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[硕士论文] 范懿魏
外科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  随着影像学技术的进步和健康体检的普及,早期肺癌的检出率越来越高。非小细胞肺癌(NSCLC)的术前分期,尤其是纵隔淋巴结分期是决定能否手术并判断患者预后的关键。研究直径≤5cm的临床早中期NSCLC患者发生纵隔淋巴结转移的独立危险因素,构建一种判断纵隔淋巴结转移的数学预测模型,为术前预测直径≤5cm的临床早中期NSCLC患者纵隔淋巴结转移提供数据支持,以期提高术前纵隔淋巴结分期的准确性,协助临床医师做出合理的诊疗决策。
  方法:
  回顾性分析2012年1月至2017年8月扬州大学临床医学院(江苏省苏北人民医院)胸外科收治的符合入组标准的NSCLC患者608例。将入组的病例以3∶1的比例随机分为两组,前者为建模组(A组),用于建立模型;后者为验证组(B组),用于进行模型的外部验证及与其他模型的比较。总结A组456例患者相关临床病史资料、影像学资料及病理情况,通过单因素和多因素分析遴选出与直径≤5cm的临床早中期NSCLC患者纵隔淋巴结转移相关的独立危险因素,并建立二元Logistic回归数学模型。通过Hosmer-Lemeshow拟合优度检验评估模型的拟合程度,通过受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)评估预测模型的准确性,并确定最佳截点值。应用B组152例患者资料,通过卡方检验判断纵隔淋巴结转移实际与预测的一致程度,并用Kappa值评价其一致率。将B组资料代入各模型,比较各数学预测模型的预测能力,判断本研究模型的临床应用价值。
  结果:
  多因素分析结果显示,患者年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、病理类型以及胸膜牵拉征5项因素是判断直径≤5cm的临床早中期NSCLC患者纵隔淋巴结转移的独立危险因素。通过对A组资料的相关分析,建立的数学预测模型为P=ex/(1+ex),其中x=-2.831+(0.825×肿瘤直径)+(1.53×肿瘤部位)+(0.779×胸膜牵拉征)+(1.883×病理类型)-(0.06×年龄),其中e为自然对数。Hosmer-Lemeshow拟合优度检验显示,预测值和观察值间差异无统计学意义,ROC曲线下面积为0.763(95%CI:0.697~0.829)。外部验证结果显示,应用本模型预测直径≤5cm的临床早中期NSCLC患者纵隔淋巴结转移的一致性良好,灵敏度为68.75%,特异度为92.65%。与VA模型及Fudan模型相比,本研究模型的适用范围更广,准确率更高。
  结论:
  1.患者年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、病理类型以及胸膜牵拉征这5项因素是判断直径≤5cm的临床早中期NSCLC纵隔淋巴结转移的独立危险因素。
  2.本研究建立的直径≤5cm的临床早中期NSCLC纵隔淋巴结转移数学预测模型为:P=ex/(1+ex),x=-2.831+(0.825×肿瘤直径)+(1.53×肿瘤部位)+(0.779×胸膜牵拉征)+(1.883×病理类型)-(0.06×年龄),其中e为自然对数。
  3.本研究所建立的数学模型对直径≤5cm的临床早中期NSCLC纵隔淋巴结转移判断具有较高的灵敏度和特异度,其预测能力和准确性均高于其他同类模型。
  4.结合本研究预测模型,对于纵隔淋巴结转移高风险患者,建议行进一步检查以明确纵隔淋巴结有无转移。
[硕士论文] 赵雪煜
中西医结合临床 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:原发性支气管肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,同时也是世界范围内癌症相关死亡的首要原因。其中,非小细胞肺癌(Non-small-cell lung cancer,NSCLC)约占肺恶性肿瘤的80%左右。近年来,虽然医疗领域内科学技术水平在不断提升,但肺癌的五年生存率仍然很低。目前,根治性手术是早期非小细胞肺癌的首选治疗手段。晚期诊断、肿瘤极易复发和转移等多种因素均可导致非小细胞肺癌的患者生存率降低。在目前的标准化治疗基础上,尽管NSCLC预后呈现良好,但肿瘤的复发和转移仍然是导致肺癌根治手术失败的主要原因。
  对于早期非小细胞肺癌患者来说,手术是首选治疗方案,术后常包括放射治疗、以铂类药为主的化疗或联合分子靶向药物等西医治疗。中医药是近年来治疗肺癌的辅助方法之一,具有重要地位。中医(Traditional Chinese Medicine,TCM)以辨证论治思想为指导的个体化综合诊疗,对减轻NSCLC患者的毒副作用、改善生活质量、延长生存时间等都产生重要影响。中医药治疗,具有预防肿瘤发生发展、减轻毒性、提高疗效、降低复发转移风险等优点。有研究显示中医治疗肺癌效果明显,但他们的随访期相对较短,缺乏与无病生存期(Disease free survival,DFS)的比较,未针对性关注早中期非小细胞肺癌患者的疗效。本论文为小样本量的回顾性队列研究,对67例Ⅱ~ⅢA期非小细胞肺癌根治术后的病人进行随访与资料分析,研究中西医结合综合治疗方案对肺癌术后患者无病生存期的影响。
  目的:以完成术后4个疗程放化疗的Ⅱ~ⅢA期非小细胞肺癌患者为研究对象,对比评价中西医结合与常规西医治疗的疗效,对影响非小细胞肺癌术后患者预后的相关因素进行分析,为延长患者的生存时间和中医综合治疗的循证发展提供依据。
  方法:病例来自江苏省苏北人民医院、扬州大学附属医院以及扬州市中医院。运用回顾性队列研究的方法,收集从2012年至2016年的Ⅱ~ⅢA期非小细胞肺癌根治术后、并且完成术后4个月辅助放化疗患者的所有临床相关资料。将患者分为2组,分别为中西医结合治疗组(接受中医综合治疗和西医常规化疗)和西医治疗组(仅接受常规化疗)。中西医结合组的中医综合治疗干预方案,主要包括根据临床辨证论治以遣药组方的复方汤剂以及相关的中成药(参一胶囊,益肺清化颗粒)等。西医组未经特殊处理,密切随访观察。研宄结果主要以无病生存期(DFS)为终点指标,即患者根治术后至肿瘤复发转移的时间。
  结果:本研究病例源于2012年1月至2016年12月期间三家医院,共67例非小细胞肺癌患者入组,中西医结合组为32例,西医组为35例,纳入病例无失访或脱落,病例资料完整。结果统计分析,西医组中位无病生存期为601天(95%置信区间[CI],375.7-826.3)。根据数据显示,中西医结合组的中位生存时间明显较西医组长,且具有统计学意义(P<0.05)。对影响非小细胞肺癌患者疾病预后的一些重要的危险因素,如年龄、体力状况评分(Eastern Cooperative Oncology Group,ECOG)、淋巴结转移和身体质量指数(Body Mass Index,BMI)等进行分析,在拥有这些独立危险因素的患者中,中西医结合组患者的无病生存时间明显比西医组的长(P<0.05)。
  结论:中西医结合疗法,可以降低肺恶性肿瘤的复发转移率,有效延长Ⅱ~ⅢA期小细胞肺癌患者的无病生存时间。
[博士论文] 鲍敏
中西医结合基础 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:本课题通过体内外实验,研究miR-10a-5p与非小细胞肺癌发生发展的关系,以及β-HIVS抗肺癌的分子作用机制,为寻找高灵敏性和特异性的肺癌诊断标志物及临床肺癌分子靶向治疗提供新的靶点和理论依据。
  第一章 miR-10a-5p在非小细胞肺癌患者组织和血清中的表达及临床意义
  目的:
  检测非小细胞肺癌患者组织和血清中miR-10a-5p表达,探讨其与临床病理特征的关系。
  方法:
  (1)收集NSCLC患者血清标本80份,健康志愿者血清75份。肺癌患者手术切除新鲜癌组织和癌旁组织20对。
  (2)通过qRT-PCR法检测组织和血清中miR-10a-5p的表达水平。
  (3)分析NSCLC患者组织和血清中miR-10a-5p表达水平与临床病理特征之间的关系。
  (4)以受试者工作特征曲线评价miRNA-10a-5p用于诊断非小细胞肺癌的价值。
  结果:
  (1)NSCLC患者癌组织中miRNA-10a-5p表达水平明显高于癌旁组织,NSCLC患者组血清miR-10a-5p表达高于健康对照组。
  (2)miR-10a-5p表达水平与肿瘤分期和淋巴结转移呈正相关。
  (3)血清miR-10a-5p诊断NSCLC的曲线下面积(AUC)为0.709,其灵敏度和特异度分别为65.98%和72.71%。与癌胚抗原(CEA)的联合诊断可提高诊断价值,AUC为0.801,敏感性为76.34%;特异性为79.26%。
  结论:
  miR-10a-5p与非小细胞肺癌的发生发展密切相关,有望成为非小细胞肺癌早期诊断的生物标志物。
  第二章 miR-10a-5p对非小细胞肺癌细胞生物学行为的影响
  目的:
  探讨miR-10a-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭和迁移等生物学行为的影响。
  方法:
  (1)以正常肺上皮细胞BEAS-2B为对照,通过qRT-PCR技术检测肺癌细胞株A549、H1650和H1299中miR-10a-5p的表达水平;选取miR-10a-5p高水平表达的细胞株作为后续实验的研究对象。
  (2)慢病毒感染A549细胞,下调细胞株中miR-10a-5p的表达水平。
  (3)采用CCK8法、流式细胞术、Transwell小室法检测miR-10a-5p对肺癌A549细胞的增殖、侵袭、迁移以及细胞周期的影响。
  (4)建立A549细胞裸鼠移植瘤模型,检测miR-10a-5p对肿瘤生长的影响,检测肿瘤体积、质量等,绘制肿瘤生长曲线,并计算抑瘤率。
  结果:
  (1)肺癌细胞株A549中miR-10a-5p具有较高的表达水平。
  (2)慢病毒感染后,A549细胞中miR-10a-5p的表达水平明显降低(P<0.05)。
  (3)体外实验显示,下调miR-10a-5p的表达能够抑制A549细胞的增殖、诱导细胞凋亡、阻滞细胞G1期向S期的发展、抑制细胞侵袭和迁移。
  (4)体内实验显示,下调miR-10a-5p的表达能够显著抑制肺癌裸鼠移植瘤的生长。
  结论:
  体内外实验结果表明,miR-10a-5p作为癌基因,下调其表达水平可显著抑制A549肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。
  第三章 miR-10a-5p在非小细胞肺癌中的靶基因及其作用机制
  目的:
  研究miR-10a-5p在NSCLC中的靶基因、分子通路及其作用机制。
  方法:
  (1)利用生物信息学方法预测miR-10a-5p的靶基因。
  (2)采用双荧光素酶报告基因法验证miR-10a-5p对所预测靶基因是否具有直接靶向调控作用。
  (3)采用免疫组化法检测NSCLC患者癌组织、癌旁组织以及裸鼠移植瘤中靶基因的表达情况。
  (4)Western blot和qRT-PCR技术检测miR-10a-5p对靶基因及其下游基因的蛋白和mRNA的表达影响。
  结果:
  (1)生物学信息提示,miR-10a-5p在多种生物中与GATA6的3'UTR区存在保守性结合位点。
  (2)双荧光素酶报告基因实验表明,miR-10a-5p可直接靶向调控转录因子GATA6基因。
  (3)免疫组化实验结果显示,肺癌组织中GATA6表达低于癌旁组织,下调miR-10a-5p组裸鼠移植瘤中的GATA6表达明显高于空白对照组和阴性对照组。
  (4)下调A549细胞miR-10a-5p表达后,细胞中GATA6蛋白和mRNA的表达水平升高,EGFR、CTNNB1蛋白和mRNA的表达水平降低。
  结论:
  miR-10a-5p对非小细胞肺癌作用机制可能与靶向调控GATA6基因,进而激活EGFR和Wnt信号通路相关
  第四章 β-羟基异戊酰紫草素对A549肺癌细胞的生长抑制作用及其分子机制
  目的:
  研究β-羟基异戊酰紫草素(β-HIVS)对人肺癌A549细胞生物学功能的影响,并对其机制进行初步探讨。
  方法:
  (1)体外实验:
  ①以不同浓度的β-HIVS处理A549肺癌细胞。
  ②采用CCK-8法、流式细胞术、Transwell小室法检测β-HIVS对细胞增殖、周期、凋亡及侵袭和迁移的影响。
  ③qRT-PCR技术和Western blot法检测β-HIVS对A549细胞中miR-10a-5p表达影响,及GATA6、EGFR、CTNNB1、P53、Bcl-2的mRNA和蛋白表达的影响。
  (2)体内实验:
  ①建立人肺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组,β-HIVS低、中、高剂量(10、20、40mg/kg)组和紫杉醇(30mg/kg)组;
  ②各组予以腹腔注射给药,每次0.2mL,每周2次,连续用药4周;
  ③检测裸鼠肿瘤体积、瘤质量等,绘制肿瘤生长曲线,并计算抑瘤率。TUNEL法检测β-HIVS处理后各组移植瘤组织中细胞凋亡情况;
  ④免疫组化法、Western blot和qRT-PCR技术检测β-HIVS对移植瘤组织中miR-10a-5p、GATA6、EGFR、CTNNB1、P53、Bcl-2蛋白和mRNA的表达的影响。
  结果:
  (1)体外实验
  ①β-HIVS能够抑制A549肺癌细胞的增殖、侵袭、迁移,阻滞细胞G1期向S期发展。
  ②β-HIVS上调p53蛋白和mRNA表达,下调Bcl-2蛋白和mRNA表达,且具有呈浓度依赖性。
  ③β-HIVS作用A549细胞前后,miR-10a-5p和GATA6表达没有明显改变(P>0.05)。
  (2)体内实验
  ①β-HIVS能够呈剂量依赖性抑制肺癌裸鼠移植瘤生长,能明显缩小肿瘤体积。
  ②TUNEL法显示,与对照组相比β-HIVS处理后肿瘤细胞凋亡明显增多。
  ③免疫组化、Western blot和qRT-PCR结果显示,β-HIVS处理后移植瘤组织中p53蛋白及mRNA表达升高,而Bcl-2蛋白及mRNA表达降低。
  结论:
  β-羟基异戊酰紫草素能抑制非小细胞肺癌生长,作用机制可能与通过调节p53和Bcl-2表达,进而诱导细胞凋亡相关。研究结果对开发适宜中药制剂或有效成份实施肺癌分子靶向治疗提供了重要的实验依据。
[硕士论文] 刘瑞花
动物学 内蒙古大学 2018(学位年度)
摘要:miRNAs是长度为22nt的内源性非编码RNA,在体内作为信号分子参与调节多种细胞活动.miRNAs的异常表达常与疾病发生相关,并且在癌症的诊断、治疗和预后方面具有临床应用潜力.本文对miR-342-5p在非小细胞肺癌(non-small-cell carcinoma,NSCLC)细胞A549和H460中的作用及其调节机制进行了研究.
  1.miR-342-5p在NSCLC A549和H460中的表达及作用
  为探究miR-342-5p在A549和H460中的作用,本研究首先利用实时定量PCR(qPCR)检测miR-342-5p在肺癌细胞A549和H460中的表达,结果显示miR-342-5p在A549和H460中的表达低于正常的肺上皮细胞HBE.其后,将miR-342-5p mimics分别转染A549和H460细胞,通过提高miR-342-5p在细胞中的表达检测其对肺癌细胞恶性表型的影响.结果显示,miR-342-5p的表达升高后显著抑制了A549和H460的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力.为进一步验证这一结果,将构建的过表达miR-342-5p的慢病毒载体感染A549和H460细胞,并利用嘌呤霉素筛选出稳定过表达细胞.细胞恶性表型检测结果表明,稳定过表达miR-342-5p同样显著抑制了A549和H460细胞的增殖、迁移和克隆形成能力.最后,将稳定过表达miR-342-5p的H460细胞皮下注射到裸鼠体内,结果显示,与对照组相比miR-342-5p抑制了H460的体内成瘤率,肿瘤的体积和重量也减少.上述结果表明miR-342-5p在肺癌细胞中具有抑癌基因的作用.
  2.miR-342-5p靶基因检测及其相互作用关系并验证
  为了探讨miR-342-5p影响A549和H460细胞恶性表型的作用机制,首先利用TargetScan7等软件预测了miR-342-5p的靶基因,并用qPCR检测了各候选靶基因在A549和H460中的表达,在检测的候选靶基因中,ELP3、FURIN和PPARGC1A等基因在两种肺癌细胞中的表达都显著高于HBE细胞,而在过表达miR-342-5p的两种肺癌细胞中这3个基因的表达量都显著降低.之后用荧光素酶报告实验(Luciferase assay)证明PPARGC1A是miR-342-5p的一个靶基因.
  为进一步验证miR-342-5p和靶基因PPARGC1A之间的相互作用,本研究合成了PPARGC1A基因的干扰片段,转染细胞后降低了PPARGC1A基因的表达量.细胞恶性表型检测表明,A549和H460细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力都受到了显著的抑制.
  综上所述,miR-342-5p在肺癌细胞A549和H460中低表达,miR-342-5p过表达后,可降低A549和H460细胞的增殖、迁移、侵袭及克隆形成的能力,并抑制体内成瘤.荧光素酶报告实验证明PPARGC1A是miR-342-5p的一个靶基因,降低PPARGC1A的表达量能显著抑制细胞恶性表型.因此,miR-342-5p抑癌的作用可能是通过直接靶向PPARGC1A基因起作用.
[博士论文] 玄香兰
内科学 延边大学 2018(学位年度)
摘要:非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)是肺癌中最常见的病理类型,其治疗包括手术、放疗、化疗、分子靶向治疗以及这些治疗的不同联合治疗。晚期NSCLC患者治疗主要有化疗和靶向药物,而化疗往往达不到理想疗效,分子靶向药物治疗因以其针对性强、副作用少的特点,应用越来越广泛。吉非替尼(Gefitinib)是表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factorreceptoe-tyrosine kinase inhibitor, EGFR-TKIs),一线治疗EGFR突变的晚期NSCLC。据临床研究报道,未经选择的化疗失败或复发的晚期NSCLC患者应用EGFR-TKIs,其疗效与二线化疗相当。提示对于EGFR分型未知晚期NSCLC患者,一线化疗失败后也可以试用EGFR-TKIs。如何提高EGFR-TKIs对这类患者的疗效,让这些患者从EGFR-TKIs治疗中获益,延长治疗间期,具有临床治疗意义。自噬(Autophagy)作为细胞应对压力的存活机制,对细胞存活具有双重作用:一是保护细胞存活,另一个是促进细胞凋亡。线粒体自噬(Mitophagy)属于自噬的特殊类型之一,是指通过自噬选择性清除损伤线粒体。研究表明,肺癌细胞存在自噬缺陷或自噬过度均可影响EGFR-TKIs疗效。小白菊内酯(Parthenolide)是倍半萜烯内酯的主要成分,从中草药野生甘菊中提取,原用于治疗发热、偏头痛、关节炎等疾病。近年来研究发现,小白菊内酯在多种肿瘤中具有较强的抗癌作用,诱导肿瘤细胞发生自噬,而且可以增强化疗和放疗对肿瘤细胞的杀伤性。目前为止,有关小白菊内酯联合吉非替尼治疗肺癌鲜有报道。本研究在体外实验将小白菊内酯联合吉非替尼作用于A549细胞,观察对A549细胞增殖、凋亡、线粒体损伤、诱导自噬及线粒体自噬的影响,探讨自噬在诱导凋亡中的作用。而在体内实验中,建立人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型,观察小白菊内酯联合吉非替尼对裸鼠移植瘤的生长抑制作用、凋亡相关蛋白、自噬相关蛋白及STAT3活性,并探讨其抑制肿瘤生长的机制。通过本研究为化疗失败的EGFR分型未知晚期NSCLC患者应用靶向药物和中草药提取物的联合治疗方案提出理论依据。
  第一部分:线粒体自噬在小白菊内酯增强吉非替尼诱导肺癌A549细胞的凋亡中的作用
  目的:探讨线粒体自噬在小白菊内酯增强吉非替尼对A549细胞诱导凋亡中的作用。
  方法:首先MTT法检测不同浓度小白菊内酯和吉非替尼作用下对A549细胞的存活率,计算半数抑制浓度(harf-inhibitory concentration,IC50);再将A549细胞分为对照组(C组,等容培养液)、吉非替尼组(G组,吉非替尼10μmol/L)、小白菊内酯组(P组,小白菊内酯5μmol/L)、小白菊内酯联合吉非替尼组(PG组,小白菊内酯5μmol/L+吉非替尼10μmol/L)。利用MTT法检测细胞存活率;划痕修复实验观察细胞增殖能力;TUNEL法染色荧光镜下观察凋亡细胞;AnnexinⅤ-FITC/PI染色后利用流式细胞仪检测细胞凋亡率;JC-1荧光探针标记法检测线粒体膜电位的变化;DCFH-DA荧光探针标记后流式细胞仪检测细胞内活性氧水平;透射电镜下观察细胞内自噬体的超微结构;利用Western Blotting法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、PINK1表达;联合用药组加入自噬抑制剂3-MA后,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率,利用Western Blotting法检测Beclin-1、caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。
  结果:
  1.小白菊内酯和吉非替尼对A549细胞的IC50值分别为(35.77±2.05)μmol/L和(15.38±1.13)μmol/L。取5μmol/L小白菊内酯和10μmol/L吉非替尼作用于A549细胞,G组、P组细胞存活率均低于C组,而PG组细胞存活率分别显著低于P组和G组,各组间比较均有统计学差异(均P<0.05)。
  2.在用药前0h时各组细胞划痕距离相同,划痕上无迁移细胞;与0h比较,用药48h后C组、G组、P组划痕距离均明显缩小、划痕上见迁移细胞,而PG组划痕距离则无明显差异。PG组划痕修复率分别显著低于C组、G组、P组,均有统计学差异(均P<0.05)。
  3.在荧光镜下观察,凋亡细胞体积缩小,连接消失,与周围的细胞脱离,细胞质密度增加,胞膜结构仍然完整。在相同视野下,G组、P组凋亡细胞均多于C组,PG组凋亡细胞分别显著多于G组、P组,其差异均有统计学意义(均P<0.05)。
  4.与C组比较,G组、P组细胞凋亡率升高,而PG组细胞凋亡率分别显著高于G组、P组,其差异均有统计学意义(均P<0.05)。
  5.与C组比较,G组Bcl-2/Bax比值、caspase-3和caspase-9蛋白表达量无明显差异(均P>0.05)。P组Bcl-2/Bax比值低于C组,PG组分别显著低于P组、G组,其差异均有统计学意义(均P<0.05)。P组caspase-3和caspase-9蛋白表达量均高于C组,PG组分别显著高于P组、G组,其差异均有统计学意义(均P<0.05)。
  6.JC-1探针标记后观察,C组显示明显红色荧光、未见绿色荧光;G组见轻微减弱的红色荧光和微弱绿色荧光线;P组可见明显减弱的红色荧光和较强的绿色荧光线;PG组可见进一步减弱的红色荧光和显著增强的绿色荧光。比较红色/绿色荧光比例,G组与C组无明显差异(P>0.05),P组低于C组,PG组均显著低于G组、P组,各组间比较均有统计学差异(均P<0.05)。
  7.DCF探针标记后,测定C组、G组、P组、PG组活性氧水平分别为0.94±0.15、1.53±0.06、2.03±0.12、3.14±0.16。G组与C组无明显差异(P>0.05),P组高于C组,PG组分别显著高于G组、P组,各组间比较均有统计学差异(均P<0.05)。
  8.TEM超微结构观察,C组细胞器结构完整,基本没有自噬体的形成;G组细胞内未见自噬体的形成;P组有少量自噬体出现;PG组可见出现大量的自噬体。
  9.与C组相比,G组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、Beclin-1、PINK1蛋白表达量均无明显差异(均P>0.05),P组表达量均升高,而PG组表达量分别显著高于G组和P组,各组间比较均有统计学差异(均P<0.05)。
  10.3-MA组细胞凋亡率与C组相比无明显差异(P>0.05),加入3-MA前PG组细胞凋亡率为(16.52±1.48)%,加入3-MA后PG组细胞凋亡率降至(9.64±0.73)%,具有统计学差异(P<0.05)。与PG组比较,3-MA+PG组Beclin-1和caspase-3蛋白表达量均显著下降,Bcl-2/Bax比值显著升高,其差异均有统计学意义(均P<0.05)。
  结论:
  1.小白菊内酯作为天然自噬诱导剂增强吉非替尼对肺癌A549细胞的抗增殖和诱导凋亡作用;
  2.小白菊内酯可能通过线粒体凋亡途径增强吉非替尼诱导肺癌A549细胞的凋亡;
  3.小白菊内酯联合吉非替尼可能通过激活自噬促进肺癌细胞凋亡;
  4.线粒体自噬可能参与小白菊内酯增强吉非替尼诱导肺癌A549细胞的凋亡作用。
  第二部分:小白菊内酯联合吉非替尼对A549细胞移植瘤生长作用及机制研究
  目的:探讨小白菊内酯联合吉非替尼对裸鼠移植瘤生长的作用及其机制。
  方法:将人肺癌细胞A549制成细胞悬液后接种于裸鼠皮下,建立人肺癌A549细胞裸鼠皮下移植瘤模型,模型成功10天后将裸鼠将随机分为对照组(C组)、吉非替尼组(G组)、小白菊内酯组(P组)、小白菊内酯+吉非替尼组(PG组),分别给予等容生理盐水、吉非替尼25mg/kg/d、小白菊内酯25mg/kg/d、小白菊内酯25mg/kg/d+吉非替尼25mg/kg/d,灌胃及腹腔注射给药,每周给3次药物,每2天测量瘤体体积,3周后处死裸鼠,剥取肿瘤组织,测定最终瘤体大小及计算肿瘤抑制率;HE染色法观察移植瘤组织及细胞间隙形态学变化;应用Western Blot法检测肿瘤组织内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3和自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ以及p-STAT3、STAT3蛋白表达。
  结果:
  1.药物干预移植瘤约3周后,测定C组、G组、P组和PG组移植瘤体积分别为(732.21±36.34)mm3、(627.01±76.04)mm3、(459.63±29.76)mm3和(311.27±33.67)mm3。G组与C组移植瘤体积无明显差异(P>0.05);P组移植瘤体积小于C组,PG组移植瘤体积均显著小于G组和P组,各组间均有统计学差异(均P<0.05)。
  2.C组、G组、P组和PG组抑瘤率分别为0%、14.36%、37.22%、57.48%。G组与C组抑瘤率无明显差异(P>0.05);P组抑瘤率显著高于C组,PG组抑瘤率显著高于G组和P组,各组间均有统计学差异(均P<0.05)。
  3.HE染色后观察,C组移植瘤细胞增生活跃、紧密连接,G组移植瘤细胞间隙略疏松,P组细胞间隙疏松、可见小片坏死区域,PG组移植瘤细胞间隙明显疏松、可见大片坏死区域。
  4.与C组比较,G组、P组的caspase-3蛋白表达均升高,PG组的caspase-3蛋白表达高于G组、P组,各组间均有统计学差异(均P<0.05)。G组、P组的Bcl-2/Bax比值均低于C组,PG组的Bcl-2/Bax比值分别显著低于G组、P组,各组间均有统计学差异(均P<0.05)。
  5.G组与C组相比,Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量均无差异(均P>0.05)。P组与C组比较,Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量均升高(均P<0.05),PG组Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量均显著高于P组和G组,各组间均有统计学差异(均P<0.05)。与C组比较,G组、P组和PG组的p-STAT3蛋白表达量减少,PG组p-STAT3蛋白表达量显著均低于G组、P组,各组间均有统计学差异(均P<0.05)。
  结论:
  1.吉非替尼对裸鼠移植瘤的生长无明显抑制作用;
  2.小白菊内酯增强吉非替尼对A549细胞移植瘤的生长抑制作用,可能与诱导移植瘤细胞凋亡、抑制STAT3活性、激活自噬相关。
[硕士论文] 蒋宗胜
药理学 福建医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,其中80%是非小细胞肺癌(Non-small-cell lung cancer,NSCLC),晚期患者可出现全身性的转移,五年生存率极低。而上皮间质转化(Epithelial mesenchymal transition,EMT)是癌症发生发展中的重要过程,是NSCLC发生侵袭转移的根源。研究表明肿瘤细胞在EMT过程中,大量转录因子向核内聚集而促进了EMT相关蛋白表达。近年研究发现叉头框转录因子(Forkhead box,FOX)家族在调控EMT过程中发挥了重要作用,其中FOXM1介导了多种肿瘤细胞的恶性进程,然而其对NSCLC细胞EMT的调控作用,尤其是对E-cadherin编码基因CDH1的转录调控作用尚不明确。本文以FOXM1为研究对象,探讨其在调控NSCLC细胞EMT过程中的机制及FOXM1特异性抑制剂硫链丝菌素对EMT的干预作用。
  方法:(1)通过FOXM1蛋白表达水平改变探讨其调控NSCLC细胞EMT的作用:HE染色观察过表达FOXM1后细胞的形态学变化;划痕实验、Transwell小室实验分别测定过表达、敲减FOXM1后细胞迁移和侵袭能力的变化;Western-Blot分析过表达、敲减FOXM1对EMT相关标志物表达的影响。(2)分子机制探讨FOXM1对EMT相关标志物的转录调控:双荧光素报告酶实验验证FOXM1对CDH1启动子的调控;核转录因子免疫共沉淀实验(ChIP)验证FOXM1对CDH1基因启动子的结合;在过表达FOXM1细胞中敲减Snail,通过双荧光素报告酶、免疫荧光整体揭示FOXM1对EMT标志物的转录调控。(3)FOXM1抑制剂硫链丝菌素体外抗NSCLC细胞EMT作用:MTT实验测定硫链丝菌素对NSCLC细胞活力的影响;克隆形成实验研究硫链丝菌素对NSCLC细胞克隆形成能力的影响;细胞形态学观察硫链丝菌素对TGF-β1诱导的EMT过程的作用;细胞迁移实验、Transwell小室实验测定硫链丝菌素对细胞迁移和侵袭的作用;Western-Blot分析硫链丝菌素对NSCLC细胞EMT相关蛋白表达的影响。
  结果:(1)GSEA分析以及在NSCLC细胞中的EMT蛋白、FOXM1表达检测表明,FOXM1与EMT具有一定的相关性;过表达FOXM1后的细胞呈现上皮-间质中间形态,而非完全的间质化形态;过表达FOXM1的A549细胞迁移能力和侵袭能力增强;N-cadherin,Snail,Vimentin的蛋白表达水平升高,E-cadherin的表达水平降低。在H1975细胞中敲减FOXM1的表达抑制了细胞侵袭迁移能力,E-cadherin表达水平升高,N-cadherin,Snail,Vimentin表达水平降低。(2)双荧光素报告酶实验表明FOXM1对于CDH1-2000-promoter荧光素报告载体具有抑制作用;ChIP结果证实了FOXM1能够内源性结合于CDH1基因启动子;在过表达FOXM1的细胞中敲减Snail后,E-cadherin的表达恢复。(3)MTT结果显示硫链丝菌素对NSCLC细胞增殖具有抑制作用;克隆形成实验表明硫链丝菌素能抑制NSCLC细胞的克隆形成能力;TGF-β1诱导的EMT过程中伴随着FOXM1的表达增加,细胞形态学发现这一过程能被硫链丝菌素所逆转;细胞迁移实验、Transwell小室实验表明硫链丝菌素能够抑制TGF-β1诱导而增强的细胞迁移和侵袭的作用,Western-Blot分析表明,硫链丝菌素能够下调TGF-β1所诱导的FOXM1,N-cadherin,Snail,Vimentin表达升高,阻断TGF-β1诱导的E-cadherin表达降低。
  结论:过表达FOXM1能够促进NSCLC细胞EMT过程,而降低FOXM1的表达能够抑制这一过程。FOXM1能够抑制CDH1的转录,并能够促进Snail间接对CDH1发挥转录抑制作用来介导EMT过程。FOXM1抑制药物硫链丝菌素对NSCLC细胞增殖、克隆及EMT过程具有抑制作用。以上结果表明可以通过改变FOXM1的表达来干预EMT过程。
[硕士论文] 闻宇翔
生物化学与分子生物学 北京交通大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  采用代谢组学的研究方法,应用1H-NMR检测健康志愿者以及非小细胞肺癌(NSCLC)患者贝伐单抗治疗前后及不同疗效患者的血浆代谢图谱变化,利用PCA、PLS-DA、LSVM等进行代谢组学数据分析,寻找差异代谢物和代谢通路,观察它们与临床疗效之间的关系,以期找到相应的标志物用于筛选病人、评估以及预测疗效,指导抗肿瘤药物的个体化治疗。
  方法:
  本实验收集了30位健康志愿者、17位接受贝伐单抗联用化疗药物治疗的NSCLC患者以及38位接受单纯化疗的患者临床血浆样本共176例,使用核磁共振的技术手段对其进行了小分子代谢物检测,获得其代谢指纹图谱,利用无监督和有监督的机器学习模式分析,以找到与贝伐单抗治疗效果相关的内源性代谢物变化。为了预测贝伐单抗的疗效,我们训练了总计14种分类器,并进行筛选,对效果最好的线性支持向量机(LSVM)分类器进行了优化与验证。
  结果:
  运用PCA、PLS-DA对代谢物的数据进行多元数据分析,再经过单独的t检验得到了区分各组间潜在的生物标志物。健康者与NSCLC患者之间潜在标志物有柠檬酸盐、葡萄糖、丝氨酸等16种小分子代谢物;患者治疗前与治疗后的差异代谢物有谷氨酰胺、牛磺酸、赖氨酸等12种代谢物;贝伐单抗治疗两周期后效果良好的患者(PR+MR)与效果不佳的患者(SD)之间的潜在标志物有牛磺酸、谷氨酸、亮氨酸、三甲胺、尿素等,而且前者的谷氨酰胺、亮氨酸、尿素三种代谢物的浓度值比后者更接近正常人,表明经过贝伐单抗治疗患者的代谢紊乱得到了改善:贝伐单抗治疗四周期后与疗效相关的潜在标志物有T-甲基组氨酸、精氨酸、丙氨酸、丙二醇、谷氨酸、赖氨酸等。
  代谢通路分析结果表明健康组与NSCLC患者的代谢差异主要表现在某些能量物质的代谢(如TCA循环、酮体合成与分解)、氨基酸相关的代谢(如丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸代谢)和蛋白合成相关的代谢(如氨酰-tRNA的合成)上。与治疗前相比,患者经贝伐单抗及化疗药物治疗后,上述代谢通路也有显著性差异。
  通过使用已知治疗效果的治疗前血浆代谢组数据训练LSVM模型,我们得到了可以用于预测贝伐单抗合并化疗治疗效果的分类器,在训练集中其准确率为84.62%(AUC=0.881),测试集中准确率75%(AUC=0.75)。
  结论:
  本研究通过对NSCLC患者化疗、贝伐单抗治疗前后临床血浆的代谢组学分析,鉴别出了一些可能用于诊断非小细胞肺癌和评估药物疗效的潜在生物标志物,并对不同组别间的代谢通路差异进行了分析。训练了可用于预测贝伐单抗治疗效果的LSVM分类器,为贝伐单抗临床应用提供了一个新的预测疗效的手段。
[硕士论文] 刘雨默
中西医结合临床 黑龙江中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:本文采用随机对照的方法,观察养阴益肺汤联合化疗治疗后患者血清CEA水平,治疗前后临床症状及体征、生存质量、安全性等指标的变化情况及化疗毒副反应发生情况,为养阴益肺汤缓解非小细胞肺癌患者化疗后的副反应提供临床应用价值。
  方法:将符合试验标准的50例晚期非小细胞肺癌患者,随机、平均分成两组,分别为治疗组(养阴益肺汤联合化疗),对照组(单纯化疗)。治疗4周期。对比两组患者治疗前后血清肿瘤标志物CEA水平、白细胞数量、血清肌酐等指标及生存质量。
  结果:
  1、养阴益肺汤联合化疗与单纯化疗后患者的CEA水平较治疗前均降低(p<0.05);且养阴益肺汤联合化疗患者的CEA降低水平比对照组高(p<0.05);
  2、养阴益肺汤联合化疗与单纯化疗后患者的中医证候较治疗前均改善(p<0.05);且养阴益肺汤联合化疗患者的中医证候缓解水平比对照组高(p<0.05);
  3、在KPS评分、患者体征及体重改善情况上,治疗组及对照组在治疗后均有所改善(p<0.05),且养阴益肺汤联合化疗的改善程度明显高于单纯化疗;
  4、不良反应发生率,即肝肾功能的指标上,养阴益肺汤联合化疗与单纯化疗无显著差异(p>0.05)。
  结论:
  1、养阴益肺汤联合化疗显著降低晚期非小细胞肺癌患者血清肿瘤标志物CEA的水平;
  2、养阴益肺汤联合化疗能显著缓解晚期非小细胞肺癌导致的中医证候;
  3、养阴益肺汤能提高晚期非小细胞肺癌患者的生存质量;
  4、养阴益肺汤对晚期非小细胞肺癌患者肝肾功能无不良影响。
[硕士论文] 于佳琪
中西医结合临床 黑龙江中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  本研究是以中医药理论为指导,旨在通过临床观察对照试验探究养阴益肺汤对气阴两虚型非小细胞肺癌化疗患者生存质量(体力状况、社会认知、情绪管理等)的影响,以及对提高气阴两虚型非小细胞肺癌患者免疫力,降低化疗相关毒副反应发生率。
  方法:
  本研究选取60例符合纳入标准的气阴两虚型非小细胞肺癌患者,随机分为对照组30例采取DP(多西他赛+顺铂)方案化疗,治疗组30例在对照组基础治疗上,同时口服养阴益肺汤,用药治疗21天为1周期,连续4周期后,对比对照组及治疗组患者中医证候、生存质量评分(体力状况、社会认知、情绪管理等)、免疫力指标、相关毒副反应及安全指标(血常规、肝功、肾功等)等变化情况。使用SPSS19.0软件进行统计学数据处理。
  结果:
  1.治疗组治疗后中医证候评分,生存质量(体力状况、社会认知及情绪管理等)改善优于治疗前及对照组治疗后,差异具有统计学意义(P<0.05)。
  2.治疗组治疗后免疫指标优于治疗前及对照组治疗后,差异具有统计学意义(P<0.05)。
  3.治疗组治疗后骨髓抑制(白细胞计数)及胃肠道不良反应(恶心呕吐)优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。
  结论:
  1.养阴益肺汤能够改善气阴两虚型非小细胞肺癌化疗患者的中医证候、能提高其生存质量(体力状况、社会认知及情绪管理等)。
  2.养阴益肺汤能够提高气阴两虚型非小细胞肺癌化疗患者的免疫功能。
  3.养阴益肺汤能够抑制气阴两虚型非小细胞肺癌患者化疗期间骨髓抑制及胃肠道不良反的发生率,对肝肾功未见明显影响。
[硕士论文] 李春香
中西医结合临床 福建中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  通过虫草菌丝体干粉治疗气虚证肺癌的前瞻性研究,观察虫草菌丝体干粉在气虚证肺癌中的疗效,并探讨其与细胞因子、甲状腺功能的关系,为虫草菌丝体干粉在癌症相关性疲乏方面的临床应用提供依据。
  方法:
  入组晚期气虚证肺癌患者90例,随机分为基础治疗对照组与虫草菌丝体干粉治疗组,治疗1个月后比较治疗前后两组中医证候积分、生活质量评分、安全性评估等指标,以及相关细胞因子、血液学指标的改变。
  结果:
  1.治疗后两组疲乏症状均得到改善,治疗组有效率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.0001)。
  2.治疗后两组中医证候均得到改善,治疗组优于对照组,差异有统计学意义(P=0.0050)。
  3.中医证候评分比较中,治疗组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。
  4.治疗后治疗组生活质量改善明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.0001)。
  5.治疗后治疗组IL-6水平提升优于对照组,差异有统计学意义(P<0.0001);而两组间IL-2,TNF-a,FT3,FT4,sTSH差异不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。
  6.治疗后两组血红蛋白及血清白蛋白提升,治疗组优于对照组,差异有统计学意义(均有P<0.01)。
  结论:
  1.虫草菌丝体干粉可以加强气虚证肺癌相关性疲乏的疗效,降低中医气虚证候评分,改善总体生活质量;
  2.虫草菌丝体干粉可提升气虚证肺癌患者IL-6、血红蛋白及血清白蛋白水平(均从低于正常升至正常范围),提升免疫力,改善肝功能及纠正贫血。
[硕士论文] 高飞
中西医结合临床 黑龙江中医药大学 2018(学位年度)
摘要:背景:
  肺癌的发病率日益增高,已成为中国癌症的首位疾病。肺癌的发病高峰年龄为70~74岁,而非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)又占肺癌总数的80%~85%。老年NSCLC患者全身器官退化且多病并存,国外众多研究表明,对身体节能状态差(PS>2)的患者,通过化疗手段是不能获益的。那么如何应对高龄、高发、难治的病人群体,成为了当前医疗届广泛关注的课题。人们逐渐认同,中医药治疗有着毒副作用小、疗效可观、且易被接受等优势。
  目前中国的专家学者对肺癌的研究涉及到辨证分型、治则治法及方药应用等方面,许多研究报道证实中医药联合放化疗在生存质量、生存期等方面明显优于单纯放化疗。但对老年NSCLC患者,需考虑其临床特征及治疗有其自身特点,如何最大程度发挥中医药优势,实现稳定瘤体并提高生存质量,应该从最先取得的四诊信息中仔细探索其证候特点,从而回归到中医的基本特点——“辨证论治”当中去。
  目的:
  通过对黑龙江中医药大学附属第一医院初诊为晚期NSCLC的老年患者进行临床回顾性分析,初步探讨老年晚期NSCLC的证候分布特点、方药应用规律及比较不同证型的生存期,为中医药治疗老年晚期NSCLC的进一步探究提供参考依据。
  方法:
  在参考有关肺癌文献的基础上,结合专家老师的意见,确定临床研究的方向及内容。设计病例调查表,充分收集黑龙江中医药大学附属第一医院在2015.09至2016.02所有初诊为NSCLC的老年患者的相关就诊资料,利用EXCEL工具建立数据库。首先借助聚类分析、主成分分析等多因素统计方法,探讨初诊为NSCLC的老年患者证候分布特点,及不同证型的中药使用频率,并采用Log-rank检验分析不同证型生存资料差异,绘制Kaplan-Meier曲线,以及对不同证型的TNM分期进行频数分析。
  结果:
  1.中医证候
  共收集258例患者80条症候信息,筛选出50条频率较高且具有辩证意义的症候,经K-平均值聚类后,聚为4类最佳。
  将4类症候进行主成分分析后,第1类中医证候可得出3个主成分,第2类中医证候可得出3个主成分,第3类中医证候可得出4个主成分,第4类中医证候可得出3个主成分。从而得出4个中医证型,分别为瘀阻肺络证,痰热壅肺证,肺脾气虚证,气阴两虚证。
  2.中医药应用情况
  258例患者中有口服中成药及使用中药注射液195例,采用中药汤剂治疗的共237例,并分别统计四种证型的患者所使用单味中药频率的前十位。
  瘀阻肺络证使用频率前十位的中药为黄芪、白花蛇舌草、山慈茹、夏枯草、白英、郁金、木香、陈皮、侧柏叶、醋五灵脂。肺脾气虚证使用频率前十位的中药为黄芪、山药、白术、山慈菇、茯苓、薏苡仁、炙百部、蜜枇杷叶、白花蛇舌草、木香。气阴两虚证使用频率前十位的中药为黄芪、白花蛇舌草、山慈菇、北沙参、熟地黄、石斛、白术、白英、知母,玉竹。痰热壅肺证使用频率前十位的中药为白花蛇舌草、白英、黄芩、鱼腥草、夏枯草、山慈菇、浙贝母、桑白皮、瓜蒌、黄芪。
  3.不同证型的两年生存情况比较
  中位生存期(95%CI):瘀阻肺络证为13.00(10.98~15.02),肺脾气虚证为22.00(18.78~25.25),气阴两虚证为15.00(12.35~17.65),痰热壅肺证为23.00(18.71~27.30)。其中痰热壅肺证生存期长于瘀阻肺络证及气阴两虚证,肺脾气虚证生存期长于瘀阻肺络证及气阴两虚证(P<0.01)。其余证型间生存期没有统计学差异。
  4.不同证型与TNM分期的关系
  瘀阻肺络证与气阴两虚证患者多见于Ⅲb期和Ⅳ期,肺脾气虚证和痰热壅肺证患者多见于Ⅲa期和Ⅲb期。
[硕士论文] 夏野峰
生物信息学 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:circRNA是一种呈闭合环状结构的RNA分子,表达量较低,长期以来一直被当做“噪音”而不被人们所重视。直到近几年来,随着测序技术的飞速发展,circRNA才终于被大规模的发现;又由于其特殊的环状结构与复杂的生物学功能,一跃成为现阶段转录组相关研究的焦点。但是,目前无论对circRNA结构、分子层面与成环机制方面的研究,还是对其生物学功能的分析,都处于十分初步的阶段。
  肺癌,作为全球发病率与致死率最高的癌症,一直以来是医学领域的一个难题,近年来circRNA在各类癌症中取得的研究成果也为肺癌的相关研究带来了新的突破口。
  本文利用了肺癌患者以及对照组的共1,029组RNA-seq数据,通过鉴别并筛选出大量可能与肺癌相关的circRNA。对其进行结构与功能的生物信息学分析,找出其结构特点,完善相关注释信息,并构建一个针对肺癌的circRNA数据库。
  我们在NCBI上选取了肺癌患者与对照组的质量较好的RNA-seq数据,并将find_circ,CIRCexplorer2与CIRI这三款circRNA鉴别工具通过脚本整合到了一起,用于ckcRNA的鉴别,最终得到了可信度较高的19,397条circRNA。其中,基因MAN1A2、ZC3H6、SLTM、RSRC1以及RNF168是最高频的几个host gene。通过对这些host gene的GO,KEGG富集分析,发现了他们主要富集到了细胞周期,转录调控,以及包括非小细胞肺癌在内的多种癌症上;再对表达量较高的circRNA进行circRNA-miRNA互作网络分析,发现绝大多数circRNA与癌症相关的miRNA存在互作,这也说明我们得到的circRNA与癌症有很高的相关性。
  另外,通过对circRNA特征的分析,我们发现了染色体长度,染色体内含子Alu元件密度,都能在一定程度上影响circRNA的产生;单个host gene在大多数情况下只产生1-3个circRNA;考虑到host gene与circRNA的对应关系可能与host gene的某些特定位点有关,本文另辟蹊径对circRNA的“热点”(即多个circRNA共用的位点)进行了统计分析。结果发现,“热点”在circRNA中广泛存在,我们得到的circRNA中约有43%的端点为“热点”,我们还意外地发现了在circRNA前端的“热点”数量远远大于circRNA尾端的“热点”(约6倍),这一现象可能与某种尚未发现的circRNA成环机制有关。
  最后,我们将筛选得到的与肺癌相关的circRNA及其基本信息(包括染色体位置,长度,注释等)进行了统一地分类与整合,并构建了相应数据库及网站,提供对肺癌circRNA及其相关信息的检索,浏览与下载等功能。
[硕士论文] 王胜云
内科学(呼吸病学) 河北北方学院 2018(学位年度)
摘要:目的:检测肺腺癌(Lung adenocarcinoma,LAC)组织和癌旁肺组织中叉头框蛋白M1(Forkhead box M1,FoxM1)及白细胞介素27(Interleukin-27,IL-27)的表达,探讨FoxM1和IL-27的表达及其与患者临床病理特征的关系,再分析FoxM1和IL-27表达的相关性。
  方法:收集2015年12月~2017年8月于河北北方学院附属第一医院内接受肺癌手术,术中切除的LAC组织标本及癌旁肺组织标本各82例,通过免疫组织化学染色方法(Immunohistochemistry,IHC)检测FoxM1和IL-27在组织中的表达情况;卡方检验分析FoxM1和IL-27的表达与LAC患者临床病理特征(性别、年龄、吸烟史、肿瘤TNM分期、组织学分级、淋巴结转移)的关系;Spearman's等级相关法分析FoxM1和IL-27表达的相关性。
  结果:1.FoxM1在82例LAC中阳性表达率为45.1%,在82例癌旁肺组织中阳性表达率为13.4%,LAC中FoxM1的阳性表达率高于癌旁组织中的阳性表达率,差异有统计学意义(P<0.05);FoxM1的表达与LAC的组织分化水平、TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05),与患者的年龄、性别、吸烟史无关(P>0.05)。2.IL-27在82例LAC中阳性表达率为41.5%,在82例癌旁肺组织中阳性表达率为69.5%,LAC中IL-27的阳性表达率低于癌旁肺组织中的阳性表达率,差异有统计学意义(P<0.05);IL-27的表达与LAC的组织分化水平及吸烟史有关(P<0.05),与患者的年龄、性别、淋巴结转移及TNM分期无关(P>0.05)。3.FoxM1和IL-27在LAC中的表达呈负相关性(r=-0.415,P<0.05)。
  结论:1.FoxM1和IL-27在LAC中的阳性表达率和癌旁肺组织中的阳性表达率有显著差异,提示FoxM1和IL-27可能与LAC的发生发展有关。2.FoxM1的表达与LAC的组织分化水平、TNM分期及淋巴结转移有关,提示FoxM1可能参与LAC的进展、转移。3.IL-27的表达与LAC的组织分化水平以及吸烟史有关,提示IL-27可能抑制LAC的进展。4.FoxM1和IL-27在LAC中的表达呈负相关。
[硕士论文] 郑丽钦
内科学 福建中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  回顾分析经病理证实的T1N0M0期的113例肺腺癌,将各病理组织学亚型包括不典型腺瘤样增生(atypical adenomatous hyperplasia,AAH)、原位腺癌(adenocarcinoma in situ,AIS))、微浸润性腺癌(minimally invasive adenocarcinoma,MIA)以及浸润性腺癌(invasive adenocarcinoma,IAC)与对应的影像学特点进行对比,找出它们的相关性,从而进一步鉴别肺腺癌的低危组和高危组,为早期恶性肺结节患者提供诊疗依据。
  方法:
  通过莆田学院附属医院电子病历系统,调阅2017年12月31日之前并以“肺肿物、肺占位性病变、肺部阴影”为入院诊断的患者,均于我院行高分辨率计算机断层成像(high resolution computed tomography,HRCT)并经手术后病理证实T1N0M0期的肺腺癌患者,收集各病理类型的影像学特点及一般临床资料,其中的内容包括:一般临床资料(性别、年龄),影像学特点[病灶最大径、密度类型、密度CT值、位置、形状、边缘结构(分叶征、毛刺征)、内部结构(空泡征、支气管充气征)、瘤-肺界面、胸膜凹陷征、血管集束征,并进行比较;同时应用受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC)分析低危组及高危组的可能临界值。
  结果:
  (1)113例T1N0M0期的肺腺癌病例中包括:AAH10例,MS36例,MIA29例,IAC38例;经过卡方分析,结果显示:病灶位置、空泡征、支气管充气征及血管集束征在各病理类型之间差异无统计学意义(P>0.05),而性别、年龄、病灶最大径、形状、密度类型、瘤-肺界面、分叶征、毛刺征及胸膜凹陷征在各病理类型之间差异具有统计学意义(P<0.05)。
  (2)CT平均密度值经过方差分析后,可知不同病理结果在CT平均密度值上可能存在差异,经过LSD法两两比较后,与AAH比较,AIS、MIA、IAC均与AAH之间差异有统计学意义(P<0.05);与IAC比较,AAH、AIS、MIA与IAC之间差异有统计学意义(P<0.05),而其他两两比较之间均不存在显著差异(P>0.05)。
  (3)将AAH、AIS、MIA分为低危组,IAC为高危组,病理类型和年龄、结节大小、形状、密度、CT值、瘤-肺界面、分叶征、毛刺征、胸膜凹陷征之间存在相关性(P<0.05),r值分别为:0.344、0.721、0.446、0.736、0.683、-0.587、0.407、0384、0.249;其中病理分类与年龄、病灶最大径、形状、密度、CT值、分叶征、毛刺征及胸膜凹陷征均呈正相关,即高危组与低危组比较,年龄越大、病灶最大径越大、病灶形状趋向于不规则、密度偏向实性,更容易有分叶征、毛刺征及胸膜凹陷征;病理类型和瘤-肺界面之间呈负相关,即高危组的瘤-肺界面较低危组的更清晰,而其他指标与病理分类之间不存在相关关系(P>0.05)。
  (4)当灵敏度为92.1%,特异度为89.3%时,获得肿瘤病灶最大径的临界值为8.75mm,曲线下面积(Area under curve,AUC)为0.930;当灵敏度为84.2%,特异度为89.3%时,获得CT平均密度值的临界值为-393.40HU,AUC为0.917。
  结论:
  1、在T1N0M0期的肺腺癌中,pGGN多提示AAH及AIS,随着病灶最大径的增加及密度实性成分的增加,IAC的可能性增大。
  2、在AAH及AIS中,边界常清楚,且多表现为圆形或者类圆形的改变;MIA的边界多为清楚,同样以圆形或类圆形多见;而当病灶的形态越不规则时,则病理类型越倾向于IAC。
  3、瘤-肺界面清晰、分叶征、毛刺征及胸膜凹陷征提示IAC的可能性大。
  4、病灶的最大径及CT平均密度值可能可以作为鉴别肺腺癌低危组与高危组的预测指标。
[硕士论文] 张利文
控制理论与控制工程 哈尔滨理工大学 2018(学位年度)
摘要:目前,肺癌仍是全球医学技术攻克的难点,有效降低每年高发的致死率和发病率同样是棘手的问题。由于肺癌中约85%的患者为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)类型。因此,非小细胞肺癌是目前研究的重点和热点。随着医疗水平的不断提高,非小细胞肺癌的预后治疗水平已经到了基因的层面,表皮生长因子受体(EGFR)基因突变状态的检测对非小细胞肺癌患者个体化治疗和改善预后都有重要的临床意义。当处于晚期的非小细胞患者被确切诊断为表皮生长因子受体突变,采用酪氨酸激酶抑制剂(TKI)来进行治疗己成为广泛接受的方式。现阶段比较流行的检测病人是否发生EGFR突变的方式是通过扩增阻滞突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)和直接测序进行特异性靶点检测。然而,直接测序需要对样本病变组织进行活检,虽然准确率很高,考虑到该方法需要进行局部手术穿刺来获取肿瘤组织,检查过程会花费高额费用,且检查结果需要较长时间。再者,该测序方法对所采用的技术和测试材料都有高标准的要求。而ARMS检测方法采用较新的检测技术,同样无法普及。此外,当癌变发生后才进行检测,多数患者在确诊后已经属于晚期,不采取一些有效的及时治疗,生存率基本在10%以下。如果病人及时被发现EGFR突变,可采取靶向药物治疗,可有效减少其进行化疗所带来的较大的副作用和在一定程度上改善发病期间生活状况。针对上述临床难题,本文提出利用新兴的影像组学方法对EGFR突变进行了理论和统计学的研究。
  首先本章通过严格的入组标准,筛选出180例病人作为研究对象。然后对每个病人的计算机断层扫描(Computed Tomography,CT)影像中进行高标准手动分割,将得到的感兴趣区域进行统一化处理。接着对每个病人提取485个三维影像组学特征进行量化。为了使研究更有临床意义,在影像组学特征的基础上,该研究收集了5个和EGFR突变高度相关的临床特征进行分析,采用套索回归算法(Least absolute shrinkage and selection operator,Lasso)从提取的485个高维特征和5个临床变量中自动地选择出具有预测EGFR突变能力的10个特征,利用逻辑斯特回归算法建立模型来预测EGFR突变。为了直观体现模型的性能,绘制了受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC),其中训练集的受试者工作特征曲线下面积(Area under ROC curve,AUC)为0.8618,验证集的AUC为0.8725,最后绘制了诺模图(nomogram)来直观反映出每个病人突变的风险,从而为诊断非小细胞肺癌的患者是否有EGFR突变提供了新思路。
[硕士论文] 李游
细胞生物学 广西大学 2018(学位年度)
摘要:Copine-3蛋白是由CPNE3基因编码的钙离子依赖性蛋白,是copines蛋白家族成员之一。该蛋白家族成员进化高度保守,功能多样,但是具体作用机理尚未明确。研究表明,copine-3蛋白与肿瘤等疾病的发生和发展具有相关性,其在生物体内,特别是肿瘤细胞中可能承担着重要的生物学功能。
  本研究首先通过western-blot和免疫组织化学技术(immunohistochemistry,IHC)发现copine-3蛋白在肺腺癌细胞系和肺腺癌患者癌组临床样品中都广泛表达,并且IHC表明copine-3蛋白主要分布在细胞质中,也有细胞核定位现象。将pEGFP-N1/CPNE3真核表达载体分别转染293T和H1299细胞,通过western-blot检测细胞亚组份和激光共聚焦观察表明copine-3蛋白定位于细胞质和细胞核中。
  然后,在肺腺癌A549细胞中,我们通过小干扰RNA(Small interfering RNA;siRNA)靶向干扰CPNE3基因表达后,Transwell实验表明细胞迁移能力显著增强(p<0.01)。利用基于细胞培养条件下稳定同位素标记(stable isotope labeling by amino acids in cell culture,SILAC)的差异蛋白质组学技术,鉴定了51个在A549细胞中siRNA介导CPNE3基因沉默后表达发生变化的蛋白质。其中,SQSTM1/p62(由SQSTM1基因编码)是CPNE3基因沉默后显著下调的蛋白质,通过RNA干扰技术,在A549细胞中干扰SQSTM1基因促进了细胞的迁移,western-blot检测显示,上皮型钙黏附蛋白E-cadherin表达下调,波形蛋白Vimentin表达上调。这表明,CPNE3基因沉默后,通过下调SQSTM1/p62表达,促进上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的发生,从而促进细胞的迁移。
  同时,为进一步探讨copine-3的功能,我们利用慢病毒介导的shRNA在肺腺癌A549、H1299和SPC-A1细胞株中,稳定沉默了CPNE3基因的表达。平板克隆和软琼脂克隆形成实验表明,稳定沉默CPNE3基因能够促进肺腺癌细胞的增殖。此外,我们还成功构建了人支气管上皮细胞HBE(human bronchial epithelial cells,HBE)细胞的CPNE3基因过表达细胞株,细胞实验结果表明CPNE3基因的过表达能够抑制HBE细胞的增殖。利用基于SILAC的差异蛋白质组学技术,我们鉴定了在A549中稳定沉默CPNE3基因后的差异表达蛋白质,共获得差异表达总蛋白质59个,差异核蛋白209个。
  最后,对通过SILAC技术获得的在A549细胞中siRNA干扰和稳定沉默CPNE3基因后的差异蛋白质组学数据进行了生物信息学分析。Gene Ontology分析和KEGG Pathway富集,显示这些差异蛋白参与多个生物学过程和通路。同时也完成了差异蛋白的相互作用网络的分析,为后续的信号转导通路实验研究提供了线索,为进一步探究copine-3蛋白的生物学功能,阐明copine-3蛋白调控肿瘤细胞迁移和增殖机制提供前期基础。
[硕士论文] 张星垚
药物化学 东北林业大学 2018(学位年度)
摘要:肺癌是第一大癌种,每四个癌症患者中就约有一个肺癌患者。肺癌晚期容易发生骨转移,临床一般采用双膦酸盐类药物治疗。虽然双膦酸盐类药物减少了骨骼相关事件(骨折、脊髓受压等),但是并不延长生存期。临床急需有效治疗肺癌骨转移的新药。
  经文献调研,多西紫杉醇和的藤黄酸联用研究抗肺癌骨转移的活性,研究结果如下:
  1.体外MTT法测定多西紫杉醇和的藤黄酸联用对小鼠Lewis肺癌细胞LLC的抗肿瘤活性:经48h处理,多西紫杉醇(DTX)组、藤黄酸(GA)组和多西紫杉醇和藤黄酸联用组的IC50值分别为0.049μM,0.073μM和0.035μM(n=3,p<0.01)。经72h处理,DTX组、藤黄酸组、DTX和GA联用组的IC50值分别为0.029μM,0.051μM和0.013μM(n=3,p<0.01)。实验结果表明DTX和GA联用组抗肿瘤活性优于DTX组或GA组,且随着时间的延长,药物的药效增强。
  2.以C57BL/6小鼠Lewis肺癌骨转移为模型,肺癌骨转移模型分为4组,分别为空白组、DTX组、GA组和DTX和GA联用组,腹腔注射给药,DTX剂量为10mg/kg,GA剂量为4mg/kg,连续给药10天,空白组小鼠整体生存期为19.27±1.32d,DTX组整体生存期为25.75±0.67d,GA组整体生存期为23.99±0.58d,DTX和GA联用组为32.61±1.06d(n=10,p<0.01),与DTX组或GA组比较,DTX和GA联用组小鼠生存时间明显延长。
  3.空白对照组小鼠平均体重为19.17±0.67g,DTX组小鼠平均体重为17.26±0.58g,GA组小鼠平均体重为16.88±0.65g,DTX和GA联用组平均体重为18.33±0.62g(n=10,p<0.01),DTX组和GA组体重均小于联合用药组,结果表明DTX和GA联用组毒性最小。
  4.根据小鼠瘤体积计算肿瘤抑制率,DTX组为60.35±2.79%,GA组为62.17±2.53%,DTX和GA联用组为69.54±3.11%,DTX和GA联用组肿瘤抑制率高于DTX组和GA组,结果表明DTX和GA联合用药对肿瘤的抑制作用强于DTX组或GA组。
  5.肺癌骨转移模型建立之后,观察各组小鼠胫骨经X线照射后骨破坏程度。小鼠腿骨肿瘤部位透射不均一,骨皮肥厚并断裂,骨皮呈现向肿瘤组织伸展的趋势。空白组骨破坏最严重,DTX组和GA组稍严重,与DTX组或GA组对比,DTX和GA联用组骨破坏较轻,结果表明联合用药发挥了更大的骨转移抗肿瘤作用。
  6.通过观察骨组织病理切片,空白组、DTX组和GA组骨瘤部位骨皮外膜消失,形成疏松状的骨瘤组织,骨小梁中细胞质萎缩,肿瘤细胞呈肥厚、不规则状态遍布于骨髓腔内,排布不规则。空白组骨破坏最为严重,DTX组和GA组稍严重,与DTX组和GA组对比,DTX和GA联用组可观察到清晰的骨皮和细胞质,骨破坏较轻。结果表明,联合用药组是更有效的抑制肺癌骨转移的抑制剂。
  在体内外活性实验初步确定了DTX和GA联用具有抗肺癌骨转移的活性后,进一步通过Lewis肺癌细胞迁移和诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7形成破骨细胞实验,研究DTX和GA联用抗肺癌骨转移的机制,研究结果如下:
  1.小鼠Lewis肺癌细胞LLC的迁移情况如下:与空白对照组比较,DTX组细胞迁移抑制率为52.83±3.44%,GA组细胞迁移抑制率为46.22±4.17%,DTX和GA联合用药组细胞迁移抑制率为64.77±3.75%(n=3,p<0.01)。结果表明DTX和GA联用可抑制小鼠Lewis肺癌细胞LLC的迁移,且抑制作用强于DTX组或GA组。
  2.小鼠Lewis肺癌细胞LLC和小鼠巨噬细胞RAW264.7,经TRAP染色后,与空白对照组相比,DTX组破骨细胞形成率为73.43%±2.97%,GA组破骨细胞形成率为86.12%±2.34%,DTX和GA联用组破骨细胞形成率为63.12±2.75%,结果表明,DTX和GA联用组破骨细胞形成率最低,可抑制小鼠Lewis肺癌细胞LLC诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7形成破骨细胞。
  由于DTX和GA水溶性差,静脉给药需添加有毒的助溶剂,本文通过高压均质乳化法制备了水溶性白蛋白包裹的DTX和GA纳米粒(DTX-GA-BSA-NPs),并以C57BL/6小鼠Lewis肺癌骨转移为模型,研究抗肺癌骨转移的活性,研究结果如下:
  1.制备DTX-GA-BSA-NPs,根据DTX标准曲线和GA标准曲线,测得DTX-GA-BSA-NPs包封率为86.3±2.4%,载药量为8.7±1.2%,粒径为102.0±18.64nm。
  2.DTX-GA-BSA-NPs作用于小鼠肺癌骨转移模型小鼠平均生存期为平均生存期为31.58±1.87d,DTX和GA联用组平均生存期为32.61±1.06d,DTX和GA联用组平均体重为18.33±0.62g,DTX-GA-BSA-NPs组平均体重为18.86±0.88g,DTX和GA联用组体重均小于DTX-GA-BSA-NPs组,差异有统计学意义(n=10,p<0.01)。试验结果表明DTX-GA-BSA-NPs对小鼠的毒副作用较联合用药组小,DTX-GA-BSA-NPs对肺癌骨转移模型生存期延长是有显著效果的。
  总结:金氏公式计算结果为q=1.17,(q≥1.15时表示两种药物有协同作用),结果表明,DTX和GA联用对治疗肺癌骨转移有协同作用,且抗癌活性高于DTX和GA单一用药。
[硕士论文] 孙凯
中西医结合临床 中国中医科学院 2018(学位年度)
摘要:癌症是严重危害人类健康的疾病之一,在我国,肺癌的发病率和死亡率在所有癌症中均居于首位。肺腺癌是非小细胞肺癌的主要类型,约占肺癌的40%左右,肺腺癌转移是影响患者预后的关键因素和导致患者死亡的重要原因。积极探索肺癌治疗的新靶点是目前热门的研究领域之一。TMCO1蛋白是一种新发现的内质网钙离子通道,是潜在的新型肿瘤调控因子,其可能通过CaMKⅡ-p38MAPK信号传导通路影响肺腺癌的转移,但目前对于TMCO1的研究资料十分匮乏,其在人肺腺癌组织中是否存在表达及表达量如何等问题尚是疑点,因此,通过免疫组织化学染色的方法初步探讨其与肺腺癌的关系十分必要。中医药是我国的瑰宝,其在肺癌治疗方面具有独特的优势。本研究的固本解毒方临床疗效确切,但其作用机制却尚未阐明,因此,采用网络药理学的方法探索固本解毒方治疗肺腺癌转移的靶点及作用机制,并通过实验进行验证,以期为今后的研究奠定一定的基础。本论文主要分为以下几个部分:
  1.TMCO1及相关蛋白在人肺腺癌组织中的表达及临床意义
  目的:初步探讨TMCO1、CaMKⅡ、p38蛋白在人肺腺癌组织中的表达及临床意义。
  方法:回顾性收集未转移和已转移肺腺癌患者各20例,运用免疫组织化学染色的方法检测TMCO1、CaMKⅡ及p38蛋白的表达,分析其表达的差异并探讨其临床意义。
  结果:在未转移肺腺癌患者的组织标本中,癌组织与癌旁正常组织比较,TMCO1、CaMKⅡ表达差异具有明显的统计学意义(p<0.05),p38表达差异无明显的统计学意义(p>0.05);在已转移肺腺癌患者的组织标本中,TMCO1、CaMKⅡ的癌组织和伴淋巴结转移癌组织与癌旁正常组织相比,表达差异均具有明显的统计学意义(p<0.05),而TMCO1、CaMKⅡ的癌组织与伴淋巴结转移的癌组织相比,表达差异无统计学意义(p>0.05);p38的癌组织和伴淋巴结转移癌组织与癌旁正常组织相比,表达差异具有明显的统计学意义(p<0.05),p38的癌组织与伴淋巴结转移的癌组织相比,表达差异有统计学意义(p<0.05);未转移肺腺癌患者的癌组织与已转移肺腺癌患者的癌组织相比,TMCO1、CaMKⅡ、p38表达差异无统计学意义(p>0.05)。
  2.基于网络药理学的固本解毒方治疗肺腺癌转移的作用机制研究
  目的:探讨固本解毒方治疗肺腺癌转移的靶点及作用机制。
  方法:首先,利用TCMSP、STITCH、DrugBank等数据库及文献检索方式搜集固本解毒方的有效活性化学成分,并预测复方中活性成分的作用靶点。利用OMIM数据库收集疾病数据;其次,运用Cytoscape3.5.1软件构建固本解毒方化合物—靶点网络、肺腺癌转移—靶点网络及复合靶点网络可视化图,构建固本解毒方化学成分—肺腺癌转移靶点蛋白互作网络图,并对网络拓扑结构进行分析;最后,采用ClueGO分析对构建的靶点蛋白分别进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。
  结果:筛选出固本解毒方的关键活性化合物成分为quercetin(槲皮素)、kaempferol(山奈酚)、luteolin(木犀草素)、baicalein(黄芩素)、beta-sitosterol(β-谷甾醇)等;关键靶点为TP53、VEGFA、NFKB1、PTGS2、TGFB1、EGFR、ESR1、MYC等;固本解毒方PPI网络图关键蛋白主要有ALB、TP53、AKT1、INS、IL6、VEGFA、JUN、TNF等;GO分析结果表明固本解毒方的生物作用途径主要涉及一氧化氮合酶调节剂活性、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶活性、磷脂酰肌醇二磷酸激酶活性等;KEGG富集结果表明固本解毒方主要作用于前列腺癌、非小细胞肺癌等肿瘤,与HIF-1signaling pathway、TNF signaling pathway、FoxO signaling pathway、MAPK signaling pathway等密切相关。
  3.固本解毒方含药血清制备及含药血清对A549细胞增殖作用的影响
  目的:制备固本解毒方含药血清,MTT法观察固本解毒方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用。
  方法:按照血清药理实验中的通法方案制备含药血清。通过MTT法检测24h、48h、72h、96h后各组对A549细胞增殖的抑制作用。
  结果:与空白组(BCG)进行对比,中剂量含药血清组(ZYM)和西药组(XYZ)差异有统计学意义(p<0.05),而高剂量含药血清组(ZYH)及低剂量含药血清组(ZYL)差异无统计学意义(p>0.05);48h、72h时ZYM组和XYZ组的抑制率较高。
  4.划痕实验观察固本解毒方对A549细胞迁移能力的影响
  目的:观察固本解毒方含药血清对A549细胞迁移能力的影响。
  方法:通过细胞划痕实验观察24h后各组含药血清对A549细胞迁移能力的影响,运用Image J图像软件分析细胞划痕的面积,计算划痕愈合的百分比。
  结果:24h后,各组划痕的面积均有不同程度的变化,划痕愈合的百分比依次为BCG组>ZYL组>ZYH组>XYZ组>ZYM组。
  5.固本解毒方对CaMKⅡ-p38MAPK通路相关基因表达的影响
  目的:探讨固本解毒方含药血清对CaMKⅡ-p38MAPK通路相关基因表达的影响。
  方法:运用Real-time PCR方法,检测TMCO1、CaMKⅡ、p38mRNA的转录水平。
  结果:与空白组相比,TMCO1中药组和西药组、p38中药组和西药组mRNA的转录水平较低,差异具有统计学意义(p<0.05);CaMKⅡ中药组mRNA的转录水平与空白组相比,差异有统计学意义(p<0.05),但西药组与空白组相比,差异无统计学意义(p>0.05)。
  结论:1.TMCO1、CaMKⅡ、p38蛋白在肺腺癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,三者之间存在共表达,但其内在联系尚未明确,仍需进一步开展研究。
  2.固本解毒方具有多途径、多作用靶点的特征,研究预测了其对肺腺癌转移产生影响的相关靶点和信号通路,为今后实验验证奠定了一定的基础。
  3.固本解毒方含药血清在一定程度上能够抑制A549细胞的增殖、迁移,能够抑制TMCO1、p38基因的转录水平,上调CaMKⅡ的转录水平,其可能通过CaMKⅡ-p38MAPK信号通路影响肺腺癌细胞转移,但需要从蛋白水平开展更深入研究。
[硕士论文] 徐秋萍
流行病与卫生统计学 福建医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  分析男性和女性肺癌发病的影响因素;探讨影响肺癌总体生存时间的因素;研究Wnt和Notch信号通路基因多态性与肺癌易感性及预后的关系。
  方法:
  1.采用病例-对照研究的方法,面访肺癌新发病例1902例和按性别、年龄(±3岁)频数匹配的健康对照2026例。采用非条件Logistic回归模型分析男性和女性肺癌发病的影响因素;利用随机森林筛选重要变量,估计其人群归因分值(PAF);应用叉生分析、Logistic回归模型、Andersson等编制的excel表进行重要变量间联合作用和交互作用分析。
  2.应用前瞻性随访调查的方法,收集2166例肺癌患者的临床资料及预后生存状况,运用Kaplan-Meier法计算1、3、5年生存率及中位生存时间,并绘制生存曲线;应用Log-Rank检验比较不同分层人群的生存率差异;应用Cox比例风险模型分析NSCLC和SCLC预后的影响因素,分别构建预后指数;应用X-tile软件确定各血液指标的最佳截断点,分析各血液指标对肺癌预后的影响。
  3.应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)对筛选出的Wnt和Notch信号通路基因SNPs位点进行基因分型,分别采用非条件Logistic回归模型和Cox比例风险模型分析在不同遗传模型下各位点与肺癌易感性和预后的关联。应用叉生分析、Logistic回归模型、Andersson等编制的excel表进行基因-环境的联合作用及交互作用分析。
  结果:
  1.男性和女性肺癌的共同独立影响因素有:居住地附近污染企业、居室通风情况(10年前)、烹调油烟(10年前)、水果;男性肺癌特有的影响因素有:吸烟史、锻炼(10年前)、烹调燃料(10年前)、粮食储存时间、肉类、蔬菜、奶制品、腌制食物;而女性肺癌特有的影响因素有:被动吸烟、饮茶史、经常服用维生素、月经初潮年龄、生育第一胎年龄、避孕环使用史、雌激素暴露年限。约66.48%、24.23%、9.59%和25.18%男性肺癌的发生可分别归因于吸烟、缺乏锻炼、使用煤烟型烹调燃料和水果摄入不足;约33.09%、34.21%、31.96%和44.69%女性肺癌的发生可分别归因于水果摄入不足、被动吸烟的暴露、生育第一胎年龄<25岁和不饮茶。
  2.性别、BMI、临床分期、肿瘤最大径、首诊转移和治疗方案是NSCLC患者的独立预后影响因素;性格特征、淋巴转移和治疗方案是SCLC患者的预后独立影响因素。血液指标分析结果显示高NLR、高PLR是NSCLC预后的危险因素,高ALI和高AGR是NSCLC预后的保护因素。
  3.rs4730775CT+TT基因型、rs1981492AA基因型、rs222851AG+GG基因型可增加肺癌发病的易感性;高GRS组患肺癌的风险是低GRS的1.404倍(95%CI:1.155-1.707)。
  4.在NSCLC患者中,分层分析发现,rs2240308AG+AA基因型、rs11364AG+AA基因型、rs1046472AC+AA基因型和rs3734637AC+CC基因型与NSCLC死亡危险性增加有关,rs3815188AG+AA基因型和rs915894AC+CC基因型与NSCLC死亡危险性降低有关。在SCLC患者中rs222851、rs8708携带的突变基因型均增加SCLC死亡的风险。
  结论:
  1.肺癌发病的影响因素存在性别差异。男性中约82.82%肺癌的发生可归因于吸烟、缺乏锻炼、使用煤烟型烹调燃料和水果摄入不足;女性中约83.43%肺癌的发生可归因于水果摄入不足、被动吸烟暴露、生育第一胎年龄<25岁和不饮茶。
  2.性别、BMI、临床分期、肿瘤最大径、首诊转移和治疗方案是NSCLC患者的独立预后因素;性格特征、淋巴转移和治疗方案是SCLC患者的独立预后因素。
  3.rs4730775、rs1981492、rs222851位点多态性与肺癌存在潜在关联,且与环境因素存在交互作用。
  4.rs2240308、rs11364、rs1046472、rs3734637、rs3815188和rs915894与NSCLC预后有关。rs222851、rs8708与SCLC预后有关。
[硕士论文] 熊为旻
流行病与卫生统计学 福建医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  探讨肺炎衣原体(Chlamydia peneumoniae,Cpn)、人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染与原发性肺癌的关联。
  方法:
  1.采用病例-对照研究设计,面访肺癌新发病例449例和按性别、年龄频数匹配的健康对照512例,通过微量免疫荧光法检测其血清Cpn IgA和IgG感染情况,并用饮食频数表计算饮食风险分数。采用χ2检验、分层分析、非条件Logistic回归模型等方法,计算调整比值比(odd ratio,OR)及其95%可信区间(95%confidence interval,95%CI)。应用叉生分析、Logistic回归模型、Andersson等编制的excel表进行因素间联合作用和交互作用分析。
  2.选取Cpn血清学抗体均阳性或阴性的原发性肺癌患者各6例,采用高通量芯片技术,对癌和癌旁正常肺组织进行全基因组DNA甲基化与全基因表达联合分析,使用t检验获得癌和癌旁组织间的差异甲基化探针和差异表达基因,并对目的基因进行GO分析和KEGG通路富集分析,探索与Cpn感染相关的潜在功能性异常甲基化基因。对差异甲基化位点进行甲基化水平定量验证,采用t检验或Wilcoxon Rank Sum检验比较分析组间每个DNA片段平均甲基化水平和每个CpG位点的甲基化水平。
  3.检测140对匹配的肺癌和癌旁正常组织中HPV感染情况。采用病毒高保守L1区PCR扩增和特异探针反向杂交相结合的方法,检测21种临床相关的HPV型别。应用配对χ2检验,分析肺癌与癌旁正常组织HPV检出率差异。应用χ2检验及确切概率法,分析不同性别、年龄、病理类型、临床分期、吸烟和饮酒情况下肺癌组织HPV检出率差异。在肺癌组织HPV阴性组和阳性组中,应用秩和检验分析血液和肺功能指标的分布差异。
  4.采用系统综述和Meta分析方法,计算机检索PubMed、OVID和Web of science数据库,同时辅以谷歌补遗和文献追溯等途径,收集国内外公开发表的关于HPV感染与肺癌关联的病例对照研究和队列研究文献,检索时限从1990年至2017年2月。由2位评价员按照纳入与排除标准独立筛选文献,进行文献质量评价、提取文献信息,采用Stata13.0软件进行Meta分析。计算合并效应量(OR/RR)及其95%CI,进行亚组分析和Meta回归以探索异质性来源。
  结果:
  1.Cpn感染是肺癌的危险因素,调整混杂因素后,血清Cpn IgG抗体阳性者发生肺癌的风险是IgG抗体阴性者的1.37倍(95%CI:0.98-1.92);血清Cpn IgA抗体阳性者发生肺癌的风险是IgA抗体阴性者的1.65倍(95%CI:1.19-2.30),随着抗体阳性数和抗体滴度的增加,肺癌发病风险增大,呈剂量反应关系(Ptrend<0.05)。Cpn感染与肺癌中吸烟者、饮酒者、男性的关联更为密切,Cpn感染和吸烟对肺癌有协同作用。沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ctr)和鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)感染与肺癌发病风险的关联性无统计学意义。
  2.饮食是肺癌的影响因素,减少小麦面粉(每周<3次)、薯类(每周<1次)、蔬菜(每天<2次)、水果(每周<3次)和鱼类(每周<3次)摄入与肺癌发病风险增加显著相关,依此建立综合饮食风险分数。Cpn IgG和IgA分层结果显示,饮食风险分数越高,肺癌的发病风险越大(Ptrend<0.05),且Cpn阳性者的饮食风险分数和肺癌发病风险的关联强度高于Cpn阴性者。Cpn感染与饮食风险分数对肺癌存在联合作用和正相加交互作用。
  3.Cpn相关肺癌的异常甲基化基因(目的基因)共293个,其中最有代表性GO和KEGG富集通路为:神经丝细胞骨架构成和神经丝束组装生物学过程、神经丝细胞组分和肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)通路中的NEFM;转化生长因子β受体同型二聚体复合物细胞组分和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号通路中的TGFBR1;Gs耦合的多巴胺神经递质受体活性和多巴胺神经递质受体活性分子功能中的DRD5;NF-κB诱导激酶活性分子功能中的IKBKE和RIPK3;ALS通路中的PPP3CC和PRPH;TGF-β信号通路中的SMAD6。通过DNA甲基化定量分析验证,仅RIPK3启动子区甲基化程度在Cpn阳性的癌和癌旁组织间差异有统计学意义,而在Cpn阴性癌和癌旁组织间差异无统计学意义。
  4.140例肺癌和癌旁正常组织中分别检出13和16例HPV阳性,HPV阳性率在肺癌与癌旁正常组织间差异无统计学意义(P=0.607)。在不同人口学和临床病理特征下,肺癌组织HPV检出率无明显差异(P>0.05)。在肺癌组织HPV阴性组和阳性组中,血小板计数、血小板压积、残气容积、功能残气量和残气容积/肺总量的分布有差异(P<0.05)。
  5.Meta分析最终纳入37篇文献,36篇病例对照研究,合计6980例病例,7474例对照;1篇队列研究,合计24162例HPV感染者;1026986例非HPV感染者。采用随机效应模型分析,结果显示HPV感染与肺癌发病风险关联的合并OR值为3.64(95%CI:2.60-5.08)。异体病例对照研究、自身病例对照研究和巢式病例对照研究的合并OR值及95%CI分别为6.71(4.07-11.07)、2.59(1.43-4.69)和0.92(0.63-1.36)。HPV-16和HPV-18的合并OR值及95%CI分别为3.14(2.07-4.76)和2.25(1.49-3.40)。HPV感染可能与肺鳞状细胞癌、腺癌和小细胞癌有关。亚组分析发现可能的异质性来源有:研究类型、性别、吸烟、HPV检测方法、HPV亚型、病理类型、病理分期和组织分化程度。
  结论:
  1.慢性Cpn感染是肺癌的危险因素(尤其是有吸烟和饮酒史的男性),与血清Cpn IgG相比,IgA与肺癌的关联更密切,且两种抗体联合检测对肺癌发病风险的预测效果更好。肺部感染及时就医治疗及富含小麦面粉、薯类、蔬菜、水果和鱼类的饮食模式可能对肺癌的防制有公共卫生学意义。
  2.血清Cpn阳性肺癌组织中特有的异常甲基化基因RIPK3,通过其启动子区低甲基化,使RIPK3高表达,可能在调节细胞程序性坏死和激活NF-κB转录因子中起关键作用,参与肺癌的发生发展。
  3.在福建人群中,尚未发现HPV感染与原发性肺癌发生风险有明显关联,HPV感染可能通过引起支气管上皮湿疣性病变,从而影响肺的残气功能。
  4.HPV阳性者发生肺癌的危险性是HPV阴性者的3.64倍,尤其是HPV-16和HPV-18型感染者肺癌发生风险高。未来的研究需要关注HPV疫苗是否能有效降低肺癌的发病率。
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