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[硕士论文] 姚小坚
皮肤病与性病学 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:婴儿血管瘤(IHs)是婴幼儿最常见的良性血管性肿瘤,多见于女性。既往的研究表明婴儿血管瘤好发于头面部,自然消退后容易留下瘢痕、皮赘、毛细血管扩张等后遗症,所以具有一定的损容性。有研究提示婴儿血管瘤的发生与性别、种族、低出生体重、早产、家族遗传、妊娠期某些特殊事件和胎儿宫内缺氧等因素有一定相关性,但目前仍缺乏大样本数据分析作为支持依据。在我国,由于命名的混乱,婴儿血管瘤真实的发病情况和临床特征情况更不明朗。本研究旨在通过队列研究,确定我国婴儿血管瘤的流行病学及临床特征,揭示常见的危险因素,从而提高其知晓率及为妊娠咨询和优生优育提供更多的意见。
  方法:我们在全国多个省份内抽取了共21个街道社区卫生服务中心成立婴儿血管瘤流行病学调查哨点,每个哨点安排1-2名调查员进行问卷的分发和填写。调查对象为父母至少有一方为汉族的年龄不超过12个月的婴儿。记录的资料包括:性别、年龄、出生体重、胎龄、胎次、产式、孕母的年龄、受孕方式,以及孕期特殊事件、家族史等;对患有婴儿血管瘤的患儿,还需记录婴儿血管瘤出现的时间、部位、大小、类型、是否合并并发症及内脏血管瘤、就诊的诊断信息及具体治疗等资料。利用EpiData v3.1Software进行数据录入,数据统计分析利用IBM SPSS20.0software完成。计量资料分析用独立样本t检验,分类资料分析用卡方检验及多因素Logistic回归分析。所有统计检验均采用双侧,α=0.05。
  结果:本队列研究共收集了7144名婴儿的资料,男女比例为1.10∶1。有179名婴儿发生了婴儿血管瘤,占2.51%,其中女性婴儿为111名(62.01%),男女发病比率1∶1.63。采取体外受精-胚胎移植术(IVF-ET)受孕的有7人(3.91%),6.67%(n=12)的患儿为低出生体重儿,14.53%(n=26)为早产儿,5.59%(n=10)的婴儿在出生时被发现存在不同程度的缺氧现象,有38位(21.23%)母亲出现过先兆流产,8位(4.47%)在怀孕期间出现过妊娠期高血压疾病,3.35%(n=6)的母亲有羊膜腔穿刺经历。34.78%婴儿血管瘤皮损位于躯干部位,36.23%位于四肢,28.50%位于头面部。大部分都为浅表型(90.82%)和局限型血管瘤(87.71%)。未发现面积巨大、累及气道和危及生命的病例。仅有2.23%有脉管性疾病的家族史。
  结论:本研究显示我国婴儿血管瘤的发病率为2.51%,明显低于白种人婴儿;此外,婴儿血管瘤的某些临床特征也与国外不同,如好发部位方面我国婴儿血管瘤多发生于躯干和四肢,而发生在头面部的血管瘤并不多。本研究提示婴儿血管瘤的发生与女性、早产、低出生体重和母亲妊娠期高血压疾病有一定的关系,母亲接受体外受精-胚胎移植术史和先兆流产并不是婴儿血管瘤发生的独立危险因素,母亲高龄、多胎妊娠、经产、黄体酮摄入、脉管性疾病阳性血家族史及孕期接受羊膜腔穿刺与婴儿血管瘤之间暂时未发现明显的关联。此外,国内的医生对婴儿血管瘤的认知与诊治水平存在不足。
[硕士论文] 张莲美
外科学 延边大学 2018(学位年度)
摘要:研究:
  背景和目的:随着社会-医学-生物模式的转变,人们生活节奏和生活压力增加的同时,肿瘤的发病率呈逐年上升趋势,成为社会关注的热点。国内外各大心脏中心进行了许多心脏肿瘤相关的基础、临床研究,大部分研究其流行病学特点,在心脏肿瘤方面的研究也有许多高层次的突破及更多的新观念的认识,包括年龄性别分布、好发部位、肿瘤大小、病理特点和临床诊断等。本文查阅接受外科手术治疗的心脏肿瘤患者的临床资料,分析讨论心脏肿瘤的流行病学、临床诊断、治疗及预后的相关性,为提高心脏肿瘤的诊疗水平提供依据。
  方法:
  收集2011年1月至2017年7月在延边大学附属医院心血管外科和吉林医药学院附属医院心胸外科接受心脏外科手术治疗的20例心脏肿瘤患者的临床资料,回顾性分析患者的一般资料、手术方法、临床疗效和预后。
  结果:
  20例患者中,良性心脏肿瘤17例(85%),其中粘液瘤15例,脂肪瘤1例,心脏血管瘤1例,恶性心脏肿瘤3例(15%)。均行手术治疗切除肿瘤,20例患者中围术期死亡2例(10%)。截止2017年12月,对治愈出院的18例患者采用门诊复查、电话随访等方式跟踪随访,随访率为90%,随访期为5月~6年。随访结果显示:术后三个月术后3个月症状明显改善或消失者14人,症状相对减轻者2人,症状无改善或持续恶化出现心功能严重不全者2人。心脏良性肿瘤预后好,随访期间无死亡,无心血管事件发生,3例合并脑栓塞的患者随访期间出现不同程度地肢体偏瘫,生活质量较差,3例心脏恶性肿瘤患者,随访期间死亡2例,死于肿瘤转移、多脏器功能衰竭,平均生存事件12.50个月。
  结论:
  左房粘液瘤是最常见的心脏肿瘤,心脏肿瘤临床症状不典型,超声心动图是首要诊断依据,病理活检是诊断金标准。外科手术是心脏肿瘤的首选治疗方法,传统手术术后并发症少,预后良好。良性肿瘤—手术效果满意、复发率低、预后良好。恶性肿瘤—手术可解除机械梗阻、预后不良。
[硕士论文] 王小兰
儿科学 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:血管瘤是儿童的常见病、多发病,其中又以婴幼儿血管瘤(Infantile hemangiomas,IH)的发病率为最高。婴幼儿血管瘤因其病变常发生在颜面、四肢等肌肤裸露部位,影响美观,部分病例还可累及重要脏器或压迫重要脏器,影响器官功能。药物治疗因为创伤小、经济、方便、疗效好的原因,被患者及家属广为接受,但如果不考虑到患儿的个体情况,盲目选择某种或某几种药物进行治疗,则可能出现药物滥用、延误病情、加重毁容风险等严重后果。
  目的:
  1.加深对婴幼儿血管瘤的认识。
  2.为优化婴幼儿血管瘤的诊治方案提供依据。
  方法:
  1.病例收集
  通过检索电子病历系统,收集2015年2月-2017年8月我科收治并定期随访的婴幼儿血管瘤病例,并根据纳入标准选取合适的病例进行研究。在确定为入组病例后,收集其年龄、性别、围产期不良事件、起病年龄、就诊年龄、临床表现、影像学检查、治疗方法、疗程、治疗反应及不良事件等。
  2.对研究对象进行分型、分类
  根据血管瘤的临床表现、影像学资料及病理资料对血管瘤进行分型和分类,并根据2016版《血管瘤和脉管畸形诊断和治疗指南》中提出的分级依据,将婴幼儿血管瘤分为低风险、中度风险、高风险三个等级。
  3.疗效分级
  (1)Ⅰ级:治疗反应差,瘤体缩小<25%;
  (2)Ⅱ级:治疗反应中,瘤体缩小≥25%且<50%;
  (3)Ⅲ级:治疗反应好,瘤体缩小≥50%且<75%;
  (4)Ⅳ级:治疗反应优,瘤体缩小≥75%。
  其中Ⅰ、Ⅱ级为部分疗效(PR)病例,Ⅲ、Ⅳ级为显著疗效(GR)病例。
  4.不良事件评价标准
  采用NCI-CTCAE4.0进行评估。
  5.数据分析方法
  使用SPSS21.0软件进行统计分析,计量资料用均值加减标准差(x±s)表示,组间差异比较采用t检验;计数资料用例数和百分比[n(%)]表示,组间差异比较采用卡方检验或确切概率法。P<0.05为差异有统计学意义,疗效两两组间比较对检验水准进行校正,P<0.017为差异有统计学意义。
  结果:
  1.一般资料
  共有158例血管瘤患儿纳入研究,其中男79例,女78例,男女比例为1.01∶1,平均起病年龄为25.06天,出生时即发现了血管瘤的患儿有105例(66.46%)。平均就诊年龄为5.47月,就诊时月龄为0-3月龄的有99例(62.66%)。
  2.血管瘤发生部位
  头颈部有血管瘤者63例(39.87%),躯干50例(31.65%),四肢38例(24.05%),头颈-躯干者3例(1.90%),头颈-四肢者1例(0.06%),躯干-四肢者3例(1.90%)。
  3.分型、分类
  (1)IH的分类:浅表性婴幼儿血管瘤103例(65.19%),深在性婴幼儿血管瘤35例(22.15%),混合性婴幼儿血管瘤20例(12.66%)。
  (2)IH的分型:单发型婴幼儿血管瘤138例(87.34%),多发型婴幼儿血管瘤15例(9.49%),节段型婴幼儿血管瘤3例(1.90%),中间型婴幼儿血管瘤2例(1.27%)。
  (3)IH的风险分型:低风险31例(19.62%),中度风险52例(32.91%),高风险75例(47.47%)。
  4.疗效及不良反应
  (1)疗效分级:Ⅰ级3例(1.90%),Ⅱ级26例(16.46%),Ⅲ级70例(44.30%),Ⅳ级59例(37.34%),GR(Ⅲ级+Ⅳ级)率为81.64%。
  (2)浅表性IH患儿的治疗用药主要是口服普萘洛尔,外用咪喹莫特以及二者联合,经统计分析,联合用药组与口服普萘洛尔组疗效差异无统计学意义(P>0.05),但均优于单纯外用咪喹莫特组(P<0.017),联合用药组的疗程短于口服普萘洛尔组及外用咪喹莫特组(P<0.05)。
  (3)深在性和混合性IH患儿的治疗均主要是口服普萘洛尔、瘤体内注射曲安奈德和博莱霉素瘤以及二种方案同时联合应用。经统计分析,深在性和混合性婴幼儿血管瘤的结果均提示:联合用药组的疗效与单纯口服普萘洛尔组差异无统计学意义(P>0.05),但优于瘤体内注射曲安奈德和博莱霉素(P<0.017),联合用药组的疗程与单纯口服普萘洛尔相比无统计学差异(P>0.05)。
  (4)口服普萘洛尔不良反应主要为睡眠减少,外用咪喹莫特不良反应主要为局部皮肤发红、破溃,瘤体内注射曲安奈德及博莱霉素不良反应主要是注射部位溃疡。不良反应均较为轻微,无Ⅱ级以上不良反应。
  结论:
  1.1岁以内的婴幼儿血管瘤最为多见,约有半数患儿在出生时即能发现病灶,就诊高峰期集中在0-3月龄。
  2.婴幼儿血管瘤以浅表性最为多见,头面部最为多见,病灶单发为主。
  3.药物治疗对婴幼儿血管瘤具有良好疗效,不良反应较为轻微。
  4.普萘洛尔是婴幼儿血管瘤的治疗首选,效果好,不良反应轻微,单药口服即有良好疗效。
  5.对于浅表性IH,咪喹莫特单药外用疗效相对劣于口服普萘洛尔,疗程也较长,但无皮肤外其他系统不良反应,可用于低风险、浅表、瘤体较小的婴幼儿血管瘤中;与普萘洛尔联合使用可缩短疗程。
  6.对于深在和混合型IH,瘤体内注射曲安奈德和博莱霉素可作为普萘洛尔基础上的补充治疗。
  7.婴幼儿血管瘤的治疗应根据其分类、分型、风险度,选择合理的治疗方案,避免延误治疗或过度治疗。
[博士论文] 沈頔
外科学(整形外科) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:婴幼儿血管瘤是一种婴幼儿期较为常见的内皮细胞良性肿瘤。该肿瘤通常具有增殖期、消退期和消退完成期的临床病理特征。患者在出生后3-6个月发病并迅速进入增殖期。该病一般在患者3-7岁可自发出现消退。在增殖期,由于血管瘤内血流量迅速增加,瘤体快速增殖,可使肿瘤体积明显增大,从而对周围组织器官造成压迫症状。多发者可伴随其它相关病理表现。在消退期,肿瘤瘤体停止生长,并自发消退。多数患儿可不残留明显皮肤改变。但部分婴幼儿血管瘤因其深在,或者并发其他疾病,可导致严重的并发症。某些病例中最终残留的病变可影响患儿正常生活。目前对于婴幼儿血管瘤的治疗方法已逐渐统一,但是还没有一种治疗方法是完全有效和没有副作用的。这主要是因为对于其发病机制还没有完全研究清楚。目前普遍认为,相对于增殖期,消退期的婴幼儿血管瘤中内皮细胞的凋亡是一个重要的促进因素。
  miRNA又称为微小RNA,是一类自然界中普遍存在的小分子RNA。该类RNA对于维持机体内环境稳定,调控细胞和组织分化有重要意义。该类RNA并不通过编码蛋白质发挥作用,而是通过识别特定靶目标的mRNA,降解mRNA或部分抑制mRNA的表达,从而抑制靶目标蛋白的形成和发挥作用。目前有诸多文献均认为,在肿瘤中miRNA与细胞凋亡有着重要的关系。在前列腺癌中[1],miRNA-34可以下调Bcl-2蛋白表达,从而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。在恶性胶质瘤中[2],miRNA-153可以通过下调Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡。在直肠癌中[3]存在着低表达的miRNA-195。通过在直肠癌细胞内高表达miRNA-195,可以促进直肠癌细胞的凋亡。我们之前对增殖期及消退期的婴幼儿血管瘤组织进行差异microRNA芯片检测和筛选,发现miR-29a-3p在不同期的组织中差异明显,且在消退期的婴幼儿血管瘤组织中明显高表达。同时,在诸多文献中,均发现miR-29家族成员可以通过作用于凋亡相关因素而抑制肿瘤的发展。通过实验[4]发现,在恶性肝细胞癌细胞株中,miR-29a可调控抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2,从而导致肝癌细胞的凋亡。在慢性淋巴细胞白血病、肺癌、乳腺癌中,miR-29a均表达下调。上调miR-29a表达可以激活P53的表达,并抑制CDC42、Tcl-1等多种增殖相关基因的表达,促进肿瘤细胞的凋亡。
  通过本研究,我们试图探讨miR-29a对婴幼儿血管瘤生物活性的影响,以及在婴幼儿血管瘤消退中的作用及其机制。以期对进一步了解婴幼儿血管瘤自发消退的机制有所裨益。
  第一部分:婴幼儿血管瘤内皮细胞的培养及鉴定
  实验目的:
  通过原代细胞培养的方法,获得可用于实验的增殖期婴幼儿血管瘤内皮细胞。
  实验方法:
  1、无菌条件下收集手术中新鲜的增殖期婴幼儿血管瘤标本,于6小时内转入实验室超净台中。以组织块贴壁培养法处理并培养血管瘤组织。培养数周后,获取其周围爬出的细胞,通过酶消化法收集。经过传代再培养。传至3-4代,细胞量足够时,收集并以CD31免疫磁珠分选,获得CD31阳性细胞。将细胞进行CD31-FITC的流式细胞学检验,以保证阳性细胞率达90%以上。
  2、将获得的高纯度的CD31阳性细胞进行培养,在倒置相差显微镜下观察其生长形态,并绘制生长曲线,行Matrigel基质胶成管实验,以确定该细胞的生长特性。
  3、通过CD31、vWF、Glut-1、VEGFA的细胞表面标志物免疫荧光检测,以明确该细胞为可用于下一步实验的婴幼儿血管瘤内皮细胞。
  实验结果:
  1、通过对增殖期婴幼儿血管瘤新鲜标本组织块的培养,细胞的收集、扩增、传代、并经CD31免疫磁珠分选,获得了足够量的细胞。通过CD31-FITC的流式细胞学检验,所获得CD31阳性细胞率为96%左右。
  2、获得的细胞通过培养,在倒置相差显微镜下观察,可见其形态为梭形,生长较为杂乱。生长曲线显示其具有较为旺盛的增殖活性。Matrigel基质胶成管实验显示其具有早期成管能力。
  3、通过CD31、vWF、Glut-1、VEGFA的细胞表面标志物免疫荧光检测,可见该细胞上述表面标志物表达均为较强阳性。
  实验结论:
  我们通过收集增殖期婴幼儿血管瘤标本,并经体外扩增培养并获得细胞。经形态学及免疫荧光抗体检测,其特征均符合文献的一般描述,证实为所需婴幼儿血管瘤内皮细胞。经流式细胞仪检测,该细胞纯度较高,活力较强,可用于下一步实验。
  第二部分:上调miR-29a对婴幼儿血管瘤内皮细胞生物活性的影响
  实验方法:
  1、体外构建能够转染并可在细胞内稳定表达miR-29a的慢病毒颗粒Lv-hsa-miR-29a及阴性对照病毒Ubi-MCS-SV40-EGFP-IRES-puromycin。
  2、以自身细胞作为阴性对照组,以Ubi-MCS-SV40-EGFP-IRES-puromycin转染的细胞作为阴性病毒转染组,以Lv-hsa-miR-29a转染的细胞作为慢病毒转染组。通过荧光显微镜观察其荧光表达情况。通过qRT-PCR检测细胞在转染前后miR-29a表达的变化,从而确定其转染效率。
  3、在婴幼儿血管瘤细胞内过表达miR-29a后,采用MTT法检测其增殖能力的改变。流式细胞仪检测其周期及凋亡水平的改变,Transwell侵袭法检测其侵袭能力的改变,以研究过表达miR-29a对婴幼儿血管瘤内皮细胞生物活性的影响。
  实验结果:
  荧光显微镜下观察,FITC荧光表达显示miR-29a转染效果良好,转染效率约为95%左右。qRT-PCR结果显示miR-29a在婴幼儿血管瘤内皮细胞中的表达丰度为中等,转染慢病毒颗粒后,miR-29a基因的表达丰度是阴性对照组的2.643倍。转染病毒后72h,过表达miR-29a的婴幼儿血管瘤内皮细胞中,其早期凋亡率约为10.82%,较阴性对照组及阴性病毒转染组有显著性差异。其晚期凋亡率约为1.72%,较阴性对照组有显著性差异。而细胞周期、侵袭及增殖实验结果均无显著性差异。
  实验结论:
  通过转染慢病毒颗粒Lv-hsa-miR-29a,可以构建稳定高表达miR-29a的细胞模型。过表达miR-29a后,婴幼儿血管瘤内皮细胞的凋亡率有显著性变化。而对于细胞周期、增殖及侵袭均无显著性影响。
  第三部分:miR-29a在婴幼儿血管瘤中作用机制的研究
  实验方法:
  1、以miR-29a过表达后的婴幼儿血管瘤细胞作为目标样本,以自身细胞作为阴性对照,采用miRNA基因表达谱芯片筛选的方法,获得两者之间有较大表达差异的mRNA表达谱。通过与TargetScan数据库进行比对,结合之前细胞功能学研究结果,参考相关文献,选取可能为miR-29a下游的靶基因作验证。
  2、通过双荧光素酶检测显示,miR-29a的下游作用分子可能为Mcl-1分子。
  3、通过Western-blot检测的方法,进一步验证在过表达miR-29a的婴幼儿血管瘤内皮细胞中,Mcl-1、VEGFA及Bcl-2蛋白水平是否有显著性变化。
  4、通过查阅文献及相关数据库,我们选取Stat3及Akt3这两个可能同时是Mcl-1上游及miR-29a下游靶蛋白的分子加以验证,进一步研究miR-29a是否通过调控Mcl-1上游分子表达以调控Mcl-1表达的可能。
  实验结果:
  参考miRNA芯片筛选、数据库分析结果及相关文献,我们获取相关分子作为miR-29a可能的下游靶蛋白并进行验证。通过双荧光素酶检测确定Mcl-1具有与miR-29a结合的相关位点,其为miR-29a可能的下游分子。通过Western-blot检测,证实了Mcl-1、VEGFA及Bcl-2蛋白水平均有显著性变化。同时,通过Western-blot检测,证实了Stat3及Akt3蛋白水平无显著性变化。
  实验结论:
  双荧光素酶检测发现,miR-29a与Mcl-1是直接相互作用并且可以找出相互作用的结合位点。通过Western-blot检测,在过表达miR-29a的婴幼儿血管瘤血管瘤内皮细胞中,Mcl-1、VEGFA及Bcl-2蛋白表达明显下调。而miR-29a与Mcl-1的上游分子Stat3和Ark3没有表达相关性,miR-29a并不能抑制或者激活Stat3和Ark3的表达。
[硕士论文] 魏震
神经外科学 郑州大学 2018(学位年度)
摘要:海绵窦海绵状血管瘤(Cavernous sinus hemangiomas,CSHs)发病率较低,为血管良性肿瘤病变,约占海绵窦区域所有肿瘤的2%[1]。该疾病容易和海绵窦区域其他常见肿瘤发生误诊,其中核磁共振成像(Magnatic resonance imaging,MRI)在诊断CSHs方面具有较高价值[2]。 CSHs临床表现以头痛及颅神经麻痹症状多见。由于肿瘤与该区域颈内动脉及颅神经等重要结构关系密切,术中出血风险高,导致CSHs显微外科手术难度较大,术后并发症常见,肿瘤不易被全切除。本研究收集了郑州大学第一附属医院自2014年1月到2017年1月期间经显微外科手术治疗的19例CSHs患者MRI影像学资料及临床资料以及作为对比的53例海绵窦其他肿瘤患者MRI影像学资料,通过统计学分析,并结合国内外文献报告,对该病的MRI影像学特征以及治疗效果进行讨论。
  目的:
  本研究旨在提高对CSHs疾病的MRI诊断及手术治疗认识。探讨显微外科手术在治疗CSHs时的注意事项,同时分析显微外科手术对CSHs的治疗效果以及手术并发症。由此促进CSHs的诊断以及治疗。
  方法:
  收集郑州大学第一附属医院自2014年1月-2017年1月经手术治疗的19例CSHs患者MRI影像学资料、临床资料以及作为对比的53例海绵窦其他肿瘤患1者MRI影像学资料,结合国内外文献对收集资料进行汇总分析。
  结果:
  ①通过对CSHs组和海绵窦其他肿瘤组4项影像学特征进行单因素卡方分析,T2WI均一信号以及T2WI近似于脑脊液极高信号在鉴别CSHs及海绵窦其他肿瘤有统计学意义,二者同时作为诊断CSHs指标时,其敏感度85.9%,特异度92.8%,精确度91.6%。②CSHs患者经显微外科手术治疗,无手术死亡病例,肿瘤全切例数10例(52.63%),次全切例数7例(36.84%),大部分切除例数2例(10.52%),头痛症状术后均见改善,少数颅神经麻痹症状可见改善或加重,术后新出现动眼神经麻痹例数10例(52.63%),外展神经麻痹例数6(31.57%)例,三叉神经麻痹例数3例(15.78%),视力下降例数2例(10.52%),其中5例患者新出现两种或两种以上颅神经损伤症状。
  结论:
  T2WI均一近似于脑脊液极高信号在诊断CSHs时具有极高价值;显微外科手术为治疗CSHs患者的有效方法,由于该区域解剖结构复杂,肿瘤全切率及手术造成颅神经损伤发生率不容乐观,放射外科疗法可作为CSHs患者选择治疗方法之一。
[博士论文] 程玉强
外科学(肝胆外科) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:背景:
  肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全世界范围内死亡率占第三位的恶性肿瘤,预后极差,主要原因之一是其容易侵犯临近的门静脉系统而形成门静脉癌栓(portal vein tumor thrombus,PVTT)。肝癌门静脉癌栓已成为制约肝癌预后的最大瓶颈问题。血小板(platelet,PLT)作为近年来肿瘤相关研究的热点,其在肝癌发生中的作用被逐渐认识,几乎参与了诸如肝脏炎症的损伤与修复、肝纤维化直至肝癌等慢性肝脏疾病的各个过程。但是,血小板与门静脉癌栓形成这一特殊的肝癌转移方式之间的关系尚未见报道。分析血小板在肝癌门静脉癌栓形成过程中的作用,不仅能为癌栓的形成机制做以新的阐释,更能为其治疗开辟新的思路。
  目的:
  通过回顾性分析术前伴有不同血小板计数的肝癌门静脉癌栓患者的预后,建立血小板与门静脉癌检之间的初步联系。进一步通过分析门静脉癌栓患者血小板活化情况及癌栓组织特异表达的基因谱,探讨血小板在肝癌门静脉癌栓形成中的重要作用,从而为肝癌门静脉癌栓的治疗寻找新的治疗靶点和方法。
  方法:
  一、术前血小板计数与肝癌门静脉癌栓患者预后关系的分析
  以肝癌伴门静脉癌栓患者为研究对象,结合术前临床资料数据及预后生存状况,以术前血小板计数的高低将病人分为三组:血小板减少组(PLT<100×109/L)、正常组(100×109/L≤PLT≤300×109/L)和升高组(PLT>300×109/L)。回顾性分析患者的预后,以确定术前血小板计数对肝癌门静脉癌栓患者预后的影响。
  二、肝癌伴门静脉癌栓患者血小板活性检测
  分离提取肝癌伴和不伴门静脉癌栓患者的洗涤血小板,通过分析血小板的聚集能力差异,探讨肝癌门静脉癌栓患者的血小板活化状态改变情况。并进一步用血小板活化相关分子通过流式细胞技术加以验证。
  三、癌栓组织特异性mRNA表达谱分析
  取三例肝癌伴门静脉癌栓患者的配对新鲜组织样本,包括癌旁组织(pritumoral tumor,PT)、肝癌原发灶组织(parenchyma tumor,T)和门静脉癌栓组织(portal vein tumor thrombosis,PVTT/P),行基因芯片检测。分别分析不同病人间的个体化差异和各组织间的特异性表达差异。通过Metascape(http://metascape.org)分析差异基因参与的生物学功能及相关信号通路,并最终确定目的基因。
  四、目的基因诱导栓块形成促进肝癌门静脉癌栓发生的作用机制研究
  通过扩大样本量,确定目的基因在不同组织中的表达。进一步用不同肝癌细胞系与血小板共培养,建立体外“癌栓”形成模型,并结合细胞系的成栓能力及目的基因的表达水平确定体外研究的工具细胞系。再通过该模型对目的基因在门静脉癌栓形成中的机制做探讨。
  结果:
  第一部分:门静脉癌栓患者血小板降低的的伴发比例较高(20.9%)。不同血小板计数患者之间的临床病理特征不同,肝硬化伴发率(p<0.001)、肿瘤大小(p<0.001)以及肿瘤是否存在包膜(p=0.032)差异明显。门静脉癌栓患者伴有血小板计数减少者的无瘤生存期RFS(recurrence free survival)和总体生存期OS(overall survival)均优于血小板计数正常组(p均小于0.001)和升高组(p=0.008和0.046),但血小板计数正常组和升高组之间无明显的统计学差异(p=0.578和0.877)。进一步通过倾向性匹配评分(PSM)排除各组间的病历资料差异的影响并作亚组分层,结果表明:Ⅱ型门静脉癌栓患者中血小板减少组的患者的无瘤生存期明显优于血小板正常组(p=0.011),但Ⅰ型癌栓和Ⅲ型癌栓病人的不同血小板计数组之间无明显差别(p=0.154和0.142)。Ⅰ型和Ⅱ型癌栓中血小板减少组的患者的总体生存期的分析均优于血小板正常组(p=0.021和0.029),但Ⅲ型癌栓患者的两组间仍无差异(p=0.451)。多因素风险回归分析结果表明血小板计数是肝癌门静脉癌栓患者预后相关的独立危险因素,包括无瘤生存期(hazard ratio[HR]0.602,95%CI0.444-0.836,p=0.001)和总体生存期(HR0.582,95%CI0.415-0.816,p=0.002)。
  第二部分:通过分析肝癌伴和不伴门静脉癌栓患者的洗涤血小板,结果表明肝癌伴门静脉癌栓患者的血小板聚集能力增强,血小板活化的比例增加。通过对肝癌伴门静脉癌栓患者配对的不同组织(癌栓组织、原发灶组织和癌旁组织)行基因芯片检测发现,病人之间存在交大的个体化差异;进一步汇总分析三例病人均有差异的基因显示:三种组织各自具有其独特的基因表达谱。将差异基因在基因功能网站进行分析发现,癌栓组织中特异表达的基因在细胞溶解、一元羧酸酸代谢、胰岛素样生长因子调节、小分子代谢以及有机羟基化合物运输等生物学功能上富集明显,且部分差异基因还与整合素信号通路和HNF3B信号通路等肿瘤相关的信号通路密切相关。进一步根据差异基因的表达水平及其生物学功能,最终将干细胞因子(SCF/KITLG)作为目的基因重点进行后续的机制研究。
  第三部分:通过扩大样本检测结果发现,目的基因KITLG在肝癌门静脉癌栓组织中表达明显高于肝癌原发灶组织和癌旁组织,此外,KITLG的受体基因c-KIT表达水平与其相一致,在门静脉癌栓组织中表达升高。进一步检测肝癌相关的干细胞标志物发现,EpCAM、CD44、CD90和CD133在门静脉癌栓组织和肝癌原发灶组织中的表达均比癌旁组织高,除CD133在门静脉癌栓组织中与肝癌原发灶中表达水平相似外,EpCAM、CD44和CD90的表达水平在癌栓组织中最高。不同肝癌细胞系中KITLG的表达水平不一样,来源与肝癌门静脉癌栓的细胞系CSQT-2中KITLG的表达水平最高。通过将CSQT-2与血小板共培养建立体外“癌栓”模型的实验结果表明,细胞系中KITLG的表达水平与成栓能力有关,KITLG是肝癌门静脉癌栓形成中的重要分子。
  结论:
  1、血小板计数是肝癌门静脉癌栓患者预后的独立危险因素。伴血小板计数减少的肝癌门静脉癌栓患者预后相对较好;
  2、肝癌门静脉癌栓患者血小板活化增强;
  3、门静脉癌栓组织、肝癌原发灶组织和癌旁组织的基因表达存在差异,各有自身特异的基因表达谱;
  4、KITLG在肝癌门静脉癌栓组织中高表达,促进癌栓肿瘤细胞干性的维持,并可在体外诱导栓块形成而促进癌栓的发生。
  本课题创新点及潜在应用价值:
  确定了血小板计数与肝癌门静脉癌栓的预后关系,为肝癌门静脉癌栓的临床治疗提供指导。通过基因芯片分析明确了癌栓组织特异性基因表达谱,并分析其分子功能及相关信号通路,为癌栓形成机制的相关研究提供数据支持和参考;进一步分析明确KITLG通过诱导栓块形成促进肝癌门静脉癌栓发生的机制,为抗血小板治疗在肝癌门静脉癌栓的应用提供有力证据。
[硕士论文] 黄元亮
临床医学(外科学) 山东大学 2018(学位年度)
摘要:婴幼儿血管瘤为现如今新生儿较为常见的良性脉管肿瘤,其发病率约为3%-5%。大多数瘤体病灶范围局限,可自行消退。但少数部分瘤体较大,且生长迅速,可发生破溃感染等并发症,某些部位瘤体亦可侵及周围重要器官造成严重后果,并在瘤体消退后局部遗留残迹。故而某些婴幼儿血管瘤需早期采取措施加以干预。
  研究目的:
  现如今婴幼儿血管瘤治疗手段呈多样化,药物治疗为运用范围最为广泛的治疗方法。药物治疗方案种类较多,本研究旨在综合评估口服普萘洛尔联合硬化剂注射治疗婴幼儿血管瘤的疗效,以期对临床治疗方案选择有所帮助。
  研究方法:
  回顾性的收集从2016年3月至2017年9月,于山东大学附属省立医院整形美容外科就诊的婴幼儿血管瘤患儿共191例。根据其接受的治疗方案不同,将患儿分组,分别为口服普萘洛尔组(A组,80例),硬化剂注射组(B组,25例)和联合治疗组(C组,86例)。其中A组采用口服小剂量普萘洛尔(1mg/kg· d-2mg/kg·d)的治疗方案,B组采用瘤体病灶局部注射硬化剂(曲安奈德+聚桂醇)的治疗方案,而C在口服小剂量普萘洛尔治疗的基础上,结合硬化剂注射的治疗方案。观察其各组的疗效及不良反应。所得的所有数据均用spss21.0软件统计,并对结果进行讨论。
  研究结果:
  A组治愈率为60.0%,显著有效率为81.3%,有效率为95.0%。B组治愈率28.0%,显著有效率48.0%,有效率64.0%。C组治愈率77.9%,显著有效率93.0%,有效率98.8%。
  对A、B、C三组进行数据分析,进行两两卡方检验并调整检验水平,其中A组与B组有效率具有统计学差异(P<0.017),C组与B组有效率具有统计学差异(p<0.017)。单独对于A组与C组进行统计学分析,得出A组与C组有效率无统计学差异(p>0.05),A组与C组治愈率有统计学差异(p<0.05)。纳入研究患儿未诉严重不良反应。
  研究结论:
  口服普萘洛尔联合硬化注射综合治疗婴幼儿血管瘤疗效显著,优于单独口服普萘洛尔或硬化注射的治疗方案,且不良反应少,可作为一种成熟的治疗方案应用于婴幼儿血管瘤的治疗。
[博士论文] 付聪
外科学(整形外科) 山东大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  婴幼儿血管瘤(infant ile he man gio ma,IH)是婴幼儿期最常见的软组织肿瘤,且发病率在过去30年呈稳定增长趋势,约3-5%。尽管大部分血管瘤呈早期快速增生随之逐渐消退的自限性病程,但是处于快速增生期以及位于重要部位的血管瘤仍可导致破溃、出血、外观及功能损害等严重并发症,甚至危及生命。增生期婴幼儿血管瘤的典型病理表现包括致密的内皮细胞团及壁厚微血管结构,并逐渐被纤维脂肪结构所替代。婴幼儿血管瘤的发病机制目前尚不明确,可能受组织缺氧、发育缺陷等外源性因素以及血管生成因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)等内源性因素的共同调控。既往研究发现非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA),如长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)、微小RNA(microRNA,miRNA),在婴幼儿血管瘤的疾病进程中至关重要,一些miRNA还可作为婴幼儿血管瘤的潜在诊断标志物及预后指标。
  环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种新型ncRNA,是由前体mRNA选择性剪接形成的闭合环形分子。近几年,借助于高通量测序技术的迅速发展,之前被误认为是“剪接错误”的circRNA被大量发现,目前已经成为ncRNA研究领域的重点。国内外学者发现circRNA在肿瘤、心血管疾病、神经系统疾病等多种疾病中均存在显著差异表达,并且可通过多种作用机制影响疾病进程。CircRNA所具有的高丰度、高稳定性、序列保守性及组织、细胞特异性等特征,提示其在疾病的发生、发展中具有重要的调控作用。基于当前研究,CircRNA的作用机制主要包括以下4个方面:通过竞争性内源RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA)机制或miRNA海绵作用,抑制miRNA活性,进而调控相关mRNA表达;竞争线性剪接或调控转录,影响亲本基因表达;与RNA结合蛋白(RBP)等重要蛋白相互作用以调控基因表达;最近研究发现部分circRNA还具有翻译功能。
  CircRNA在肿瘤发生以及血管性疾病等相关领域中的重要作用提示其在婴幼儿血管瘤的发生、发展中可能也具有重要的调控作用。目前circRNA在婴幼儿血管瘤中的表达及功能尚无相关研究。明确circRNA在增生期婴幼儿血管瘤中的表达,分析并探索其可能的功能及调控机制,有助于完善ncRNA在婴幼儿血管瘤中的调控网络。
  方法:
  1.标本收集:根据严格的纳入及排除标准,收集2015年6月到2017年5月的增生期血管瘤标本及瘤旁皮肤组织共10对,PBS洗净后置于RNALater中4℃过夜,转至-20℃保存,用于芯片检测及PCR验证;留置部分标本采用4%多聚甲醛固定,用于病理检测。采用HE染色及GLUT1、CD31免疫组化染色验证增生期婴幼儿血管瘤的诊断及病理特征。
  2.CircRNA芯片检测及数据分析:采用Arraystar Human circRNA V2Array检测4对增生期婴幼儿血管瘤标本及瘤旁组织circRNA表达谱。采用Trizol法分离提取总RNA,采用紫外线检测法确定RNA样品纯度及浓度,通过变性琼脂糖凝胶电泳检测样品完整度。采用Rnase R消化除去线性RNA并富集circRNA。利用随机引物法扩增富集的circRNA并转录成荧光cRNA。将标记的cRNA杂交到Arraystar Human circRNA V2Array(8x15K,Array st ar)上。芯片采用Agilent Scanner G2505C扫描。Agilent Feature Extraction软件用于分析芯片图像。R语言limma包进行数据处理。经t-检验差异倍数≥2.0且P<0.05视为有统计学差异。绘制火山图、散点图及聚类图显示差异表达的circRNA。
  3.qRT-PCR法验证:采用实时荧光定量PCR技术对circRNA在10对增生期婴幼儿血管瘤中的表达进行验证,选择6个显著差异表达的circRNA(cricRNA_100933,circRNA_100709,circRNA_102116,circRNA_051239,circRNA_102039,circRNA_104310)进行检测。采用Primer5.0设计circRNA特异性背靠背引物。采用β-actin作为内参基因。
  4.CircRNA功能分析:采用多种生物信息学技术分析差异表达的circRNA的潜在功能。通过MRE靶标预测软件(基于Target Scan&miRanda)分析circRNA/miRNA相互作用。采用miRWalk2.0预测miRNA下游靶基因,并结合增生期婴幼儿血管瘤mRNA表达谱数据,利用Cytoscape构建circRNA/miRNA/mRNA调控网络。基于DAVID以及KOBAS3.0在线工具,采用GO和KEGG通路富集分析分别探索circRNA的亲本基因以及其间接介导的circRNA/miRNA/mRNA调控网络的潜在功能。
  5.初步功能验证:选择显著上调的circRNA_100933作为目标circRNA,构建两种RNAi慢病毒载体并转染脐静脉内皮细胞;采用MTT法、克隆形成试验及FACS法检测circRNA100933对细胞增殖及凋亡的影响;采用双荧光素酶报告基因试验验证circRNA_100933与miR-137的结合位点;采用qRT-PCR法检测circRNA100933对miR-137的调控以及miR-137在增生期婴幼儿血管瘤中的表达。采用qRT-PCR及western blot检测circRNA_100933对VEGFA表达的影响。
  结果:
  1.增生期婴幼儿血管瘤的病理学特征:组织标本GLUT1、CD31免疫组化染色呈阳性,婴幼儿血管瘤诊断明确;HE染色显示增生期婴幼儿血管瘤以大量增生的内皮细胞团及紊乱的微血管结构为主。
  2.增生期婴幼儿血管瘤circRNA表达谱鉴定:各样本RNA质量检测合格,且cRNA标记效率符合要求。聚类图显示circRNA在血管瘤与瘤旁组织中存在显著差异表达,通过散点图及火山图共发现234个上调和374个下调的circRNA(FC≥2.0,P<0.05)。其中外显子型circRNA占据最大比例,内含子型circRNA次之。除chrY,各染色体中均有ckcRNA定位。
  3.差异表达的circRNA的qRT-PCR检测结果:选择了6个显著差异表达的circRNA进行验证。其中cricRNA_100933,circRNA_100709在婴幼儿血管瘤中显著上调,circRNA_104310在婴幼儿血管瘤中显著下调,与芯片表达趋势一致,且差异具有统计学意义。另外三个circRNA(circRNA_102116,circRNA_051239,circRNA_102039)的变化趋势与芯片结果变化方向一致,但缺乏统计学意义。
  4.差异表达的circRNA功能分析:采用MRE靶标预测软件对circRNA的miRNA结合位点进行预测,共发现1248个可能结合的miRNA,借助Cytoscape构建circRNA/miRNA网络。结合文献发现其中一些miRNA在婴幼儿血管瘤中具有重要的调控作用。此外,通过对差异表达的circRNA的亲本基因进行GO和KEGG通路富集分析,发现其与肿瘤发生、血管发育相关功能及信号通路密切相关。最后,选择显著上调的circRNA_100933及显著下调的circRNA_104310进行circRNA/miRNA/mRNA网络构建。circRNA_100933的MRE包括miR-137,miR-1298-3p,miR-892b,miR-2113,miR-514a-5p;而circRNA_104310的MRE包括miR-499a-3p,miR-1271-3p,miR-216a-3p,miR-197-3p,miR-489-3p。通过整合miRNA靶基因预测数据及增生期婴幼儿血管瘤mRNA表达谱数据,分别获得circRNA100933间接介导的100个靶基因以及circRNA_104310间接介导的94个靶基因。GO和KEGG通路富集分析显示circRNA_100933介导网络主要富集在上皮细胞迁移、血管发育等生物过程,以及VEGF信号通路、Rap1信号通路等。circRNA_104310介导网络则主要富集在细胞脂代谢、细胞内信号传导等生物过程以及H IF-1α通路等重要信号通路。
  5.CircRNA_100933初步功能研究:选择显著上调的circRNA_100933进行初步功能研究发现,敲减circRNA_100933可明显抑制细胞增殖,并促进凋亡。生物信息学分析发现circRNA100933与重要的抑癌因子miR-137序列互补具有结合位点。PCR检测示miR-137在婴幼儿血管瘤中显著下调。采用双荧光素酶报告基因试验证实circRNA_100933可通过预测位点结合miR-137。在细胞中敲减circRNA_100933可显著上调miR-137表达,提示circRNA_100933可能具有miR-137海绵作用。VEGFA是婴幼儿血管瘤中的重要调控因子。PCR检测示VEGFA在婴幼儿血管瘤中显著上调。在细胞中敲减circRNA_100933可显著下调VEGFA的mRNA及蛋白水平,提示circRNA_100933可能正向调控VEGFA表达。
  结论:
  1.本研究采用芯片检测技术首次鉴定了circRNA在增生期婴幼儿血管瘤及瘤旁组织中的表达,发现了大量差异表达的circRNA并采用qRT-PCR对6个差异表达的circRNA进行了验证。大量circRNA在婴幼儿血管瘤中的显著差异表达提示其可能在婴幼儿血管瘤的发生、发展中具有重要作用。
  2.基于芯片检测结果,采用多种生物信息学分析手段对差异表达的circRNA进行功能分析。采用MRE靶标预测软件发现大量与circRNA具有互补结合位点的miRNA,并构建circRNA/miRNA互作网络;采用GO分析及KEGG通路富集分析发现circRNA的亲本基因参与多条肿瘤发生、血管发育相关的重要通路。以上两方面结果共同提示circRNA可能通过不同作用机制在婴幼儿血管瘤中发挥重要作用,本研究在后续实验中初步探索了目标circRNA的miRNA海绵作用,关于差异表达的circRNA是否可通过竞争线性剪切或结合重要蛋白而影响亲本基因的表达仍有待未来进一步验证。
  3.结合miRNA靶基因预测数据及婴幼儿血管瘤mRNA表达谱构建了circRNA100933/miRNA/mRNA和circRNA_104310/miRNA/mRNA网络。采用GO分析及KEGG通路富集分析发现两个互作网络均富集于多条与婴幼儿血管瘤密切相关的重要通路。
  4.基于PCR验证及生物信息学分析结果,首次对显著上调的circRNA100933在细胞中的功能及miRNA海绵作用进行初步探索。结果发现敲减circRNA_100933可显著抑制细胞增殖,促进凋亡,并抑制重要因子VEGFA表达,提示其在婴幼儿血管瘤中可能起着促瘤作用。此外,circRNA_100933还可通过互补位点结合miR-137并调控其表达,提示circRNA_100933可能通过miR-137海绵机制发挥作用。初步实验结果提示circRNA_100933在婴幼儿血管瘤中具有重要的研究价值,下一步仍需要进行更为深入的体外及体内实验进行验证。
[硕士论文] 邓琪
皮肤病与性病学 大连医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:探讨0.5%噻吗洛尔滴眼液联合595脉冲染料激光治疗浅表性婴幼儿血管瘤的临床疗效。
  方法:根据婴幼儿血管瘤的诊断标准及其受累深度的分类选取2016年12月-2017年10月于我院就诊的浅表性婴幼儿血管瘤患儿50例,采用简单随机化方法随机分成A、B两组,每组各25例。充分了解患儿基本情况及现病史,并向患儿家属仔细交代注意事项。每次治疗前由固定的皮肤科医师记录患儿皮损改善情况,并进行疗效判断,同时询问患儿家属是否有不良反应发生。数码相机(D60,尼康,日本)从同一角度进行皮损拍照。A组:局部外用0.5%噻吗洛尔滴眼液+595脉冲染料激光,0.5%噻吗洛尔滴眼液涂于患处,并用保鲜膜封包,每次30min,每天2次,间隔12小时,Vbeam Perfecta脉冲染料激光每月1次,光斑大小7mm,能量7.25-11J/cm2,脉冲时间1.5-3ms。B组:0.5%噻吗洛尔滴眼液涂于患处,并用保鲜膜封包,每次30min,每天2次,间隔12小时。分别观察并记录两组患儿每次治疗后有无心力衰竭、心动过缓,有无低血压,呼吸困难,低血糖,睡眠障碍等全身不良反应及皮损局部有无红斑、水疱、破溃、渗出,有无出血、糜烂,每月评估并用D60数码相机记录患儿皮损恢复情况(包括瘤体颜色、体积大小、表面张力等)及不良反应发生情况。并将最终数据结果通过统计学软件spss17.0进行数据分析,研究两组患儿用药时间、治愈率、有效率、总有效率及不良反应发生情况。
  结果:0.5%噻吗洛尔滴眼液外用联合脉冲染料激光治疗浅表性婴幼儿血管瘤临床疗效较单纯外用0.5%噻吗洛尔滴眼液好,其疗程短,差异有统计学意义(P<0.05)。
  结论:对于浅表性婴幼儿血管瘤,0.5%噻吗洛尔滴眼液联合595脉冲染料激光治疗可提高临床疗效,缩短病程,且不显著增加不良反应的发生。
[博士论文] 高歌
外科学(神外) 山东大学 2017(学位年度)
摘要:颅内动脉瘤是脑动脉的局限性异常扩大形成的脑血管壁的瘤状突起,是颅内自发性蛛网膜下腔出血的首要因素。首次破裂出血约20%的患者因来不及救治而死亡。
  显微外科手术和介入手术是临床上治疗破裂动脉瘤的主要两种方式。显微动脉瘤夹闭术既往是动脉瘤治疗的“金标准”,有60多年历史,如何能把动脉瘤夹闭手术做的更微创是开颅手术医生面临的挑战。介入治疗在近些年得到了快速的发展,已成为颅内动脉瘤治疗的重要手段。通常就前循环动脉瘤而言,两种治疗方式疗效相当,但显微外科手术术后复发率低;对于后循环动脉瘤,因动脉瘤位置深在,治疗方式通常首选介入手术;对于高龄患者,亦优先考虑介入栓塞。文献报道动脉瘤栓塞后仍有较高的复发率,研究提示动脉瘤的复发与动脉瘤的栓塞密度有关,栓塞越致密复发率越低。
  不同部位的动脉瘤有其特点,如何做到动脉瘤的个体化治疗需要去探索。前交通动脉瘤在颅内动脉瘤所占比例最高,因位置深在,多选择介入栓塞治疗,本研究对前交通动脉瘤的个体化栓塞治疗进行了总结分析。另外,目前对于宽颈、不规则动脉瘤多采用支架辅助栓塞,但在出血急性期,支架的应用仍存在一定的风险,包括术中术后血栓事件及出血风险等,而双微导管技术的应用可以避免部分患者的支架应用,基于此,本研究亦对双微导管技术在颅内复杂不规则形动脉瘤治疗中的应用做了回顾性分析。
  动眼神经麻痹是部分后交通动脉瘤的典型临床表现。介入栓塞和开颅夹闭对动眼神经麻痹的恢复都有一定帮助,但哪种方式对动眼神经麻痹的恢复更有益处仍无定论,在之前文献报道中,因病例数有限,报道的结果也存在差异,本研究对单中心后交通动脉瘤伴动眼神经麻痹的病例进行了回顾性分析,发现开颅夹闭患者动眼神经麻痹的恢复率更高。
  对于以上颅内动脉瘤外科治疗中存在的一些问题,本研究对安徽省立医院近4年的临床病例进行回顾性研究,为颅内动脉瘤的外科治疗提供参考。研究分为四个部分:手术夹闭与栓塞治疗后交通动脉动脉瘤所致动眼神经麻痹疗效的比较(第一部分);眶上外侧入路显微手术夹闭颅内前循环动脉瘤(第二部分);破裂前交通动脉瘤的个体化介入栓塞治疗(第三部分);双微导管技术在颅内不规则复杂动脉瘤治疗中的应用(第四部分)。
  第一部分 手术夹闭与栓塞治疗后交通动脉动脉瘤所致动眼神经麻痹疗效的比较
  目的:比较手术夹闭和血管内栓塞两种方法治疗后交通动脉动脉瘤(PcomAA)所致动眼神经麻痹(ONP)的疗效及其影响因素。
  方法:回顾性分析2011年1月-2015年6月,安徽省立医院神经外科收治的52例PcomAA同时伴有ONP患者的临床资料。其中手术夹闭23例,血管内栓塞治疗29例。比较两组患者的年龄、性别、动脉瘤大小、是否破裂、治疗间隔时间、术前ONP程度及术后12个月的ONP恢复程度,采用多因素Logistic分析方法分析影响ONP恢复程度的因素。
  结果:52例PcomAA瘤患者中,最终ONP完全恢复27例(51.9%),部分恢复21例(40.4%),无恢复4例(7.7%)。(1)手术夹闭组23例中,有SAH16例,无SAH7例,最终ONP完全恢复18例(78.3%),部分恢复5例(21.7%);血管内栓塞组29例中,有SAH18例,无SAH11例,最终ONP完全恢复9例(31%),部分恢复16例(55.2%),无恢复4例(13.8%)。(2)对ONP术后恢复情况进行多因素Logistic回归分析,不同的治疗方法是ONP恢复的独立影响因素(OR=0.041,95%CI:0.007~0.261,P<0.01)。
  结论:与血管内栓塞比较,手术夹闭使PcomAA导致的ONP恢复疗效更加显著。
  第二部分 眶上外侧入路显微手术夹闭颅内前循环动脉瘤
  目的:总结应用眶上外侧入路显微外科手术治疗颅内前循环动脉瘤的经验,分析眶上外侧入路临床应用的可行性、优缺点及术中注意事项,为颅内前循环动脉瘤的显微外科治疗提供一种安全、微创的手术入路。
  方法:回顾分析2013年1月至2014年6月安徽省立医院采用眶上外侧入路治疗的颅内前循环动脉瘤患者的临床资料(动脉瘤分布、并发症及GOS预后评分等)。
  结果:62例患者(72个动脉瘤),其中9例为多发动脉瘤,共夹闭动脉瘤72个。预后良好59例,中残1例,2例轻残,无死亡病例。
  结论:眶上外侧入路较传统翼点入路操作简捷高效,尤其适合应用于Hunt-HessⅢ级以内的动脉瘤患者。
  第三部分 破裂前交通动脉瘤的个体化介入栓塞治疗
  目的:总结血管内栓塞治疗前交通动脉瘤的经验和体会,探讨血管内栓塞治疗前交通动脉瘤的疗效和降低并发症发生的方法。
  方法:回顾分析安徽省立医院神经外科2011年1月-2013年12月血管内栓塞治疗前交通动脉瘤126例。采集的数据包括:性别、年龄、Hunt-Hess分级、动脉瘤分布、治疗时间、手术并发症等。依据Hunt-Hess分级:Ⅰ级22例,Ⅱ级56例,Ⅲ级35例,Ⅳ级13例。
  结果:本组126患者均予以了血管内栓塞治疗,单导管弹簧圈栓塞107例,支架辅助栓塞11例,球囊辅助栓塞4例,双导管弹簧圈栓塞4例;成功栓塞123例;根据Raymond分级评价动脉瘤栓塞程度,RaymondⅠ级栓塞98例(79.6%),RaymondⅡ级栓塞25例(20.4%),患者随访6个月~4年,4例复发,其中3例再次栓塞完全,1例行开颅成功夹闭,无再出血病例。
  结论:血管内栓塞治疗前交通动脉瘤是一种有效的治疗方法。个体化的治疗,尽可能早的栓塞、较好的栓塞技术、术后早期引流血性脑脊液能降低并发症的发生。
  第四部分 双微导管技术在颅内不规则复杂动脉瘤治疗中的应用
  目的:总结双微导管技术在颅内不规则形动脉瘤血管内治疗中的初步经验,探讨其应用的可行性及优势。
  方法:回顾分析2013年7月-2015年5月间采用双导管技术血管内治疗的不规则形颅内动脉瘤37例病历资料,术后6个月进行随访。采集的数据包括:性别、年龄、Hunt-Hess分级、动脉瘤分布、治疗时间、手术并发症等。
  结果:采用双微导管技术成功栓塞本组37例动脉瘤,即刻造影显示35例为致密栓塞,2例为近全栓塞。按改良格拉斯哥预后量表评估预后,均恢复良好,无并发症,无死亡病例。半年后随访24例,动脉瘤无复发,血管分支存在、通畅。
  结论:双微导管技术对于颅内不规则形动脉瘤有着较好的疗效,手术操作简单、提高了致密栓塞率,增加了手术安全性。
[博士论文] 陈远征
外科学(整形) 山东大学 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几章展开论述:
  第一章 口服普萘洛尔不同给药方案治疗婴幼儿血管瘤疗效对比
  第一部分 口服不同剂量普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤疗效对比
  背景:
  婴幼儿血管瘤(infantile hemangioma,IH)是最常见的儿童体表软组织良性肿瘤,婴幼儿的发病率一般在5%-10%。极低出生体重早产儿发病率可以高达20%-30%。目前治疗手段有很多,如手术、冷冻、激光、药物治疗等。常用的药物有糖皮质激素、干扰素α、环磷酰胺、长春新碱等。上述治疗药物均有不同程度的副作用,使其临床应用受到限制。自2008年法国专家Léauté-Labrèze报道普萘洛尔对婴幼儿血管瘤有很好的疗效后,国内外广泛应用普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤,均取得了良好的疗效和较少的不良反应,已经成为治疗婴幼儿血管瘤的一线药物。
  目的:
  对比研究1.0 mg/kg/d和2.0mg/kg/d剂量普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤的疗效,以期为临床治疗提供理想的用药剂量及理论依据。
  方法:
  2015年9月到2016年10月期间,诊断为婴幼儿血管瘤,且符合纳入标准的婴幼儿血管瘤患儿,采用随机对照的原则,根据口服普萘洛尔的剂量不同分为两组,治疗A组(N=45):口服普萘洛尔剂量为1mg/kg/d;治疗B组(N=44):口服普萘洛尔剂量为2 mg/kg/d。1mg/kg/d和2 mg/kg/d的剂量,均分两次给药,时间间隔8小时。纳入A组和B组患儿按相应方案口服药物治疗,根据Achauer等提出的分级标准进行疗效评价,记录有效病例;记录治疗过程中发生的不良反应;符合治愈停药标准时,停药,并记录治愈病例及治疗持续时间。六个月时进行有效率、治愈率、不良反应发生率的比较;12个月时进行治愈率及治愈病例所需治疗时间的比较;治愈停药后随访3个月,统计复发病例,并进行复发率的比较。
  结果:
  治疗A组:开始治疗的平均年龄为3.7月(1-9月),终止治疗的平均年龄为11.1月(3-18月)。6个月时45例患儿疗效评价为:Ⅰ级(差)1例,Ⅱ级(中)3例,Ⅲ级(好)14例,Ⅳ级(优)27例;有效率91.1%;治愈率为60%;不良反应发生率为13.3%,复发率为9.5%。12个月时治愈率为86.7%,治疗持续时间为7.6±2.7个月。治疗B组:开始治疗的平均年龄为3.8月(1-9月),终止治疗的平均年龄为10.3月(3-18月)。6个月时44例患儿疗效评价为:Ⅰ级(差)2例,Ⅱ级(中)2例,Ⅲ级(好)8例,Ⅳ级(优)32例;有效率为90.9%;治愈率为72.7%;不良反应发生率为15.9%,复发率为11.9%。12个月治愈率为88.6%,治疗持续时间为6.2±1.9个月。6个月时两组有效率比较差异无统计学意义(P>0.05);治愈率比较差异有统计学意义(P<0.05)。不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。12个月时两组治愈率差异无统计学意义(P>0.05);治疗持续时间比较差异有统计学意义(P<0.05)。停药3个月后两组复发率差异无统计学意义(P>0.05)。
  结论:
  1.普萘洛尔1 mg/kg/d或2 mg/kg/d的剂量治疗婴幼儿血管瘤疗效好,不良反应少,有效率、不良反应发生率及复发率差异均无统计学意义,均可以作为治疗剂量。
  2.普萘洛尔1 mg/kg/d和2 mg/kg/d的剂量治愈婴幼儿血管瘤时间上相比,1 mg/kg/d的剂量需要更长的治疗时间。
  3.普萘洛尔说明书中推荐儿童用药剂量为0.5-1.0 mg/kg/d。考虑到不明确的远期不良反应及超剂量、超说明书用药方面的问题,建议治疗剂量为1mg/kg/d,在效果欠佳的情况下可逐渐增加剂量至2mg/kg/d。
  4.展望:进一步观察不同剂量对身高、体重、神经系统发育等远期的影响;前瞻性多中心大样本随机对照研究,为普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤的药物临床实验提供理论依据,为获得中国食品药品监督管理局(CFDA)的批准做出贡献。
  第二部分 口服普萘洛尔不同给药次数治疗婴幼儿血管瘤疗效对比
  目的:
  对比普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤不同给药次数对临床治疗效果的影响,为临床治疗提供安全方便有效的给药方法。
  方法:
  2016年10月到2017年2月间,诊断为婴幼儿血管瘤的患儿,并符合纳入标准。共收治患儿37例,采用随机对照的原则,根据口服普萘洛尔的给药次数分为两组,治疗1组(N=19):口服普萘洛尔剂量为2 mg/kg/d,2次/日;治疗2组(N=18):口服普萘洛尔剂量为2mg/kg/d,3次/日。治疗过程中记录不良反应发生情况;根据Achauer等提出的分级标准进行疗效评价,记录有效病例;根据治愈停药标准停药,并记录治愈病例。六个月时对两组有效率、治愈率及不良反应发生率进行比较。
  结果:
  37例婴幼儿血管瘤患儿在口服普萘洛尔后1周内,观察到瘤体张力下降,颜色变淡。治疗6个月时评价疗效。治疗1组19例患儿疗效评价:Ⅰ级(差)1例,Ⅱ级(中)0例,Ⅲ级(好)4例,Ⅳ级(优)14例,有效率94.7%,治愈率73.7%;发生无症状性心动过缓1例,腹泻1例,无低血压、低血糖、呕吐,四肢发凉,睡眠障碍等发生,不良反应发生率10.5%。治疗2组18例患儿疗效评价为:Ⅰ级(差)0例,Ⅱ级(中)0例,Ⅲ级(好)4例,Ⅳ级(优)13例,因不良反应改变治疗剂量1例,有效率94.4%,治愈率72.2%;发生口唇苍白及呕吐1例,腹泻1例,无其他不良反应发生,不良反应发生率11.1%。治疗有效率及治愈率差异无统计学意义(P>0.05)。两组间不良反应发生率均较低,其差异无统计学意义(P>0.05)。
  结论:
  1.口服2mg/kg/d普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤,一日三次给药与一日两次给药有效率、治愈率及不良反应发生率无明显差异,均安全、有效。
  2.目前普萘洛尔无针对婴幼儿剂型,且患者为婴幼儿,年龄小,服药困难,为减轻其服药痛苦,减轻患儿父母或者监护人护理负担,推荐用药次数为2次/日。
  3.展望:可进一步采取多中心大样本前瞻性研究,并增加药代动力学及药效学方面的指标,为用药次数的选择进一步提供理论依据。
  第二章 普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤作用机制的实验研究
  背景:
  血管瘤是婴幼儿最常见的血管良性肿瘤,约60%位于头颈部,大多位置表浅,严重地影响美观,给患儿及家属带来巨大的心理压力。根据Mulliken等提出的生物学分类法,通过病理学特点、生长方式及临床表现等将其分为血管瘤(hemangiomas)和血管畸形(vascular malformations)两大类。婴幼儿血管瘤的增殖和消退过程与血管内皮细胞的异常增殖、分化和成熟关系密切,所以对婴幼儿血管瘤发病机理及治疗的研究多数集中在血管发生和血管生成等因素中。
  缺氧诱导因子1α(Hypoxiainducible factor-1α)是细胞缺氧状态下分泌的重要细胞因子之一,是肿瘤生长过程中促进新生血管生成的始动因素,HIF-1α的高表达可以对包括血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)信号在内的多种下游靶基因进行调控,促进新生血管生成,缓解瘤体细胞供血不足,保证瘤体快速生长。
  目的:
  检测血管瘤组织及应用普萘洛尔后的瘤体组织和细胞中的HIF-1α的表达量,探讨HIF-1α过表达或敲除后对血管瘤内皮细胞的生物学行为影响,阐述普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤的作用机制,为普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤提供理论依据。
  方法:
  该组实验纳入10例婴幼儿血管瘤患儿,收集其切除的新鲜组织,检测正常血管组织,婴幼儿血管瘤组织和普萘洛尔治疗后婴幼儿血管组织中HIF-1α表达量变化。同时以体外培养血管瘤内皮细胞HemECs为研究对象,采用CCK-8法、流式细胞仪、划痕实验和成管能力分别测定HIF-1α过表达、敲除HIF-1α及普萘洛尔对血管瘤内皮细胞增殖、凋亡、迁移和成管能力的影响;采用荧光定量PCR和western blot法测定HIF-1α的变化。
  结果:
  与正常血管组织相比,HIF-1α在婴幼儿血管瘤组织中的表达量上调,经由普萘洛尔处理后的婴幼儿血管瘤组织中的HIF-1α的表达量下调。HIF-1α在普萘洛尔处理过的血管瘤内皮细胞中的表达量呈现浓度和时间依赖性;血管瘤内皮细胞经过普萘洛尔处理后能够抑制由HIF-1α过表达诱导的细胞增殖;HIF-1α过表达能够降低或者阻止由普萘洛尔诱导的细胞凋亡;转染HIF-1α过表达载体能够显著促进细胞的迁移及成管能力,而转染HIF-1αsiRNA干扰则会降低细胞的迁移及成管能力。
  结论:
  1.普萘洛尔和HIF-1α对血管瘤内皮细胞的生物学功能即增殖、凋亡、迁移、成管产生影响,并且二者相互影响,对血管瘤内皮细胞具有相反作用。
  2.通过对HIF-1α的调节发挥治疗作用可能是普萘洛尔治疗血管瘤作用机制之一。
  3.需要大样本的随机对照研究进一步明确普萘洛尔作用机制。可进一步对细胞内部的信号接收、传导等进行相关研究。
[硕士论文] 刘成
内科学(呼吸系病) 蚌埠医学院 2017(学位年度)
摘要:原发性心包间皮瘤(Primary PericardialMesothelioma,PPM)是一种在间皮细胞中发展的极罕见的心包肿瘤,因部位特殊,均为恶性,也可称为原发性恶性心包间皮瘤(Primary Malignant Pericardial Mesothelioma,PMPM)。一项大型尸检研究报告指出PMPM的发生率极低<0.0022%,男性多见,发病年龄在12~77岁,平均年龄47岁。目前PPM的病因仍未明确。其症状和体征常表现为呼吸困难、咳嗽、胸闷、胸痛、心悸、头晕、乏力、颈静脉怒张、水肿、肝肿大、奇脉等心脏压塞表现,当肿瘤累及心脏传导系统,可引起心律失常甚至猝死。因其症状和体征非典型和非特异,易误诊或者延误诊断。需要通过CT、MRI、PET-CT等多模态成像方法辅助诊断。心包积液中进行充分的细胞学诊断是非常困难的,间皮瘤为双向分化的肿瘤,以上皮或肉瘤性分化为主时诊断困难,免疫组织化学标记成为诊断的要点,但间皮瘤细胞暂无用于诊断的特异性标志物。需症状、影像学、病理结合免疫组化结果,诊断PMPM。对诊断明确的患者,手术是最重要的治疗方式。现暂无系统化疗的可靠临床试验,系统化疗的有效性主要通过病例报告证明。目前暂无化疗或放疗的大规模临床试验,这些治疗的证据水平相当低。虽然放射疗法和化疗都没有被证明是有益的,但两者仍被用于具有不完全肿瘤切除术患者的辅助治疗。PPM患者的中位生存期平均约为6个月,预后较差。本病例报告了1例患有复发性心包积液的48岁女性。初始症状无特异性,表现活动后胸闷、气喘症状。后进行了心包穿刺术,但是恶性细胞和结核病的检测为阴性。病情进展后出现肿瘤浸润表现,行超声引导下穿刺术,组织病理学检查包括免疫组织化学染色提示恶性间皮瘤。诊断明确,胸外科会诊无手术指证。予以“培美曲塞(500mg/m2)”方案化疗6次,病人的状况得到改善。后短期内再次进展,并出现上腔静脉阻塞综合征,调整方案予以“培美曲塞(500mg/m2)+顺铂(75mg/m2)”方案化疗4次,出现II度骨髓抑制表现,予以升白细胞治疗后好转,现继续化疗中。
[博士论文] 饶薇
临床医学 北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院中国医学科学院 2017(学位年度)
摘要:皮肤血管肉瘤是一种高度恶性的软组织肿瘤,其中头面部血管肉瘤最为常见。该病较为罕见,目前的研究多为病例报道或小样本量的病例分析,有关该病的治疗方案与预后风险因素尚无定论。由于缺乏有效的治疗方式,头面部血管肉瘤预后极差,寻找有效的治疗方式十分必要。而mTOR信号通路在调控细胞生长、增殖与存活,促进血管生成等方面具有重要的作用,其异常调节对于肿瘤的发生发展至关重要,且mTOR抑制剂已被尝试用于治疗部分肿瘤。同时,动物实验及体外实验表明,mTOR信号通路在血管肉瘤中也存在异常表达,但有关该通路在头面部血管肉瘤中的研究十分缺乏。
  目的:
  1.回顾分析北京协和医院2010年至2016年诊断的头面部血管肉瘤患者,总结其临床特征及治疗方案,初步分析可能影响预后的风险因素。
  2.探索mTOR信号通路相关分子在头面部血管肉瘤中的表达情况,为可能的靶向治疗提供新的证据。
  方法:
  1.检索北京协和医院2010年1月1日至2016年12月31日病理确诊为头面部血管肉瘤的患者,调阅患者的病案资料并进行电话随访,整理患者的临床特点和治疗情况,并进行生存分析,找出可能的预后影响因素。
  2.选择p-AKT at Ser473、p-AKT at Thr308、p-mTOR at Ser2448及p-p70S6K1atThr421/Ser424这4个靶分子进行免疫组化染色,同时分析这些分子对头面部血管肉瘤预后的影响。
  结果:
  1.我院2010年1月1日至2016年12月31日病理确诊为头面部血管肉瘤的患者共计23例,其中2例中途失访,8例死亡,6例无随访数据,中位随访时间为13个月。
  2.23例头面部血管肉瘤患者平均年龄为68.3岁,皮损多分布于额、项、颞以及眶周、颊部。
  3.我院头面部血管肉瘤患者的中位生存时间为26月,1年及3年累积生存率分别为73.5%(95%置信区间:51.0%-96.4%)和21.8%(95%置信区间:0%-57.7%)。
  4.通过单因素分析,我们发现年龄<70岁的患者中位生存时间为33.0月,而年龄≥70岁的患者则仅为8.0月(P=0.001)。此外,肿瘤>5cm的患者中位生存时间为13.0月,肿瘤≤5cm的患者则为33.0月(P=0.02)。
  5.头面部血管肉瘤中p-AKT at Ser473、p-AKT at Thr308、p-mTOR at Ser2448及p-p70S6K1at Thr421/Ser424的阳性率分别为13.0%、78.3%、47.8%及21.7%。
  6.AKT、mTOR及S6K1的磷酸化水平与头面部血管肉瘤的总生存期无显著相关性。
  结论:
  头面部血管肉瘤好发于老年人,皮损多分布于额、顶、颞以及眶周、颊部。该病预后极差,年龄≥70岁、肿瘤>5cm为可能的不良预后因素。此外,头面部血管肉瘤中存在AKT/mTORC1信号通路的异常调节,部分患者中尚存在mTORC2的异常激活,使用该通路的抑制剂治疗头面部血管肉瘤或许可以作为未来的研究方向。然而,p70S6K1在该病中的异常表达并不显著,S6K的其他亚型或mTOR下游的其他信号分子可能在头面部血管肉瘤中具有更重要的地位。
[硕士论文] 张明珠
影像医学与核医学·超声诊断 兰州大学 2017(学位年度)
摘要:目的:应用实时三维超声心动图(real-time three-dimensional echocardiography,RT-3DE)对行急诊PCI的左心室室壁瘤(left ventricular aneurysm,LVA)患者的术前及术后2个月心功能的相关指标进行对比,评估急诊PCI的短期疗效。
  方法:应用RT-3DE收集31例急性前壁心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)并LVA患者术前、术后2月左心室的心功能参数,主要包括:左心室舒张末期容积(left ventricular end-diastolic volume,LVEDV)、收缩末期容积(End-systolic volume,ESV)、心排血量(cardiac output,CO)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)及球形指数(spherical index,SPI),根据体表面积(body surface area,BSA(m2)=0.0061x身高(cm)+体重(kg)),计算出左室舒张末期容积指数(LVEDVI)、收缩末期容积指数(ESVI)、心脏指数(Cardiac index,CI)(LVEDVI=LVEDV/BSA,ESVI=ESV/BSA,CI=CO/BSA)。将研究对象分成功能性LVA(12例),解剖性LVA(11例),伴有血栓性LVA(8例)。对其术前、术后2月的心功能参数进行组内及组间比较;并对术前、术后2月的SPI、LVEF与相关心功能指标进行相关性分析。
  结果:(1)功能组术后2月的LVEF比术前增高,SPI降低,差异有统计学意义(P<0.05)。
  (2)解剖组术前、术后2月的CO、CI、LVEF、SPI差异有统计学意义(P<0.05),CO、CI、LVEF术后2月比术前高,SPI术后减低,其中SPI、LVEF显著性更高一些(P<0.01)。
  (3)血栓组术后2月的SPI比术前有所下降,差异有统计学意义(P<0.05);LVEF术后2月比术前有所提高(P>0.05),差异无统计学意义。
  (4)三组组内相比:术后2月的LVEDV、ESV、EDVI、ESVI均比术前有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。
  (5)三组组间比较:术前及术后2月LVEF及SPI差异无统计学意义(P>0.05)
  (6)①术前及术后2月的SPI与LVEF值呈负相关,与LVEDV、ESV、EDVI、ESVI、CO、CI呈正相关。②术前及术后2月的LVEF值与SPI、LVEDV、ESV、EDVI、ESVI、CO、CI呈负相关,其中LVEDV、ESV、EDVI、ESVI(P<0.01)、CO、CI(P<0.05)与LVEF值相关性有统计学意义。
  结论:(1)功能性和解剖性LVA患者PCI术后2月左心室形态及整体收缩功能改善,手术有效果;伴有血栓性LVA术后2月疗效不明显。
  (2)3RT-DE是评价急诊PCI对LVA患者的短期疗效的一种有效的方法,其中SPI及LVEF是重要的两个指标。
[博士论文] 刘筱雯
外科学(整形) 山东大学 2017(学位年度)
摘要:第一部分:基于转录组芯片的婴幼儿血管瘤组织中长链非编码RNAs(lncRNAs)表达谱分析
  婴幼儿血管瘤是婴幼儿时期最常见的良性血管性肿瘤,婴幼儿血管瘤的发病率约为3%~10%。临床上婴幼儿血管瘤表现:增生期以出生后一年以内快速增生为特征,消退期以一年以后自发消退为特征,3~5年后可进入消退完成期。增生期婴幼儿血管瘤是以不成熟内皮细胞的异常增殖为特征,而消退期婴幼儿血管瘤的内皮细胞逐渐成熟,血管团块逐渐形成管腔结构,消退完成期婴幼儿血管瘤瘤体的血管结构逐渐由脂肪组织和纤维结缔组织所取代。在增生期婴幼儿血管瘤中,血管瘤内皮细胞成类圆形,细胞核较大,消退期血管瘤中,血管瘤内皮细胞变细长,逐渐成熟。
  婴幼儿血管瘤由血管瘤干细胞,血管瘤内皮细胞,周细胞,肥大细胞等构成。婴幼儿血管瘤各种细胞组分的成功分离,揭示了血管瘤干细胞的存在。移植血管瘤干细胞于裸鼠体内可以模拟婴幼儿血管瘤的典型三期临床表现,这为研究婴幼儿血管瘤的发病机制提供新的依据,暗示婴幼儿血管瘤可能来源于血管瘤干细胞,婴幼儿血管瘤的增生与消退有可能是与血管瘤干细胞的增殖与消退有关。婴幼儿血管瘤发病机制假说有,胎盘内皮细胞栓塞假说,血管生成或者血管形成能力增加学说,组织缺氧学说。婴幼儿血管瘤中重要的信号通路机制包括,VEGF/VEGFR通路,Notch通路,β肾上腺素受体通路,HIF-α信号通路,PI3K/Akt/mTOR信号通路,PDGFB/PDGFR-β信号通路。
  虽然关于婴幼儿血管瘤的发病机制存在多种假说,目前婴幼儿血管瘤发病机制不清,血管内皮细胞异常增殖为特征的病理性血管生成是婴幼儿血管瘤的重要病理机制。而血管生成不足通常出现在缺血性疾病如心梗、中风等相关性疾病,而过度血管生成常在肿瘤增殖、炎症反应和视网膜病变等生理过程中起负面作用。故探究婴幼儿血管瘤血管生成的相关机制,亦有利于揭示病理性血管生成相关性疾病的发病机制。
  长链非编码RNAs(lncRNAs)是一类长度>200碱基的几乎不编码蛋白的RNA。LncRNAs参与大量生命活动过程,如染色体印记,表观遗传学调控,细胞周期调控,细胞凋亡调控,多能干细胞的调控等。LncRNAs在肿瘤、心血管、神经发育等病理生理活动中起重要调控作用。在血管生成方面,lncRNAs在生理性血管生成及病理性血管生成中起重要调控作用,例如在血管内皮细胞中,抑制lncRNAMALAT1促进细胞迁移同时抑制细胞增殖能力;在糖尿病相关肾脏微循环障碍,敲减LncRNA RNCR3可减轻肾脏血管功能障碍;糖尿病视网膜病变中,敲减lncRNAMIAT明显减轻糖尿病诱发的微循环障碍症状。故lncRNAs有可能在病理性新生血管生成中起到重要调控作用。
  目前lncRNA在婴幼儿血管瘤方面的表达情况及作用机制尚不清楚,本研究拟在现有工作基础上,对目标长链非编码RNA在婴幼儿血管瘤发病机制之一的病理性血管生成作用方面,进行效应及机制的深入研究,可进一步完善lncRNA在婴幼儿血管瘤发生中的作用机理,也有可能为病理性血管生成相关性疾病的研究提供有力依据。
  研究目的:本章节拟利用lncRNA芯片技术进行婴幼儿血管瘤组织中lncRNA表达谱分析,通过生物信息学分析差异表达的LncRNA,筛选出与血管生成相关的lncRNA,采用QPCR验证其在婴幼儿血管瘤瘤体中的表达量,并初步探讨其功能,为婴幼儿血管瘤的病理机制的研究提供新的突破点。
  研究方法:收集2013年6月份到2016年6月份山东省立医院烧伤整形外科就诊的增生期婴幼儿血管瘤及瘤体旁组织的标本,存放于液氮中。采用Trizol一步法提取RNA,应用基因芯片技术进行婴幼儿血管瘤瘤体对比瘤体旁正常组织进行lncRNA及mRNA表达谱分析。芯片数据进行差异表达基因的生物信息学分析,并结合文献,选择目的分子。采用荧光定量PCR检测目标lncRNA表达量,验证目标lncRNA是否差异性表达,并判断差异表达倍率是否与芯片分析结果一致。
  结果:增生期婴幼血管瘤lncRNA+mRNA表达谱芯片分析数据经过标准化分析处理,选择变化倍率超过2倍,p<0.05,为差异表达lncRNA和mRNA。相对于增生期婴幼儿血管瘤体旁正常组织,婴幼儿血管瘤瘤体,有1259个lncRNA高表达,857个lncRNA低表达,另外有1469个mRNA高表达,1184个mRNA低表达。这些数据资料已上传GEO数据库(GSE78811)。
  采用KOBAS2.0系统分析差异表达mRNA,其中排名前30的GO条目包括大血管发育,血管调节,血管发生,细胞迁移,内皮细胞发育,心血管系统发育,血管生成和组织迁移。排名前30的通路信息条目包括“一氧化氮激活鸟苷酸环化酶”,“表皮生长因子受体(EGFR)与磷脂酶C-gamma的相互联系”,“血管内皮生长因子信号通路(VEGF)”,“血管平滑肌收缩”,“神经生长因子信号通路(NGF)”,“非整合膜蛋白-细胞外基质和Rho GTPase环路相互作用”。共表达网络关联分析图展示MEG3,MEG8,FENDRR和Linc00152与之相关mRNA的关系,提示一个lncRNA有可能与几个到数十个mRNAs相关联。
  根据文献及生物信息学分析,选择目标靶分子进行QPCR分析,其中文献推荐的分子有MALAT1,MEG3,MEG8,FENDRR,Linc00152,根据生物信息学分析选定的分子有p29066,p33867,p44557_v4和p8683,选定的mRNA分子为FOXF1,EGFL7。采用QPCR法在大样本中验证芯片结果;其中9个lncRNAs(MALAT1,MEG3,MEG8,p29066,p33867,FENDRR,linc00152,p44557_v4,and p8683)和2个mRNAs(FOXF1,EGFL7)经过QPCR验证,与芯片结果一致。
  结论及意义:
  1.首次进行增生期婴幼儿血管瘤瘤体对比瘤体旁正常组织的lncRNA的表达谱芯片分析,结果为有1259个lncRNA高表达,857个lncRNA低表达,另外有1469个mRNA高表达,1184个mRNA低表达,提示lncRNA和mRNA分子在婴幼儿血管瘤中存在显著差异性表达。
  2.生物信息学分析显示,排名前30的GO条目包括大血管发育,血管调节,血管发生,细胞迁移,内皮细胞发育,心血管系统发育,血管生成和组织迁移,共表达网络关联图展示MEG3,MEG8,FENDRR和Linc00152与之相关mRNA的关系,提示差异表达的lncRNA可能与婴幼儿血管瘤中血管生成机制存在相关性。
  3.差异表达的lncRNA中,我们选取文献推荐的分子MALAT1,MEG3,MEG8,FENDRR,linc00152,根据生物信息学分析选定的分子p29066,p33867,p44557_v4和p8683,选定的mRNA分子为FOXF1,EGFL7为目标分子,进行QPCR分析,结果与芯片结果相一致。提示差异表达的lncRNA可能与婴幼儿血管瘤的疾病发展存在相关性。
  第二部分:MALAT1在婴幼儿血管瘤组织的表达及功能研究
  研究目的:我们前期工作发现婴幼儿血管瘤瘤体lncRNA存在显著差异表达,其中明星分子MALAT1表达上调明显。在新生血管生成中,lncRNA MIAT及MALAT1在糖尿病视网膜病变中促进新生血管生成。而婴幼儿血管瘤以病理性血管生成为特征。本试验目的在于探究婴幼儿血管瘤中过表达的MALAT1是否对血管生成过程有调控作用。
  研究方法:首先扩大样本量,采用QPCR法探究MALAT1在婴幼儿血管瘤瘤体中的表达量。再次采用shRNA慢病毒感染脐静脉内皮细胞,采用MTT法探究MALAT1在细胞增殖方面的作用,采用流式细胞仪法检测MALAT1在细胞周期调控方面的作用,检测细胞凋亡情况,采用血管生成实验检测MALAT1对血管生成的调控作用。
  结果:扩大样本量后,MALAT1在增生期婴幼儿血管瘤中依然存在高表达;shRNA病毒感染法敲减MALAT1,敲减组MALAT1表达量约为对照组的41%,MTT实验提示敲减MALAT1显著抑制细胞增殖,流式细胞仪检测提示敲减MALATI显著引起S期延长,凋亡检测提示敲减MALAT1诱导凋亡,血管生成实验提示敲减MALAT1抑制体外血管生成。
  结论及意义:MALAT1在增生期婴幼儿血管瘤中存在高表达,敲减MALAT1显著抑制脐静脉内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制体外血管生成。故过表达的MALAT1有可能在婴幼儿血管瘤增生期的快速增殖和快速血管生成中起重要作用。
  第三部分:FENDRR及FOXF1在婴幼儿血管瘤组织中的表达及其机制研究
  研究目的:前期工作发现血管瘤瘤体lncRNA存在显著差异表达,其中FENDRR及其邻近转录因子FOXF1表达上调明显,FENDRR为表达上调倍率最高的lncRNA分子。FENDRR在胚胎时期的大血管心脏及体壁的发育中起重要调节作用,在血管内皮细胞的研究中发现FOXF1促进体外血管生成,同时FOXF1促进胚胎时期大血管发育。婴幼儿血管瘤以血管生成活动过度为特征,而FENDRR和FOXF1在婴幼儿血管瘤中虽表达增高,但其作用及机制尚不清楚。故该课题旨在探究FENDRR在婴幼儿血管瘤中的作用,及FOXF1与FENDRR之间的调控机制研究。
  研究方法:本课题拟扩大样本量采用QPCR法验证FENDRR与FOXF1表达量;采用shRNA构建慢病毒转染细胞后构建FENDRR敲减细胞株,采用MTT法、流式细胞仪检测法、血管生成实验探究FENDRR的细胞学功能;采用荧光素酶报告基因法探究FOXF1是否调控FENDRR的表达;于HUVEC中转染慢病毒敲减FENDRR,后采用QPCR法检测FOXF1表达量;于HUVEC中转染过表达FOXF1慢病毒,后采用QPCR法检测FENDRR表达量;采用表达谱芯片法探究FENDRR调控血管生成间接机制,选择目标蛋白,采用蛋白质印迹法验证芯片结果。
  结果:
  1.QPCR实验证实,lncRNA FENDRR及转录因子FOXF1在增生期婴幼儿血管瘤组织中的相对于瘤体旁正常组织存在显著高表达,且FENDRR的表达量与FOXF1的表达量之间存在正相关。
  2.体外功能学实验发现,于脐静脉内皮细胞中敲减FENDRR后,可显著抑制脐静脉内皮细胞增殖,诱导细胞凋亡,细胞周期检测发现敲减FENDRR可引起G2/M期阻滞,体外血管生成实验发现,敲减FENDRR可显著抑制血管生成现象。
  3.为探究转录因子FOXF1是否可以转录激活LncRNA FENDRR,采用荧光素酶报告基因实验,证实FOXF1可转录激活FENDRR;另外,在脐静脉内皮细胞中过表达FOXFI,FENDRR的表达量显著升高;在脐静脉内皮细胞中敲减FENDRR后,QPCR法检测FOXF1表达量显著下降。提示转录因子FOXF1与FENDRR之间可能存在负反馈调节机制。
  4.为探究lncRNA FENDRR的下游调节机制,采用基因表达谱芯片分析,结果为在脐静脉内皮细胞中敲减FENDRR后,相对于对照组,敲减FENDRR组上调基因364,下调基因207个(表达量变化大于1.5倍,且P值要小于0.05),IPA分析提示,EIF2信号通路被显著抑制,AMPK信号通路被显著激活,鉴于功能学实验提示敲减FENDRR抑制细胞增殖和血管生成,并可引起细胞周期的G2/M期阻滞,我们选取相关调节基因,如PLK1,KIAA0101和CCND2,采用Western Blot法验证其表达量,提示敲减FENDRR可抑制PLK1,KIAA0101和CCND2表达量。
  结论及意义:
  1.增生期婴幼儿血管瘤中,转录因子FOXF1及lncRNA FENDRR显著高表达,且FENDRR与FOXF1的表达量存在正相关。
  2.FOXF1激活的过表达FENDRR,有可能通过激活PLK1,KIAA0101和CCND2表达,起到促进细胞增殖,促进血管生成的效果。
  3.探究FENDRR与新生血管生成相关机制有可能揭开LncRNA在婴幼儿血管瘤发病中的作用,为新生血管生成性疾病的靶向治疗提供靶点。
  第四部分结论及创新点
  结论
  1.婴幼儿血管瘤lncRNA表达谱分析发现约1259个lncRNA分子上调,857个lncRNA分子下调,另外有1469个mRNA高表达,1184个mRNA低表达。其中经验证9个lncRNA和2个mRNA经过QPCR验证表达存在明显差异,且差异变化规律与芯片结果一致。
  2.LncRNA MALAT1在增生期婴幼儿血管瘤中显著高表达。功能学实验中,敲减MALAT1可显著抑制细胞增殖,抑制血管生成,诱导S期阻滞。
  3.LncRNA FENDRR在增生期婴幼儿血管瘤中高表达。功能学实验中,下调FENDRR可抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,诱导G2/M期阻滞,同时抑制血管生成。
  4.机制研究发现FOXF1可转录激活FENDRR,抑制FENDRR可通过下调PLK1,KIAA0101和CCND2的表达来产生抑制血管生成、抑制增殖、诱导凋亡、引起G2/M阻滞的效应。
  创新性:
  1.首次在婴幼儿血管瘤中采用表达谱芯片法研究长链非编码RNA的差异表达,并应用生物信息学分析结合文献选定目标分子,为深入研究lncRNA在婴幼儿血管瘤的功能及其机制提供依据。LncRNAs在病理性血管生成及生理性血管生成中均起到重要的调控作用,而婴幼儿血管瘤的病理特征为病理性血管生成,故从婴幼儿血管瘤组织中筛选出差异表达的lncRNA分子,并探究其在病理性血管生方面的作用及其机制,有可能为其他病理性血管生成性疾病的研究提供有力依据。
  2.首次发现MALAT1在增生期婴幼儿血管瘤中高表达,MALAT1促进内皮细胞增殖,促进血管生成。提示MALAT1具有促进细胞增殖和血管生成的作用,MALAT1在婴幼儿血管瘤中有可能起到促进血管瘤内皮细胞增殖和血管生成的作用,MALAT1有可能成为治疗血管过度生成性疾病的新靶点,这为血管生成性疾病的机制研究及治疗提供依据。
  3.首次发现转录因子FOXF1诱导的过表达FENDRR通过PLK1,KIAA0101,CCND2促进内皮细胞增殖,促进血管生成。提示FENDRR具有促进细胞增殖和促进血管生成的作用,FENDRR有可能参与婴幼儿血管瘤的发病机制,并且FENDRR有可能成为治疗血管生成相关性疾病的新靶点。本研究深入探讨并明确目标lncRNA FENDRR及通路中相关分子对血管瘤的调控作用,不但可以完善血管瘤的发病机制,填补相关领域的空白,而且可以从分子生物学角度为婴幼儿血管瘤的疾病干预提供理论依据。进而为其它相关疾病如肿瘤、糖尿病等领域的血管生成干预提供重要参考。
[硕士论文] 王逸飞
口腔医学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:背景:
  婴幼儿血管瘤(Infantile hemangioma,IH)是婴幼儿最常见的先天性良性肿瘤,约60%发生于口腔颌面部。IH多在出生后数天内出现,一般在4周及4-5个月的时候快速生长;1岁以后进入自然消退期,可持续3-8年甚至更长时间,多数为不完全消退。IH的发病机制目前尚不完全清楚,其中血管瘤内皮细胞(Hemangioma Endothelial cells,HemECs)作为IH的最主要细胞成分,直接决定着其各种生物学特性,是现阶段相关研究的主要研究对象。HemECs可分泌血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factors,VEGF),作用于自身或周围同类细胞的相关受体,激活其下游通路,促进血管生成,进而导致IH的增殖。目前国际上主张对IH进行早期积极干预以减少并发症,但现阶段关于IH的多种治疗方法均存在或多或少的缺陷。因此,进一步揭示IH的发病机制,探索更加安全有效的治疗方法仍十分必要。
  体液免疫系统在机体对抗肿瘤发生发展中发挥重要作用,肿瘤抗原可刺激机体产生抗肿瘤抗体,即免疫球蛋白,可激活补体系统,形成以C5b-9为主要成分的补体膜攻击复合体,通过补体依赖的细胞毒作用,杀伤肿瘤细胞。儿童免疫学的研究表明,婴幼儿抗体补体系统的发育与成熟和IH的增殖消退存在时间相关性。另有研究表明,以IgG为主要成分,麦芽糖为主要辅料的临床常用药静脉注射用人免疫球蛋白(Intravenous Immunoglobulin,IVIg)可通过多种途径抑制血管内皮细胞VEGF表达及作用,对正常内皮细胞如人脐静脉内皮细胞的增殖有抑制作用。
  现阶段未见关于体液免疫系统与IH关系的基础实验研究,免疫球蛋白是否与IH的发病及病程进展有关需要一步探究。因此,本研究通过组织切片染色检体外细胞培养和药物干预实验等方法,从免疫学角度对IH的发病机制进行初步探究,为免疫球蛋白在IH的临床治疗中的应用提供初步的理论基础。
  目的:
  1.检测抗体和补体膜攻击复合体(Membrane Attack Complex,MAC)在不同时期IH中的表达分布情况;
  2.通过体外药物干预实验,检测IVIg对HemECs的增殖及分泌VEGF情况的影响;
  3.探讨抗体补体系统与IH发生发展的关系,为免疫球蛋白在IH的临床治疗中的应用提供初步的理论基础。
  方法:
  1.选取2010-2016年于山东大学齐鲁医院口腔科或小儿外科手术切除的不同时期IH标本,制备组织切片,以Glut-1免疫组织化学染色明确诊断;HE染色观察不同时期IH中免疫细胞的类型及分布;免疫荧光染色检测不同时期IH中IgG和C5b-9的共沉积情况。
  2.选取手术切除的新鲜增殖期IH标本,以组织块贴壁法分离培养HemECs;通过CD31+免疫磁珠进行细胞纯化,免疫细胞化学检测纯化前后细胞表达CD31和vWF的情况,流式细胞术进行细胞纯度鉴定。
  3.配置浓度为0、5、10、15、20、25mg/mL的IVIg和浓度为25mg/mL麦芽糖溶液(作为对照组),进行药物干预,通过CCK-8法检测24h、48h后HemECs的增殖情况;ELISA检测24h、48h后HemECs分泌的VEGF的变化。
  结果:
  1.增殖早期IgG和C5b-9表达均不明显;增殖晚期瘤体内血管内皮可见IgG沉积,C5b-9不明显;消退期瘤体内可见IgG和C5b-9强阳性共沉积,局部可见IgG-C5b-9共沉积带。
  2.组织块贴壁法培养HemECs,组织块种植第3天可见细胞爬出,原代细胞呈多角形或长梭形。CD31+免疫磁珠法成功分离纯化HemECs,CD31和vWF阳性表达,细胞纯度达99%以上。
  3.CCK-8实验发现IVIg浓度大于等于10mg/mL时,实验组OD值显著降低;ELISA发现IVIg浓度为5mg/mL时,HemECs分泌VEGF的量增多,当药物浓度大于等于10mg/mL时,随药物浓度增加,VEGF的量降低。
  结论:
  1.IgG和C5b-9的沉积与IH的消退存在相关性。
  2.一定浓度的IVIg在体外可显著抑制HemECs的增殖,这可能与IVIg抑制HemECs分泌VEGF有关。
  3.抗体补体系统在IH的病变发展中存在一定作用,IVIg在IH的治疗中具有一定的临床应用价值。
[博士论文] 和晓坡
口腔医学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:研究背景
  血管瘤(hemangiomas)是发生在婴幼儿的血管源性良性肿瘤,发病率高达10~12%,绝大多数在出生时或出生后不久发现,大部分可自行消退,但仍有20%的血管瘤不能消退。根据病变发展过程可分为增殖期、消退期和消退完成期。血管瘤虽然属于良性肿瘤,但发生在口腔颌面及颈部的病变,不仅严重影响面容美观,还可能由于病变阻塞呼吸道、消化道而影响发音、进食,甚至导致局部出血、窒息并危及生命。因此目前主张对该病应积极进行早期治疗。血管瘤常用的治疗方法有药物治疗、激光、手术切除、冷冻以及硬化治疗等。冷冻、激光及硬化治疗易导致增生或萎缩性瘢痕、色素沉着或色素减退等,手术切除仅适用于局限性的血管瘤的治疗。药物治疗则是一种治疗早期血管瘤安全、有效的方法。治疗血管瘤的药物有多种,目前国内外常用药物包括以下几类:1.β-肾上腺素受体阻滞剂,以普萘洛尔(propranolol)为主;2.皮质类固醇激素,以泼尼松(prednisolone)为主;3.其它:α-干扰素(IFN-α)、咪喹莫特(Imiquimod)、抗肿瘤药环磷酰胺(CTX)及长春新碱(VCR)等。2008年,在《新英格兰医学杂志》上,Leaute-LabrezeC等首次报道口服普萘洛尔引起了鼻咽部血管瘤的消退。近年来,口服普萘洛尔逐渐成为治疗血管瘤的一线药物。
  2012年,Swetman等首次报道口服西地那非(sildenafil)治疗3名淋巴管畸形患儿后病变显著消退,发表于《新英格兰医学杂志》上,提示西地那非可作为治疗淋巴管畸形的一种新型药物。但该文章仅展示了患儿病变部位的照片和核磁共振平片(magnetic resonance imaging,MRI),病变均未经手术及病理证实为淋巴管畸形。根据MRI表现,我们认为此患儿更符合血管瘤伴发淋巴管畸形的诊断,且病变以血管瘤为主。西地那非是一种磷酸二酯酶-5(phosphodiesteraseisoform-5,PDE-5)抑制剂,因而我们推测可能西地那非是通过抑制PDE-5的作用使该病变缩小的。在此启发下,我们通过免疫组织化学的方法研究了PDE-5在静脉畸形、动静脉畸形、淋巴管畸形、血管瘤组织中的表达。结果表明PDE-5在血管瘤组织中呈阳性表达,在其它脉管畸形组织中无表达。因此,我们认为西地那非是对血管瘤而不是淋巴管畸形起作用。目前很多文献证实西地那非可增强某些类型的恶性肿瘤化疗效果并对血管平滑肌、肺动脉内皮细胞等有抗增殖及促进凋亡的作用。因此,我们通过体外实验进一步研究西地那非对血管瘤内皮细胞(HemECs)增殖及凋亡的影响,并对其相关机制进行探讨。
  目的
  1.检测PDE-5在血管瘤及各种脉管畸形组织中的表达。
  2.研究西地那非对人源性HemECs的增殖和凋亡的影响。
  3.研究西地那非对HemECs的增殖和凋亡作用与DNA分化抑制因子-1(Id-1)表达的关系,探讨该药的作用机制。
  方法
  1.收集山东大学齐鲁医院病理科2000-2013年血管瘤及脉管畸形组织块,通过免疫组织化学的方法分别检测石蜡包埋的10例淋巴管畸形、8例增殖期血管瘤、
  2例消退期血管瘤、10例静脉畸形以及10例动静脉畸形组织块中PDE-5的表达。血管瘤及脉管畸形的诊断是依据患者病史、体格检查、MRI表现以及最后的病理结果确定的。淋巴管内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)、细胞膜表面分化抗原34(CD34)和葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)分别作为淋巴管内皮细胞、血管内皮细胞和血管瘤组织的特异性标记物。随后对PDE-5在血管瘤及各种脉管畸形组织的表达进行了检测。本研究通过了山东大学齐鲁医院医院伦理委员会授权,所有患者或监护人均知情同意。
  2.收集山东大学齐鲁医院手术切除并经病理证实为血管瘤组织标本,利用组织块贴壁培养法分离并培养HemECs。通过免疫细胞化学法检测第八因子相关抗原因子vWF、CD34和PDE-5在HemECs中的表达。体外以梯度浓度西地那非(0μM,1μM,3μM,5μM,10μM和15μM)处理HemECs24 h、48 h和72 h后,MTT法检测细胞的增殖能力。以梯度浓度的西地那非(0,1,5,10,15μM)处理HemECs,20分钟后分别加入50 ng/ml bFGF、50 ng/ml VEGF。继续孵箱培育24 h。MTT法检测西地那非对bFGF及VEGF诱导的HemECs增殖的影响。HemECs分别经对照组(0μM)、5μM西地那非处理24 h后,采用流式细胞Annexin-V/PI staining assay检测细胞凋亡率。
  3.组织块培养法获得的HemECs分别经OμM(对照组)、5μM(实验组)西地那非处理24 h后,用TRI法提取细胞总RNA并逆转录成Id-1 cDNA,再通过实时荧光定量RFQ-PCR扩增cDNA,利用比较Ct值法(2ˉ△△Ct)计算Id-1基因和内参照基因阈值循环数差异,检测两组HemECs中Id-1基因的相对mRNA表达量。HemECs分别经0μM(对照组)、5μM(实验组)西地那非处理24 h后,提取细胞总蛋白,通过免疫印迹法(western blot)检测两组HemECs中Id-1蛋白的表达水平,人舌鳞癌TCA8113细胞系作为Id-1蛋白表达的阳性对照。
  结果
  1.免疫组织化学检测发现CD34、LYVE-I和GLUT-1分别作为血管内皮细胞、淋巴管畸形组织和血管瘤组织的特异性标记物表达均阳性。PDE-5表达在血管瘤组织HemECs胞浆内,但在淋巴管畸形、动静脉畸形、静脉畸形组织中均无表达。
  2.MTT法检测发现在西地那非浓度为5μM时,24 h后与对照组(0μM)相比开始出现显著差异(t=3.220,P<0.01),出现明显的细胞抑制现象,且随时间延长抑制作用逐渐加强。西地那非作用于HemECs72 h时细胞的增殖活性与48 h相比无明显差异(P>0.05)。在检测西地那非对bFGF及VEGF诱导的HemECs增殖的抑制作用时,西地那非浓度为5μM时,对bFGF及VEGF诱导的HemECs增殖也出现明显的细胞抑制现象(P<0.05),且随时间延长抑制作用逐渐加强。然而,当西地那非浓度为15μM时,与浓度为10μM相比对HemECs的增殖抑制作用无明显差别(P>0.05)。因此,浓度为5μM和作用时间为24 h分别是西地那非抑制HemECs的最适有效浓度和最适有效作用时间。用5μM西地那非处理HemECs24 h后,在光学显微镜下可见到HemECs随着细胞间连接的破坏和胞浆内不断增加的颗粒,细胞形态发生了改变。流式细胞学分析结果表明5μM西地那非处理HemECs24 h后凋亡率为10.5%,高于对照组(2.53%)。因此,体外实验中浓度5μM的西地那非处理24 h后显著抑制了HemECs的增殖并促进了其凋亡。
  3.通过实时荧光定量RFQ-PCR方法,根据2-△△ct公式,用5μM西地那非处理HemECs24 h后,细胞内Id-1的mRNA相对表达量减少了44.2%,(t=9.749,df=4,P=0.0006<0.01)。根据Western blot实验取得的免疫印迹条带的灰度值比较分析,用5μM西地那非处理HemECs24 h后,细胞内Id-1的蛋白表达也降低。
  结论
  1.血管瘤组织中存在磷酸二酯酶-5。
  2.西地那非在体外能抑制HemECs增殖和促进其凋亡。
  3.西地那非抑制HemECs增殖和促进其凋亡作用可能是通过下调Id-1基因来实现的。
[硕士论文] 任彤
外科学(神经外科) 中国人民解放军海军军医大学;第二军医大学 2017(学位年度)
摘要:第一部分动脉瘤性蛛网膜下腔出血后迟发性脑缺血影响因素META分析
  目的:
  目前关于动脉瘤性蛛网膜下腔出血后发生迟发性脑缺血(DCI)的影响因素的报道尚不统一,尤其是关于手术和介入治疗对DCI的不同的影响结果的报道仍有分歧。因此本课题通过Meta分析,探讨动脉瘤性蛛网膜下腔出血后发生迟发性脑缺血的影响因素及其相关危险度,为动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aSAH)患者预防DCI提供理论依据。
  方法:
  搜集PubMed上近10年关于动脉瘤性蛛网膜下腔出血后迟发性脑缺血影响因素相关的文献,利用Revman5.2软件对纳入文献相关指标畸形META分析,计算每个影响因素的优势比(OR值)及95%置信区间。
  结果
  此次研究共纳入13篇相关文献,共5084名患者,其中发生DCI的患者为1338人,DCI总发生率为26.3%。Meta分析结果还提示各因素合并OR值及95%置信区间分别:性别0.87(0.68-1.12)、高血压(Hypertension)病史1.26(0.76-2.09)、吸烟史1.28(0.92-1.77)、入院时临床分级(Clinical Grade)0.35(0.27-0.46)、Fisher分级0.38(0.22-0.65)、治疗方式0.70(0.60-0.81)、动脉瘤位置1.23(0.88-1.71)。
  结论:
  入院时临床分级、Fisher分级及动脉瘤的治疗方式是影响动脉瘤性蛛网膜下腔出血后发生迟发性脑缺血的影响因素,而性别、高血压病史、吸烟史、动脉瘤位置未显示出有明显相关性。
  第二部分破裂动脉瘤术后迟发性脑缺血的影响因素分析(单中心)
  目的:
  分析本院破裂动脉瘤术后出现迟发性脑缺血的发生率、影响因素和相关临床特点,更深入的研究迟发性脑缺血的影响因素,以期为改善蛛网膜下腔出血患者的预后提供进一步的理论依据。
  方法:
  回顾性分析我院自2013年1月至2016年6月入院的动脉瘤破裂后蛛网膜下腔出血2周内行手术治疗的患者临床资料,分析迟发性脑缺血的影响因素及发病特点。
  结果:
  破裂动脉术后迟发性脑缺血发生率为10.7%,经多元回归分析提示治疗方式(开颅夹闭或介入栓塞)(OR=6.645,P<0.05)和Fisher分级(OR=5.325,P<0.05)是影响破裂动脉瘤患者出现迟发性脑缺血的危险因素。在Fisher分级Ⅰ-Ⅱ级的病人中,栓塞组病人和夹闭组病人DCI的发生率均很低,分别为2.4%和4.8%。在Fisher分级Ⅲ-Ⅳ级时栓塞组病人和夹闭组病人DCI发病率分别为3.4%和27.7%,且两者有统计学差异(P<0.05)。迟发性脑缺血的部位可以在手术同侧,也可以在手术对侧。DSA造影显示,血管痉挛较严重的一侧,均发生在SAH较重的一侧。
  结论:
  治疗方式和Fisher分级均是破裂动脉瘤术后DCI的危险因素,即只有在Fisher分级≥3级的患者行夹闭手术时对DCI发生具有高度危险性,而且脑缺血的部位与蛛网膜下腔出血波及的范围相关,且出血较多的部位,发生血管痉挛更为严重。
[硕士论文] Muna Baskota
Clinical Medicine 重庆医科大学 2017(学位年度)
摘要:Kawasaki disease is an acute self-limited vasculities of unknown etiology that occurs predominantly in infants and young children. If it is not treated early with high dose intravenous immunoglobulin, 1 in 5 children develop coronary artery aneurysm. Kawasaki disease is the most common acquired heart disease in children in developing countries. Coronary artery aneurysm is an uncommon condition that can be cause of death when it thrombosis or ruptures. In this study the articles focusing on treatment and prognosis of coronary artery aneurysm in Kawasaki disease are included. The age group selected was below eighteen. Only full text articles, which are in English, are included. This paper reviews about the different treatment done for coronary artery aneurysm in Kawasaki disease like coronary angiography and percutaneous coronary intervention, coronary artery bypass grafting, and transcatheter treatment and their prognosis. The short-term outcomes with these treatments are excellent. However the long-term prognosis is still unclear in some studies so follow up is essential.
[硕士论文] 罗薇
口腔医学 遵义医学院 2017(学位年度)
摘要:目的:应用地塞米松联合低剂量普萘洛尔与单纯低剂量普萘洛尔治疗婴幼儿面颈部血管瘤进行对比研究,分析其疗效及安全性,同时检测其对血清中血管内皮生长因子(VEGF)的影响。
  方法:选择2015年2月-2016年11月就诊于遵义医学院附属口腔医院及遵义医学院附属医院小儿外科的32例婴幼儿面颈部血管瘤患儿,年龄在1月~1岁,其中男性15例,女性17例。用药前行血常规、电解质、肝肾功、血糖、凝血功、心脏彩超等检查,常规化验检查无异常者,根据纳入标准采用双色球法随机分为试验组及对照组。每组各16例。试验组采用静滴低剂量地塞米松联合口服普萘洛尔进行治疗,地塞米松用法为静脉滴注,剂量为0.3 mg/kg/d,每日1次,共3日;普萘洛尔用法为口服,剂量为2.0 mg/kg/d,1次/日顿服,疗程为6个月;对照组采用单纯口服普萘洛尔组,剂量为2.0 mg/kg/d,1次/日顿服,疗程6个月。对用药前、用药后6月患儿病变治疗有效率及肝功能、心率指标进行分析,同时检测血清中VEGF水平,分析对血清中VEGF的影响。
  结果:试验组总体有效率为93.75%,对照组总体有效率为81.25%,两组间具有显著差异(P<0.05);治疗后1周,试验组血清VEGF水平下降较对照组大(P<0.05);治疗后6月,两组血清中VEGF水平对比无差异(P>0.05);治疗前后监测患儿肝功能,两组对比无差异(P>0.05);第1日用药前后心率比较,对照组心率有所降低,差异有统计学意义(P<0.05),第2日用药2h时,患儿心率变化无差异(P>0.05)。试验组于用药前后心率对比无差异(P>0.05)。
  结论:低剂量糖皮质激素联合低剂量普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤,疗效优于单纯使用低剂量普萘洛尔的治疗。其安全性与单纯低剂量普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤无差别。
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