9755,两者检测限均在0.1μM左右。结果表明该电化学细胞传感器可以用于AHLs水平评价。
  (5)将特定腐败菌Pseudomonas以及Shewanella,分别接入无菌鱼汁中于4℃条件下模拟腐败,随着时间的延长,鱼汁中细菌浓度及TVB-N值逐步上升,蛋白质浓度下降。电化学细胞传感器检测细胞电阻值变化表明,Pseudomonas以及Shewanella产生的AHLs浓度在0~6d逐步增加,并在第6d到达最高后下降,菌株腐败能力也随之降低,表明AHLs对腐败能力具有调控作用。
[博士论文] 栾兰兰
食品科学 浙江大学 2018(学位年度)
摘要:冷冻保藏是水产品最普遍最有效的保藏方式,能够有效抑制水产品的腐败变质。但是,在冷冻保藏过程中冰晶的形成过程及其形成后的状态对于食品的品质如持水性、蛋白质变性、脂肪氧化等都有本质的影响,另外直接影响了食品货架期和商品价值。冷冻过程及其冷冻保存过程中冰晶的形成机制研究对于冷冻技术的完善和冷冻技术在水产领域乃至食品领域的推广具有极其重要的理论意义。基于此,本课题以带鱼为原材料,针对带鱼冷链物流中存在的贮藏温度波动、贮藏时间不固定以及多次解冻后再冻结(冻融循环)等不同因素,对冰晶观测方法学进行了全面系统的研究,建立了冰晶生长预测模型,并研究了壳寡糖作为抗冻剂对冰晶的抑制及抗冻保水作用,同时完善了分形维数作为带鱼品质指标的评价体系。得到的主要结论如下:
  (1)针对于不同冻结方式下带鱼冰晶观测的方法学进行了研究,主要包括冰冻切片法、冷冻替代法、扫描电子显微镜法和X射线断层扫描法。冰冻切片法与冷冻替代法所观察到的冰晶痕迹性状没有明显差异(p>0.05),且与冷冻替代法相比,样品前处理时间大大缩短,可将冷冻替代所需的3-5天缩短为20-30分钟。另外,几种观测手段结论一致,即液氮浸渍冻结与其他冻结方式相比,产生更小更规则的胞内冰晶,其肌肉纤维保持较好的完整性,排列紧密,具有较高的持水力。而传统慢速冻结样品,生成的为大的胞外冰晶,对肌肉纤维造成分离和破坏,肌肉具有较低的持水力。慢冻对冷冻食品的最终品质造成不可逆转的破坏。
  (2)随着贮藏时间的延长,4组样品均呈现肌肉间空隙增大的趋势,冰晶的体积逐渐增大,肌肉纤维被挤压,导致它们的分离;当贮藏温度越低时,相同时间下形成的冰晶越小,冰晶增长越不明显,组织破坏越小,保存后的食品品质与鲜品质地越接近。此外,在重结晶的过程中,冰晶的圆度和拉伸度没有显著变化,冰晶是在初始形态的基础上均匀向四周扩增的。通过一阶动力学模型和阿伦尼乌斯方程的运用,得出冰晶大小的预测模型为:D=D0 exp(0.5624t exp(-7745.45/RT)。通过对模型的验证,预测值和测定值的误差均保持在10%以内,因此,建立的该模型较好地预测了在不同贮藏温度以及不同贮藏时间下的冷冻带鱼的冰晶大小。
  (3)水分活度、色差值、弹性、硬度、咀嚼性等指标均随贮存时间的延长而呈现不同程度的下降,而K值则随着贮存时间的延长逐渐上升,同时,贮藏温度越低,水分活度、色泽、质地等指标下降速度越慢,K值上升速度越慢,越有益于保持食品原有品质。另外,分形维数FD值随着贮藏时间的增加呈现下降的趋势,也就意味着带鱼在贮藏期间组织的不规则程度增加;同样贮藏温度越低,越能够抑制FD值的下降。通过对比FD值与K值结果,得出:一级鲜度的FD值1.9565~1.9175,二级鲜度的FD值1.9175~1.7705,初级腐败的FD值1.7705~1.5302。鲜度设定FD值临界值的求取,实现了通过求取FD值就可以直接对鱼肉新鲜度进行评价。最后建立了FD值与各项理化性质在不同贮藏温度下的函数模型,所建立的函数模型相关系数较好,拟合度较高,建立了基于分形维数的冷冻带鱼品质评价方法。
  (4)在反复冻融处理的过程中,冰晶不断消失又重新生成,肌纤维发生径向收缩,肌纤维间出现较大孔隙,冰晶的生成和生长会对鱼体肌肉细胞产生一定的损伤。通过多孔微观结构分形维数的分析,分形维数随着冻融循环次数的增加而减小,说明冰晶的形成使得肌肉组织的不规则程度增加。同时持水力和质构在冻融循环过程中不断降低,挥发性盐基氮(TVBN)值、硫代巴比妥酸(TBA)值以及菌落总数值均呈上升趋势。在较低的温度冷冻时,能够一定程度上抑制分形维数、持水力和质构的下降,以及抑制TVBN、TBA和菌落总数的上升。说明在带鱼的冷冻贮藏过程中,要尽量减少冻融循环次数,同时应该在较低的冷冻温度下冷冻贮藏,才能较好地保持带鱼的原有新鲜品质。此结果进一步证明了分形维数在评价带鱼冷冻过程中的品质变化的可行性。
  (5)壳寡糖浸泡处理能有效降低冷冻带鱼的解冻汁液损失,且在维持带鱼质构品质、延缓肌原纤维蛋白含量的下降以及保护巯基、Ca2+-ATPase活性等方面均具有较好的效果。另外,壳寡糖对冷冻带鱼的冰晶生长具有抑制作用,能够延缓冷冻贮藏过程中分形维数的降低,对冷冻带鱼微观结构的保持作用较好,同时较高浓度的壳寡糖处理效果更佳。因此,壳寡糖可作为一种优良的抗冻保水剂应用于冷冻水产品中,其含有的大量羟基能够有效抑制冰晶的形成,防止蛋白质变性,有效起到抗冻保水的作用,保证产品品质。
  本研究有利于全面理解带鱼冷冻过程中的冰晶及相关品质变化机理,有利于优化产业结构,分形维数理论推动逐渐完善冷冻带鱼品质分析技术,同时也为其他冷冻水产品和肉类的品质研究提供新的思路和科学依据。
[硕士论文] 郭芮
水产品加工及贮藏工程 河北农业大学 2018(学位年度)
摘要:2016年中国有条件放开红鳍东方鲀的加工经营,这必然会带动国内市场对红鳍东方鲀的需求,推动红鳍东方鲀养殖与加工产业的发展。本论文以红鳍东方鲀为主要研究对象,分析了包括水分、粗蛋白、粗脂肪、灰分、总糖、氨基酸、脂肪酸等主要成分含量;确定了制备红鳍东方鲀鱼皮胶原蛋白的适宜工艺;探究了不同分子量的胶原蛋白肽与Ca2+的螯合效果;结合Box-Benhnken中心组合优化原理,建立了螯合温度、肽钙质量比以及pH值的响应面试验,对胶原蛋白肽螯合钙工艺进行优化,确定了适宜的螯合条件,并对胶原蛋白肽螯合钙的理化指标进行了分析。研究结果如下:
  1.分析了红鳍东方鲀主要营养成分。红鳍东方鲀肌肉必需氨基酸(EAA)含量占总氨基酸(AA)含量的42.49%,占非必需氨基酸(NEAA)总量的73.89%,符合FAO/WHO推荐的理想蛋白模式氨基酸组成,属于优质蛋白的来源。鱼皮中的蛋白质含量达到27.93%,其氨基酸组成中鲜味氨基酸含量达到55.06%,胶原蛋白含量丰富。鱼肝中的粗脂肪含量显著高于肌肉和鱼皮中的粗脂肪含量(P<0.01),达到60.82%,单不饱和脂肪酸含量占其脂肪酸总含量的49.39%,多不饱和脂肪酸含量占其脂肪酸总含量的24.59%,其中DHA的含量较高达到15.49%。
  2.制备了红鳍东方鲀鱼皮胶原蛋白肽。从五种蛋白酶中筛选出效果较适宜的蛋白酶为酸性蛋白酶,胶原蛋白肽的适宜制备条件为:酶解时间为3h,加酶量为5%,料液比为1∶40。对酶解液超滤分离得到Mr<1000Da、1000<Mr<3000Da、3000<Mr<5000Da、5000<Mr<10000Da的五个不同分子质量的胶原蛋白肽,经试验验证分子量越小和CaC12的螯合效果越好。
  3.优化了红鳍东方鲀鱼皮胶原蛋白肽螯合钙工艺。选用Mr<1000Da的胶原蛋白肽为原料制备胶原蛋白肽螯合钙,响应面优化的最适宜螯合工艺为:pH值9.18,肽钙质量比为20.55∶1,反应温度为45.26℃,模型预测螯合率达到89.98%,考虑到实际条件将温度设为45.3℃来验证模型预测条件,螯合率达到91.02%,相对偏差为1.18%,响应面优化的优化工艺可靠。纯化后的胶原蛋白肽螯合钙蛋白质含量为77.06%,钙含量为2.15%。
  通过紫外光谱扫描发现胶原蛋白肽在226nm处有最大吸收波长,而胶原蛋白肽螯合钙的最大吸收波长迁移至208nm处,最大吸收峰发生了明显的移位。红外光谱图对比发现胶原蛋白肽的-NH2在3275.13cm-1有吸收峰,胶原蛋白肽螯合钙的-NH2移至3408.22cm-1处,胶原蛋白肽在1654.92cm-1处具有吸收峰,而胶原蛋白肽螯合钙的C=O吸收峰移至1624.06cm-1,根据紫外光谱和红外光谱谱图分析可以推断胶原蛋白肽中的-NH2和-COOH与Ca2+发生了螯合反应。
  本研究为红鳍东方鲀的加工利用提供了理论依据,对促进红鳍东方鲀产业化的发展具有重要指导意义。
[硕士论文] 苏红
水产品加工及贮藏工程 河北农业大学 2018(学位年度)
摘要:河豚鱼味道鲜美,营养丰富,因其体内含有河豚毒素在国内长期被禁食。目前中国关于河豚鱼的研究主要集中在无毒养殖技术及中毒护理方面,深加工技术及保鲜技术的研究很少,随着河豚鱼市场的开放,研究出有效的保鲜技术是河豚鱼产业发展的迫切需要。本研究以红鳍东方鲀为研究对象,探索了红鳍东方鲀在冰温下的特定腐败菌,并建立了特定腐败菌(假单胞菌)的动力学模型和货架期方程;选择了可以显著抑制特定腐败菌生长的生物保鲜剂,研究了复合生物保鲜剂对红鳍东方鲀的保鲜效果,主要研究结果如下:
  1.分离鉴定了红鳍东方鲀的特定腐败菌。利用选择性培养基研究了冰温下红鳍东方鲀鱼块的菌相,在比例占优势的选择性培养基上挑取单菌落进行分离纯化,通过菌落形态的观察,致腐能力的测定,部分生理生化实验和16S rDNA分子鉴定,确定了冰温下红鳍东方鲀的特定腐败菌为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)。
  2.建立了荧光假单胞菌动力学模型和货架期方程。采用修正的Gompertz模型拟合了冰温贮藏期间红鳍东方鲀鱼块中假单胞菌的生长曲线,建立了荧光假单胞菌的动力学模型和货架期方程,经验证,模型拟合效果较好,货架期预测方程可靠。
  动力学模型为:lg N(t)=3.38+3.87×exp{-exp[0.4949×(12.4311-t)+1]};货架期方程为:SL=12.431-7.25-lgN0/1.915×[ln(-ln5.20-lgN0/7.25-lgN0)-1]
  3.研究了生物保鲜剂对红鳍东方鲀的保鲜效果。针对冰温下红鳍东方鲀的特定腐败菌种类,以菌落总数、挥发性盐基氮(TVB-N)、汁液流失率为指标,选择了对其抑制作用较好的海藻酸钠、柠檬酸、植酸及百里酚4种生物保鲜剂对其进行保鲜效果的研究,并且根据协同效应原理,选择海藻酸钠、柠檬酸及百里酚进行复配,以菌落总数为响应值,通过响应面优化了其配比。结果表明,4种生物保鲜剂均能抑制腐败菌的生长,减缓TVB-N值的增长,并且柠檬酸较植酸对红鳍东方鲀的保鲜效果更好。复合生物保鲜剂的最佳配比为:柠檬酸浓度0.68%、百里酚浓度1.45%、海藻酸钠浓度1.94%。
  4.验证了复合生物保鲜剂对红鳍东方鲀的保鲜效果。采用最佳配比的复合生物保鲜剂处理红鳍东方鲀鱼块,贮藏在冰温及冷藏条件下,以pH、汁液流失率、TVB-N、TBA、菌落总数及假单胞菌数为指标,验证复合生物保鲜剂的保鲜效果。结果表明,该复合生物保鲜剂可以产生协同效应,扩大抑菌范围,比单一生物保鲜剂对红鳍东方鲀的保鲜效果更佳,冰温下可将红鳍东方鲀的货架期由13d左右延长至30d,冷藏条件下将货架期由5d延长至11d左右。
  本论文确定了冰温下红鳍东方鲀的特定腐败菌为荧光假单胞菌,为后续有效的保鲜技术研究提供了理论依据,研究了复合生物保鲜技术对红鳍东方鲀的保鲜效果,为红鳍东方鲀以后的市场流通条件提供了技术理论。
[硕士论文] 谢蒙蒙
水产品加工及贮藏工程 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:中国是淡水鱼生产和消费大国,2016年淡水鱼总产量2986.65万t。受我国居民喜食鲜活淡水鱼之习惯及加工业发展滞后的制约,我国淡水鱼加工比例仅17.1%,仍有占总产量82.9%的淡水鱼仍以鲜活形式上市销售。淡水鱼在转移、运输和暂养过程中,因其生存环境条件发生剧烈变化而易产生应激反应,导致活体受伤、免疫力下降、甚至死亡,使活体存活率和鱼肉品质降低。因此,基于水生生物学原理构建高密度保活系统,研究保活系统的工艺控制及其在淡水鱼暂养和运输过程中应用效果,对提升我国鲜活淡水鱼物流技术和淡水鱼品质具有重要意义。本文以白鲢等淡水鱼为研究对象,在构建高密度保活系统的基础上,研究了保活运输过程中不同增氧方式、温度、过滤方式下鱼类生命体征以及水质的变化,优化出适宜的水体控制方式并在白鲢等淡水鱼的暂养和运输中进行了应用。主要研究内容和结果如下:
  1、构建了淡水鱼高密度保活系统。基于淡水鱼生物学原理,构建了由鱼箱、水循环、水质净化、恒温、供氧及自动控制等装置在内的淡水鱼高密度保活系统,并对水循环、净化、供氧、恒温等四个关键工艺和装置进行设计和计算,确定了水循环方式和循环泵参数、水过滤材料及过滤方式、供氧量和增氧方式、制冷量及双制式压缩机参数。经空载模拟试验证明,鱼箱水体循环率2次/h、降温速率1.5~2.0℃/h、鱼箱可控温度范围5~7℃、水体溶氧8±2mg/L,且具有较好的去除水体中固形物和可溶性蛋白的能力。
  2、研究了高密度保活系统在静止状态的载鱼运行效果及水质控制。在静止状态下,采用高密度保活系统装载白鲢,研究系统载鱼运行过程中水体溶氧、鱼体呼吸频率和行为、复苏时间和复苏后存活时间以及水质的变化。结果表明,采用本文搭建的保活系统装载白鲢可显著提高预提存活率,在系统运行72h时存活率100%,而常规组白鲢在48h时存活率为54%、60h时存活率为0。与常规相比,该系统可显著提高水体溶氧量,降低水体氨氮含量。增氧方式、水体温度和净化方式对鱼体生命体征、肌肉成分以及水体pH、氨氮含量以及气味特征均有显著影响。经正交试验优化,采用泡沫分离、过滤(碳滤-生化棉)进行水体净化,采用高效增氧装置供氧(输出压1MPa),水体温度控制6℃时具有最好的保活效果,并能有效控制水质。
  3、研究了高密度保活系统在运动状态的载鱼车运行效果及水质变化。在运动状态下,采用高密度保活系统装载草鱼、鲫鱼、黄颡鱼、鳊鱼,研究恒速运动、加减速及弯道行驶对对鱼体生命体征、肌肉成分以及水体pH、氨氮含量以及气味特征的影响。在恒速形势下,随着运输时间延长,水体中氨氮、水溶性蛋白含量显著性上升。在加减速及弯道行驶中,加减速及弯道行驶对鱼体产生挤压。随着行驶时间延长,水体pH、水溶性蛋白含量明显上升,而鱼体呼吸频率则越不均匀,鱼肉中TVB-N含量明显增加。且在草鱼、鲫鱼、黄颡鱼、鳊鱼中,鳊鱼和黄颡鱼易受运输挤压影响而死亡,草鱼和鲫鱼的耐受力较强。
[硕士论文] 倪佳丹
食品科学 浙江大学 2018(学位年度)
摘要:鮸鱼(Michthys miiuy)是我国重要的出口鱼类品种,在广东、浙江等地产量丰富。鱼类由于富含蛋白质与氨基酸,在内源性及微生物源酶的作用下,会发生氨基酸脱羧反应而产生大量生物胺,从而影响水产品质量。本文通过分析鮸鱼背部肌肉中不同位置的生物胺含量差异,检测生物胺产生过程中的各项生化指标的变化,探索生物胺产生的外源性机制。同时,分离鉴定产生物胺菌,分析其产胺能力,探究茶多酚与壳聚糖复配液对生物胺产生的抑制效果和对品质指标的影响,为水产品中的生物胺产生机制的深入研究和生物胺控制技术的进一步开发提供依据。本文主要研究结果如下:
  (1)运用高效液相色谱-丹磺酰氯柱后衍生-紫外检测法检测了鮸鱼肌肉外、中、内层的生物胺含量,发现样品外层的生物胺含量明显高于中层和内层。25℃下,样品外层腐胺、尸胺、组胺、酪胺含量为1796±023 mg/kg、33.60±083mg/kg、39.69±0.68 mg/kg、5.57±0.07 mg/kg;4℃下则依次为30.00±0.64 mg/kg、27.89±1.03 mg/kg、42.33±1.63 mg/kg、8.01±0.40 mg/kg。
  (2)分析了鮸鱼在贮藏过程中的pH、水分含量、挥发性盐基氮和菌落总数的变化。结果可得:鮸鱼的水分含量稳定在78%至80%。pH、挥发性盐基氮和菌落总数、生物胺的含量均随着贮藏时间的增加而增大。
  (3)运用生物胺筛选培养基对样品中的产胺菌进行了初筛,最终分离了10株菌株;运用高效液相色谱对分离菌株的代谢产物进行生物胺测定,最终得到这10株菌株中有4株可产生腐胺,8株可产生尸胺,7株可产生组胺,3株可产生酪胺。
  (4)运用PCR扩增技术,对产生物胺菌进行了基因鉴定,最终鉴定其分别为:雷氏普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)、摩氏摩根氏菌(Morganellamorganii)、普通变形杆菌(Proteus vulgaris)、液化沙雷氏菌(Serratia hquefaciens)、双壳气单胞菌(Aeromonas bivalvium)、变形斑沙雷菌(Serratia proteamaculans)、费氏耶耳森氏菌(Yersinia frederiksenii)、乡间布丘氏菌(Buttiauxella agrestis)、杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)和苯丙酮酸冷杆菌(Psychrobacterphenylpyruvicus)。
  (5)采用正交实验研究出茶多酚与壳聚糖浓度分别为3 g/L和10 g/L,对鱼体浸泡8 min是一种有效的生物胺控制技术。25℃下,四类生物胺的总含量由93.68±1.60 mg/kg降为48.48±0.33 mg/kg;4℃时,生物胺总量则从113.71±0.90mg/kg降为51.35±0.72 mg/kg。运用此技术可影响鮸鱼的鲜度指标从而延长货架期。25℃下,鮸鱼货架期由原先的18~24 h增加为30~36 h,4℃下由9~12 d增加为15~18 d。
[硕士论文] 徐子涵
食品科学 浙江大学 2018(学位年度)
摘要:鲜活水产品口感细嫩而有弹性,味道鲜美,安全性高,营养价值高,在水产品市场中占据了重要的份额。虾养殖的地域性和气候性比较明显,保活运输是活虾广泛供应和销售的基本保证。无水保活运输效率较高,对水产养殖和市场供应具有重要意义。本文对南美白对虾(Penaeus vannamei)进行模拟无水保活运输,将活虾捕捞后在常温充氧海水中暂养6h,13℃水中冷击3min,充纯氧包装,15℃模拟运输12h,运输结束后在常温充氧的水中复活,探究了虾在无水低温胁迫环境中发生的氧化应激和抗氧化反应、免疫反应、糖代谢及相关神经内分泌反应,并在理论研究的基础上设计了无水保活运输技术装置。主要研究结果如下:
  1.通过测定南美白对虾在无水低温胁迫过程中的存活率、观察肝胰脏细胞超微结构、测定血淋巴和肝胰脏中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)、抗超氧阴离子自由(ASAFR)等抗氧化物质活性、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)等氧化产物及CAT、GSH-Px基因表达的变化情况,研究了虾在无水胁迫中的氧化应激和抗氧化反应。结果表明运输12h后南美白对虾的存活率仍高达86.67%,虾肝胰脏细胞内部结构完好,虽有核膜轻微水肿、内质网扩张、微绒毛排列紊乱等现象出现,复水后细胞形态与组成并未发生太大改变。SOD、POD、CAT、GSH-Px、T-AOC活性和CAT、GSH-Px基因表达水平均在冷击后呈现上升趋势,并在胁迫3-6h达到峰值。复水后的虾与处理前新鲜虾相比,SOD、POD、GSH-Px、T-AOC的活性、MDA的含量以及CAT、GSH-Px基因的表达量均未发现显著性差异(P≥0.05)。MDA具有组织特异性,肝脏比血液具备更强的敏感性和解毒防御能力。无水保活胁迫过程引起了虾明显的氧化应激及抗氧化反应,但未导致无法恢复的损害。
  2.通过测定南美白对虾在无水低温胁迫过程中血细胞总数(THC)、观察血细胞超微结构、测定血淋巴中酚氧化酶(PO)、溶菌酶(Lys)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)的活性、谷氨酰胺(Gln)的含量以及酚氧化酶原(ProPO)、β-1,3-葡聚糖结合蛋白(LGBP)、铁蛋白(FcFer)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的基因表达量,研究虾在无水低温胁迫中的免疫反应。结果表明无水低温胁迫过程能够激活南美白对虾的免疫系统,PO、Lys、GGT的活性、Gln的含量以及ProPO、LGBP、Fer和GRP78的基因表达水平在胁迫前期均显著升高以应对无水胁迫环境对南美白对虾机体的刺激,减少胁迫应激对虾的伤害。胁迫3-9h,免疫反应较为强烈,免疫酶活性峰值先后在此时期出现。胁迫9h后,无水运输环境可能对虾的免疫系统产生损害,导致相关免疫酶和基因表达出现下降。将复水后的结果与处理前新鲜值结果比较发现,除THC、proPO、FcFer及LGBP的基因表达水平在胁迫后显著降低外,其他指标未见显著性差异(P≥0.05)。血细胞微观结构依旧完整,仅部分细胞器和核膜形态发生了改变。因而12h的无水低温胁迫会影响南美白对虾免疫系统的效率与功能,但未造成永久性损害。
  3.通过测定南美白对虾在无水低温胁迫的过程中血淋巴中葡萄糖(Glu)和乳酸(LD)含量,乳酸脱氢酶(LDH)、己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PK)的活力以及高血糖激素CHH水平及其基因表达的变化情况,研究了虾糖代谢及相关神经内分泌反应情况。结果表明无水低温胁迫能够引起南美白对虾的糖代谢和神经内分泌系统反应,Glu、CHH活性及CHH基因表达水平在冷击后迅速上升,激素水平对无水胁迫应激胁迫的比较敏感,进而引起糖代谢的改变,胁迫后期随着体内能量的消耗及应激适应性,含量下降并趋于稳定。随着无水低温胁迫的进行,LD含量、LDH、HK、PK、PFK活性均在3h后显著上升并在6h达到峰值,之后下降至稳定水平。3-6h无氧代谢强度增加并达到较高水平,随后的胁迫可能引起代谢系统损伤以及对胁迫的适应性,导致相关酶活性降低。复水后,除LD含量、LDH活性有所恢复但仍显著高于处理前水平、Glu含量显著低于处理前含量(P<0.05)外,HK、PFK、PK这些糖代谢酶的活性、CHH活性及其基因表达水平与处理前无显著性差异(P≥0.05),短期复水仍不能完全消除无水保活运输的无氧代谢影响及能量损失,但无水低温胁迫过程对南美白对虾的糖代谢及神经内分泌系统的影响具有可恢复性。
  4.根据无水保活运输的技术需求,设计了南美白对虾无水保活运输的重要装置,包括“一种捕捉运输通用型虾笼结构”(专利申请号:CN201610969903.X,公开号:CN106561584A)、“一种简易鱼虾保活运输箱”(专利申请号:CN201610963056.6,公开号:CN106561534A)和“一种鱼虾无水保活运输箱”(专利申请号:CN201610961468.6,公开号:CN106561533A)。捕捉运输通用型虾笼能够克服现有技术中虾捕捉后需要反复更换容器、导致虾体损伤、降低虾存活率的不足,布局合理、结构紧凑,捕捉后的虾可直接运输,无需更换容器,取虾方便且不易造成虾体损伤。简易鱼虾保活运输箱结构简单,能够提供无水保活运输过程所需的温度、氧气、湿度等环境条件,且其中的蓄冷腔利用冰融化吸热的原理进行降温,可以反复使用、绿色环保。鱼虾无水保活运输箱能够为虾提供高氧、湿润的运输环境,且可串联使用实现大规模运输。这些技术装备能够满足虾在无水保活运输过程中所需的环境条件,减少应激损伤,提高运输效率,为虾的无水保活运输实践提供重要支持。
[硕士论文] 向迎春
食品安全与营养 浙江大学 2018(学位年度)
摘要:中国对虾是中国重要的渔业经济产物,因其肉质鲜嫩味美,高蛋白低脂肪的白肉特性深受广大消费者喜爱。但其特殊的生存环境及高水分的生理特性给捕捞后的对虾带来极大负面影响。本文以中国对虾为研究对象,探究超声辅助冻结对虾的最优参数,对比超声辅助冻结、浸渍冻结及冰箱冻结过程中组织冰晶变化与水分变化间的关系,不同冻结方式处理后贮藏过程中组织冰晶变化与品质变化的影响。主要研究结果如下:
  1.不同的超声参数对超声辅助冻结中国对虾影响较大。单因素结果表明,在虾体温度为0℃、功率为270W、作用时长为5s on/3s off条件下,超声通过最大冰晶生成带时间最短。通过单因素试验得到三种条件下的三中间值,以通过最大冰晶生成带所需时间为响应值,经过响应面优化设计分析结果,最优的冻结参数为:超声作用温度-0.13℃,超声功率191.97W,超声作用时间4.92s on/3s off,在最优超声参数条件下得到通过最大冰晶生成带的预测值为101.541s。经进一步实验验证通过最优超声参数辅助冻结中国对虾,最大冰晶生成带通过时间为106.000s,相对误差为2.99%,为超声辅助冻结中国对虾实际应用提供理论参考。经过最优超声冻结与非超声浸渍冻结后中国对虾的组织切片对比发现,超声冻结的中国对虾组织冰晶孔洞细小,明显优于非超声浸渍冻结。
  2.采用超声辅助、乙醇浸渍、冰箱三种不同的冻结方式对新鲜中国对虾进行冻结,对冻结过程中不同时间点的冰晶形成与水分变化进行比较。研究结果表明,超声冻结只需130s通过最大冰晶生成带,通过速率远远快于浸渍及冰箱冻结;其中超声冻结组的组织破坏程度最小,其组织冰晶直径达到最小值46.81μm;此外,与浸渍或冰箱冻结相比,超声处理组持水性高达7.19%~19.50%,失水率低至1.30%~2.38%;pearson分析表明三种冻结方式下对虾冰晶面积与其水分变化呈极显著相关,超声冻结下冰晶圆度与水分显著相关,但冰箱及浸渍冻结下冰晶的圆度与水分变化相关性不明显。
  3.样品虾经过不同冻结方式处理后冻藏,随着冻藏时间的延长,组织冰晶逐渐增大,TVB-N值不断升高。在冻藏60d时,超声组、浸渍组、冰箱组的TVB-N值均小于25.000mg/100g,属于一级品,但TVB-N值超声组<浸渍组<冰箱组。同时,盐溶性蛋白含量呈现逐渐下降趋势,超声冻结组在贮藏60d时,盐溶性蛋白的保存优于浸渍冻结20d,优于冰箱冻结35d以上。而Ca2+-ATPase活性随着贮藏时间逐渐升高,在15d时达到最大值,之后逐渐降低。浸渍组与超声组下降相对缓慢,在60d时Ca2+-ATPase活性相当。不同处理组在冻藏初期TBA值相当,其后随着贮藏时间不断增大,在到达60d时,冰箱冻结组TBA值明显高于超声组与浸渍组,超声组TBA值略小于浸渍组。在冻藏期间,各处理组pH值不断降低,由最初的中性下降到pH值为6.42~6.57,超声组>浸渍组>冰箱组。随着冻藏时间的延长,持水性也不断减弱,当贮藏60d时,超声组持水性较最初下降了24.5%,而冰箱冻结下降了约41.9%。经过不同冻结方式处理后冻藏虾的样品感官评价,随着冻藏时间的延长,超声组略有下降,浸渍组其次,冰箱组在60d时下降到6.43。
[硕士论文] 李慢
食品工程 浙江大学 2018(学位年度)
摘要:随着冷链技术的发展,冷冻原料在水产品二次加工中所占的比例越来越高,解冻作为冷冻原料二次加工前的必经步骤,对冷冻原料的品质有着极为重要的影响。超声技术在食品工业中的应用较广,大多集中在提取、杀菌等,超声辅助解冻作为一种新型解冻技术在水产品解冻中的应用逐渐引起关注。中国对虾肉质鲜嫩、味美、营养丰富,通常以冻品形式贮藏、流通和销售,针对冻藏期间中国对虾品质变化的研究报道较多,但尚未有关于超声辅助解冻对其品质影响的系统研究。因此选择中国对虾为研究对象,通过超声辅助解冻、静水解冻、自然空气解冻以及低温解冻的对比研究,探究了超声辅助解冻技术对中国对虾理化性质以及蛋白质结构与功能的影响,并建立和优化解冻方法。主要研究内容和结论如下:
  (1)通过比较不同解冻方式对中国对虾理化性质、感官特性以及解冻速率的影响,发现:超声辅助解冻对虾的肌肉色泽与新鲜对照样品无显著差异(p>0.05),与其他三组解冻样品相比,TBARS值与pH值较低;经空气解冻,样品脂肪氧化程度较严重(p<0.05),色泽劣变;低温解冻样品色泽、持水性较好。SEM结果显示超声辅助解冻处理后虾肉细胞间隙较小,说明超声处理对肌纤维结构的破坏程度低;静水解冻后肌纤维细胞间隙有一定程度的增大;低温解冻对肌纤维结构破坏最小。四种解冻方式处理对虾肉质构特性的影响没有显著差异,但与新鲜对照相比,硬度、弹性等均有一定程度的下降。超声辅助解冻样品的感官评价(色泽、形态等)优于其他对照组,且解冻后冷藏24h仍能较好地保持其感官特性。比较四种解冻方式的解冻速率,其中超声辅助解冻最快,完成解冻过程耗时4.3min,能迅速地通过最大冰晶生成带区域,其次是静水解冻,耗时8.5min,空气解冻耗时60.6min,低温解冻最慢,需154.7min。综合而言,超声辅助解冻对中国对虾理化性质、感官特性破坏较小且是一种高效的解冻方式。
  (2)通过比较中国对虾在不同解冻方式处理后肌肉蛋白空间结构与功能特性的变化,发现:空气解冻后虾肉羰基含量最高,达到2.70nmol/mg(p<0.05),巯基含量、蛋白溶解性降低,蛋白质氧化较严重;与其他三种解冻方式相比,超声辅助解冻后虾肉的巯基含量保持着较高的水平(p<0.05),低温解冻后表面疏水性较低(p<0.05),这两种解冻方式有效地降低了蛋白质的变性程度。超声辅助解冻后肌肉的热稳定性较新鲜样品发生轻微下降,静水解冻后其肌动蛋白的变性焓值显著下降约40%,肌肉热稳定性变差。最大荧光吸收波长没有发生改变,但荧光强度均显著增加,解冻处理对蛋白质的三级结构有一定的影响。SDS-PAGE电泳图谱显示,解冻处理对肌球蛋白重链和肌动蛋白没有明显的影响,但超声辅助解冻和低温解冻后,分子量为70kDa~100kDa处的蛋白条带颜色轻微变浅或加深,蛋白片段发生一定程度的降解和交联。由此可见,超声辅助解冻能有效降低蛋白质功能特性的劣变,但对蛋白质的结构略有影响。
  (3)建立超声辅助解冻的解冻模型模拟解冻过程,为预测解冻过程以及优化解冻工艺提供理论依据。采用有限元分析法建立热传导-压力声场的多物理场耦合模型,分析超声辅助解冻中国对虾过程中温度分布随时间变化的规律。实验结果显示超声辅助解冻的RMSE值为0.9433,温度偏差最大为1.6℃;静水解冻作为对照组,RMSE值为0.9077,温度偏差最大为1.3℃。模拟值和实验值数值相差较小,该模型能有效模拟对虾解冻过程中温度随时间变化的趋势。同时,与静水解冻相比,超声辅助解冻的解冻时间缩短了35.9%;由温度分布图可见,肌肉截面的温度均高于对照组,可能是由于超声辅助解冻时对虾内部和外部同时吸热解冻,进一步证明超声辅助解冻是一种快速高效的解冻方式。
[硕士论文] 王丽平
食品工程 浙江大学 2018(学位年度)
摘要:本课题将β-环糊精(β-cyclodextrin,β-CD)与阿魏酸(Ferulic Acid,FA)以不同主客体比例(1∶0.5、1∶1和1∶2)通过共沉积法制备成包合物(即IC1∶0.5、IC1∶1和IC1∶2),并对其包合效果和结构进行鉴定分析;对抗菌、抗氧化等功能性质和体外释放行为进行研究;以带鱼(Trichiurus lepturus)为研究对象,对冷藏条件下的带鱼腐败菌进行分离鉴定,并研究阿魏酸-β-环糊精对主要腐败菌的抑制作用;利用包合物对带鱼贮藏前处理,通过一系列理化指标及感官评分对其实际保鲜应用效果进行评价。得到的结论如下:
  1、以共沉积法成功制备阿魏酸-β-环糊精包合物(Ferulic Acid-β-cyclodextrin,FA-β-CD),考察主客体比例对包合效果的影响,结果表明IC1∶0.5的包封率和载药率显著高于其他比例包合物。产物结构经差示热量扫描仪、傅里叶红外光谱、X射线衍射、扫描电镜等一系列分析手段表征,包合物成功合成。
  2、通过DPPH自由基清除、过氧化氢清除等试验及最小抑菌浓度测定对包合物进行性质分析,结果发现随着包合物中阿魏酸比例提高,其抗氧化性能随之增强;而抗菌活性与纯阿魏酸相比抑菌能力未被削弱。同时讨论多种体外释放pH环境中各组包合物的释放行为,以零级、一级、Higuchi和Ritger-Peppas动力学模型对阿魏酸释放曲线进行拟合,在pH2.2、7.4及8.4中,IC1∶0.5和IC1∶1以Higuchi模型为主,IC1∶2以Ritger-Peppas模型为主,而在去离子水中则都与Ritger-Peppas模型拟合程度较高。
  3、对冷藏条件下带鱼腐败菌进行分离鉴定并测序,确定带鱼主要腐败菌为:棕色类香味菌(Myroides phaeus)、摩氏摩根氏菌(Morganella morganii)、居泉沙雷菌(Serratia fonticola)和麦芽香肉杆菌(Carnobacterium maltaromaticum),包合物对麦芽香肉杆菌抑制效果最佳,同时随着包合物中阿魏酸比例的提高,对菌株抑制效果明显增强。
  4、将阿魏酸-β-环糊精应用于带鱼保鲜研究,考察其对冷藏期间带鱼品质变化的影响。结果发现包合物能减缓鱼肉pH值升高,显著降低鱼肉TVB-N值,延缓脂肪氧化作用(TBARS和POV),延长货架期。
[硕士论文] 冯杰
食品科学与工程 浙江工商大学 2018(学位年度)
摘要:大黄鱼蛋白含量丰富,水分含量高,在贮藏过程中极易发生腐败。生物胺是一类低分子含氮化合物,在微生物作用下,游离氨基酸在对应脱羧酶脱羧反应产生大量生物胺,而生物胺的过量积累对人体有毒害作用。在鱼类的腐败过程中,起主导作用的是一些特定腐败菌。经研究,冷藏大黄鱼中特定腐败菌是波罗的海希瓦氏菌。群体感应是一种细菌间交流传递信息的机制,许多细菌利用这一机制调控某些基因的表达达到致腐的效果。而通过抑制群体感应达到抑制食物腐败的研究也成为食品保鲜中的关注热点。因此,本文以大黄鱼为研究对象,研究贮藏过程中生物胺和其他品质指标的动态变化,进而选取大黄鱼特定腐败菌波罗的海希瓦氏菌,研究其培养过程中群体感应和生物胺的消长关系,最后研究了花色苷抑制希瓦氏菌群体感应系统及其腐败能力,主要结果如下:
  1.养殖大黄鱼贮藏在4℃、25℃下,测定生物胺、菌落总数以及三甲胺、pH、挥发性盐基氮等品质指标,并对生物胺与其他品质指标进行相关性分析,建立生物胺的线性回归方程。结果表明贮藏温度对养殖大黄鱼品质具有显著的影响,随着贮藏温度的升高,品质下降速度加快。25℃和4℃贮藏条件下,养殖大黄鱼菌落总数分别于18h和6d超出临界值,挥发性盐基氮分别于36h和10d超出临界值。研究发现腐胺和尸胺与其他品质指标均显著相关,通过SPSS回归分析,建立了相应的回归方程,两者关系紧密,相关系数R2分别为0.915和0.766,可用于描述养殖大黄鱼储藏过程中典型生物胺与其他品质之间的动态变化规律。利用多元线性回归方程建立腐胺和尸胺预测模型并验证。
  2.建立GC-MS同时定量分析两类信号分子(8种AHLs和4种DKPs)。通过质谱确定其特征离子,并确定方法的线性回归方程、检测限、定量限和回收率。选取6株波罗的海希瓦氏菌接入无菌鱼汁冷藏条件下摇床培养,通过GC-MS-SIM和HPLC定量分析生长过程信号分子和生物胺产生的动态变化,测得六株菌产生两类DKPs(cyclo-(L-Pro-L-Leu)和cyclo-(L-Pro-L-Phe))和两类生物胺(腐胺和尸胺)。且两类DKPS和腐胺含量均先增长至对数中后期,然后呈下降趋势,在第3天达到最高,呈现显著正相关。而尸胺含量先缓慢升高,当信号分子含量达到最高时,尸胺生成速度变快。
  3.探究花色苷对S.baltica群体感应及生物胺的影响,结果发现蓝莓和紫薯花色苷对S.baltica的最小抑菌浓度为2mg/mL和6mg/mL,分析在最小抑菌浓度范围内花色苷对S.baltica信号分子分泌、腐胺生成及鸟氨酸脱羧酶的影响,研究表明,1.5mg/mL和2mg/mL的蓝莓花色苷对cyclo-(L-Pro-L-Leu)的抑制率分别为35.1%和55.2%,对cyclo-(L-Pro-L-Phe)的抑制率分别为28.4%和49.1%,4mg/mL和6mg/mL的紫薯花色苷对cyclo-(L-Pro-L-Leu)的抑制率分别为23.3%和38.0%,对cyclo-(L-Pro-L-Phe)的抑制率分别为18.6%和31.8%,而花色苷对DKPs无降解作用。添加1、1.5和2mg/mL的蓝莓花色苷对腐胺含量的抑制为14.0%、36.1%和94.4%,添加4、6mg/mL的紫薯花色苷对腐胺含量的抑制为57.8%和64.5%。RT-qPCR实验确认花色苷能显著抑制鸟氨酸脱羧酶基因的表达,蓝莓花色苷的抑制率为23.2~88.1%,紫薯花色苷的抑制率为17.0~83.8%。
  本研究阐明了大黄鱼贮藏过程中生物胺的动态变化及波罗的海希瓦氏菌生长过程中信号分子与生物胺的关系,为大黄鱼贮藏过程中品质的预测提供了理论基础,筛选的花色苷可作为潜在的新型保鲜剂用于水产品的保鲜。
[硕士论文] 袁晓明
食品工程 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:淡水鱼因其蛋白质、水分含量高、肌肉pH接近中性,在贮藏、运输、加工处理及销售过程中极易腐败,这主要是因为鲜鱼本身所携带的微生物在鱼死亡后大规模生长,最终造成鱼肉的变质。本文以广州三种淡水鱼样品(鳊鱼、鲫鱼和罗非鱼(即“非洲鲫鱼”))为研究对象,分析淡水鱼在冷藏期间的品质变化,通过高通量测序探讨三种淡水鱼在新鲜点、鲜度终点和腐败点的菌相变化,研究淡水鱼所带低温腐败菌的腐败特性,为淡水鱼更好地防腐保鲜提供依据。主要试验方法和结果如下:
  1.采集广州地区鲫鱼、鳊鱼和罗非鱼三种鱼样品,通过pH和TVB-N、K值、微生物计数结合QIM分析,阐述了淡水鱼4℃冷藏过程中品质变化,结果表明:淡水鱼冷藏条件下pH和TVB-N、K值、微生物计数和QI分数随贮藏时间的延长显著增加(p<0.05),其中TVB-N、K值、微生物计数与感观分析呈极显著相关(p<0.01),pH与感官分析呈显著相关(p<0.05);从各项指标评估来看,三种淡水鱼中罗非鱼腐败最快,鳊鱼其次,鲫鱼最慢;鲫鱼在前8d保持较好的品质,鳊鱼和罗非鱼在前4d保持较好品质,三种淡水鱼贮藏12d时各指标均呈现腐败;
  2.对三种淡水鱼新鲜点、鲜度终点和腐败点取样进行高通量测序,通过质量过滤后获得574,357条优质序列,97%置信水平上,所有序列聚类得到24354个OTUs,其中新鲜点菌群比鲜度终点和腐败点菌群多样性更高;分类水平中共测得25个门,64个纲,111个目,379个属。五个主要的门为变形菌门、厚壁菌门、梭杆菌门、放线菌门和拟杆菌门;379个属分属于101个变形菌门,41个厚壁菌门,32个梭杆菌门,15个放线菌门和7个拟杆菌门;淡水鱼新鲜点优势菌属包括Pseudomonas(假单胞菌属)、Cetobacterium(鲸杆菌属)、Chryseobacterium(金黄色菌属)和Akkermansia(阿克曼氏菌);鲜度终点优势菌属包括Pseudomonas(假单胞菌属)、Cetobacterium(鲸杆菌属)和Lactococcus(乳球菌属);腐败点优势菌为Pseudomonas(假单胞菌属)、Carnobacterium(肉食杆菌属)和Lactococcus(乳球菌属);所以,在整个贮藏过程中,Pseudomonas(假单胞菌属)和Akkermansia(阿克曼氏菌)均为优势菌属,但Pseudomonas(假单胞菌属)不断增加,而Akkermansia(阿克曼氏菌)呈现相反趋势,此外,Cetobacterium(鲸杆菌属)、Chryseobacterium(金黄色菌属)和Lactococcus(乳球菌属)随着时间延长比重逐渐增加,Pseudomonas(假单胞菌属)和Akkermansia(阿克曼氏菌)被确定为冷藏淡水鱼的特征腐败菌;
  3.以广州三种淡水鱼为实验对象,进行筛选腐败菌株。所有的菌落形态都呈现圆形、整体隆起、边缘整齐、表面光滑并且有光泽的特征,大部分菌落呈不透明状态,颜色大致可分为乳白色、白色和黄色。革兰氏染色结果显示分离所得20株耐冷菌株中,G-菌16株,G+菌4株,菌体形状分为杆状、球状、球杆状三种。采用形态观察、生理生化分析和16S rDNA测序鉴定对20株耐冷菌株进行鉴定,结果表明,19株耐冷菌株主要为荧光假单胞菌、假单胞菌属、希瓦氏菌属、嗜冷杆菌。而假单胞菌所占比例最高为90%;
  4.通过模拟腐败实验来测定三株菌株的pH值、TVB-N值、生长曲线及蛋白浓度、几丁质酶活来进行比较,结果表明:在冷藏过程中TVB-N、生长曲线和几丁质酶活随冷藏时间的延长显著增加,而pH变化不大,蛋白浓度则随冷藏时间的延长而降低。其中在冷藏过程中假单胞菌的TVB-N和几丁质酶活的增加趋势大于另外两株菌株,而生长曲线正好相反;假单胞菌的蛋白浓度的降低趋势大于另外两株菌株。结合感官评价,假单胞菌的腐败能力明显大于另外两株菌株,可确定假单胞菌为优势腐败菌。
[硕士论文] 杨志坚
食品加工与安全 浙江大学 2017(学位年度)
摘要:本论文以梭子蟹为实验材料,采用液氮速冻、平板冷冻和冰柜冻结处理;以舌鳎为实验原料,采用液氮速冻和平板冷冻处理,然后将不同冷冻处理的样品存放于-18℃温度条件下。测定硫代巴比妥酸值TBA、鲜度挥发性盐基氮值TVBN、感官分值、盐溶性蛋白、pH值等理化指标及观察其肌肉的组织微观结构,分析舌鳎和梭子蟹冷冻贮藏过程的品质变化情况及内在原因。主要的研究内容和结论如下:
  (1)随着贮藏时间的增加,两种冻结方式(液氮冷冻和平板冷冻)冷冻的舌鳎样品TBA和TVBN值逐渐增加。平板冷冻的舌鳎样品TBA和TVB-N值增加的更快,液氮冷冻处理样品增加较慢,液氮冷冻的舌鳎贮藏105d后,TVB-N值为≤13mg/100g,TBA仅为0.29mg/100g,样品还处于一级鲜度,表明液氮速冻处理的舌鳎品质好,较平板冷冻能有效的延缓TVBN和TBA值的上升。可能是因为两种冷冻方法冷冻速率不同,平板冷冻舌鳎形成的冰晶大,对鱼肉细胞的造成的损伤大,增加了脂肪的氧化程度。
  (2)随着贮藏的时间延长,两种冻结方式处理下舌鳎的持水力、盐溶性蛋白、感官分数、Ca2+-ATPase酶等降低。平板冷冻样品下降的速度较快,液氮冷冻样品的下降缓慢,这表明快速冻结能有效延缓舌鳎品质的下降,可一定程度抑制舌鳎肌肉纤维蛋白的变性。
  (3)电镜结果表明:舌鳎肌原纤维经液氮冷冻后仍光滑整齐,这可能与舌鳎肉液氮冷冻后产生的冰晶细小,对鱼肉细胞的损伤小有关。
  (4)以pH值、K值、TVBN、TBA、感官评分、盐溶性蛋白等指标,研究了梭子蟹经液氮冷冻,平板冷冻、冰柜冷冻处理后于-18℃条件下贮藏,在180天内样品品质的变化。结果表明:pH值呈先降低后升高的趋势,冷冻温度越低,pH变化越慢。除了感官评分外,液氮冷冻样品的各指标低于其他两组,可以看出液氮冷冻能较好地保持样品品质,延长货架期。
  (5)采用不同超低温深冷速冻技术冷冻梭子蟹至中心温度为-40℃时仅需15-30min,并通过最大冰晶生成带仅需数分钟,速冻效率极高。将样品初温预冷至13℃左右,能有效降低梭子蟹的冷冻冻裂率。梭子蟹较为优化的速冻程序为:使液氮柜内温度2分钟降低至-20度,2分钟降低至-40度,最后3分钟再降低至-80度,保持直至速冻样品中心温度达-40℃,此处理的样品具有低的冻裂率,依然品质保持较好。
[硕士论文] 黄文博
食品科学与工程 上海海洋大学 2017(学位年度)
摘要:美国红鱼属高蛋白低脂肪鱼类,其呈味氨基酸百分含量与其他鱼类相比较高,味道鲜美,常被制成生鱼片。生食对鱼肉的鲜度品质有极高要求,因此,对美国红鱼品质保鲜技术进行研究,对延长红鱼货架期具有重要意义。本文主要从以下三个方面研究了关于美国红鱼的保鲜技术,首先是研究了冷藏过程中温度变化对美国红鱼的品质变化的影响,其次是用三种不同的保鲜方式(单一保鲜剂、复合保鲜剂、气调包装)处理美国红鱼,观察其在变温冷链中的品质变化,最后将优化后的保鲜方式结合,旨在研究不同保鲜技术对变温冷链中美国红鱼品质的控制,并找到一种能在变温冷藏条件下最大限度延长美国红鱼货架期的保鲜方法。论文研究的主要内容和结论如下:
  1、研究了4条不同冷藏物流过程中美国红鱼的品质变化。考虑到海产品现有冷链系统不够完善,存在温度波动的现象,研究了温度波动对美国红鱼品质变化的影响,实验模拟了4条不同的冷链物流过程,包括贮藏、运输、销售和家庭暂存多个环节,选择红鱼品质变化表征特性指标(白度、感官评价)、物理指标(汁液流失率)和生化指标(pH值、挥发性盐基氮(total volatile basic nitrogen, TVB-N)含量、2-硫代巴比妥酸(2-thiobarbituric acid,TBA)值、K值、水溶性蛋白电泳及菌落总数)进行分析。研究结果表明,在冷链物流过程中美国红鱼的品质随着时间的延长而产生劣变,在贮运过程末期温度波动较快的三组菌落总数均超过6.00 lg(CFU/g),温度波动较快的第4组在第9 d的K值为30.37%,较第1组的21.326%可证明温度波动加快了ATP的降解速率和蛋白质的分解速率,汁液流失率和碱性挥发性物质含量随之增加,造成红鱼的感官品质下降。在本次实验中TBA值变化较小,可忽略不计。由此得出,温度波动频率较大会加快蛋白质降解和微生物生长繁殖,破坏肌肉组织结构,对美国红鱼的品质造成显著的不良影响。
  2、研究了不同浓度的植酸对变温冷链中美国红鱼品质变化的影响。选择保鲜效果最差的变温冷链作为冷藏条件,选用植酸作为保鲜剂处理美国红鱼,研究不同浓度植酸对维持美国红鱼品质的保鲜效果,结果表明,植酸可以降低贮藏过程中美国红鱼的菌落总数和水溶性蛋白的降解速率,延缓pH的变化,维持良好的感官,在贮藏末期植酸处理组中最高的TVB-N含量仅为11.37 mg/100 g,K值结果显示植酸可将红鱼的可生食期限延长至少2 d。其中浓度为0.10%的植酸不仅抑菌效果显著(p<0.05)且感官也在可接受范围内,可作为变温冷链过程中美国红鱼的抑菌剂,但植酸与其他生物保鲜剂的复配应用需要进一步的研究。
  3、研究了经响应面法优化后的复合保鲜剂对变温冷链中美国红鱼品质变化的影响。为了延长在变温贮运过程中美国红鱼的货架期,在单因素实验结果的基础上,用Box-Behnken进行实验设计和响应面分析植酸、异抗坏血酸钠和茶树精油组成的复合保鲜剂处理美国红鱼鱼片的保鲜效果,设计构建二次回归模型,得到复合保鲜剂的最优复配方案为植酸0.10%(v/v),异抗坏血酸钠0.46%(m/v),茶树精油0.35%(v/v),并对此复配方案进行验证实验,模拟变温冷链物流贮运过程,通过对菌落总数,感官评价、pH值、TVB-N、K值、水分活度、白度等理化指标进行测定,结果表明,植酸和异抗坏血酸钠有显著的协同作用(p<0.01),处理组保鲜效果优于对照组,复合保鲜剂最优复配方案效果显著。
  4、研究了不同浓度气调包装对变温冷链中美国红鱼品质变化的影响。将CO2和 N2作为填充气体利用气调包装处理美国红鱼,对其进行微生物指标、物理指标、化学指标的测定和感官评分,结果表明,气调包装可以有效抑制鱼肉受到温度波动的影响而导致的菌落总数的增加,延缓蛋白质的降解速率,保持白度、pH值和水分活度的稳定,提高了相同贮藏时间内鱼肉的硬度、弹性、咀嚼度和感官评分。空气和不同比例气调包装对美国红鱼品质的保鲜效果好坏依次为:A组(70%CO2、30%N2)>B组(60%CO2、40%N2)>C组(50%CO2、50%N2)>CK(空气组)。在相同的温度波动条件下,高浓度CO2的气调包装方式更能够延长更久的美国红鱼货架期。但气调包装与生物保鲜剂相比,对蛋白质变性影响较小,且对白度、水分活度的保持效果较差,因此,在下一步的研究中将结合两种保鲜方式,进一步完善冷链物流中对美国红鱼品质变化的控制。
  5、研究了复合保鲜剂与气调包装结合所得保鲜技术对变温冷链中美国红鱼品质变化的影响。由植酸、茶树精油及异抗坏血酸钠复配得到的复合生物保鲜剂与 CO2、N2气调包装结合,评价此复合保鲜技术处理对美国红鱼在变温冷链中品值变化影响。结果表示,复合保鲜技术其协同作用可以抑制微生物的生长,使美国红鱼的菌落总数延缓8 d达到6.4 lg(CFU/g),白度和TVB-N含量较对照组上升趋势缓慢,水分活度、质构等指标显著优于对照组(p<0.05)。通过感官分析,发现该复合保鲜技术可以维持鱼肉较好的感官品质,但在初期会伴随生物保鲜剂特有地香味。综合微生物指标和各类鲜度指标,利用该复合保鲜技术可以延长变温冷链物流中美国红鱼的货架期至14 d(3~5 d及以上),成本约增加8.26元/kg,成本低廉,有广阔的应用前景和实际的现实意义。
[硕士论文] 张雪梅
水产品加工及贮藏工程 广东海洋大学 2017(学位年度)
摘要:单增李斯特菌(LM)是世界公认的四大食源性病原菌之一,该菌不仅对营养要求不高,且生长温度范围较广(0.4~50℃),-20℃下能存活一年,并且在低温等不良环境条件下仍可刺激被膜、毒素等危害因子的产生。本课题通过低温水产品中LM的分离鉴定,对其产生危害的因子进行检测分析,并建立了低温条件下的生长预测模型,最后通过静电纺丝技术处理传统的细菌素CAMT2制备细菌素复合纤维,并在低温条件下检测其在凡纳滨对虾,罗非鱼以及花蛤基质中对LM的控制效应。研究结果如下:
  (1)单增李斯特菌的分离鉴定:采用传统的分离方法,并结合形态学、生化反应、双重PCR技术以及16S rRNA鉴定技术,对湛江市售低温水产品中的LM进行分离、筛选与鉴定。测不同温度盐度及pH对其生长的影响,然后检测37℃下被膜和溶血活性的形成情况。结果从新鲜的白鲢鱼、半成品梅香鱼干、散装香辣银鱼中各分离得到一株单增李斯特菌。结果表明分离菌株,最适温度是35~37℃,但在低温下也有生长;最适盐度为1.5%~3.5%之间,最适pH为中性和弱碱性,菌膜和溶血活性在37℃下都较强。但标准菌株ATCC19111的生长情况都比分离菌株相对较好,说明其耐受性强,适应范围广。
  (2)不同水产品基质中LM的危害分析:本研究以LM的数量、溶血毒素和被膜作为危害评价指标,对凡纳滨对虾(Litopenaeus Vannamei)、罗非鱼(Oreochromis mossambicus)、花蛤(Venerupis philippinarum)三种不同基质的水产品进行低温贮藏的生长规律及危害进行分析与评价。结果表明,LM在花蛤基质中最容易形成菌膜,且溶血活性(LLO)花蛤基质中持续时间长达12 d,溶血毒素最强。
  (3)低温条件下不同基质中LM生长预测模型的建立:本研究建立了低温条件下三种水产基质中的生长预测模型,初级模型用修正Logistic、Gompertz、Weibull和Hill模型,二级模型用修正Dave方程、Arrhenius方程和Ratkowsky平方根模型进行拟合。对虾基质中最优一级模型是修正Gompertz,罗非鱼和花蛤基质中最优一级模型为修正 Logistic模型,其拟合系数 R2均大于0.98,且标准差 S均小于0.0085。二级模型中,凡纳滨对虾、罗非鱼和花蛤基质中最大比生长速率与温度的关系都符合Arrhenius方程,R2分别为0.9687,0.9507,0.9756。迟滞期与温度的关系,在罗非鱼基质中采用修正Dave方程拟合,凡纳滨对虾和花蛤基质中采用Ratkowsky平方根模型拟合,对应的R2依次为0.9826,0.9618,0.9590。预测模型验证结果,残差分析均在±0.01之间,准确因子Af及偏差因子Bf均在可接受范围内,表明本研究所建立的生长预测模型均有效,可以为-20~6℃下3种水产基质中LM的生长预测提供理论依据。
  (4)细菌素复合纤维对LM控制效应:通过静电纺丝技术对解淀粉芽孢杆菌细菌素CAMT2进行处理,得到新型细菌素复合纤维,其抑菌和缓释作用进行检测,然后使用扫描电镜和傅里叶红外检测其形态结构。结果表明细菌素浓度为0.20 mg/mL时的抑菌活性最高,抑菌圈直径为23.82±0.20 mm。傅里叶红外以及扫描电镜对其结构形态进行初步分析,结果表明复合纤维结构主要呈现排列不规则的多孔结构。当在4℃下将复合纤维膜材料置于不同基质中检测期对LM的抑制作用结果表明,复合纤维膜材料在罗非鱼基质中作用效果最明显。
[硕士论文] 杨钰
海洋生物学 大连海洋大学 2017(学位年度)
摘要:本研究选取旅顺自然群体,长岛、海洋岛、獐子岛底播群体以及人工选育“獐子岛红”品种养殖群体,对比原产地日本青森县陆奥湾自然群体,运用稳定同位素技术,分析虾夷扇贝中国群体同日本原产地群体间的生理状态、生活环境及摄食习性是否存在差异,并确定其群体结构,以推断虾夷扇贝群体间的相互关系。结果显示,虾夷扇贝各群体的闭壳肌δ13C值范围为-22.26‰~-19.87‰,平均值为-20.47‰,内脏团的δ13C值范围为-25.96‰~-17.86‰,平均值为-24.13‰;闭壳肌的δ15N值范围为5.19‰~9.99‰,平均值为8.52‰,内脏团的δ15N值范围为6.15‰~7.87‰,平均值为7.26‰;基于δ13C值和δ15N值的单因素方差分析显示,经SNK检测,在0.05的显著性水平下,各个取样点闭壳肌和内脏团的碳氮稳定同位素比值具有明显差异;ANOVA分析表明,群体间稳定性同位素比值的差异其主要因素是地理位置的不同所导致的,地理因素的主效应性显著(P<0.05);构建所有群体的碳氮稳定性同位素散点分布图,基于地理位置为依托进行分析,可以明显地将中国群体和日本群体区分开来。对于中国8个虾夷扇贝群体而言,长岛群体的碳、氮稳定同位素比值均明显低于其余群体,而獐子岛3个群体、海洋岛养殖群体、“獐子红”人工选育品种养殖群体以及旅顺自然群体在稳定性同位素比值上并未体现出明显的差异。综上所述,虾夷扇贝中国群体与日本群体间稳定同位素比值已经存在较大的差异,而中国群体则因生长海域、水文环境的不同呈现出分群现象,说明虾夷扇贝定居群体面对不同的生态环境,已产生了不同程度的适应性改变。
  参考六十年代、八十年代、九十年代及近些年北黄海海域水文环境、理化因子及生物资源的调查信息及文献,整理数据并分析北黄海水域生态环境及生物资源的年际变化,同时结合北黄海进行大规模底播扇贝养殖的情况进行综合分析,发现北黄海海域的水文环境未发生较大改变,浮游植物的生物量呈下降趋势,浮游动物的数量呈波动状态。
[硕士论文] 马超锋
食品科学与工程 广东海洋大学 2017(学位年度)
摘要:我国盛产罗非鱼,但加工方式单一,以整鱼冻藏、冻罗非鱼片居多。在存储期间,有害菌污染、内源酶活动等负作用常会导致罗非鱼产品脂肪氧化和蛋白质变性,严重影响食用质量。气调包装通过调节食物储藏的气体环境,抑制微生物滋生和减缓脂质酶促反应,并以此来提高货架期。可食性膜是一种具有较高力学性能和选择透过性薄膜,主要依靠防止产品贮藏过程中气体、风味成分等的转移来保持产品的品质。它是以特定生物物质作为基质,同时搭载增塑剂、抑菌剂、抗氧化剂、抗冻剂、防腐剂等,以此来减缓水产品冻藏过程中蛋白质变性、干耗、脂肪氧化等不良反应,从而更好地保持水产品的品质,满足人们对营养物质的需求。本文以罗非鱼为试验对象,通过气调包装和可食性涂膜来改善冻藏罗非鱼片的品质,具体结论如下:
  1.以硬度、Ca2+-ATPase活性、白度值、TVB-N值、TBA值、持水力为指标,研究了镀冰衣对冻罗非鱼片品质的影响。结果表明,随着冻藏时间的延长,冻罗非鱼片硬度、Ca2+-ATPase活性、白度值、持水性都呈下降趋势,前30 d内下降最为明显。除持水性变化不明显外,其它3个指标水平显著高于对照组。罗非鱼片TVB-N值、TBA值随冻藏时间的延长而不断增大,且镀冰衣组TVB-N值、TBA水平显著低于对照组(p<0.01)。冻藏90 d时,镀冰衣组TVB-N值为18.11 mg/100g,低于对照组的19.32 mg/100g,贮藏期内两组样品TVB-N值均未超过安全界限20.00 mg/100g。在冻藏75 d和60 d时,对照组和镀冰衣组TBA值达到最大,为2.883 mgMDA/kg、1.856 mg MDA/kg,之后均出现下降。
  2.以硬度、pH、TVB-N值、TBA值、Ca2+-ATPase活性、弛豫时间T2为指标,研究了气调包装对冻罗非鱼片品质的影响。结果表明,罗非鱼片硬度、Ca2+-ATPase活性呈下降趋势,TVB-N值、TBA值呈升高趋势。真空包装组罗非鱼片以上指标,都显著优于氮气组和对照组。冻藏期内,罗非鱼片 pH先下降后上升,真空包装组罗非鱼片升高速率最为缓慢,一直处于较优水平。对照组冻藏60 d时,TVB-N值超过国家安全标准水平,为变质肉,不宜食用。冻藏105 d时,真空包装组罗非鱼片TBA值才达到峰值,TVB-N水平超过安全标准20mg/100g,有效延长货架期至少45 d。LF-NMR分析表明,冻藏罗非鱼肌肉中有3种不同状态的水分,分别为结合水(T20)、不易流动水(T21)、自由水(T22)。随着冻藏时间的延长,罗非鱼片弛豫时间 T21、T22不断减小,以真空包装组罗非鱼片下降最快。与之对应的A21也显著高于其它两组。
  3.通过单因素实验结果,利用 L9(34)正交实验,确定了罗非鱼片最佳复合涂膜工艺。结果为:单因素实验中,海藻酸钠最佳浓度为0.2%~0.6%,氯化钙胶化时间为2~10 min,壳聚糖最佳浓度为0.1%~0.5%。正交实验表明,冻罗非鱼片最佳复合涂膜工艺为海藻酸钠0.2%、氯化钙胶化5min,壳聚糖0.1%。
  4.以真空包装+复合涂膜液和复合涂膜液对罗非鱼片进行处理,研究其对冻藏罗非鱼片品质的影响,并以未处理罗非鱼片作为对照组。结果表明,各处理组罗非鱼片Ca2+-ATPase活性、硬度、白度值、持水力在贮藏期内呈下降趋势, TBA值、TVB-N值变化呈上升趋势。冻藏90 d时,对照组TVB-N值升至20.44 mg/100g,超过安全阈值20.00 mg/100g,而复合涂膜组、真空包装+复合涂膜组罗非鱼片TVB-N值分别为18.57、18.29 mg/100g,仍保持一定的鲜度。真空包装+复合涂膜组罗非鱼片各项理化指标均显著优于对照组,但与复合涂膜组差别不大。
  5.以冻罗非鱼片为研究对象,研究了壳聚糖涂膜对其玻璃化转变温度(Tg)和微观结构的影响。结果表明,低温条件下,不同处理罗非鱼片微观结构较鲜鱼片都受到不同程度的影响。其中,0.1%壳聚糖溶液对罗非鱼片微观结构保护最好,0.3%壳聚糖次之,0.7%壳聚糖最差。Tg分析表明,添加壳聚糖可升高罗非鱼片的Tg,且升高幅度随壳聚糖浓度的增大先增大后降低,有利于罗非鱼片贮藏稳定性的提高,与电镜扫描结果基本一致。
[硕士论文] 李敏
水产养殖 上海海洋大学 2017(学位年度)
摘要:本论文通过研究水体中悬浮颗粒物、干露及静水压力对虾夷扇贝的影响,进而为虾夷扇贝底播区的选择及养殖容纳量的评估提供理论指导,促进虾夷扇贝底播增殖的持续健康发展。本研究以虾夷扇贝为实验材料,在对獐子岛养殖海域的悬浮颗粒物及环境参数调查的基础上,结合室内受控实验,重点研究了悬浮颗粒物对虾夷扇贝摄食生理的影响以及稚贝的致死效应和免疫酶活性的影响,并针对在虾夷扇贝底播增殖过程中出现的问题,探讨了静水压力对其摄食、呼吸、排泄的影响、干露对虾夷扇贝稚贝的致死效应。主要研究结果如下:
  1、獐子岛邻近海域悬浮颗粒物的时空分布特性。
  (1)獐子岛海域TPM和POM的浓度(mg/L)变化范围分别为:16.76-97.54和2.20-17.20,年平均浓度(mg/L)分别为:31.65±9.58和6.97±2.08。PCOM值的变化范围为:8.69%-37.09%,平均值为22.25±4.18%。
  (2)TPM浓度的季节变化趋势为:秋季>春季>夏季>冬季,最大值出现在秋季表层。而POM和PCOM的最高值出现在夏季,冬季的值最低。
  (3)POM与TPM的平面分布趋势相似,大部分海域的平面分布比较均匀。春夏季POM的分布呈现出中部略高、四周略低的特点,秋冬季与之相反;夏季底层显著高于表层(P<0.01),其它季节表底层无显著差异(P>0.05)。
  (4)4个季节中,獐子岛海域的POM与叶绿素a(chl a)的含量呈极显著正相关关系(P<0.01)。其中,春季底层和夏季表层的POM与chl a均存在极显著正相关关系(P<0.01);只有夏季表层POM与盐度之间存在显著负相关关系(P<0.05),说明夏季陆源输入对该海域的悬浮颗粒有机物有显著影响。
  2、悬浮颗粒物对虾夷扇贝摄食生理的影响。
  (1)通过实验生态学方法,研究了不同浓度的悬浮颗粒物对虾夷扇贝的滤水率、吸收效率以及摄食率的影响。结果显示,虾夷扇贝的滤水率和摄食率随悬浮颗粒物浓度的增加呈现出先增加后减小的趋势,TPM为53.01±6.81 mg/L时,滤水率达最大值(0.82 L/g/h);吸收效率随着TPM浓度的增大而减小,TPM为622.9±14.13mg/L时,吸收效率出现负值;TPM超过262±3.36 mg/L时,对虾夷扇贝的摄食率有显著性抑制作用。
  (2)悬浮颗粒物对中规格虾夷扇贝的摄食选择性的研究表明,悬浮颗粒物的浓度影响虾夷扇贝对不同粒径颗粒的滤除率;有效滤除效率随着颗粒物粒径的增大而增大,在自然海水中虾夷扇贝能够完全滤除粒径3.84μm左右的颗粒物质。随着水体中底泥沉积物的增加(主要增加了1.4-2μm范围内的颗粒物质),虾夷扇贝对不同粒径颗粒的滤除率随颗粒粒径的增大而呈现上升的趋势,在4-5μm处较平稳。较高浓度组的虾夷扇贝对2-4μm的颗粒滤除率略高于中浓度组。
  3、悬浮颗粒物和干露对虾夷扇贝稚贝的致死效应及抗氧化酶活性的影响。
  结果表明:
  (1)在12d的实验过程中,悬浮颗粒物对虾夷扇贝的稚贝具有慢性致死作用。自实验第7d后,高浓度组与低浓度组的死亡率出现显著性差异(P<0.01),随着悬浮颗粒物浓度的不断增加、实验时间延长,虾夷扇贝稚贝的死亡率不断增加。
  (2)于实验第1d、4d、8d、12d,清水恢复2d时取虾夷扇贝的鳃和内脏团组织,测定悬浮颗粒物对其谷胱甘肽过氧化物酶(GP x)和谷胱甘肽硫转移酶(GST)的影响。结果显示,鳃和内脏团中GP x、GST酶活性随悬浮颗粒物浓度的升高、暴露时间的延长均呈现出先升高后下降的趋势。
  (3)在10℃和20℃温度下,虾夷扇贝稚贝在两种湿度条件(干燥组和湿润组)下对干露耐受力的研究表明:10℃干露8h后,两种条件下稚贝的成活率均为100%;干露24h后,湿润组成活率为50%,干燥组的成活率降为16.67%。20℃干露8h后,湿润组的成活率降至83.33%,干燥组成活率呈直线下降趋势,20h时全部死亡。10℃较20℃更有利于虾夷扇贝干露运输中的成活,湿润组较干燥组的成活率更高。
  4、静水压力对不同规格虾夷扇贝的摄食、呼吸及排泄的影响。结果表明:静水压力对两种规格虾夷扇贝的摄食率、耗氧率和排氨率均有显著性影响(P<0.05)。
  (1)静水压力的增加,会使虾夷扇贝呼吸耗氧及氨氮代谢率增加,摄食率降低,也就是获取的能量减少,支出的能量增加,不利于贝类的生长。
  (2)短时间内静水压力的增加会对不同规格的虾夷扇贝产生不同程度的影响,小规格的扇贝对压力的变化更敏感。
[硕士论文] 王晓娜
渔业 烟台大学 2017(学位年度)
摘要:此研究是为了提取及鉴定栉江珧(Atrinapectinata)和旗江珧(Atrina vexillum)贝壳中的黑色物质,并鉴定是否为黑色素。实验选取了成体栉江珧和旗江珧,分别从这两种江珧的贝壳中提取黑色物质并加以鉴定。两种江珧经贝壳的提取清理、粉碎、盐酸水解、水浴加热、乙醚抽脂,从3份栉江珧贝壳中提取了3份黑色固体物质,从3份旗江珧贝壳中提取了3份黑色固体物质,分别将两种江珧中提取的黑色物质溶解于0.01mol/L氢氧化钠溶液中,经紫外分光光度计在190-500nm波长下测紫外吸收光谱,两种江珧的最大吸收峰都在210-240nm,且随着波长增加其吸光值下降,与公认黑色素紫外吸收光谱一致;另外将从两种江珧中提取的两份黑色固体物质分别用进行傅里叶红外光谱扫描,其红外图谱都在3500~3300 cm–1、1670~1600 cm–1和1100~1000 cm–1处分别有特征吸收峰,亦与公认的黑色素红外扫描图谱特征一致,从而首次确定栉江珧和旗江珧中的黑色物质为黑色素。黑色素不溶于水,而可溶性的黑色素在功能验证中才具有实用性,采用酸碱法并结合超声波破碎法,成功获取了可溶性的栉江珧和旗江珧贝壳中的可溶性黑色素,并通过紫外吸收和红外吸收检验,发现超声波处理之后,黑色素的化学性质并没有变化,但溶解性大大提高,为以后的江珧黑色素功能验证实验奠定了基础。本研究还存在不足之处,比如提取的黑色素为黑色素的粗制品,并没有黑色素的进一步提纯实验,且不能准确的测量出黑色素的确切纯度,这也许与生物体内黑色素本身就是混合物有一定关系。
[硕士论文] 徐玉超
设施农业 浙江海洋大学 2017(学位年度)
摘要:曼氏无针乌贼(Sepiella japonica)是我国重要的海洋经济物种,现人工养殖发展迅速,但随之出现性早熟、个体偏小等现象,严重影响其养殖效益。因此研究乌贼生长及生殖发育调控机制是解决这一问题的关键。神经肽Y受体(NeuropeptideY receptor,NPYR)是典型的G蛋白偶联受体,在许多动物的摄食生长和发育繁殖中扮演着重要角色。本论文采用分子生物学、细胞生物学等实验方法,分析曼氏无针乌贼神经肽Y-like(Sepiella japonica NPYR-like,SjNPYR-like)基因的序列特征、受体类型、亚细胞定位、组织分布特征、在摄食中的调控功能及在生长周期中的变动规律。主要取得的研究结果如下:
  采用RACE克隆技术获得了SjNPYR-like的全长序列,并对其序列特征进行了分析,结果表明,SjNPYR-like cDNA序列(KX683395)全长1,902 bp,包含492 bp的5'UTR、228 bp的3'UTR和1,182 bp的ORF,可编码393个氨基酸。与其他G蛋白偶联受体结构类似,SjNPYR-like拥有七个跨膜结构域TM1(AA36-58)、TM2(AA79-101)、TM3(AA111-133)、 TM4(AA145-167)、 TM5(200-222)、 TM6(AA254-271)和TM7(AA286-308)。利用系统进化树分析发现,SjNPYR-like与脊椎动物中神经肽Y受体(Neuropeptide Y receptor,NPYR)的三支亚型(NPYR-1、NPYR-2和NPYR-5)具有同源性,与无脊椎动物中神经肽F受体(Neuropeptide F receptor,NPFR)聚为一支。经多序列比对发现,其与预测的真鞘NPYR序列同源性高达81%。
  利用细胞生物学研究方法,对SjNPYR-like受体细胞定位进行分析,结果表明,通过构建SjNPYR-EGFP表达载体,转染至HEK293细胞中,用荧光染料DiI染膜、DAPI染核,在激光共聚焦显微镜下观察发现SjNPYR-like定位于细胞膜上,与SjNPYR-like序列中存在七次跨膜结构的预测结果相一致,表明SjNPYR-like是一个膜受体,为下一步功能验证奠定了基础。
  通过荧光定量PCR技术分析了SjNPYR-like mRNA在不同生殖阶段曼氏无针乌贼组织中的表达特征。结果表明,SjNPYR-like基因在曼氏无针乌贼脑、性腺和肝等组织中有较高的表达量,在其他组织中表达量相对较低。SjNPYR-like的表达在曼氏无针乌贼的生长发育周期中存在明显的变化;在卵原细胞阶段、原生质生长阶段和间质生长阶段,SjNPYR-like表达量在卵子发生过程中显著上升(P<0.05),到发育成熟阶段即营养质生长阶段SjNPYR-like表达量则显著下降。SjNPYR-like表达量变化特征研究结果说明其在乌贼生殖发育中可能具有一定的调控功能。
  综上所述,本论文克隆了曼氏无针乌贼NPYR-like基因,并对其亚细胞定位和生理实验做了初步的研究,为进一步研究曼氏无针乌贼神经肽受体信号通路转导机制以及生理功能奠定了基础,并为解决人工养殖条件下曼氏无针乌贼个体小、性早熟等问题提供了一定的理论参考。
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