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[硕士论文] 谢鹏
水生生物学 东北林业大学 2018(学位年度)
摘要:东方白鹳是濒危涉禽,全球种群数量仅3000余只。2017年7月-12月,利用鸟类跟踪器技术对洪河保护区的东方白鹳的繁殖期、迁徙期和越冬期栖息地生境进行调查,并采集了多个生境因子和植物优势种数据。对东方白鹳的栖息地调查数据采用多元统计等方法,比较东方白鹳在繁殖期、迁徙期和越冬期生境选择的差异性和相似性。
  对繁殖期、迁徙期和越冬期的东方白鹳选择的生境类型进行分析,结果显示:繁殖地洪河保护区东方白鹳偏爱选择沼泽湿地(Ei=0.3333),随机选择明水面(Ei=0.0909)生境;停歇地东方白鹳偏爱选择鱼塘(Ei=0.3878)生境类型,随机选择滩涂(Ei=-0.0345);越冬地偏爱选择滩涂(Ei=0.3333)和明水面(Ei=0.2308)生境,回避选择沼泽地(Ei=-0.4286),不选择鱼塘(Ei=-1)。繁殖期和越冬期东方白鹳均不选择鱼塘类型生境,而迁徙期和越冬期东方白鹳均回避选择沼泽湿地类型。
  繁殖期、迁徙期和越冬期生境因子的主成分分析结果显示,繁殖期洪河保护区内东方白鹳生境选择的主要影响因素是水因子和食物因子,其次是植被因子。停歇期影响东方白鹳生境选择的主要因素是水因子和食物因子,干扰因子对东方白鹳的影响较低。越冬期东方白鹳生境选择的主要的影响因子是水因子和植被因子,其次是食物因子,而干扰因子影响程度较低。
  东方白鹳栖息生境的优势植物调查结果显示,繁殖地洪河保护区内东方白鹳生境优势种植物为5种,停歇期优势植物共7种,越冬期优势种植物共7种。其中芦苇(Phragmites australis)是唯一广泛分布于繁殖期、停歇期和越冬期的优势种植物,薹草类植物在繁殖期和越冬期的东方白鹳生境中均有较大面积分布。
[硕士论文] 张姝
生物学;动物学 牡丹江师范学院 2018(学位年度)
摘要:哺乳动物体毛是与外界环境直接接触,同时又是动物体本身基因末端的产物,其中包含了大量的综合信息。本文以松鼠科6种鼠的体毛样本为研究对象,通过使用扫描电子显微镜观察并测量了6种鼠身体不同部位体毛的鳞片类型等4项形态学指标,并研究了6种鼠之间的亲缘关系。研究结果:(1)松鼠科6种鼠尾部和前肢针毛鳞片高度相对其他部位较小,岩松鼠(Sciurotamias davidianus)针毛鳞片高度小于其他5种鼠;松鼠科6种鼠前肢的针毛鳞片疏密度大于其他部位,草原旱獭(Marmota bobac)针毛鳞片疏密度大于其他5种鼠;松鼠科6种鼠背部、臀部、腹部针毛直径较大,有由躯干向四肢递减的趋势;(2)不同物种、同一物种不同部位、同一根体毛不同位置上的体毛的鳞片类型存在一定差异性。其中,多为简单冠状型和规则扁平型,其次是杂波型,尾部鳞片杂波型所占比例最高。(3)对6种鼠针毛鳞片的高度、直径和鳞片类型聚类分析后得到,花鼠(Tamias sibiricus)与草原旱獭亲缘关系最近。对针毛鳞片疏密度进行聚类分析得出,花鼠与长尾黄鼠(Spermophilus undulatus)亲缘关系最近。说明运用针毛鳞片高度和针毛直径作为分类标准,能够为6种鼠的亲缘关系判定提供指导,而针毛鳞片疏密度受环境因素影响较大,不能很好反应6种鼠其内在的基因特征,不适宜作为判定6种鼠之间的亲缘关系。
[硕士论文] 杨晓鹏
生物化学与分子生物学 内蒙古大学 2018(学位年度)
摘要:有性生殖是自然界中非常重要的一种繁殖方式,主要存在于哺乳类动物中。雄性动物产生的精子与雌性动物产生的卵细胞两者结合到一起形成受精卵,然后受精卵发育成为新的个体。在精子与卵子融合的过程中,涉及到许多蛋白质分子之间的相互作用,特别是膜蛋白之间的相互识别,对于精卵融合有着十分重要的意义。迄今为止,尽管在精子和卵子之间已经鉴定出至少三对相互作用蛋白,但只有精子表面蛋白IZUMO1与卵子表面蛋白JUNO之间的相互作用是精卵融合所必需的。此外,还有一种精子表面蛋白对精卵融合有着重要影响,那就是CRISP2—一种富含半胱氨酸的分泌蛋白,敲除crisp2基因会显著抑制精子与正常卵子融合的效率。CRISP2蛋白本身就能与卵子表面结合,说明卵子上也有CRISP2的受体,但位于卵子表面且能与CRISP2结合的蛋白一直未被鉴定出来。
  本实验通过构建酵母双杂交诱饵重组载体pGBK-crisp2,从实验室保存的大鼠卵巢cDNA文库中筛选与CRISP2相互作用的蛋白,以期找到能与CRISP2结合的卵子蛋白。实验一共筛选到三个cDNA:creb3l1,tl0aea56yl02和chromosome20,其中只有creb3l1属于已知基因,剩余的两个结果并不属于完整的基因,只是一些RNA或者DNA片段。下一步即可验证CREB3L1蛋白是否位于卵子表面,能否与CRISP2结合。
  为了鉴定CRISP2蛋白与CREB3L1其在卵子表面上的受体共定位,本实验克隆了大鼠crisp2的cDNA,构建了pGEX-crisp2原核表达重组载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了CRISP2-GST重组融合蛋白。以此重组蛋白免疫昆明白雌性小鼠,获得了小鼠抗大鼠CRISP2-GST重组蛋白多克隆抗体,将利用该抗体检测CREB3L1卵子上的定位和与CRISP2蛋白结合的细节。
[硕士论文] 李梦思
生物学 集美大学 2018(学位年度)
摘要:肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-bound serine proteinase,MBSP)是普遍存在于动物肌肉中的胰蛋白酶类似物。由于MBSP结构与功能间的作用缺乏深入研究,本文对鲫鱼MBSP的底物特异性进行分析,探讨并完善酶结构与功能间的关系,以拓展应用价值。
  以鲫鱼MBSP为对象,利用基因重组构建8株突变酵母表达菌株SMD1168-pPICZαA-tMBSP,表达产物分别命名为D170S、D170T、D170K、S171A、G193A、G203A、D170T/G203A、G193A/G203A。利用本实验室制备的兔抗鲫鱼MBSP多克隆抗体进行Western blot鉴定,确认重组表达产物为鲫鱼MBSP。利用荧光底物Boc-Phe-Ser-Arg-MCA(BFSR)、Boc-Gln-Arg-Arg-MCA(BQRR)、Boc-Glu-Lys-Lys-MCA(BEKK)和Boc-Val-Leu-Lys-MCA(BVLK)进行酶活力测定,仅4个突变体具酶活力(S171A、G193A、G203A、G193A/G203A)。底物特异性研究结果表明,与野生型MBSP的最适底物BQRR相比,突变体G193A与G193A/G203A无明显变化;突变体S171A的最适底物同为BQRR,但仅能水解BQRR、BFSR,不能水解BVLK、BEKK;突变体G203A的最适底物变为BEKK,且明显偏向于切割含Lys残基的底物。
  因突变体S171A专一的底物特异性,故对其进行深入分析。圆二色谱、同源建模结果显示,Ser171突变对MBSP的结构稳定性影响不大;分子对接分析结果显示,与野生型MBSP不同的是,底物BVLK、BEKK与突变体S171A的对接能量值由负值变为正值,且BVLK、BEKK作用区域彻底偏离酶分子的催化三联体与特异性底物结合口袋。由于底物与突变体S171A的作用区域发生变化最终导致突变体S171A只能选择性切割Arg残基,间接提示MBSP的催化三联体与特异性底物结合口袋在酶水解底物时发挥重要作用。
  MBSP是使鱼糜制品发生凝胶劣化的原因之一。本文选择两种胰蛋白酶抑制剂对MBSP进行抑制动力学分析,结果显示两种抑制剂对MBSP的抑制关系均属于可逆的竞争型抑制。因此MBSP能够被胰蛋白酶抑制剂抑制,从而在鱼糜制品加工过程中缓解凝胶劣化现象。其次,比较分析MBSP与胰蛋白酶对全蛋白的酶解情况,发现拟穴青蟹主要过敏原均能被MBSP降解,包括耐胰蛋白酶消化的精氨酸激酶。相比于胰蛋白酶及野生型MBSP,突变型MBSP的消化速率最快,仅在1min就能将精氨酸激酶酶解成小分子片段。
  综上所述,MBSP经分子改造后,其突变体结构稳定性不变。分子对接技术结果模拟出突变体S171A与底物的作用区域发生变化,而导致突变体S171A底物特异性的变化。本研究中MBSP表达量较高且热稳定性较好,制备较为容易,有望替代商品化的胰蛋白酶。
[硕士论文] 但弘
水产养殖 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:随着生物基础研究的深入,对基因的功能探究一向是生命科学研究的重要课题之一,不单单是在了解生物发育的现象上具有重要的理论意义,也会影响到生产实践的应用。脂肪肉瘤转运/肉瘤融合蛋白(Fus)是一种参与转录调控与前体mRNA剪切的一种RNA结合蛋白。据先前的实验报道,在哺乳动物中突变FUS会导致神经退行性疾病,包括肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)。然而,关于fus的功能在鱼类中的报道却很少。本研究中,我们以斑马鱼(Danio rerio)作为模式生物,探究fus在鱼类中的功能。斑马鱼fus定位于第3号染色体上,由14059bp个碱基组成,cDNA长度为1626bp,共编码541个氨基酸,其编码序列包含RNA超家族识别结构域(RRM superfamily)和锌指家族与包含锌指区的RNA结合蛋白结构(ZnF-RBZ)的两个结构域。基于该基因的功能结构域,我们选取基因组上尽量靠近翻译起始密码子的合适的靶位点,利用近年来广泛使用的CRISPR/Cas9技术在斑马鱼中对fus产生可遗传的等位基因移码突变,通过子代杂交的方式获得纯合的fus突变体。
  研究结果发现,在斑马鱼幼鱼与成鱼躯体的发育过程中,通过测量fus-/-纯合突变体与对照组的体长与体重,相对于对照组(wide type,WT)野生型斑马鱼来看,发现突变体斑马鱼的体长与体重均有显著减小,但身体发育却无明显异常并且完全可育。除此之外,在野生型斑马鱼中常见的雌鱼身体比例大于雄鱼的性别异形现象在fus-/-纯合突变体中被消除了。进一步研究生长发育信号通路中较为关键的几种生长相关基因,发现gh1,ghra,igf1,igf2a,stat5.1和socs6基因的表达水平在突变体斑马鱼的早期幼鱼发育阶段显著低于野生型斑马鱼。然而,相对于WT,在fus-/-纯合突变体斑马鱼中,其运动能力并未受到影响。本研究表明,不同于它在哺乳动物中的功能,fus在斑马鱼中与运动神经元的发育不相关但在调节鱼类躯体生长发育与两性生长异形方面有着不同的功能。
[硕士论文] 王帅
动物学 广西大学 2018(学位年度)
摘要:革囊星虫属(Phascolosoma)是星虫动物门中重要的一个属,其中可口革囊星虫(P.esculenta),也叫弓形革囊星虫,是我国特有的星虫品种,同时也是我国食用星虫的两个主要品种之一,为了了解北部湾地区的革囊星虫资源分布以及革囊星虫自然群体的遗传多样性和遗传结构,本文在2017年10月至2018年2月,分别在广西北海、防城港、广东湛江、海南四必村、越南海防市等北部湾地区对革囊星虫属的资源进行了勘探和采集,共发现三种革囊星虫,分别为可口革囊星虫(P.esculenta)、厥目革囊星虫(P.scolops)和太平洋革囊星虫(P.pucificum)。三种星虫的形态、生境等有较大的差异,我国的革囊星虫主要为可口革囊星虫和厥目革囊星虫,太平洋革囊星虫均采自越南海防市。通过调查分析,对北海革囊星虫资源分布以及密度有一定了解,基于COI基因和16S rRNA基因对北部湾地区的革囊星虫进行序列测定,运用DNAstar、Dna Sp5.0、MEGA7.0等基因序列软件对序列进行分析。结果表明:
  (1).北海半岛的革囊星虫有两种,一种为可口革囊星虫,一种为厥目革囊星虫。两种革囊星虫的形态差异较大,可口革囊星虫的形体较大,介于50-110mm之间,体表有大量褐色的乳突,位于吻基部和身体末端的乳突颜色加深,紧密排列,纵肌束明显;厥目革囊星虫的体型较小介于25-45mm,身体为棕黄色,半透明,纵肌束不明显。太平洋革囊星虫样品采自越南海防市,形体最大,介于60-120mm之间,纵肌束明显,体壁较厚。北海半岛的星虫资源分布区域主要包括金海湾湿地公园、西村港、银滩大桥等半岛东南部的红树林地区,均为可口革囊星虫,其分布密度介于6.24-7.28ind/m2,生物量为11.48-14.13g/m2,北部湾一号附近的滩涂地也有革囊星虫的分布,为厥目革囊星虫,密度为28.8ind/m2,生物量为17.86g/m2,分布密度显著大于可口革囊星虫,生物量指数相差不大。
  (2)通过COI基因以及16S rRNA基因的测序分析,对北部湾地区的三种革囊星虫的基因碱基对、简约信息位点,遗传距离测定、构建NJ树、MP树等结果表明,三种革囊星虫的碱基含量差异不大,A+T含量均大于C+G含量,运用不同的构树方法,其最终结果均表明可口革囊星虫和太平洋革囊星虫的亲缘关系较近,与厥目革囊星虫的亲缘关系较远,其构树结果和通过形态学分类的结果相符合。
  (3)对不同群体的可口革囊星虫的COI序列碱基对,其中不同群体的碱基含量差异不大,四个地方群体的A+T含量明显大于C+G的含量,A+T含量之和位于59.22-59.55,C+G含量之和为40.45-40.78%之间。符合可口革囊星虫线粒体基因的特点。在80个个体中,共检测出47种单倍型,其中Hap30单倍型在四个群体中均有分布,个体数为12,占总体的15%,其余单倍型随机分布在不同的群落当中。基于Kimura一双参数模型,对不同群体间以及群体内部的可口革囊星虫的遗传距离计算,结果为群体内部的遗传距离为0.0013-0.0028,群体间的最大遗传距离为0.0021,最小的遗传距离为0.0032,群体间与群体内的遗传距离有重叠区域,遗传距离处于同一水平。分子方差分析(AMOVA)结果表明,群体间的遗传变异为1.71%,群体内的遗传变异为98.29%,说明群体遗传变异主要来自群体内部而不是群体间。基于Kimura-双参数模型,对不同群体构建邻接关系树,结果表明47个单倍型之间并没有分出明显的单倍型类群,其节点大部分低于60,没有显示出地域性,不存在地理隔离,可口革囊星虫群体经历过种群扩张事件。
[硕士论文] 李真
生物学 河南师范大学 2018(学位年度)
摘要:1892年法国生物学家Boettger依据采自湖北宜昌高家堰的1号雄性标本(SMF6241)建立新种花臭蛙(Rana schmackeri),由于缺少对正模标本的完整的形态描述和图片展示,一直以来花臭蛙的鉴别特征和形态描述均依据的是非地模产地的标本。近年来有研究表明模式产地的花臭蛙可能是包含了3个物种的复合体(species complex),因此花臭蛙正模标本的属于花臭蛙复合体中的哪个物种?模式产地花臭蛙在形态和遗传上发生了哪些变异分化?这些问题对修订花臭蛙复合体内已知物种的名称、隐存种的命名具有重要意义,同时对花臭蛙地模标本的补充描述能够进一步完善花臭蛙作为一个有效种的基本信息,对确定复合体内物种的鉴别特征及隐存种的发现具有指导和借鉴作用。
  本研究基于湖北宜昌高家堰地区(30°39.154′N;110°56.665′E)模式产地3种花臭蛙复合体共149号形态标本(花臭蛙36雄27雌、合江臭蛙35雄23雌、O.sp.为23雄5雌)和96号分子材料(花臭蛙52号,合江臭蛙21号,O.sp.为23号),利用形态标本进行形态学比较、典型判别分析、方差分析及协方差分析,基于线粒体12S、16S rRNA基因标记和10个微卫星位点对96号花臭蛙复合体的分子材料进行遗传距离计算、系统发生关系和遗传结构分析,以揭示高家堰地区花臭蛙复合体的形态变异和遗传分化情况。研究结果显示:(1)模式产地花臭蛙复合体3个物种在方差分析中雌性个体在各项形态量度上均极显著大于雄性个体(P<0.01);经头体长矫正后协方差分析结果显示三者在头宽、鼻眼距、鼻间距、眼间距、眼前角距、胫长、胫宽、跗足长、内蹠突长9个指标显示出差异。其中头宽、鼻间距、眼间距、眼前角距均只有花臭蛙显示出雌性小于雄性,合江臭蛙和O.sp.均无显著差异,表明花臭蛙的雄性个体相较于合江臭蛙和O.sp.头部相对较宽;在胫长、胫宽两个指标上花臭蛙表现出胫长相对较大,区别于合江臭蛙和O.sp.的胫宽较大。合江臭蛙在鼻眼距、跗足长区别于花臭蛙、O.sp.,O.sp.在内蹠突长区别于另两者。(2)典型判别分析结果支持将湖北宜昌的花臭蛙复合体分为3个类群,雄性、雌性的正判率分别为96.8%和100%;将花臭蛙正模标本放入判别模型中,其所在位置距花臭蛙、O.sp.、及合江臭蛙群组重心马氏平方距离分别为15.622、29.592和93.150。
  (3)系统发生关系显示湖北宜昌的花臭蛙复合体的明显分为3个支系(A支、C支和D支),各主要支系节点均获得较高的支持度(后验概率0.83~1),三个支系间遗传距离为3.7%~6.7%,支系内均为0.01%。
  (4)基于微卫星位点的Structure聚类分析显示出湖北宜昌花臭蛙复合体的遗传结构显著分为3个类群(Cluster1、Cluster2和Cluster3),且各类群间基因交流水平极低。
  结论:
  (1)花臭蛙正模标本(SMF6241)与花臭蛙O.schmackeri为同一物种。
  (2)高家堰地区的花臭蛙复合体包括3个物种,即花臭蛙(O.schmackeri)、合江臭蛙(O.hejiangensis2个已知种和1个隐存种(O.Sp.)。
  (3)湖北宜昌的花臭蛙(O.schmackeri)、合江臭蛙(O.hejiangensis)和隐存种(O.sp.)在性二型性机制上存在显著的差异,表明三者在面对自然选择压力的过程中产生了不同形式的适应机制。
  (4)湖北宜昌同域分布的花臭蛙复合体的3个物种间遗传结构差异显著,种群间几乎没有基因流。
[硕士论文] 王玉
海洋生物 浙江大学 2018(学位年度)
摘要:近年来,人类因误食沾染贝类毒素的海产品而中毒的现象屡见不鲜。因此,明确贝类毒素的定性定量分析方法,对实施海产品食用安全检测有重要意义。本文以常见的脂溶性贝类毒素扇贝毒素-2(Pectenotoxin-2,PTX2)为研究对象,分别从室内培养的藻种和野外水体的吸附样品中自主研发了一套PTX2毒素的提取-纯化-检测-制备的标准物质制备技术,并以此为基础,对广西北部湾海域水体和牡蛎中的脂溶性贝类毒素进行检测。
  首先,针对PTX2及其他常见的17种脂溶性贝类毒素,本文建立并优化了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)分析检测方法。这些脂溶性贝类毒素包括大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)、鳍藻毒素-1,2(Dinophysistoxin-1,2;DTX1,2)、扇贝毒素-1,2,11,12(Pectenotoxin-1,2,11,12;PTX1,2,11,12)及其衍生物Pectenotoxin-2seco acid(PTX2sa)、环亚胺毒素(Gymnodimine,GYM)、螺环内酯毒素(Spirolides-1,SPX1)、原多甲藻酸贝类毒-1,2,3(Azaspiracids-1,2,3;AZA1,2,3)、虾夷扇贝毒素(Yessotoxin,YTX)及其衍生物(45OH-YTX、homoYTX和45-OH-homoYTX),其中对PTX12、PTX11、PTX1、PTX2sa等四种扇贝毒素和45OH-YTX、homoYTX、45-OH-homoYTX等三种YTX衍生物毒素是定性分析,对其它十种脂溶性贝类毒素是定量分析。检测方法的建立不仅为常用脂溶性贝类毒素的检测提供依据,也为后续研究中PTX2的提取和纯化效率的鉴定提供保障。
  其次,本文以室内培养的PTX2毒素产毒藻渐尖鳍藻(Dinophysis acuminata)为对象,重点对鳍藻细胞的大量培养、收集和破碎,PTX2毒素的提取及高效液相色谱法(HPLC)纯化等步骤进行筛选和优化,确定基于HPLC的PTX2的制备方法。结果表明,反复冻融与超声波细胞破碎相结合可获得最大的细胞破碎率和毒素提取率,分别为99.2%和81.5%。采用四种有机试剂(甲醇、丙酮、乙醚、二氯甲烷)及三种SPE小柱(Oasis HLB SPE,Phenomenex Strata-X SPE,Sep-Pak C18SPE)对PTX2毒素的提取结果表明,乙醚-二氯甲烷的提取效率最高,达78.2%。在HPLC对PTX2毒素的纯化实验中发现,流动相的pH会影响毒素组分的分离,在碱性流动相(含6.7mM氨水的水溶液和乙腈溶液,pH=10.94)条件下,PTX2的分离效果最佳(纯度为93.2%),响应值最高。该方法简单快捷,高效易操作,为从大规模培养的鳍藻细胞中制备高纯度PTX2毒素提供了技术支持。
  然后,本文利用固相吸附毒素跟踪技术(Solid Phase Adsorption Toxin Tracking,SPATT)对海水中的脂溶性物质进行吸附,并以SPATT中吸附的脂溶性物质为原料,对PTX2毒素进行提取和分离(Oasis HLB SPE),并优化了分离纯化PTX2毒素的HPLC条件,最终从SPATT样品中制得纯度为88.9%的PTX2毒素。利用本文建立的检测体系对北部湾海域脂溶性贝类毒素进行分析,证明本研究制备的高纯度PTX2可用于贝类毒素的日常检测筛查要求。对北部湾为期一年(2015年10月至2016年9月)的监测结果表明,脂溶性贝类毒素的检出率在不同季节存在差异,夏季是脂溶性贝类毒素爆发期,而冬季一般较低。
  最后,本文对制备的PTX2样品按照国家级标准物质技术要求进行了均匀性、稳定性和标准值与不确定度的检验,保证了样品制备过程的有效性。本文的研究结果可为从大规模培养的鳍藻细胞和海水样品中制备高纯度PTX2毒素提供切实有效的方法,为PTX2标准品的国产化奠定技术基础。
[硕士论文] 梁思雨
生理学 东北林业大学 2018(学位年度)
摘要:鹿角是雄鹿对抗天敌、争夺配偶或领地的武器,也是性选择的炫耀工具。其形状和大小的演化与物种身体结构和行为模式的分化有关,而身体结构和行为模式的分化又与生境适应关系密切,所以鹿角的演化是揭示鹿类进化机制的重要方面。但是,传统的研究中一直缺乏有效的方法来定量描述鹿角的形状,使很多深入的研究受到限制。本研究系统研究了13种鹿类的角,建立了17项形态描述指标,以0/1方式生成数据。采用卡方距离(x2Distance),以Average Linkage、Single Linkage、Complete Linkage和Ward's Minimum Variance等4种聚类方法进行形态聚类。结果显示,鹿角的形状分为两大分支,一是以麂族为核心的简单型角,二是以鹿族、驼鹿族和空齿鹿族为核心的复杂型角,并呈现出从简单到复杂的变化趋势。这些趋势与鹿类动物系统进化谱系没有明确的关系,但能够客观地反映出各种鹿角的形态特征,用于定量分析。这些指标的量化简单、易行,为鹿角形状有关的研究和鉴定提供一种实用工具。
  骨骼形态发生蛋白4(BMP4)基因与动物的面部形态发生有关,其分化可在短期内引发动物头面部形态的剧烈分化。鹿角是额骨的附属物,生长过程中BMP4有较高的表达,说明BMP4参与了鹿角形态形成。但是,鹿角形态的演化与BMP4的进化是否有协同关系还未见研究。为了揭示这一协同关系是否存在,用15中鹿类动物研究了BMP4最为活跃的外显子4的系统发育关系,将其与鹿角形态演化的趋势和鹿类物种的系统发育关系进行比较。结果显示,鹿角形状演化不是按照鹿类动物的系统进化关系h和BMP4Exon4的系统进化关系而进行的。BMP4Exon4的系统进化也未按照物种的演化关系进行,在207个密码子有29个密码子显示出正选择倾向,平均概率为0.891,说明Exon4表现出非常活跃的适应性进化特点。综合以上结果,鹿角形状的演化是在物种种化之后的次生性、个性化的适应性进化的结果。BMP4是一个活跃的适应性进化的基因,其进化过程超越了鹿科动物系统发育关系,其他性状对其产生的选择压力是主要的,同时受到打斗、展示和生境适应等方面功能的选择压力。
[硕士论文] 韩富瑶
动物学 四川农业大学 2018(学位年度)
摘要:齿蟾属(Oreolalax)隶属于两栖纲(Amphibia)无尾目(Anura)角蟾科(Megophryidae)拟髭蟾亚科(Leptobrachiinae),目前该属共记录18个物种,其中17个物种属于中国特有物种,主要分布于中国西南山区(四川盆地周缘山区及毗邻地区),只有越南齿蟾(O.sterlingae)分布在越南北部。线粒体基因组(mtDNA)由于具有进化速度快、无组织特异性、母系遗传、无重组、分子量小易获得等特点而被广泛用于两栖动物的分子系统发育研究。一方面,先前报道的齿蟾属7个物种线粒体基因组,未能详尽地比较分析线粒体的进化特征。因此有必要全面地对齿蟾属相关物种线粒体基因组进行比较分析。另一方面,本研究通过测定线粒体基因和和核基因RAG1重建齿蟾属物种的系统发育关系。本文获得以下结果:
  1.首次测定并分析峨眉齿蟾(O.omeimontis,17,675bp)和魏氏齿蟾(O.weigoldi,17,266bp)两种齿蟾的线粒体基因组全序列。同时测定秉志齿蟾(O.pingii,15,570bp,Dloop区和4个tRNA未测全)、大齿蟾(O.major,15,758bp,Dloop区未测全)和无蹼齿蟾(O.schmidti,18,481bp,Dloop区未测全)共三种齿蟾的部分线粒体基因组序列。
  2.将本实验测定的两种齿蟾线粒体基因组序列与已公布的7种齿蟾的线粒体基因基因组序列整合分析发现:齿蟾属线粒体基因组的基因顺序与已经公布的齿蟾属物种排布方式基本一致,都包含13个蛋白质编码基因(PCG),2个核糖体基因、23个tRNA和1个控制区(Dloop),其中tRNA-Met为双拷贝。齿蟾属物种的蛋白质编码基因使用最多的起始密码子是ATG,大部分tRNA都可以折叠成典型的三叶草结构。线粒体基因组长度变化较大,范围在17,110bp(乡城齿蟾)-18,676bp(红点齿蟾)。
  3.本文通过测定齿蟾属内7个物种21个个体的线粒体12S rRNA,16S rRNA及tRNA-Val基因并结合GenBank中已发布的角蟾科内的线粒体基因重建齿蟾属内16个物种和一未知物种的系统发育关系并讨论了相关物种的分类地位,本论文首次通过分子证据确定魏氏齿蟾(O.weigoldi)在系统发育树上的位置,与利川齿蟾、秉志齿蟾和无蹼齿蟾聚为一大枝。此外,发现采自四川省彭县的宝兴齿蟾(O.popeii)与采自四川省峨眉山的宝兴齿蟾(O.popei)并没聚为一支,推测可能为同一物种,要澄清相关问题,下一步研究需要整合宝兴齿蟾模式产地(四川省宝兴县)的信息,还需要在未来的工作中进一步深入讨论。
  4.本文通过测定齿蟾属物种的6个物种21个个体,并结合GenBank中已发布的序列重建齿蟾属内13个物种的系统发育关系并讨论了相关物种的分类地位。研究结果表明齿蟾属与齿突蟾(Scutiger)亲缘关系较近,互为姐妹群。
[硕士论文] 张宇
动物遗传育种与繁殖 东北林业大学 2018(学位年度)
摘要:麝鼠(Ondatra zibethicus Linnaeus)又称为青根貂,是田鼠亚科麝鼠属中唯一物种。雄性麝鼠有一对泌香腺,繁殖时可分泌具有明显芳香气味的乳白色麝鼠香。麝鼠香的主要药用成分为麝香酮,与天然麝香相近,所以具有成为天然麝香替代品的巨大潜力。麝鼠相较于其它鼠类,前列腺组织非常发达。研究发现腹腔注射麝鼠香可使小鼠的前列腺组织增大,所以麝鼠香除了具有外激素的作用还可能具有调节麝鼠自身发育的作用。
  本研究中通过RNA-seq测序技术,对麝鼠泌香期和非泌香期的前列腺组织进行了转录组测序,并通过生物信息学从整体水平上对麝鼠前列腺的发育进行了研究。同时,本研究中建立了麝鼠前列腺成纤维样细胞的原代培养方法,构建了麝鼠前列腺成纤维样细胞的细胞模型,证明了该细胞体外培养的可行性。结合RNA-seq测序结果和原代培养的细胞模型,对原代细胞进行了麝鼠香干预试验,将传代至第3代的原代培养麝鼠前列腺成纤维样细胞分为2组,10μg/ml麝鼠香组记为A1组,0.1%DMSO对照组记为B1组。实验结果显示,A1组的Bcl-2转录水平高于B1组约4倍,Bax基因转录水平较B1组低。麝鼠香可以提高细胞Bcl2基因的转录水平,降低Bax基因的转录水平,提高Bcl2/Bax的比值,起到抗细胞凋亡的作用。为初步研究麝鼠香调节Bcl2/Bax比值的作用机制,本实验使用HEK293T细胞,并利用麝鼠香的主要成分麝香酮进行干预,将复苏后传代至第3代的HEK293T细胞分为5组,3μg/ml麝香酮组记为A2组,5μg/ml麝香酮组记为B2组,7μg/ml麝香酮组记为C2组,9μg/ml麝香酮组记为D2组,0.1%DMSO对照组记为E2组。每组设置3个生物学重复。相较于E2组,A2、B2、C2和D2组NF-κB基因的转录水平分别为E2组的1.39倍、1.53倍、1.72倍和1.78倍;PI3K基因的转录水平分别为E2组的1.41倍、1.58倍、1.71倍和1.79倍;ERK基因的转录水平分别为E2组的1.27倍、1.39倍、1.53倍和1.77倍;MEK基因的转录水平分别为E2组的1.2倍、1.29倍、1.32倍和1.38倍;p53基因的转录水平分别为E2组的1.08倍、1.11倍、0.99倍和1.1倍。结果发现:麝香酮会提升NF-κB、PI3K、MEK和ERK基因的转录水平,且具有明显的量效关系。对于p53基因的影响并无明显规律。因此推测,麝香酮调节细胞Bcl-2、Bax基因转录水平比值的改变可能是通过调节上述信号通路来完成的。通过RNA-seq测序部分和药物干预细胞的实验结果进行推测,麝鼠香对于麝鼠本身不只可以起到外激素的作用,还可以调节自身的生长发育情况,如可以促进麝鼠前列腺的发育。麝鼠香中的麝香酮等亲脂性气味分子随血液循环到达前列腺组织,c75134_g2转录本所编码的蛋白在这一过程中起到亲脂性气味分子载体的作用,并帮助其与受体结合,通过调节Bcl-2家族基因的转录水平,起到抗细胞凋亡的作用,调节前列腺组织的发育过程。
[硕士论文] 盛清宇
野生动植物保护与利用 东北林业大学 2018(学位年度)
摘要:在种群遗传多样性研究中,从2015年1月至2017年1月期间,在长白山北部区域采集了266份狍粪便样品,实验室提取DNA后,筛选了10个微卫星位点对该地区7个西伯利亚狍(Capreolus pygargus)的局域种群进行遗传多样性和性别偏倚扩散分析,目的在于为狍种群资源的保存利用以及后续研究狍作为猎物对东北虎、东北豹的影响提供支持。获得主要研究结果如下:
  1)7个地区的西伯利亚狍种群遗传多样性程度均较高。等位基因数在7.3~11.1之间,平均等位基因数为8.9。等位基因丰富度整体水平较高,为7.5。观测杂合度和期望杂合度大小范围在0.7~0.76之间,种群遗传一致性较低,种群遗传多样性丰富、变异程度较高。7个种群中,仅黄泥河种群的Fis值为负值(-0.01),其余6个种群的Fis值均大于0,在0.021~0.061之间,表明种群内部可能存在一定程度的近交。
  2)遗传多样性研究结果表明,研究区域内的狍种群具备优良的选育和遗传潜力,是可以进行持续利用的种质资源。
  3)在种群遗传结构和性别偏倚扩散机制研究中,应用空间自相关分析发现了汪清区域的狍种群在5~10km的距离等级内存在明显的空间遗传相关性,表明汪清区域狍种群空间遗传结构由于基因流受限所导致的。
  4)长白山北部区域狍种群遗传结构表现出的性别间差异和偏雌扩散的模式,可能是由以下两方面的原因导致的:一是狍雌雄个体冬季栖息地利用差异,后代较少的雌性个体,需要在冬季进行较长距离的迁移,以回到出生地来加入具有亲缘关系的集群中;二是狍一夫一妻制以及雄性保卫领地的交配策略可能导致雌性狍需要通过较长距离的迁移来寻找并选择拥有较好资源配偶。
[硕士论文] 张娜
农用海洋资源 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:海洋污损是人类开发利用海洋资源时,所需要面对的海洋生物聚集生长在人工表面所带来的问题。随着海洋开发力度的增强,海洋生物污损问题也受到广泛关注。近年来,开发新型无毒、高效、环境友好型的抗污损技术,成为海洋防污损技术发展的必然趋势,而探究污损生物的附着机制则是开发新技术的基础条件。海洋污损生物包括动物、植物、微生物,动物主要是指无脊椎动物,藤壶由于其超强的耐受性,分布范围广,是最常见的海洋污损生物之一。本文选取的实验对象就是纹藤壶,纹藤壶的生活史可分为浮游生活阶段和固着生活阶段,由浮游转向固着生活的过程就是我们研究的重点。
  本文针对纹藤壶幼虫发育变态过程,建立了纹藤壶驯养与幼虫培育模型,对幼虫发育变态过程中发生的体态特征变化进行了研究。在实验前已经有研究表明组胺物质参与了藤壶幼虫变态发育过程的信号传递。实验中,不仅定量测定了组胺的含量,而且测定了一系列可能与组胺信号传递过程相关的神经递质、第二信使、蛋白激酶等指标,来探究组胺的具体信号传导途径。本文具体研究结果如下:
  (1)纹藤壶实验室驯化需保证20℃以上的水温,温度过低或者喂食的营养不够都会影响其幼虫的释放。纹藤壶幼虫释放后需要经过实验室培养5d左右才能变态为金星幼虫,在培养过程中需要定时镜检,观察期生长发育情况。实验结果表明,在纹藤壶幼虫发育变态过程中,其体型会发生很大的改变,这为我们判定纹藤壶各个时期提供了条件。在某些阶段,纹藤壶幼虫的某些特定结构会快速发育,例如在蜕变为金星幼虫后,其甲壳几乎变为原来的2倍。
  (2)根据邱晶晶[115]的实验结果可知,组胺确实可以促进纹藤壶幼虫的发育变态,因此本实验选用了组胺和其他3种常见的神经递质:多巴胺、肾上腺素、血清素进行测定。为了探寻信号物质如何参与纹藤壶幼虫附着变态过程,首先需要确认幼虫体内是否存在该信号物质,接着进行定量分析。本论文测定结果显示未能通过HPLC检测出纹藤壶幼虫体内含有多巴胺、肾上腺素、血清素,可能是不含有或者含量低于检测线。成功检测出了组胺的存在,并且通过定量分析发现不同阶段纹藤壶幼虫体内组胺含量有显著差异。其变化趋势说明,纹藤壶幼虫发育变态会消耗体内组胺。
  (3)纹藤壶幼虫发育变态过程中,RNA和DNA含量有显著性变化。单位蛋白中RNA和DNA含量的变化趋势与组胺的变化趋势相一致,其中RNA更加符合。与组胺测定结果相比,在纹藤壶幼虫整个发育变态过程中RNA和His含量的变化趋势是一致的,如此验证了组胺参与了纹藤壶幼虫发育变态的信号传递过程。
  (4)PKA和PKC是信号传递过程中重要的蛋白激酶。在整个发育变态过程中,PKA和PKC表达量的变化趋势非常相似。在整个发育阶段中,PKA和PKC表达量与单位蛋白的RNA含量变化趋势相似,RNA含量在无节幼虫6期是5期的1.51倍,在此一定程度上验证了纹藤壶幼虫6期的高RNA含量导致了高速的蛋白质合成,其中也包括PKA和PKC的表达。
  (5)在信号传导过程中,第二信使的主要功能是在细胞内传导并放大信号。本实验选用最主要的四种:DAG、cGMP、cAMP和IP3。实验发现,不同时期纹藤壶幼虫体内第二信使含量差异巨大。其中,DAG含量最低,而cGMP和IP3含量最高。同种第二信使在纹藤壶幼虫生长的不同阶段含量有显著性差异。并且,与组胺含量的变化趋势相比,IP3与其有高度重合性。因此猜测,IP3可能是参与组胺信号传递过程中的第二信使,信号传递途径可能涉及到PIP2途径。
  综上所述,PKA和PKC的变化趋势也同RNA和His的变化趋势保持一致,但由于第二信使测定结果表明cAMP、DAG可能不是His的下游信号物质。因此,PKA和PKC可能与His的信号传导没有非常直接的联系,但可能与纹藤壶的发育变态的信号传递相关。总而言之,在纹藤壶幼虫发育变态过程中的调控机制非常复杂,极有可能是多种信号途径共同作用。
[硕士论文] 李越
生物学 集美大学 2018(学位年度)
摘要:脯氨酰内肽酶(Prolyl endopeptidase/PEP/PREP)隶属于丝氨酸蛋白酶家族,在医学,食品科学中有较大应用潜力。本研究选用皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai),克隆得到皱纹盘鲍脯氨酰内肽酶的cDNA序列并进行体外表达,同时对其性质进行了相关研究。
  通过对多个物种的PEP基因中的保守序列进行分析后设计特异性引物,采用巢式PCR和RACE技术从皱纹盘鲍的肝胰腺组织中克隆获得了脯氨酰内肽酶(Hdh-PEP)基因的cDNA全长序列。序列分析结果显示Hdh-PEP的cDNA全长共3224个碱基对(bp),包含5'端非编码区序列51bp,3'端非编码区1052bp,开放阅读框2121bp,编码706个氨基酸残基。序列比对结果显示,Hdh-PEP的氨基酸序列与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)、热带爪蟾(Xenopus tropicalis)、和人(Homo sapiens)PEP的序列相似度分别为70%、65%和63%。经预测,Hdh-PEP基因编码的蛋白相对分子质量为80.3ku,理论等电点为5.55,属于相对稳定的亲水蛋白。Hdh-PEP的二级结构与三级结构模拟分析显示其具有典型的PEP家族特征,有“α-催化结构域”和“β-螺旋桨结构域”两部分形成的“匣式”结构。系统发育关系分析结果表明Hdh-PEP在腹足纲PEP中形成了独立的进化分支。
  通过将编码Hdh-PEP的全长序列连接至pET-28a载体上,构建了原核重组表达载体pET-28a-HP。表达并纯化了具有酶活性的重组Hdh-PEP。重组Hdh-PEP的理论相对分子量为85.4ku,包含了原Hdh-PEP80.3ku以及载体自带的组氨酸标签等序列4.1ku,与SDS-PAGE结果相符。对纯化产物进行肽质量指纹质谱分析获得结果与分子克隆结果相比较,氨基酸序列100%相符,证明重组表达得到的蛋白为Hdh-PEP。
  酶学性质分析表明,Hdh-PEP的最适温度和最适pH分别为20℃和6.0,且在低温范围内(10℃-20℃)和pH6.0-9.0时能保持相对较高的酶活力,在温度高于30℃时即失活。Hdh-PEP能够特异分解羧基端含有脯氨酸残基的荧光底物Suc-Gly-Pro-MCA和Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-MCA,在最适环境下进行分解时的比活力为6.57U/μg。
  选取了多种抑制剂及金属离子对Hdh-PEP进行了抑制作用分析,结果显示,特异性抑制剂SUAM-14746能够强烈抑制Hdh-PEP的活性,Na+和Mg2-对Hdh-PEP的活性没有产生显著影响。Ca2+对Hdh-PEP的活性可起到少许促进作用。合成小肽EGAR和水飞蓟宾(Silibinin)对Hdh-PEP的抑制效果相对较弱。SUAM-14746对Hdh-PEP表现为竞争性抑制作用,Cu2+对Hdh-PEP的抑制类型为混合型抑制。Zn2+和Al3+在抑制Hdh-PEP活性时会对其二级结构产生影响,而Cu2+,Pb2+和Ag+抑制Hdh-PEP活性时不会对其二级结构产生明显影响。
  使用Western Blot技术检测Hdh-PEP在皱纹盘鲍各组织中的表达量。结果显示,实验所用的兔抗罗非鱼PEP多克隆抗体对天然Hdh-PEP和重组Hdh-PEP均有特异性的免疫杂交反应。Hdh-PEP在皱纹盘鲍血细胞中的表达量较高,鳃中次之。但未能在腹足肌肉中检测到Hdh-PEP的表达。
  通过对Sigma-Aldrich公司产品化PEP储存液配方进行改良,改良后的储存缓冲液可在75天内将Hdh-PEP的活性保持在90%以上。本研究对皱纹盘鲍PEP的分子克隆丰富了贝类PEP的研究内容并建立了稳定的表达体系。为贝类PEP的后续研究提供了一定的理论基础。
[硕士论文] 刘源
水产养殖 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus),隶属于鲤形目(Cypriniformes)、鳅科(Cobitidae)、副泥鳅属(Paramisgurnus)。大鳞副泥鳅作为外来鱼类已存活于青藏高原水域,有关其在高原水域的个体生物学和种群动态的相关研究仍未见报道。本文对茶巴朗湿地大鳞副泥鳅的入侵途径、年龄结构、生长特性和种群动态进行研究,通过与低海拔地区该物种年龄结构的对比分析,揭示其在高原湿地的生长特征,为外来鱼的控制提供基础资料。主要结果如下:
  2017年4月初至5月中旬对茶巴朗湿地和拉萨河曲水段进行的渔业资源调查结果表明:茶巴朗湿地和拉萨河曲水段渔获物中的外来鱼类组成一致,均有7种外来鱼类,分别为麦穗鱼、黄黝鱼、棒花鱼、鲫、大鳞副泥鳅、泥鳅和鲇,根据本次调查结果与以往的相关资料分析可推测外来大鳞副泥鳅是由拉萨河经由沟渠进入茶巴朗湿地。
  取大鳞副泥鳅的鳞片和耳石作为年龄鉴定材料,对298尾大鳞副泥鳅进行年龄鉴定,结果表明,鳞片与耳石均可作为大鳞副泥鳅的年龄鉴定材料,耳石的鉴定结果更佳。大鳞副泥鳅已在茶巴朗湿地形成了自然种群,个体体长范围为5.13~16.92cm,平均体长为11.02 cm;体重范围为1.22~49.89 g,平均体重为10.79 g;种群由2~8龄共7个年龄组组成,优势年龄组为4~6龄;相关分析表明雌雄的体长与体重无显著性差异,其种群体长体重表达式为W=0.010L2.917,呈匀速生长;逻辑斯谛生长方程为Lt=12.740/(1+e0.803-0.530t),Wt=16.740/(1+e0.803-0.530t)2.917,拐点年龄为3.5龄,对应的体长与体质量分别为9.44 cm、6.99 g。与低海拔地区相比,茶巴朗湿地外来大鳞副泥鳅在年龄结构上表现为年龄组成偏大,可能是与当地的捕捞力度小有关,从而能自然生长至理论最大年龄;在生长特征上表现为相同年龄段的个体减小,生长指标下降,这些变化可能是该外来物种为了更好地适应高原低温水环境所致。
  茶巴朗湿地外来大鳞副泥鳅种群的自然死亡系数(M)为0.768/年,其生态学类型为r选择,通过其自然死亡系数(M)、生态学类型及生命表来分析该物种的种群动态,结果表明外来大鳞副泥鳅在茶巴朗湿地正处于种群丰度持续增加的阶段。
[硕士论文] 穆瑶
生物工程 内蒙古大学 2018(学位年度)
摘要:中华鼢鼠(Mospalax fontanieri)为鼹形鼠科、鼢鼠亚科、鼢鼠属动物,目前还没有该动物成纤维细胞建系及细胞生物学特性的研究。作为蒙古高原代表性动物遗传资源,本研究采集中华鼢鼠9种组织用于实验,其中气管、肺和剑状软骨3种组织成功建立成纤维细胞系并分析了这些细胞的生物学特性。主要实验方法是通过细胞计数法计算细胞的贴壁率、冻存前及复苏后的存活率、绘制细胞生长曲线;制备常规染色体标本分析染色体核型;采用DNA测序方法测定中华鼢鼠线粒体DNA的Cyt-b,D-loop,ND4基因序列,评价其进化地位。
  实验结果显示:中华鼢鼠气管、肺、软骨3种组织在体外条件下培养第3~4天出现成纤维样细胞,分别在培养第11天、第16天、第17天原代细胞90%以上汇合。3种组织来源体细胞均显示成纤维细胞特征,气管成纤维细胞贴壁能力最强,24h贴壁率最高能达到98.10%,肺成纤维细胞与剑状软骨成纤维细胞贴壁能力较弱,24h贴壁率最高,分别为95.28%和94.88%。3种不同组织来源成纤维细胞冻存成活率均显著下降,P4~P8气管成纤维细胞存活率为:冻存前98.92%~93.20%,复苏后91.57%~73.25%,P4~P8肺成纤维细胞存活率为:冻存前98.92%~89.33%,复苏后89.97%~70.21%,P4~P6剑状软骨成纤维细胞存活率为:冻存前98.52%~82.91%,复苏后88.23%~69.06%。3种成纤维细胞的生长曲线均呈“S”型,其中气管成纤维细胞增殖能力最强,在24孔板的每个孔中,其最大增殖数目为2.435×104个,肺成纤维细胞最大增殖数目为1.813×104个,剑状软骨成纤维细胞最大增殖数目为1.521×104个。核型分析结果显示,中华鼢鼠的成纤维细胞染色体数目为2n=62,30对为常染色体,形态类型为2st+28sm。第1对染色体最大为近中着丝粒染色体。其余28对染色体均为亚中着丝粒染色体,性染色体X为中部着丝粒染色体。系统发育树分析结果表明,鼢鼠来源于2个不同的母系祖先,且中华鼢鼠与高原鼢鼠的亲缘关系最近。综上所述,本研究成功建立了中华鼢鼠成纤维细胞建系技术及体细胞系,并揭示了该物种成纤维细胞的基本生物学特性,评价了中华鼢鼠的系统进化地位,为进一步研究其遗传及物种进化提供了重要的实验材料和参考依据。
[硕士论文] 邵婕
生理学 东北林业大学 2018(学位年度)
摘要:近些年因疾病爆发、生境破坏等诸多因素、特别是环境中病原微生物的影响,导致全球两栖类种群数量呈锐减趋势,已引起了人们广泛关注。Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)作为机体识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP),在微生物侵袭时,使机体启动固有免疫应答,从而激活一系列信号级联反应引发针对病原体的特异性免疫应答。本研究以中国东北地区优势两栖动物东北林蛙(R.dybowskii)为研究对象,以蛙类易感病原微生物嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)为感染源,研究在嗜水气单胞菌胁迫下东北林蛙体内TLR4信号通路中核转录因子IRF3和IRF7的调控机制。
  本研究通过HE染色观察Ah感染东北林蛙后其肝脏组织病理学变化,采用高通量测序获得东北林蛙IRF3和IRF7序列设计引物,荧光定量PCR检测在Ah胁迫下其肝、心、肾、脾组织中TLR4信号通路中IRF3和IRF7mRNA表达变化,为探明东北林蛙被细菌感染后其体内TLR4通路的作用机制奠定基础。
  实验结果显示:Ah感染后肝脏组织病理学观察所见,随着时间延长(12~72h),肝细胞变性,呈空泡样变,细胞间隙增大,炎性细胞浸润逐渐明显。荧光定量PCR结果显示:东北林蛙TLR4信号通路中IRF3mRNA在肝、心、肾、脾组织中均呈上调表达,在12h达峰值;IRF7mRNA在肝、心、肾、脾组织均呈上调表达,且在肾、心中于12h达峰值,在脾、肝脏中则分别在24h和72h达到峰值。此外,IRF3mRNA在肾脏和脾脏中上调表达峰值明显高于心脏和肝脏,其中尤以脾脏变化最为明显,为对照组的13.7倍(p<0.01);IRF7mRNA表达量在脾脏中变化最明显,为对照组的13倍(p<0.01),其次在肾脏中表达量为对照组的9倍(p<0.01),在肝脏中表达量最低,为对照组的1.3倍。
  本研究结果表明,嗜水气单胞菌对东北林蛙具有致病性,IRF3、IRF7参与了TLR4信号通路的固有免疫应答。
[硕士论文] 曹洁霞
生态学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:基于次生代谢物的动植物间的协同进化一直是生物学领域的研究热点。植物通过分泌次生代谢物来影响植食性动物的取食,而植食性动物则可以通过各种机制来缓解植物次生代谢物对自身的影响。单宁酸是一种具有苦涩味的植物次生代谢物,至今无人研究单宁酸对动物味觉系统及调控动物食欲与取食行为的脑肠轴的作用。本实验是用捕捉自内蒙古草原并在室内进行配对繁殖的布氏田鼠做为研究对象,口腔连续(1d、5d、10d和20d)滴灌500μL不同浓度单宁酸溶液(0mg·mL-1、30mg·mL-1和60mg·mL-1,分别为对照组、低剂量组和高剂量组),测定布氏田鼠20d内的体重和日取食量的变化,用ELISA法测定布氏田鼠血清六种脑肠肽(五种为抑食激素,即胰多肽、肽YY、胃泌素调节素、胰高血糖样肽-1、胆囊收缩素;一种为促食激素,即胃饥饿素)水平的变化,用实时荧光定量PCR法(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测布氏田鼠舌组织味觉受体T2R38(Taste Receptor Family2members,T2R)、T2R106和α-味导素(α-gustducin;又为Guanine nucleotide binding protein alpha transducing3,Gnat3)mRNA的表达量,用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)观察舌组织前部、中部和后部T2R38、T2R106和GNAT3蛋白的表达,以确定单宁酸对布氏田鼠舌部味觉感受系统及食欲相关脑肠肽水平的影响,揭示动物味觉系统对单宁酸的感受方式,探讨单宁酸影响动物取食行为的味觉机制,为草食动物与植物次生化合物间的协同进化提供新的理论依据。研究结果如下:
  1、雌雄布氏田鼠口腔滴灌不同剂量TA溶液20d,隔天称量布氏田鼠的体重共11次,结果发现每个时间点各剂量组布氏田鼠的体重没有显著性差异(P>0.05),表明口腔滴灌一定剂量的TA溶液并不影响布氏田鼠的体重。
  2、口腔滴灌不同剂量TA溶液5d和10d后,低剂量组与高剂量组雌雄布氏田鼠的取食量均显著低于对照组(P<0.05);但处理20d后,各组布氏田鼠的取食量没有显著差异(P>0.05)。
  3、给雌雄布氏田鼠口腔滴灌不同剂量的TA溶液处理1d、5d、10d和20d后,低剂量组和高剂量组血清胰多肽、肽YY、胃泌素调节素、胰高血糖样肽-1和胆囊收缩素等抑食激素的水平,均显著高于对照组(P<0.05);而低剂量组与高剂量组血清中促食激素胃饥饿素的水平在不同剂量TA处理1d、5d和10d后,均显著低于对照组(P<0.05),但处理20d后则与对照组相比没有显著性差异(P>0.05)。
  4、RT-qPCR结果表明,布氏田鼠舌组织T2R38、T2R106和Gnat3mRNA的表达量,不同剂量TA处理1d、5d、10d和20d后,低剂量组和高剂量组的表达量均显著高于对照组(P<0.05),且高剂量组的表达量显著高于低剂量组(P<0.05)。
  5、免疫组化结果表明,布氏田鼠舌组织的前部和中部并不表达T2R38和T2R106,只在舌后部表达这两种基因,但GNAT3在舌组织的三个区域均有表达。不同剂量TA处理四个时间段后,低剂量组和高剂量组舌后部T2R38和T2R106的表达量均显著高于对照组(P<0.05),且高剂量组的表达量显著高于低剂量组(P<0.05);舌前、中、后部GNAT3的表达量均显著高于对照组(P<0.05),且高剂量组的表达量显著高于低剂量组(P<0.05)。
  上述结果提示,单宁酸在较短时间内能够抑制布氏田鼠的取食量,但是随着处理时间的增加,对布氏田鼠的取食量没有显著性影响。布氏田鼠舌部的两种苦味受体和α-味导素参与该动物对单宁酸苦涩味的感受;摄入单宁酸一定时间后,布氏田鼠促食欲脑肠肽分泌减少,而抑食欲脑肠肽分泌增加。这些变化可能通过摄食中枢影响布氏田鼠的取食。
[硕士论文] 张余广
水生生物学 东北林业大学 2018(学位年度)
摘要:2016年6月到2017年4月,利用无线电跟踪技术,对黑龙江泰湖国家湿地公园繁殖的白琵鹭进行定位、追踪和现场调查,获得不同时期(繁殖期、迁徙期、越冬期)白琵鹭栖息地生境数据。选择黑龙江泰湖国家湿地公园(繁殖期)、吉林月亮泡、山东烟台、山东乳山(迁徙期)和江苏高邮湖(越冬期)等五个栖息地进行研究;并利用SPSS(23)软件对不同时期栖息地植被密度、优势种植被高度、植被盖度、食物丰度、水深、水的透明度以及人为干扰距离等7个主要因子进行比较分析。
  白琵鹭迁徙停歇地的湿地类型以芦苇沼泽为主,也有水库、湖泊及河流的浅水区域。白琵鹭停歇点食物丰富,植被大多为芦苇、苔草生长比较茂盛的区域,植被优势种高度49.4~204.3cm,植被盖度50%以上。水体面积占停歇地面积的50%~100%,水质良好,水深10~30cm,透明度在10~30cm左右。白琵鹭栖息地人为干扰距离为90~300m,但人为干扰强度低。
  通过SPSS(23)软件进行栖息地生境的主成分分析,白琵鹭在繁殖期、迁徙期以及越冬期对于环境的要求略有不同。在繁殖地影响最大的为植被高度和食物丰度,主成分贡献率为49.892%;在停歇地主要影响因子为植被的种类、食物丰度和水的透明度,主成分贡献率为35.617%;在越冬地主要影响因子为人为干扰和食物丰度以及植被盖度,主成分贡献率为40.051%。在不同中途停歇地对于生境因子的要求大致相同,主要影响因子为食物丰度。对5个停歇地进行综合分析,繁殖地综合得分最高,为31.882%,是最适合白琵鹭的生境,其次是越冬地,为27.541%,其余3个停歇地的生境条件较差,为16.646%,说明白琵鹭选择生境条件最严格的是幼鸟生长发育地,其次是越冬地的选择,中途停歇地点的生境条件可以适当放宽。
  白琵鹭在停歇地停歇时间与植被盖度、食物丰度和优势种高度相关性最高,与人为干扰相关性较低。
[硕士论文] 葛宝庆
野生动植物保护与利用 东北林业大学 2018(学位年度)
摘要:本研究通过收集长白山北部林区5个地点的140份粪便样本,结合世界粮农组织(FAO)推荐的9个微卫星标记,对5个地理种群中野猪的遗传变异水平、遗传结构、以及影响地理种群间迁移率的环境因子进行了评估。获得的主要研究结果如下:
  本研究采用的9个微卫星位点均未出现明显的连锁现象,检测出等位基因数范围为6(SW857)~15(S0101)个,共检测到101个等位基因,且PIC值变化范围在0.625(SW857)~0.888(S0101),均大于0.5。因此,本研究采用的9个微卫星位点均为高度多态性位点,能反映野猪种群遗传现状;
  5个地理种群的平均等位基因数为6.978,平均有效等位基因数为4.368,私有等位基因数在1(天桥岭种群)~11(穆棱种群)个,平均观测杂合度为0.785,平均期望杂合度为0.734。5个种群的观测杂合度的差异并不大,从期望杂合度来说,遗传多样性从低到高依次为天桥岭种群、汪清种群、张广才岭南种群、穆棱种群和珲春种群。5个局域种群的9个微卫星位点中,共有6个位点偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.05);
  在适于微卫星分析的TPM模型和SMM模型的假设前提下,对野猪种群整体进行瓶颈效应检测。结果表明,Wilcoxon双尾检验的P值均大于0.05,各种群并未出现显著偏离突变-漂变平衡状况,种群近期未经历遗传瓶颈;
  5个地理种群之间的FST值在0.023~0.070之间,种群间遗传差异较小,但种群间的遗传分化显著(P<0.05)。AMOVA分析结果也表明,只有5%的变异来源于种群间,95%的变异来源于种群内。根据STRUCTURE的贝叶斯聚类分析结果发现,5个地理种群共分成2个遗传结构;
  使用贝叶斯法计算地理种群间迁移率表明,天桥岭种群整体呈现向外扩散的趋势,汪清种群与天桥岭种群之间的基因交流频繁。海拔、坡向、坡度和雪深4个环境因子中,坡向与迁入迁出呈现显著的相关性,野猪倾向于迁入东南坡的生境,这可能与野猪冬季生境选择以及季风方向有关。
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