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[博士论文] 何飞
中西医结合基础 福建中医药大学 2018(学位年度)
摘要:本文从以下几个方面进行论述:
  第一部分 清眩降压汤治疗新发1级高血压随机交叉对照试验
  目的:评估清眩降压汤治疗1级高血压的临床疗效。
  方法:采用随机交叉对照的临床试验评估。根据2010年中国高血压防治指南诊断标准,纳入新发高血病例80例,随机数字表法均分为两组,分别是A组和B组,分别予以第一阶段用清眩降压汤4周和一般生活方式干预4周,4周后,交叉转换为分别以一般生活方式和清眩降压汤干预4周,患者家庭上下午自测血压方式并填写血压记录和症状体征改变;入组、干预4周和第8周时,分别抽血离心,取血清1ml留待检测AngⅡ、ET-1、TNF-α、CRP、Smad3水平。
  结果:清眩降压汤能够显著降低新发1级高血压患者血压,用药四周后上午收缩压平均降低13mmHg,舒张压平均降低9.1mmHg;下午收缩压和舒张压平均下降6.2mmHg和4.5mmHg。随访4周,血压维持良好。生化结果:清眩降压汤对AngⅡ、ET-1的血清学水平未见显著干预作用;B组TNF-α水平获得显著降低,A组未见显著改变;A组患者CRP水平获得显著下降,B组未见显著改变,Smad3水平恰恰相反。未见严重不良反应。
  结论:清眩降压汤能够降低新发1级高血压患者收缩压和舒张压,停药后4周,血压维持良好;清眩降压汤对高血压炎症状态具有潜在的改善作用。
  第二部分 清眩降压汤对自发性高血压大鼠血压调节的药效作用机制
  目的:探讨清眩降压汤(QXJYD)对自发性高血压大鼠(SHR)血压的调节作用和对胸主动脉血管重构及TGF-β1/Smad信号转导通路活化的影响。
  方法:自发性高血压大鼠(SHR)随机分为清眩降压汤组(SHR-QXJYD)和对照组(SHR-control),并分别给予清眩降压汤和纯净水干预,另设Wistar-Kyoto为正常对照组(WKY),给予等体积纯净水干预,连续灌胃给药8周,每周监测大鼠收缩压、舒张压。实验结束后,麻醉后经腹主动脉取血分离血清,并分离和收集胸主动脉。①HE染色、光学显微镜结合Leica Q Win V3病理图像分析系统测定胸主动脉中膜厚度(media thickness,MT);②ELISA等生化试剂盒检测AngⅡ、ET-1的含量和RPA的活性水平;③采用IHC、Q-PCR和Western blot检测清眩降压汤对不同类型胶原蛋白(CollagenⅠ、CollagenⅢ)、PCNA和TGF-β信号通路活化的影响。
  结果:SHR大鼠在6周龄时血压已开始升高,与WKY空白对照组具有显著差异(P<0.05)。与SHR-control组比较,清眩降压汤组能够显著减缓SHR大鼠收缩压(SBP),舒张压(DBP)和平均动脉压(MBP)的升高,而对大鼠的体重没有显著的影响;与SHR-control组比较,清眩降压汤组能够显著降低SHR大鼠血清中AngⅡ、ET-1的含量和RPA的活性水平;与WKY组比较,SHR组大鼠胸主动脉中膜明显增厚(P<0.05),血管平滑肌细胞(VSMC)排列紊乱,单位面积细胞核数量明显增多,部分出现内膜损伤及外膜炎性细胞浸润现象;弹力膜排列紊乱、松散、厚薄不均甚至断裂。清眩降压汤能够显著改善胸主动脉中膜厚度、改善胸主动脉的病理变化。QXJYD能显著下调动脉血管平滑肌细胞中PCNA、CollagenⅠ、CollagenⅢ的表达,对胸主动脉平滑肌细胞TGF-β信号通路活化有显著的抑制作用。
  结论:QXJYD能够抑制SHR大鼠血压升高,对高血压引起的血管重构有一定的改善作用,其机制与QXJYD能够降低血清中AngⅡ、ET-1的含量和RPA的活性水平、抑制血管平滑肌细胞中PCNA、CollagenⅠ、CollagenⅢ的蛋白表达以及抑制胸主动脉平滑肌细胞TGF-β信号通路活化有关。
[硕士论文] 吴岱津
兽医 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是大部分心脑血管疾病的重要危险因素,动脉粥样硬化因理想的动物模型缺乏在一定程度上限制对其药物干预治疗和发病机制的研究,而兔子因其独有的特点使之成为研究动脉粥样硬化和高脂血症的最适合模型之一。据报道LDLR功能缺陷是引起高胆固醇血症及AS的主要原因之一,本研究运用CRISPR/Cas9基因编辑对新西兰大白兔基因组中与动脉粥样相关基因进行基因编辑,对低密度脂蛋白受体(low-density lipoprotein receptor,LDLR)的基因外显子上的主要结构域进行了敲除,从而破坏了其功能。
  研究针对LDLR基因的第二外显子和第七外显子的启动子分别构建了两对CRISPR/Cas9表达质粒,通过加帽(ARCA)和加尾修饰后的sgRNA和Cas9mRNA配对用来显微注射制备转基因兔。本研究一共超排34只供体兔子,获得了804枚受精卵。其中注射LDLR靶位点Cas9mRNA和sgRNA第二外显子(E2)的胚胎数目为116枚,移植胚胎110枚,胚胎存活率94.83%;新西兰兔受体移植6只,兔怀孕顺利分娩2只,怀孕率33.33%;共出生4只仔兔,全部死亡,成活率为0%。注射Cas9mRNA和sgRNA第七外显子(E7)的胚胎数目为209枚,移植胚胎202枚,胚胎存活率96.65%;新西兰兔受体移植12只,兔怀孕顺利分娩6只,怀孕率50%;共出生14只仔兔,成活仔兔11只,成活率为78.5%。同时在E2和E7位点上注射Cas9mRNA和sgRNA的胚胎数目为442枚,移植胚胎373枚,胚胎存活率84.39%;新西兰兔受体移植19只,兔怀孕顺利分娩11只,怀孕率57.90%;共出生19只仔兔,成活仔兔8只,成活率为42.11%。在饲养过程中因为温度、疾病等因素,活到成年并继续血脂检测实验转基因兔16只。
  本研究获得的16只仔兔基因组PCR产物测序结果显示LDLR的2个位点均出现不同程度的突变,T载体克隆检测结果表明第七外显子突变(E7)共获得的8只仔兔全部双等位基因突变,双等位基因突变率为100%.其中3只LDLR基因突变兔两条染色体突变状况完全相同,确定为纯合子,纯合子率为37.5%。送检检测结果表明第二外显子(E2)和第七外显子(E7)2个靶位点共同突变的活转基因兔8只,1只未突变,突变率为87.50%,剩余7只LDLR基因突变兔均为双等位基因突变。
  LDLR敲除兔子分别在第5周,10周,15周抽血,使用全自动生化分析仪检测兔血清CHOL、TG、LDL、HDL水平,通过SPSS软件数据分析发现CHOL含量突变组是正常组的17倍,LDL含量突变组是正常组的12倍,TG含量突变组是正常组的3倍,HDL突变组是正常组的2倍,CHOL和LDL2个指标与正常组比较P<0.01差异极显著,TG和HDL与正常组比较P<0.05差异显著,表明利用CRISPR/Cas9系统可成功构建高血脂模型。
  在表型分析血脂脂蛋白的分布情况,结果显示与野生型兔相比LDLR-/-兔Beta区染色较深,说明该样本中富集低密度脂蛋白。低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)主要成分是血清载脂蛋白B,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)中主要成分是载脂蛋白AI,Western bloting实验结果显示LDLR-/-apoB的含量远大于野生型。LDLR-/-兔血脂蛋白中apoAl的含量比野生型低,其两者的比值可反映出致动脉粥样硬化和抗动脉粥样硬化脂质颗粒的平衡。ApoB和ApoAⅠ含量从侧面也体现了LDL-C和HDL-C的水平。
  苏丹红Ⅳ脂质沉积图片软件测量正常组兔子整条血管面积24812,斑块面积413,斑块占血管面积比例1.66%。测量模型组兔子整条血管面积23701,斑块面积15604,斑块占血管面积比例65.83%。可见动脉粥样硬化病变区有大量红染脂滴,并且主要集中在增生的内膜,结果显示模型组LDLR-/-斑块形成明显。
  主动脉切片结果表明LDLR-/-兔的主动脉出现管腔狭窄,管腔内膜增厚,表面覆盖脂质斑块和大量的泡沫细胞,发生血管壁增厚现象。测量结果取均值得出突变兔血管梗塞比例73.48%。正常兔血管梗塞比例37.65%。研究表明模型突变兔斑块内阳性细胞积分光密度(IOD)值28498.0098及Area面积242558,计算得出MOD值0.1174894。测量正常变兔斑块内阳性细胞积分光密度(IOD)值6824.50049及Area面积217538,计算得出MOD值0.0314,突变组的巨噬细胞阳性率明显大于正常组(P<0.01)。
  综上所述,本课题研究利用Cas9基因编辑技术和sgRNA显微胞质注射兔受精卵,成功获得典型动脉粥样LDLR基因敲除兔。目前还未有获得LDLR基因敲除兔个体的相关报道。通过各个表型分析数据表明本研究制备的兔模型可产生明显的动脉粥样病理变化。同时本课题为以后血栓疾病的治疗和研究打下基础。
[硕士论文] 冯燚
兽医 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:刚地弓形虫是一种原生动物寄生虫,也是常见的一种人畜共患病。根据流行病学调查我们普遍认为只感染温血动物。但是,从远离猫粪污染的草食动物和鸟类的流行病学调查也显示出高感染率。实验室前期研究显示,媒介节肢动物蜱可作为弓形虫在自然界的保存宿主。为全面了解自然条件下,蜱体感染弓形虫的情况,本研究开展不同地点、不同宿主来源和不同种类的蜱体携带弓形虫的分子检测,并对阳性样本中的弓形虫基因进行分型,以期为弓形虫流行病学研究提供资料。
  (1)本研究对1275份蜱DNA样品进行定量PCR分子检测,共发现88份为阳性样本,阳性率为6.90%。其中检测的吸血蜱样本总数为848份,阳性样本数为55份,阳性率为6.49%;检测的未吸血蜱样本总数为427份,阳性样本数为33份,阳性率为7.73%。
  (2)在吸血蜱中,成蜱携带弓形虫的阳性率为7.69%,若蜱携带弓形虫的阳性率为1.90%;幼蜱携带弓形虫的阳性率为0;在未吸血蜱中,成蜱携带弓形虫的阳性率为7.96%,若蜱携带弓形虫的阳性率为0;幼蜱携带弓形虫的阳性率为14.29%。
  (3)不同蜱种的阳性率差异并不大。在吸血蜱中,长角血蜱携带弓形虫的阳性率为8.05%;血红扇头蜱携带弓形虫的阳性率为7.50%;镰形扇头蜱携带弓形虫的阳性率为12.12%;微小牛蜱携带弓形虫的阳性率为0;草原革蜱携带弓形虫的阳性率为10%;褐黄血蜱携带弓形虫的阳性率为3.07%;血蜱属携带弓形虫的阳性率为20%;扇头属携带弓形虫的阳性率为5.22%以及未鉴定蜱种携带弓形虫的阳性率为0。在未吸血蜱中,长角血蜱携带弓形虫的阳性率为7.67%;血红扇头蜱携带弓形虫的阳性率为8.7%;镰形扇头蜱携带弓形虫的阳性率为8.33%;扇头属携带弓形虫的阳性率为6.25%以及未鉴定蜱种携带弓形虫的阳性率为0。
  (4)对所有通过定量PCR检测显示出携带弓形虫的阳性样本再用巢式PCR方法进行检测,均成功扩增出目的条带,将目的条带进行胶回收并送测序,测序所得结果与数据库标准序列进行比对,与弓形虫529-bp重复序列片段相似程度高达99%以上。说明所有阳性样本均携带弓形虫。
  (5)采用巢式PCR方法对所有使用定量PCR方法检测出携带弓形虫的阳性样本进行基因分型,结果显示所有阳性样本均为弓形虫ME49虫株,即弓形虫Ⅱ型弱毒株。
  (6)构建吸血蜱阳性样本与未吸血蜱阳性样本数据进化树,并对数据进行卡方检验分析其显著差异性。发现吸血蜱与未吸血蜱之间的差异不显著。
  综上所述,本研究发现自然界蜱感染弓形虫较为普遍,蜱总体感染阳性率为6.90%;在检测的6种硬蜱中,5种蜱均感染,不同蜱种的阳性率无显著差异;在蜱的三个不同发育阶段,相较而言成蜱感染率较高,吸血蜱与未吸血蜱之间的差异不显著。基因分型结果显示,所有阳性样本均为弓形虫Ⅱ型。根据实验结果我们可以发现蜱携带弓形虫在流行病学中具有重要意义,人类弓形虫感染需要高度重视。
[硕士论文] 滕东伶
内科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:急性胰腺炎(Acute pancreatitis,AP)是多种病因导致胰酶在胰腺内被激活后引起胰腺组织自身消化、水肿、出血甚至坏死的炎症反应。临床上重症急性胰腺炎病情严重,预后较差。本研究探讨了血清CA199和铁蛋白的变化在急性胰腺炎的病因诊断和病情严重程度评估中的价值。研究内容分为两部分:
  第一部分 血清CA199升高在急性胰腺炎中的临床意义
  目的:糖链抗原199(Carbohydrate antigen19-9,CA199)已被认为是胰腺癌(Pancreatic cancer,PC)的肿瘤标记物之一,近年来发现其在消化系统良性病变中亦可升高,然而CA199在急性胰腺炎(Acute pancreatitis,AP)中是否升高尚无专题报道。本文将主要研究急性胰腺炎患者血清CA199水平变化及其相关临床意义。
  方法:回顾性分析扬州大学附属医院2006年1月至2015年12月急性胰腺炎患者血清CA199水平,观察其与AP临床病因、严重程度及胰腺癌发病率等关系。
  结果:1609例AP患者中693例检测了血清CA199,其中CA199升高者(>37U/ml)186例(26.8%)。与CA199水平正常的患者相比,CA199升高患者年龄较大(平均年龄62.7岁vs54.8岁,P<0.001),胆源性胰腺炎比例较高(53.8%vs32.9%,P<0.001)。CA199水平与AP疾病严重程度不相关。另外,血清CA199水平与血清丙氨酸转氨酶,天冬氨酸转氨酶,谷氨酰转肽酶,碱性磷酸酶和肌酐水平呈正相关。经分层发现,CA199小于37U/ml、37-100U/ml、100-200U/ml、大于200U/ml的胰腺癌比例分别为0.4%、0%、5.9%和15.8%,CA199水平越高,急性胰腺炎合并胰腺癌风险越大(P<0.001)。
  结论:CA199可在AP中升高,其中胆源性胰腺炎较为常见。CA199显著升高的AP患者,胰腺炎伴发胰腺癌的发病率升高,建议在AP患者入院期间常规监测血清CA199水平。
  第二部分 血清铁蛋白升高在急性胰腺炎中的临床意义
  目的:血清铁蛋白(Serum ferritin,SF)作为全身炎性反应的一种急性时相反应蛋白,可反映体内氧化应激及炎症反应的程度。本研究旨在评估血清铁蛋白水平对急性胰腺炎(AP)严重程度的相关性。
  方法:回顾性分析了扬州大学附属医院2013年1月至2016年12月连续住院的140例急性胰腺炎患者血清铁蛋白水平,观察其与AP临床病因、严重程度及其他血清学指标的关系,ROC曲线分析确定升高的SF水平是否能够预测持续性器官功能衰竭的发生。
  结果:140例检测血清铁蛋白的AP患者中,轻度、中度、重度急性胰腺炎分别为103例(73.9%)、30例(21.8%)、7例(4.3%),SF水平正常者79例,SF水平升高者61例。SF水平与AP疾病病因不相关,但与SF水平正常的患者相比,SF升高患者SAP比例明显升高(8.2%vs2.5%),SIRS比例偏多(42.6%vs25.3%)。并且,血清铁蛋白浓度和AP严重程度呈正相关。血清铁蛋白在预测持续性器官衰竭方面的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)为0.815(95%CI0.663-0.967),敏感度为0.714,特异度为0.91。
  结论:血清铁蛋白浓度与急性胰腺炎严重程度呈正相关,且血清铁蛋白的定量评估可预测急性胰腺炎患者的持续性器官衰竭。血清铁蛋白可能是一项潜在的预测AP严重程度的生化指标。
[博士论文] 朱业
中西医结合临床 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:本课题共分三大部分,分别讨论以下问题:1.VSELs的体外分离、培养、扩增和优化分选及生物学特性鉴定;2.建立适宜的VSELs细胞向心脏起搏样细胞定向诱导分化体系、探索HCN基因调控心脏起搏样细胞发生的机制及关键信号通路;3.rhG-CSF动员联合麝香保心丸治疗心肌梗死的实验研究。
  第一部分 猪骨髓极小胚胎样干细胞的分离、培养及鉴定
  目的:
  建立猪骨髓极小胚胎样干细胞(very small embryonic-like stem cells,VSELs)的体外分离、纯化鉴定体系,探索优化分选VSELs的流程,明确VSELs的生物学特性。
  方法:
  获取猪骨髓后,采用红细胞裂解法从猪骨髓中分离单个核细胞,运用相关特异性抗体CD45,Lin及CXCR4标记,使用免疫磁珠分选器及流式细胞仪分选获得VSELs,将乳猪成肌细胞作为饲养层培养,使用光学显微镜及透射电镜观察猪骨髓VSELs的形态特征、增殖情况和超微结构,并采用免疫荧光染色和碱性磷酸酶染色的方法鉴定干细胞标志的表达。
  结果:
  采用免疫磁珠分选器及流式细胞仪分选的方法,可从猪骨髓中分离到贴壁生长的细胞,与骨髓间充质干细胞相比,这些细胞体积小、形态均一,不易扩增,且表达多潜能抗原标志SSEA-1、Oct-4、Nanog和Sox-2,同时碱性磷酸酶染色阳性。VSELs呈核大胞浆少特点,胞核中可见部分细胞器结构,呈现明显幼稚细胞特点。定量PCR及凝胶电泳结果显示VSELs细胞高表达CD133、SOX-2、OCT-4、NANOG等干细胞特异性基因。
  结论:
  采用免疫磁珠分选器及流式细胞仪分选技术可以从猪骨髓中分离到表达多潜能干细胞标志的VSELs。
  第二部分 基于HCN转染VSELs构建生物起搏信号通路筛选诱导剂研究
  目的:
  建立适宜的VSELs细胞向心脏起搏样细胞定向诱导分化体系、探索HCN基因调控心脏起搏样细胞发生的机制及关键信号通路。
  方法:
  ①参照MSCs的诱导分化体系,将纯化的P2代VSELs细胞接种于铺有基质胶的24孔板中用成神经细胞诱导培养液(1640+体积分数为10%胎牛血清+RA/IBMX)、成脂细胞诱导培养液(体积分数为10%胎牛血清的1640培养基+0.5μmol/L地塞米松+10mg/L胰岛素+0.5mmol/LIBMX+50mol/L吲哚美辛)、心肌细胞诱导液(10μmol/L5-Aza+无血清基础培养基)替换各诱导孔的VSELs细胞培养液。每隔24h仔细观察添加诱导剂后细胞的形态变化;②用胰酶将处于对数生长期的P2代VSELs细胞制成细胞悬液,在裸鼠的右侧腋窝皮下、腹腔各注射200μl细胞悬液,注射细胞后每日观察裸鼠的生长、饮食、精神活动等状况;③HCN基因慢病毒质粒载体转染及转染后诱导分化,构建MSCs、VSELs诱导分化过程关键基因的信号通路。慢病毒载体构建成功后,提取质粒备用,将传代后的MSCs、VSEL接种于24孔板,细胞增殖至每孔面积70%时,按照Fugen转染体系分别转染HCN1、2、4基因,转染后添加基础培养基正常培养,分别于转染后12h、24h、48h观察绿色荧光,计数转染效率;④全细胞膜片钳记录稳定转染HCN阳性VSELs起搏离子通道电流:将转染阳性的MSCs、VSELs细胞用0.25%胰酶消化后,加入细胞外液。在光镜和荧光显微镜下选择带有绿色荧光的单个干细胞进行实验,用微操纵器将玻璃微电极缓慢靠近细胞,将玻璃微电极轻轻压于细胞中央后轻轻给予玻璃微电极负压吸引,等待电极尖端与细胞膜表面形成1GΩ以上的高阻封接,补偿电极电容,给玻璃微电极内轻施脉冲式负压进行破膜,使细胞与电极内液直接相通而与细胞外液绝缘,补偿细胞膜电容及串联电阻,由此构建全细胞记录模式记录离子流。
  结果:
  ①通过对VSELs体外分化能力鉴定发现,VSELs诱导神经元样细胞甲苯胺蓝染色鉴定阳性;VSELs诱导脂肪样细胞油红染色阳性;VSELs诱导心肌样细胞免疫荧光结果显示心肌样细胞特异性蛋白阳性,由此证实了VSELs具有多向分化潜能;②VSELs裸鼠成瘤实验发现注射VSELs的裸鼠的生长、饮食、精神活动等状况均良好,皮下注射位置未见明显肿瘤包块形成,腹腔未触及肿块形成。连续观察1月后处死裸鼠,剥离皮肤及腹腔内组织,在注射位置均未分离得到肿瘤组织;③HCN基因慢病毒质粒载体可成功转入MSCs、VSEL细胞中,且48h时荧光信号最强;④HCN转染后MSC及VSELs细胞均可检测到典型电流信号,不同亚型HCN基因转染后膜电流强度不同,相同HCN基因转染MSC及VSELs所得电流强度也存在差别。
  结论:
  我们将所培养的VSELs诱导分化为神经元样细胞、心肌样细胞和脂肪样细胞确立了其具有三胚层细胞分化的特性,不具有恶性增殖成瘤性能。将HCN基因慢病毒质粒载体转染至VSELs,建立了VSELs诱导分化为心脏起搏样细胞定向诱导分化体系,探索了HCN基因调控心脏起搏样细胞发生的机制及关键信号通路。
  第三部分 rhG-CSF动员联合麝香保心丸治疗心肌梗死的实验研究
  目的:
  研究麝香保心丸联合重组人粒细胞集落刺激因子(recombinat human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)动员基础上对急性心肌梗死兔的治疗作用。
  方法:
  以普通健康大耳兔为研究对象,全麻下开胸结扎冠状动脉左前降支近段建立心肌梗死模型。动物模型分为对照组(Ⅰ组)、rhG-CSF动员组(Ⅱ组)、麝香保心丸喂养组(Ⅲ组)、rhG-CSF动员与麝香保心丸联合喂养组(Ⅳ组)。观察各组动物治疗前后一般情况,测定各组动物治疗前后心功能并于6周后取心脏组织作相关病理检查。
  结果:
  与Ⅰ组相比,其余三组动物治疗后一般情况均改善,左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)明显增加(P<0.05),左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic dimension,LVEDd)明显缩小,室壁运动显著增强;心肌梗死面积明显缩小(P<0.05),梗死区毛细血管数目显著增多(P<0.05)。Ⅳ组与Ⅱ组相比,LVEF进一步增加(P<0.05),LVEDd缩小无明显差异(P>0.05),左室后壁运动增强。毛细血管数目显著增多(P<0.05),心肌梗死面积变化无统计学差异(P>0.05)。
  结论:
  麝香保心丸、rhG-CSF动员以及在此基础上加用麝香保心丸喂养均可改善急性心肌梗死兔的一般情况,改善心功能,缩小心肌梗死面积,促进血管增生,而rhG-CSF动员联合麝香保心丸干预后心功能改善及血管增生更为明显。
[硕士论文] 陆志峰
内科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:近期流行病学调查显示我国成人2型糖尿病(T2DM)患病率10.9%,随病程延长,50%T2DM患者死于大血管病变如心肌梗死、脑梗死等,严重影响患者生活质量,因此早期防治T2DM大血管病变有重要意义。研究表明调节性T细胞(Tregs)与免疫相关疾病有关,T2DM大血管病变发病与免疫有关,而T2DM大血管病变与Tregs相关性文献较少,研究其作用机制对T2DM大血管病变防治有意义。
  目的:
  本研究通过分析单纯T2DM患者与T2DM大血管病变患者外周血CD4+CD25+Tregs分布特征及临床资料,探讨T2DM大血管病变与外周血CD4+CD25+Tregs相关性。分析CD4+CD25+Tregs在T2DM大血管病变早期防治中的临床价值,探讨T2DM大血管病变防治新策略和方法。
  方法:
  选取扬州大学临床医学院(苏北人民医院)内分泌科2016年10月-2017年8月期间收住入院T2DM患者,根据患者既往史、肿瘤指标、眼底检查、自身抗体检测、心脏彩超、影像学检测等,排除可能影响CD4+CD25+Tregs的疾病如糖尿病视网膜病变、自身免疫性疾病、血液病、肿瘤疾病等;选择44例T2DM患者,通过测量颈动脉内膜厚度来判断是否合并大血管病变,分成T2DM无并发症组23例(其中男15例,女8例,A组)和T2DM大血管病变组21例(其中男15例,女6例,B组)。
  取患者空腹外周血通过混匀、孵育、离心等处理采用美国BD流式细胞仪检测CD4+CD25+Tregs百分比;检测两组患者空腹血糖(FPG)、胰岛素值(FINS)、高敏感C-反应蛋白(hs-CRP)、血沉(ESR)、尿微量白蛋白、糖化血红蛋白(HbA1c)等指标,计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),并对相关指标进行对比分析。
  结果:
  1、两组间一般临床资料单因素分析
  A、B两组临床资料比较,病程、尿微量白蛋白为非正态分布,采用四分位区间表示,其余指标为正态分布,采用“(x)±s”表示。然后采用独立样本T检验分析得出,两组数据比较病程、FPG、年龄、体重指数(BMI)、HbA1c、ESR、尿微量白蛋白差异无统计学意义(P≥0.05);但B组与A组比较CD4+CD25+Tregs百分比降低,HbA1c、HOMA-IR、FINS升高,差异有统计学意义(P<0.05)。
  2、Tregs与各因素相关性分析结果
  CD4+CD25+Tregs百分比与各因素采用Spearman相关性分析结果:与BMI(r=-0.071,P=0.649)、HbA1c(r=-0.099,P=0.522)、ESR(r=0.082,P=0.596)、hs-CRP(r=-0.265,P=0.082)、FINS(r=-0.448,P=0.002)、FPG(r=-0.022,P=0.887)、HOMA-IR(r=-0.344,P=0.022);提示CD4+CD25+Tregs百分比与BMI、HbA1c、hs-CRP、FINS、FPG、HOMA-IR具有负向线性关系,其中与FINS、HOMA-IR差异有统计学意义(P<0.05),与其他指标比较差异无统计学意义(P≥0.05)。
  3、T2DM大血管病变的危险因素回归分析
  选取有统计学意义的指标进行Logistic回归分析表明,CD4+CD25+Tregs百分比、hs-CRP、HOMA-IR与T2DM大血管病变具有相关性,发现CD4+CD25+Tregs百分比差异有统计学意义(P<0.05),二者呈线性回归关系;而hs-CRP及HOMA-IR(P≥0.05)差异无统计学意义。
  结论:
  T2DM大血管病变组与T2DM组比较外周血CD4+CD25+Tregs降低,CD4+CD25+Tregs百分比降低提示T2DM发生大血管并发症的风险增高。
[硕士论文] 徐艳
内科学(肾脏内科) 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:研究klotho基因多态性与维持性血液透析患者发生重度继发性甲状旁腺功能亢进相关性以及甲状旁腺切除术对患者钙磷代谢的影响。
  方法:研究组(B组)为167名长期维持性血液透析合并钙磷代谢紊乱者,其中87名患者因重度继发性甲状旁腺功能亢进已行甲状旁腺切除术为B1组,另外80名患者轻-中度继发性甲状旁腺功能亢进仅予内科保守治疗为B2组,对照组(A组)为60名同期健康体检者,分别采集A、B两组患者两管静脉血,其中一管血样本提取DNA并PCR扩增以一代测序法检测klotho基因G-395A位点单核苷酸多态性,另一管血样本予高速离心后取上层血清液用于ELISA法检测klotho蛋白、FGF23水平并采集患者同期各临床指标,分别比较A、B两组患者基因型及等位基因频率是否存在差异,同时比较行甲状旁腺切除术对维持性血液透继发性甲状旁腺功能亢进患者钙磷代谢及Klotho蛋白、FGF-23表达的影响。
  结果:①所选取研究对象klotho基因G395A多态性位点分别表现为GG、GA、AA基因型,且基因分布符合Hardy-Weinberg平衡,具有一定的群体代表性。②A组和B组患者klotho基因G395A基因型及等位基因频率比较有差异(P<0.05),B组(维持性透析合并钙磷代谢紊乱组)其GA+AA基因型频率及A等位基因频率均高于A组(健康对照组)(P<0.05)。③B1组(重度继发性甲状旁腺功能亢进组)与B2组(轻-中度继发性甲状旁腺功能亢进组)患者klotho基因G395A基因型频率比较无明显差异(P>0.05),B1组A等位基因频率较B2组高(P<0.05)。④采用二元logistics回归分析发现携带A等位基因与早期发生重度继发性甲状旁腺功能亢进具有相关性(OR=0.462,95%CI0.213-0.922,P=0.029)。⑤对所选研究对象进行pearson相关分析显示:FGF23与血磷、钙磷乘积及PTH水平呈正相关(r=0.314,P≈0.000;r=0.292,P≈0.000;r=0.389,P≈0.000);klotho蛋白水平与血磷、钙磷乘积及PTH水平呈负相关(r=-0.447,P≈0.000;r=-0.389,P≈0.000;r=-0.355,P≈0.000)。⑥比较手术治疗及非手术治疗对B组患者的影响,B1组(手术组)血磷、钙磷乘积、PTH、FGF23水平均较B2组(非手术组)下降(P<0.05),B1组血钙、血红蛋白、白蛋白均较B2组上升(P<0.05),B1组与B2组klotho蛋白无明显差异(P>0.05)。
  结论:①在研究人群中存在Klotho基因G-395A单核苷酸多态性。②klotho基因G-395A位点其等位基因A可能为ESRD及MHD患者并发重度SHPT的遗传易感基因。③klotho蛋白可能是MHD患者并发SHPT的保护性因素,FGF23可能是MHD患者并发SHPT的危险因素④甲状旁腺切除术可明显改善MHD并发重度SHPT患者钙磷代谢紊乱,对klotho蛋白表达无明显影响,可降低FGF23水平,可能改善MHD患者预后。
[硕士论文] 陈春燕
临床医学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:胃息肉近年来发病率上升,胃息肉是胃癌癌前病变,胃息肉具体发病危险因素尚不清楚,国内外文献报导与饮食和生活习惯相关,扬州地区的胃息肉发生与饮食、生活习惯的相关性尚无研究报导。
  目的:
  通过采用病例对照研究方法对苏北人民医院诊断为胃息肉患者饮食和生活习惯相关资料的分析,探讨胃息肉患者的饮食习惯、生活习惯对胃息肉形成的影响。总结发现胃息肉的相关危险因素,提高临床医师和广大人群对胃息肉的认识,达到减少胃息肉发生及预防胃恶性肿瘤的目的。
  方法:
  随机选取2014年9月至2015年8月在苏北人民医院电子胃镜室完成电子胃镜检查并诊断为胃息肉患者153例为研究对象(不包括遗传性息肉病、P-J综合征等特殊类型胃息肉)同时选择体检电子胃镜检查,无胃息肉,并与病例组性别、年龄(相差≤3岁)相匹配者作为病例对照组。通过问卷调查分析研究胃息肉发病人群的统计学特征、上消化道内镜下直观表现及两组的生活习惯、饮食习惯。数据经Excell建库,SPSS16.0进行数据统计分析,寻找影响胃息肉发生发展的相关危险因素,并与国内外资料进行比较。
  结果:
  1.本研究共收集153例胃息肉患者,女性比例高于男性,男∶女=1∶1.94,平均年龄为55.48±11.85岁,40-69岁之间为胃息肉高发年龄。近6年中胃息肉的检出率逐年升高。
  2.305枚胃息肉中,有蒂153例(50.16%),无蒂48例(15.74%),亚蒂104例(34.10%)。胃息肉基底部在镜下以有蒂多见。直径<2.0 cm者292例(95.74%),直径≥2.0cm者13例(4.26%),直径<2.0 cm者数量明显高于直径≥2.0 cm者。直径≥2.0 cm的胃息肉多发于胃窦部。胃息肉分布贲门29例(9.51%),胃底62例(20.33%),胃体114例(37.38%),胃角5例(1.64%),胃窦95例(31.15%)。胃窦和胃体是胃息肉的主要发生部位,占胃息肉总数的一半以上。单发100例(65.36%)。病理类型增生性息肉最多见,占74.56%。腺瘤性息肉7例,占6.14%。多发性胃息肉53例,占34.64%。
  3.排除年龄、性别的相关影响,家族史是胃息肉发生的相关危险因素(x2=22.643,p<0.05),BMI在胃息肉组与对照组之间无明显统计学差别(p>0.05)。饮食习惯中,稻类、面粉、白肉、奶制品、动物内脏在胃息肉组与对照组之间无明显统计学差别(p>0.05);差别有统计学意义的因素包括:红肉(p<0.05),新鲜蔬菜(p<0.05),水果(p<0.005),豆制品(p<0.05),蛋类(p<0.05)。
  4.排除年龄、性别的相关影响,生活习惯中,盐渍食品、饮酒、茶水在胃息肉组与对照组之间无明显统计学差异(p>0.05);差别有统计学意义的因素包括辣椒(p<0.05),食用油(p<0.05),焦虑(p<0.05),抽烟(p<0.05)。
  5.对以上有统计学意义的因素(p<0.05)包括家族史、饮食习惯(红肉、新鲜蔬菜、水果、豆制品、鸡蛋)、生活习惯(辣椒、食品油、焦虑、抽烟)进行多因素Logistic回归分析。排除混杂因素,得出危险因素:家族史OR值1.571(1.023~2.414),红肉OR值1.276(1.034~1.573),食用油OR值1.276(1.027~1.587),焦虑OR值1.266(1.044~1.537),蔬菜OR值0.112(0.042~0.300),蛋类OR值0.283(0.159~0.507)。
  与国内外资料相比,本资料显示扬州地区胃息肉发生与家族史、红肉、食用油、焦虑有明显相关性。由于缺少既往病例对照资料,本研究未能反应近年来饮食、生活习惯改变对胃息肉发生的影响。
  结论:
  扬州地区胃息肉患者中老年女性人群多发,病理类型以增生性息肉最多见。内镜下胃息肉好发于胃窦部和胃体部;胃息肉以单发、有蒂、小息肉多见。排除混杂因素的影响,与胃息肉发生的相关危险因素分别为消化道疾病家族史、红肉、食用油、焦虑。蛋类和新鲜蔬菜可降低胃息肉的发生率。
[硕士论文] 许超
影像医学与核医学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:利用磁共振成像技术结合基于体素的形态学(Voxel-based morphology,VBM)的分析方法探索2型糖尿病(type2diabetes mellitus,T2DM)患者不伴CMBs灶(Cerebral Microbleeds)的脑灰质微结构及核团形态学的变化及其与2型糖尿病认知功能及糖化血红蛋白值(HbA1c%)的关系进行研究。
  资料与方法:收集2016年7月至2017年7月在扬州大学附属医院门诊、住院及体检病人各32例,对32例2型糖尿病患者和32例年龄匹配的健康对照组进行常规MR检查、ESWAN、实验室检查及神经认知量表评估,检查过程中排除2型糖尿病组3例患者,原因为患者头动幅度过大、患者颞部有蛛网膜下腔囊肿及患者右枕叶微出血灶,最终对29例2型糖尿病患者和32例年龄匹配的健康对照组并且都不伴CMBs灶(Cerebral Microbleeds)进行高分辨率3D-BRAVO-T1加权的结构MRI扫描,数据后处理采用基于MATLAB2013a平台的SPM8(Statistical parametric mapping)中的VBM(Voxel-based morphology)计算全脑体素的脑总体积(TCV)、脑白质体积(WMV)、灰质体积(GMV)、脑脊液体积(CSFV)值并进行组间统计分析,图表显示显著差异脑区的脑灰质(GMV)区域及数值,选取灰质核团(双侧尾状核、丘脑及豆状核)与糖化血红蛋白值(HbA1c%)及神经认知量表做相关性分析。
  结果:本研究发现蒙特利尔认知评估、简易精神状态检查表、连线实验A、连线实验B、复杂图形复制测试及复杂图形回忆测试神经认知功能测试能力在不合并CMBs(Cerebral Microbleeds)的T2DM患者中较正常对照组下降,并且有统计学意义。基于VBM形态学分析,不伴CMBs(Cerebral Microbleeds)的T2DM患者与正常健康对照组脑总体积(TCV)、脑白质体积(WMV)、灰质体积(GMV)及脑脊液体积(CSFV)无明显差异,但2型糖尿病组患者脑总、灰白质体积均低于正常对照组。脑灰质及核团体积在双侧颞中回、海马、右侧楔叶、舌回、左侧尾状头、豆状壳核、双侧丘脑及部分灰质体积显著减少(P<0.05,FDR校正),此外,双侧丘脑、尾状核及豆状壳核的灰质体积(GMV)与HbA1c水平呈负相关改变;并且双侧丘脑灰质体积(GMV)与连线实验A(TMT-A)所花费时间也呈负相关改变。
  结论:1.不合并CMBs的T2DM的中老年人在无临床症状早期,脑体积、脑灰质及核团结构早已经发生了改变;
  2.不合并CMBs的T2DM患者具有广泛的灰质及核团体积结构萎缩,表现在认知、视觉中枢等相关区域;其双侧丘脑、尾状核及豆状壳核的灰质体积(GMV)萎缩与长期的血糖控制密切相关;
  3.形态学分析是检测不伴CMBs的T2DM灰质及核团微结构异常最敏感的方法之一;
  4.T2DM患者伴丘脑平均灰质体积(GMV)减少需要消耗更多的时间在连线实验A(TMT-A)及复杂图形回忆测试(CFT-Recall)测试上。
[硕士论文] 马龙
内科学(心血管) 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  随着医疗水平的提高,经皮冠脉介入治疗(PCI)已广泛应用于临床,冠脉再通时间缩短,有效地降低急性心肌梗死(AMI)死亡率,PCI术后康复治疗至关重要,但临床尚未普及。现研究认为,Ⅰ期心脏康复治疗可以改善AMI介入治疗术后患者的预后,提高患者生活质量。选取AMI行PCI术后患者,通过指导其Ⅰ期运动康复,观察其血脂水平、心功能、心血管不良事件以及术后6个月时患者的左室射血分数(LVEF),最终分析评定Ⅰ期运动康复治疗对急性心肌梗死PCI术后患者临床疗效和预后影响,指导患者更好地回归社会。
  方法:
  选择2016年10月至2017年9月因AMI在江苏省苏北人民医院心血管内科住院且行急诊PCI患者共259例。对于符合入组标准的患者,按照随机数字表,随机分成两组:1、常规术后治疗+常规护理+个性化运动组(试验组);2、常规术后治疗+常规护理组(对照组),记录所有入组患者临床资料。分别于PCI术后1个月、3个月,6个月对两组患者进行专科门诊随访复查,同时电话随访记录各组患者不良事件发作情况,并在出院前、PCI术后1个月及6个月时对两组所有在访患者进行6分钟步行试验及超声心动图检查,对结果进行统计分析。
  结果:
  1.两组患者基础资料的比较:
  入选的259例患者明确诊断为AMI,其中男212例;女47例,分别占总数81.9%和18.1%;STEMI患者192例,NSTEMI患者67例;年龄范围为26-80岁,平均60.75±10.97岁。其中试验组136例,对照组123例,两组患者在性别、吸烟史、饮酒史、高血压、糖尿病、血脂异常等方面无统计学差异。
  2.两组患者干预前cTnⅠ、NT-ProBNP、hs-CRP值比较
  两组患者干预前后血浆cTnⅠ、NT-ProBNP、hs-CRP水平无统计学差异。
  3.两组干预前后血脂水平比较:
  治疗前两组患者血脂指标无明显差异(P>0.05);治疗后两组患者的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平降低,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平升高,其中试验组患者各项指标变化更明显(P<0.05)。表明通过长时间运动康复治疗可以改善患者血脂水平,延缓冠状动脉粥样硬化发生。
  4.两组患者术中病变血管、放置支架数及术中并发症情况
  两组患者术中病变血管、放置支架数及术中并发症等情况无统计学差异。两组患者均达到完全血运重建,因此统计无差异。
  5.超声心动图结果与6分钟步行试验结果比较:
  入院24h内行超声心动图检查示:试验组、对照组各组之间的左心室射血分数(LVEF)及左心室舒张末期直径(LVDD)等未见明显统计学差异(P>0.05)。出院后1个月、6个月,复查超声心动图,结果示:在患者的LVEF及LVDD方面,试验组优于对照组,但两组之间无统计学差异(P>0.05)。试验组患者出院前、术后1个月、术后6个月,6分钟步行距离明显较对照组长(P<0.05)。
  6.两组患者心血管不良事件发生率的比较:
  两组患者术后1个月(分别为试验组5例,对照组12例)及术后6个月(分别为试验组9例,对照组18例)均出现不良事件,包括心绞痛、心律失常、心衰等,试验组患者发生率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。
  7.两组患者住院天数比较:
  试验组患者平均住院时间9.8±3.2天,对照组10.2±3.5天。采用独立样本t检验分析两组之间差异无统计学意义。
  结论:
  Ⅰ期心脏康运动可以减轻患者术后绝对卧床带来的不利影响,改善心功能,提高运动耐量。目前相关研究涉及的早期康复,实际上是Ⅰ期与Ⅱ期的总和,本研究将Ⅰ期康复与Ⅱ期康复的时间节点进行区分,突显Ⅰ期康复的内容、目标和意义。
[硕士论文] 缪欣
病理学与病理生理学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:miR-16是具有肿瘤抑制功能的miRNA之一,在慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、前列腺癌、胰腺癌、卵巢癌等多种肿瘤中表达下调。为研究miR-16对机体抗肿瘤免疫功能的影响,课题组前期从美国Jackson实验室引进miR-15a/16-/-基因敲除小鼠,对其免疫细胞表型分析发现,生理状态下miR-15a/16-/-小鼠脾脏中巨噬细胞的功能无明显变化,而在H22肝癌细胞荷瘤状态下miR-15a/16-/-小鼠体内巨噬细胞频率显著减少,活性发生改变。本研究进一步对miR-15a/16-/-小鼠CD8+T细胞的表型及功能进行了测定,并以DSS诱导的小鼠肠炎模型评价该小鼠体内CD8+T细胞的功能。
  研究内容分为3个部分:
  1.miR-15a/16-/-小鼠CD8+T细胞的活性分析
  目的:明确miR-15a/16-/-小鼠CD8+T细胞的功能是否发生变化。
  方法:分离miR-15a/16-/-小鼠与C57BL/6小鼠脾脏并制备脾脏单细胞悬液,通过流式细胞术分别检测CD8+NKG2D+、CD8+CD44+、CD8+CD44+CD62L-、CD8+CD25+CD69+细胞的频率。以PMA/Ionomycin刺激小鼠CD8+T细胞后,胞内染色法检测CD8+T细胞IFN-γ的产生能力。同时,CD8+T细胞与MC-38细胞共孵育后以CD107a标记法检测CD8+T细胞的脱颗粒活性。
  结果:与对照组C57BL/6小鼠相比,miR-15a/16-/-小鼠脾脏来源的CD8+CD25+CD69+、CD8+CD44+、CD8+NKG2D+、CD8+CD44+CD62L-T细胞的频率显著增高,且该小鼠脾脏来源的CD8+T细胞脱颗粒活性增强。
  结论:miR-15a/16基因敲除上调小鼠脾脏CD8+T细胞的频率,并增强其生物学活性。
  2.miR-15a/16-/-小鼠CD8+T细胞对DSS-肠炎发病的影响
  目的:明确miR-15a/16-/-小鼠体内CD8+T细胞活性的增强是否参与DSS-肠炎小鼠的发病。
  方法:以2.5%DSS喂养miR-15a/16-/-小鼠和对照C57BL/6小鼠,诱导其肠炎的发生,观察并记录小鼠的体重、腹泻、便血等情况,计算小鼠肠炎的疾病活性指数(DAI)。通过流式细胞术检测miR-15a/16-/-小鼠和对照C57BL/6小鼠脾脏和肠道中CD8+NKG2D+T细胞的频率。记录小鼠肠道组织的炎症发生情况,并制备小鼠肠道组织切片,利用H&E染色法,观察小鼠肠道组织的病理学变化。利用免疫组织化学等方法检测小鼠肠道组织内CD8+T细胞的浸润情况。
  结果:与对照组C57BL/6小鼠相比,miR-15a/16-/-小鼠经2.5%DSS喂养后体重及体重指数显著下降。且miR-15a/16-/-小鼠疾病活性指数(DAI)显著高于对照小鼠,表现为便血情况的加剧和小鼠肠道的显著缩短等。同时,miR-15a/16-/-肠炎小鼠肠道组织中CD8+T细胞、中性粒细胞等炎性细胞浸润量显著高于对照小鼠,其中CD8+T细胞高表达NKG2D分子。此外,miR-15a/16-/-肠炎小鼠脾脏中CD8+NKG2D+T、CD8+IFN-γ+细胞的频率也显著高于对照小鼠。
  结论:miR-15a/16基因敲除加剧DSS诱导的小鼠肠炎发病,miR-15a/16-/-肠炎小鼠肠道组织中有大量CD8+T细胞的浸润,且高表达活化型分子NKG2D。
  3.miR-16对小鼠CD8+T细胞生物学活性发挥的影响
  目的:初步探讨小鼠CD8+T细胞活性变化是否由miR-16调控。
  方法:制备C57BL/6小鼠脾脏单细胞悬液,磁珠分选脾脏CD8+T细胞,经pre-miR-16或anti-miR-16慢病毒感染72小时后,以流式细胞术检测其表面分子NKG2D的表达情况。并以PMA/Ionomycin刺激后,检测CD8+T细胞IFN-γ的产生情况。
  结果:使用pre-miR-16慢病毒体外感染C57BL/6小鼠脾脏CD8+T细胞后,GFP+CD8+T细胞表面NKG2D分子表达下调,而anti-miR-16慢病毒感染后,GFP+CD8+T细胞表面NKG2D分子表达上调。与空白对照组相比,过表达miR-16后,GFP+CD8+T细胞IFN-γ分泌功能减弱,而敲低miR-16后,GFP+CD8+T细胞IFN-γ分泌功能显著增强。
  结论:miR-16可能通过调控NKG2D的表达影响CD8+T细胞的功能。
[硕士论文] 秦宏超
内科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:检测2型糖尿病并发周围神经病变患者外周血25-羟维生素D3[25-(OH)D3]和CD4+调节性T细胞(Treg细胞)的变化,探讨其与2型糖尿病周围神经病变的关系,进而研究Treg细胞调控2型糖尿病周围神经病变的可能机制,为临床上2型糖尿病并发周围神经病变的预测,治疗和预后提供理论基础。
  方法:选取2017年1月至2017年7月期间,在本院内分泌科就诊的2型糖尿病患者56例。根据患者临床症状、体征,生化检查和电生理检查,将患者分为糖尿病并发周围神经病变组(n=28例)和非糖尿病周围神经病变组(n=28例)。评价两组患者的基本信息及相关生化检查指标是否存在差异。采集外周血样本,采用电化学发光免疫法检测2型糖尿病周围神经病变组和对照组外周血25-(OH)D3水平。同时,采用流式细胞仪检测所有患者CD4+Treg细胞比例。比较两组患者血清25-(OH)D3水平和CD4+Treg比例,采用t检验及Pearson分析两组间的差异及其相关性。P<0.05被认为有统计学差异。
  结果:(1)糖尿病并发周围神经病变组和非糖尿病周围神经病变组患者在体重指数、糖化血红蛋白、尿微量白蛋白、血尿素氮、血肌酐、血脂分析、24h尿微量白蛋白等指标之间无明显差异(p>0.05);(2)与非糖尿病周围神经病变组患者25-(OH)D3水平相比[(52.85±8.73)nmol/L],糖尿病周围神经病变组血清25-(OH)D3水平[(47.82±7.72)nmol/L]降低,差异具有统计学意义(p=0.026);(3)与非糖尿病周围神经病变组(3.51%±0.58%)相比,糖尿病并发周围病变组患者外周血CD4+Treg细胞百分比(3.04%±0.50%)降低,差异具有统计学意义(p=0.002);(4)2型糖尿病周围病变组外周血25-(OH)D3水平与CD4+Treg细胞百分比呈正相关(r=0.436,P=0.001)。
  结论:2型糖尿病并发周围神经病变患者外周血25-(OH)D3水平及CD4+Treg细胞比例明显降低,且2型糖尿病周围神经病变组外周血25-(OH)D3水平与CD4+Treg细胞百分比呈正相关,提示25-(OH)D3可能通过影响2型糖尿病并发周围病变患者Treg细胞表达,从而影响2型糖尿病周围病变的发生和发展。
[硕士论文] 王雯雯
内科学(风湿免疫) 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性自身免疫性疾病,主要以关节滑膜增生、炎性细胞浸润、血管翳形成以及软骨和骨结构破坏为病理特征。目前RA发病机制尚不完全清楚,随着研究的深入,类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(Rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLS)被认为是在RA发病和发展过程中关键的效应细胞。活化的RA-FLS具备异常增殖、凋亡抑制以及迁移、侵袭能力增强等肿瘤细胞的性质,在RA滑膜增生、血管新生、软骨和骨侵蚀等方面发挥重要作用。血小板微颗粒(Platelet microparticles,PMPs)是血小板活化过程中产生的微颗粒,研究发现PMPs不仅在RA患者的外周血和关节液中含量增加,并且可以促进RA的炎症反应,提示PMPs可能与RA的发生和发展密切相关。核因子κB受体活化因子配体(Receptor activator ofNF-κB ligand,RANKL)/核因子κB受体活化因子(Receptor activator of NF-κB,RANK)/骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)系统在RA骨破坏和骨重塑过程中起调控作用,其中RANKL/OPG的比例失衡是RA骨质破坏的重要因素。本实验通过研究PMPs对RA-FLS中RANKL和OPG表达的影响,探讨PMPs对RANKL/OPG系统的调控及其可能的作用机制,为RA的诊断和治疗提供了新靶点。
  方法:
  1、活化富血小板血浆后提取PMPs,用流式细胞仪以CD41抗体进行纯度测定,同时用BCA法对PMPs进行蛋白浓度测定。
  2、培养MH7A细胞株,以CD90、CD55抗体标记后,采用流式细胞仪进行细胞鉴定。
  3、采用MTT法、直接计数法以及结晶紫染色实验探究PMPs对RA-FLS增殖的影响。
  4、经PI单染和AnnexinⅤ-FITC/PI双染后,以流式细胞仪检测不同浓度的PMPs对RA-FLS凋亡的影响。
  5、利用高通量基因芯片分析PMPs对RA-FLS中基因表达谱的影响。
  6、采用RT-qPCR方法从mRNA水平验证PMPs对RA-FLS中RANKL和OPG表达的影响,并用Western Blot和ELISA方法检测PMPs对RA-FLS的RANKL和OPG蛋白表达和分泌的影响。
  7、联合使用信号通路抑制剂,以Western Blot方法研究PMPs影响RA-FLS中RANKL和OPG表达及其可能的机制。
  结果:
  1、流式细胞仪检测PMPs纯度为93.4±1.46%,可用于后续试验。BCA法测的PMPs浓度为800μg/ml,以此浓度配置后期实验中所需的不同浓度。
  2、经流式细胞术检测,表达CD55+/CD90+的MH7A比例为95.6±1.36%,该细胞为RA-FLS,可用于后期实验。
  3、采用MTT实验、细胞计数法和结晶紫染色实验检测,结果均显示PMPs可以明显促进RA-FLS的增殖。
  4、经PI单染后用流式细胞仪检测发现经不同浓度PMPs作用后的RA-FLS中未见明显Sub-G1峰;AnnexinⅤ-FITC/PI双染后用流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组(0μg/ml PMPs)相比,加入PMPs后RA-FLS凋亡率的改变无统计学意义(P>0.05),以上结果提示PMPs对RA-FLS凋亡无明显影响。
  5、高通量基因芯片结果显示,相对于空白对照组(0μg/ml PMPs),25μg/ml PMPs组中有298个基因表达显著改变(>1.5倍),50μg/ml PMPs组中有164个基因表达显著改变,两组表达均发生显著改变的共39个基因。
  6、基因芯片结果显示,与空白对照组相比,25μg/ml和50μg/ml PMPs组中的RANKL表达均增加,OPG表达均减少;RT-qPCR验证芯片结果可见在不同浓度的PMPs作用于RA-FLS后,RA-FLS中RANKL表达升高,OPG表达下降,RANKL/OPG比值显著增加(P<0.05);通过Western Blot和ELISA分别从蛋白水平和细胞培养上清水平检测,结果表明PMPs促进RANKL表达和分泌,抑制OPG表达和分泌,明显提高RANKL/OPG比值(P<0.05)。
  7、Western Blot实验结果显示:(1)PMPs联合使用NF-κB抑制剂JSH-23作用于RA-FLS后,RANKL表达减少,OPG表达升高,RANKL/OPG比值较PMPs组显著下降(P<0.05),提示PMPs可能通过激活NF-κB通路影响RANKL和OPG表达,进而调控RANKL/OPG比值;(2)前期研究表明,趋化因子受体CXCR2可以活化NF-κB通路,本研究在PMPs作用于RA-FLS基础上加入CXCR2抑制剂SB225002,结果显示与PMPs相比,RANKL表达增高,OPG表达下降,RANKL/OPG比值明显下降(P<0.05),提示PMPs可能通过激活CXCR2使NF-κB活化,进而调控RANKL/OPG比值;(3)与空白对照组相比,PMPs组p-Erk表达增加,而Erk无明显改变,PMPs联合CXCR2抑制剂SB225002作用于RA-FLS后,p-Erk表达水平较PMPs组明显下调,Erk表达无改变,p-Erk/Erk比值下降(P<0.05),而JNK、p38和Akt蛋白及其磷酸化水平在各组间均无明显改变,提示PMPs可能通过CXCR2激活Erk,使Erk发生磷酸化改变;(4)PMPs联合应用Erk抑制剂PD98059作用与RA-FLS后,p-Erk、p-IκB和p-NF-κB表达较PMPs组明显下降,而较PD98059组有所上升,各组Erk、IκB和NF-κB表达无明改变,提示PMPs可能通过Erk的磷酸化激活NF-κB通路。上述结果提示PMPs可能通过激活RA-FLS中的CXCR2使Erk磷酸化,从而活化NF-κB通路,影响RANKL和OPG的表达,调控RANKL/OPG比值,进而在骨破坏过程中发挥一定的作用。
  结论:
  PMPs可以促进RA-FLS增殖并且可能通过激活CXCR2/Erk/NF-κB信号通路影响RANKL和OPG的表达,调控RANKL/OPG的比值,进而促进RA的骨质破坏,在RA的发病和发展中发挥重要作用。
[硕士论文] 孙昌亮
运动人体科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  探讨2型糖尿病心肌纤维化的发生发展及有氧运动的干预作用;TGF-β1/Smad及其相关miRNA在运动干预糖尿病心肌纤维化形成中的调节作用。
  方法:
  在35只4周龄SD大鼠中随机取出10只为对照组(NC组,n=10),剩余大鼠通过高脂饲料喂养基础上结合腹腔注射STZ复制2型糖尿病大鼠模型20只。建模成功后随机分为糖尿病运动组(DME,n=10)和糖尿病对照组(DMC组,n=10)。运动组每天进行60min的无负重游泳训练。8周后,检测各组大鼠心肌组织中TGF-β1含量、Smad2、Smad3、Smad7、Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维mRNA的表达和miR-133a、miR-21、miR-29b表达,检测血清中FBG、INS含量。
  结果:
  (1)在T2DM大鼠建模成功8周末,与NC组相比,DMC组FBG含量、HOMA-IR显著升高(P<0.05)的同时,INS含量有所升高,但无显著性差异;与DMC组相比,DME组FBG含量显著降低(P<0.05), INS含量有升高和HOMA-IR有降低趋势,但无显著性差异;与NC组相比,DME组FBG与INS含量均有所升高,均无显著性差异,HOMA-IR显著升高(P<0.05)。
  (2)在T2DM大鼠建模成功8周末,与NC组相比,DMC组心肌中TGF-β1含量、Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维mRNA表达量均显著性升高(P<0.05);与DMC组相比,DME组心肌中TGF-β1含量、Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维mRNA表达量均显著性降低(P<0.05);与NC组相比,DME组心肌中TGF-β1含量、Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维mRNA表达量均有所降低,但均无显著性差异。
  (3)与NC组相比,DMC组心肌中Smad2 mRNA表达量显著升高(P<0.05),Smad3mRNA表达量极显著升高(P<0.01)的同时,Smad7 mRNA表达量有所降低,但无显著性差异;与DMC组相比,DME组大鼠心肌中Smad2 mRNA表达量显著降低(P<0.05),Smad3mRNA表达量极显著降低(P<0.01)的同时,Smad7 mRNA表达量极显著升高(P<0.01);与NC组相比,DME组心肌中Smad2、Smad3 mRNA表达量均有所上升,均无显著性差异,Smad7 mRNA表达量极显著升高(P<0.01)。
  (4)与NC组相比,DMC组大鼠心肌中miR-133a、miR-29b表达量均显著性降低(P<0.05)的同时,miR-21表达量显著升高(P<0.05);与DMC组相比,DME组大鼠心肌中miR-133a、miR-29b表达量均极显著升高(P<0.01)的同时,miR-21表达量有所降低,但无显著性差异;与NC组相比,DME组大鼠心肌组织miR-133a、miR-29b表达量均极显著升高(P<0.01),miR-21表达量有所升高,无显著性差异。
  结论:
  (1)本研究所复制的2型糖尿病大鼠模型是成功的;随着病情的发展,T2DM大鼠心肌组织中出现了一定程度的纤维化,而8周的有氧运动可以有效预防大鼠心肌纤维化的发生和发展。
  (2)随着T2DM的发展,一方面miR-133a表达受到抑制,从而激活TGF-β1/Smad2、3信号通路,抑制了miR-29b的表达,促进胶原蛋白的生成。另一方面,糖尿病引起TGF-β1的过量表达,促进miR-21的生成,抑制Smad7的表达,从而削弱Smad7对TGF-β1/Smad信号通路的抑制作用,对胶原蛋白的合成抑制性降低,促进了心肌纤维化的进程。
  (3)8周的有氧运动,一方面可以促进miR-133a表达,从而抑制TGF-β1/Smad信号通路,提高miR-29的表达,有效减少胶原蛋白的合成,预防大鼠心肌纤维纤维化的发生和发展。另一方面,8周的有氧运动通过抑制TGF-β1的表达,降低miR-21表达量,从而促进Smad7的表达,进一步抑制TGF-β1/Smad信号通路,有效减少胶原蛋白的合成,预防心肌纤维化的发生发展。
[硕士论文] 仰彬
病原生物学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:日本血吸虫病是一种重要的人兽共患寄生虫病,仍是我国主要的公共卫生问题之一。血吸虫感染免疫的一个基本特征是在成虫产卵后,宿主逐渐表现出免疫下调的状态,使感染呈现慢性化。以往的研究认为这种免疫负调节性与调节性T细胞(Tregs)、DC和Mψ等相关。调节性B细胞(Bregs)是一类具有调节功能的B细胞,在自身免疫病、慢性炎症、肿瘤、寄生虫感染等疾病中发挥着免疫负向调控作用。MicroRNA(miRNA)是一类内生的、长度约为20-25个核苷酸的小RNA,不编码蛋白但其在细胞内具有多种重要的调节作用。近来研究发现,microRNA在B细胞的活化、分化和发挥功能过程中起着关键作用,但目前仍不清楚miRNA是否在B细胞发挥调节性功能中发挥重要作用。本课题组前期研究已经证实日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)在体内外均能诱导产生Bregs并分泌高水平的IL-10,并且在日本血吸虫感染过程中,可以诱导产生CD19+Tim-1+分泌IL-10的B细胞。那么,是否miRNA参与日本血吸虫感染诱导Bregs发育分化仍不清楚。日本血吸虫病主要病理改变为肝脏肉芽肿,在慢性期导致肝脏纤维化。研究表明在肝脏肉芽肿形成过程中,B细胞发挥了重要作用。但是,目前仍不清楚调节性B细胞是否参与了肝脏的病理改变。因此,我们对日本血吸虫感染小鼠后调节性B细胞的产生及其作用进行了初步研究。
  研究内容分为以下3个部分:
  1、miRNA-21在日本血吸虫诱导调节性B细胞分化过程中的作用
  目的:探索miRNA-21在日本血吸虫感染小鼠后调节性B细胞分化及体外SEA刺激后调节性B细胞的产生中的作用。
  方法:构建日本血吸虫感染C57BL/6小鼠模型,分别取感染13W和正常小鼠脾脏CD19+B细胞,qPCR检测miRNA-21和IL-10mRNA表达水平。体外用SEA、LPS分别刺激正常小鼠CD19+B细胞72h,荧光定量PCR检测CD19+B细胞miRNA-21和IL-10的mRNA水平。体外miRNA-21-Inhibitor转染正常小鼠CD19+B细胞后用SEA、LPS刺激72h,流式检测IL-10+B细胞的比例,ELISA检测上清中IL-10的水平。
  结果:日本血吸虫感染后,小鼠脾脏B细胞miRNA-21和IL-10的mRNA的表达水平较正常小鼠明显升高;体外SEA、LPS刺激CD19+B细胞后miRNA-21和IL-10的mRNA水平也明显升高;体外miRNA-21-Inhibitor转染正常小鼠CD19+B细胞后用SEA、LPS刺激72h,IL-10+B细胞比例及IL-10分泌量显著降低。
  结论:日本血吸虫感染后,miRNA-21参与了调节性B细胞的产生和IL-10分泌。
  2、日本血吸虫感染诱导肝脏肉芽肿形成过程中调节性B细胞的动态变化
  目的:通过体内实验观察日本血吸虫感染不同阶段CD19+Tim-1+IL-10+B细胞的动态变化。
  方法:构建日本血吸虫感染C57BL/6小鼠模型,分别在感染第0W,3W,6W,13W分离小鼠脾脏单个核细胞和肝脏淋巴细胞,流式检测CD19+Tim-1+IL-10+B细胞比例,同时取感染不同阶段的小鼠肝脏免疫组化分析CD19+Tim-1+细胞的变化。
  结果:小鼠日本血吸虫感染后第6W、13W脾脏CD19+Tim-1+IL-10+B细胞比例显著增加;感染后第3W、6W,小鼠肝脏CD19+Tim-1+IL-10+B细胞比例均显著增加;感染第13W,小鼠肝脏CD19+Tim-1+IL-10+B细胞显著减少。肝脏免疫组化分析发现,感染第6W小鼠肝脏有严重的虫卵肉芽肿,并伴随有大量CD19+Tim-1+细胞聚集在肉芽肿周围;感染第13W小鼠肉芽肿体积有所减小,肉芽肿周围CD19+Tim-1+细胞也明显减少。
  结论:日本血吸虫感染早期和急性期,CD19+Tim-1+IL-10+B细胞参与了日本血吸虫感染诱导的肝脏肉芽肿的发生与发展。
  3、SEA诱导产生的调节性B细胞对巨噬细胞的作用的初步研究
  目的:体外实验初步探讨调节性B细胞对巨噬细胞的作用。
  方法:磁珠分选正常小鼠CD19+B细胞,体外分别用LPS、SEA刺激培养后与小鼠巨噬细胞RAW264.7共培养,检测培养上清中NO和IL-10水平。荧光定量检测共培养后RAW264.7细胞iNOS和Arg-1的mRNA水平。
  结果:与阴性对照组相比,经SEA刺激后的B细胞与RAW264.7细胞共培养后,NO表达无明显变化,IL-10表达显著增加,iNOS的mRNA表达水平无明显变化,Arg-1的mRNA水平显著升高。
  结论:体外SEA刺激的B细胞能够诱导巨噬细胞分化成M2型的巨噬细胞。
[硕士论文] 吴青青
数学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:传染病动力学是生物数学的一个重要分支.本文中我们针对霍乱的传播,研究了其微分方程模型,系统地分析了这些模型的阈值动力学性质,得到病毒传播的全局渐近性态.本文具体内容如下:
  第一章主要介绍了霍乱传播的数学模型,及与之有关的背景知识、研究现状,并简要概述了本文的主要工作.
  第二章我们研究了一类描述霍乱传播规律的常微分模型,主要讨论稳态解的存在性、唯一性和渐近性.首先,我们用下一代矩阵法得到模型的基本再生数R0.接着利用线性化结合谱分析的方法得到结论:R0<1时无病平衡点局部渐近稳定;R0>1时无病平衡点不稳定,系统存在唯一染病平衡点且局部渐近稳定.最后,分别通过构造Lyapunov泛函和上下解迭代的方法得到无病平衡点和染病平衡点的全局渐近稳定性.
  第三章中,我们考虑了细菌和感染者的扩散,研究了具第三边界条件的非线性抛物问题.我们首先利用特征值问题给出了系统的基本再生数RR0;接着,利用构造上解和比较原理得出无病平衡点是全局渐近稳定的;最后,通过上下解的方法讨论了染病平衡点的存在性和稳定性.
  为了考察具变系数的反应扩散问题,我们在第四章中进一步考虑了非均质空间中的反应扩散方程.首先给出了系统的基本再生数RD0.然后借助特征方程,利用反证法得到染病平衡点的局部渐近性质.再运用比较原理结合构造上解的方法得出无病平衡点的全局渐近稳定性.接着通过上下解和迭代的方法得到染病平衡点的存在性和稳定性.最后考察了细菌扩散、感染者不扩散的特殊情形下疾病持续或趋于稳定状态的条件.
  第五章我们使用Matlab软件对上述问题进行了数值模拟,利用所绘制的图形验证所得到的理论结果.
  最后,第六章对本文的主要内容进行简单总结,结合本文的研究结果对今后的研究工作做进一步的思考.
[硕士论文] 王超
流行病与卫生统计学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:研究目的:
  1.通过对2012~2015年江苏省人源、食品源以及动物源肠炎沙门氏菌的耐药情况测试,耐药谱分析,研究肠炎沙门氏菌的耐药特点。为指导临床医生合理选择使用抗生素,同时为有效预防沙门氏菌感染以及控制疾病流行提供科学参考。
  2.根据肠炎沙门氏菌β-内酰胺类、氨基糖苷类、氯霉素类、磺胺类/甲氧苄胺类、四环素类以及喹诺酮/氟喹诺酮类耐药表型以及相关耐药基因检测结果,了解耐药基因在肠炎沙门氏菌中的分布情况以及耐药表型和基因型之间的关系,分析探索多重耐药性肠炎沙门氏菌产生的原因。
  3.利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对肠炎沙门氏菌进行分子分型及溯源分析,比较不同来源肠炎沙门氏菌同源性,确定江苏省肠炎沙门氏菌主要分子型别以及分子型别与耐药表型及基因型间关系,为监测肠炎沙门氏菌流行及疾病暴发溯源提供参考。
  研究方法:
  1.参照GB4789.4-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》中方法,对2012~2015年江苏省地区动物源(鸡、猪专项)基线调查专项、食源性疾病哨点监测腹泻病人及食品行业从业人员健康体检共93株肠炎沙门氏菌分离株进行血清型鉴定;参照美国临床实验室标准化研究所CLSI标准推荐的Kirby-Bauer(K-B)纸片法对肠炎沙门氏菌进行β-内酰胺类(氨苄西林、阿莫西林/克拉维素、头孢西丁、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢曲松、头孢吡肟)、氨基糖苷类(链霉素、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星)、喹诺酮类(萘啶酸、环丙沙星)、磺胺类(磺胺甲恶唑)、氯霉素类(氯霉素)、四环素类(四环素),共计16种抗生素敏感性试验。
  2.通过PCR方法检测肠炎沙门氏菌分离株β-内酰胺类(blaTEM-1-like、blaCTX-M、blaOXA-1-like、blaCMY-2、blaPSE-1、blaSHV)、氨基糖苷类(aadA1-like、aadA2、aadB、aacC4、aac(6')-1b、氯霉素类(catA1、cmlA1、floR)、甲氧苄胺类(dfrA1-like、dfrA12、dfrA17)、磺胺类(sul1、sul2、sul3)、四环素类(tet(A)、tet(G)、tet(B)、tet(C))以及喹诺酮/氟喹诺酮类(qnrA、qnrB、qnrS、qnrC、qnrD)共29种耐药基因携带情况。
  3.参照国际PulseNet沙门氏菌脉冲场凝胶电泳分子分型标准操作方案,对所有受试肠炎沙门氏菌进行分子分型。选择限制性内切酶XbaⅠ消化菌株基因组,经脉冲场凝胶电泳后,使用凝胶成像系统获取电泳图像,通过国家致病菌识别网软件对图像条带进行处理、分析。
  研究结果:
  1.耐药表型结果:肠炎沙门氏菌对萘啶酸、氨苄西林、链霉素以及头孢哌酮耐药率较高,其耐药率分别为93.55%(87/93)、74.19%(69/93)、65.59%(61/93)和51.61%(48/93)。93株肠炎沙门氏菌对16种抗生素共形成22种耐药谱,菌株主要表现对4~5种抗生素耐药;部分菌株形成固定耐药谱型:AMP-CFP-STR-NA-TE(21/93)、AMP-STR-NA-TE(15/93)、AMP-CFP-STR-NA(10/93),对3类及3类以上药物耐药即MDR多重耐药菌株比例为75.27%(70/93)。
  2.耐药基因PCR检测结果:sul2和sul3基因携带率最高,超过80%,其次为blaTEM-1-like、tet(A)、tet(G)、blaCTX-M和aac(6')-1b基因,检出率分别为7527%、40.86%、35.48%、12.90%和9.8%。sul1基因与磺胺类耐药表型符合率为93.55%,blaTEM-1-like基因与青霉素类耐药表型符合率为91.40%,tet(A)、tet(G)与四环素耐药表型符合率为66.67%。
  3.PFGE分型结果:PFGE聚类分析可分为A和B两个大聚类,共形成PFGE-XbaⅠ28个型别。B19和B23为主要PFGE型别,来源于不同地区,且多数菌株来源于动物源(鸡源)。B19型别菌株耐药表型主要为AMP-CFP-STR-NA-TE,携带的耐药基因主要为blaTEM-1-like、sul2、sul3以及tet(A);B23型别菌株耐药表型主要为AMP-CFP-NA-TE,携带的耐药基因主要为blaTEM-1-like、sul2、sul3、tet(A)和tet(G)。
  研究结论:
  1.肠炎沙门氏菌普遍对萘啶酸、氨苄西林及链霉素等抗生素耐药,且多重耐药性情况严重,菌株主要以耐4类抗生素为主,最多可对10种抗生素耐药,部分菌株形成固定型别耐药谱型:AMP-CFP-STR-NA-TE、AMP-STR-NA-TE、AMP-CFP-STR-NA。
  2.耐药基因sul2、sul3、blaTEM-like、tet(A)、tet(G)在肠炎沙门氏菌中携带率较高。耐药基因与耐药表性之间存在一定的关联性;携带全部或部分耐药基因簇blaTEM-1-like/blaCTX-M-tet(A)/tet(G)-sul1-aac(6')-Ib是导致肠炎沙门氏菌多重耐药性主要原因。
  3.PFGE结果显示肠炎沙门氏菌分化程度不高,优势PFGE型别为B19、B23,其所包含的菌株耐药表型、基因型存在明显相似性。溯源结果表明不同来源(人源、食品源以及动物源)以及不同地区肠炎沙门氏菌可形成相同PFGE带型,表明同一菌株克隆肠炎沙门氏菌,可在不同宿主及不同地区之间流行传播。
[硕士论文] 祁双
临床检验诊断学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  本研究通过构建质粒特异性的表达类泛素化修饰物(Small ubiquitin-related modifiers,SUMO),并初步研究SUMO蛋白在原发性胆汁性胆管炎(Primary biliary cholangitis,PBC),系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE),类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA),干燥综合征(Sjogren syndrome,SS)多种典型性自身免疫性疾病患者血清中的表达水平,探究抗SUMO抗体是否可作为PBC的特异性血清标志物。并结合患者临床病历资料,探究SUMO与可溶性酸性磷酸化核蛋白(Acid soluble phosphorylated nuclear protein,Sp100)间的内在联系及对患者肝功能的影响。
  方法:
  1.利用PCR和ET克隆技术制备含有SUMO1,SUMO2,SUMO3片段的质粒,将其分别导入大肠杆菌进行蛋白的诱导和表达,最后进行蛋白的纯化。
  2.采用斑点印迹法初步筛查原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者血清样本中的SUMO阳性标本,并用Western blot进行验证,获取阳性参考血清。通过实验条件的不断改善,建立最适的抗SUMO抗体ELISA诊断体系。
  3.通过建立的ELISA诊断体系,分别检测抗SUMO抗体3种亚型在PBC,SLE,SS及RA中的阳性率,并通过卡方检验分析其差异性。斑点印迹法和Western blot验证ELISA诊断体系的有效性。
  4.结合患者临床病历资料,采用t检验对患者的各类生化指标进行统计学分析,发现抗SUMO抗体阳性患者病症上的共性,利于后期研究其致病机制,为其提供针对性的治疗提供依据。
  结果:
  1.与其他非PBC自身免疫性疾病和健康对照相比,抗SUMO1抗体,抗SUMO2抗体,抗SUMO3抗体在PBC中的阳性检出率高(P<0.01)。
  2.抗SUMO抗体标记物在PBC中的特异性高达99%,其敏感性保持在86%左右。
  3.抗SUMO抗体在其他自身免疫性疾病人群中的阳性率无明显差异(P>0.05)。
  4.在抗Sp100抗体阳性与阴性的PBC样本中,抗Sp100抗体阳性组中抗SUMO抗体的阳性率显著高于抗Sp100抗体阴性组(P<0.05),其总胆红素均值和直接胆红素均值较抗SUMO抗体阴性组明显增高(P<0.05)。
  5.抗SUMO抗体阳性组的非PBC自身免疫性疾病中的胆红素均值较抗SUMO抗体阴性组高。
  结论:
  高特异性抗SUMO抗体有望成为PBC诊断的一种新型抗体,对于提高PBC的临床诊断效率意义重大。SUMO蛋白与Sp100联系紧密,其对患者的肝功能具有潜在性的影响。
[硕士论文] 王丹
内科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:本文主要从以下几方面进行论述:
  第一部分 中国扬州地区体检人群脂肪胰检出率及临床特点分析
  目的:
  本研究的目的是探讨脂肪胰在江苏扬州体检人群中检出率及影响因素。
  方法:
  这是一项横断面研究。初始包含2093受试者,均来自中国扬州大学附属医院体检中心人群。在排除了865名信息不全的受试者后,最终受试者人数为1228人。所有人采用经腹超声检查并根据结果将受试人群分为脂肪胰组和非脂肪胰组。分别用t检验和x2检验对连续变量和分类变量进行初步统计分析,比较脂肪胰与体重指数、腹围、血脂水平、空腹血糖水平、肝酶水平及代谢相关疾病如脂肪肝、糖尿病、代谢综合征等疾病相关性。在去除混杂因素后,采用Logistic多因素回归进一步分析脂肪胰独立危险因素。
  结果:
  在2093名受试者中,有56人(2.7%)经腹超声诊断为脂肪胰。最终纳入人群中53人诊断为脂肪胰并将其定义为脂肪胰组,其中28人(52.8%)为男性,25人(47.2%)为女性。其余人群为非脂肪胰组(对照组),由550名(46.8%)男性及625名(53.2%)女性组成。初步分析显示,脂肪胰组与对照组在年龄、一般肥胖、中心性肥胖、饮酒、脂肪肝、代谢综合征的患病率差异均有统计学意义(P<0.01),而两组间在血γ-谷氨酰转肽酶和血肌酐水平、性别、吸烟、糖尿病及高血压病比例方面无统计学意义(P分别为0.081,0.964,0.039,0.062,1.000,0.056)。与非脂肪胰组相比,脂肪胰组显示出较高的血尿酸、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、空腹葡萄糖、总胆固醇,甘油三酯、低密度脂蛋白浓度水平和较低的高密度脂蛋白水平(P<0.05)。脂肪胰组代谢综合征患者比例49.1%(26/53),明显高于非脂肪胰组的20.3%(238/1175)。Logistic多因素回归分析结果显示,年龄增大(P=0.20),中心性肥胖(P=0.008),脂肪肝(P=0.005)是脂肪胰的独立危险因素,OR值分别为1.030(95% CI1.005 to1.057),4.386(95% CI1.461 to13.162),2.749(95% CI1.364 to5.539)。
  结论:
  受试人群中脂肪胰的检出率约为2.7%。年龄增长,中心性肥胖和脂肪肝是脂肪胰的独立危险因素。
  第二部分 高甘油三酯腰围表型与脂肪胰的关系
  目的:
  既往研究显示高甘油三酯血症-腰围表型(HTWC)与代谢相关指标及相关疾病如糖尿病、冠心病等相关,但与脂肪肝及脂肪胰相关性研究未见报道。本文旨在探讨高甘油三酯血症-腰围表型与脂肪胰及代谢相关疾病关系。
  方法:
  这是一项随机横断面研究。受试者包含1241例体检者,均来自中国扬州大学附属医院。腰围升高定义为男性≥90cm,女性≥80cm。甘油三酯升高定义为血甘油三酯水平≥1.7mmol/L。根据腰围和甘油三酯偏高水平将受试者分为三组:正常腰围及甘油三酯水平组(组-1,n=538),腰围升高或甘油三酯升高组(组-2,n=424),腰围甘油三酯升高组(高甘油三酯腹围表型组,组-3,n=279).所有人采用腹部超声检查,根据其结果诊断脂肪胰与脂肪肝。分析比较三组间体重指数,腹围,血脂水平,空腹血糖和既往病史等指标差异性。
  结果:
  最终1241例受试者纳入研究。与组-1(538例)和组-2(424例)相比,HTWP组(组-3,n=279)显示出较高的胆固醇酯、甘油三酯和低密度脂蛋白、空腹葡萄糖、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、γ-谷氨酰转肽酶、血尿酸水平和较低的高密度脂蛋白水平(P<0.001),三组之间的年龄,性别,一般肥胖,中心性肥胖,吸烟和饮酒有显着差异(所有P<0.001)。HTWP组患者代谢综合征(84.2%),脂肪胰(10.4%),脂肪肝疾病(64.5%)和高血压疾病(15.8%)的患病率更高,P值均<0.001。而三组间在糖尿病和SCr水平方面无统计学差异(P值分别为0.399,0.501)。在脂肪胰组(n=53),HTWP的比例和WT指数水平显着高于非脂肪胰组(54.7%vs23.4%,222±135 vs142±141),两组之间差异有统计学意义(P<0.001)。ROC曲线中,当曲线下面积最大值为0.746时,WT指数为107.09,相应的敏感性和特异性分别为90.6%和51.9%。
  结论:
  高甘油三酯腰围表型与脂肪胰发生紧密相关,可以作为筛查脂肪胰方法。
[硕士论文] 葛宽雪
消化内科 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  研究血清总胆汁酸(Total bile acid,TBA)对肝损害及肝脏合成代谢功能的评估作用;探讨血清总胆汁酸与终末期肝病模型(Model for end-stage of liver disease,MELD)之间的相关性,及两者联合对乙肝肝硬化失代偿期患者短期预后的预测价值。
  方法:
  收集2016年8月至2017年8月期间入住江苏省苏北人民医院肝脾内科病历资料和随访结果完整的乙肝肝硬化失代偿期患者84例,建立临床资料数据表,随访6个月。按照6个月存活与否分为死亡组存活组,了解死亡组与生存组间的一般临床资料,比较两组血清总胆汁酸、MELD评分、总胆红素(Total bilirubin,TBIL)、凝血酶原国际标准化比值(International Normalized Ratio,INR)、血清肌酐(Creatinine,Cr)指标的差异;分析84例失代偿期乙肝肝硬化患者TBA水平与MELD评分的相关性;应用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)评价血清TBA、MELD评分对失代偿期乙肝肝硬化患者6个月预后的预测能力;根据ROC曲线截断值建立Kaplan-Meier生存曲线,同时分析血清TBA联合MELD评分对患者预后评估的价值。
  结果:
  1.失代偿期乙肝肝硬化患者死亡组血清TBA值平均为(55.36±65.35)μmol/L,较生存组(28.85±38.83)μmol/L显著升高(P<0.05)。
  2.随着MELD评分升高,总胆汁酸水平升高,经过pearson相关分析可知,r=0.704,P=0.00,MELD评分与血清TBA呈正相关关系。
  3.MELD评分、血清TBA对失代偿期乙肝肝硬化患者6个月预后的ROC曲线面积分别为0.817、0.766,MELD评分、TBA的截断值分别为50、35.3,根据截断值可知两者对判断失代偿期乙肝肝硬化患者的6个月是否发生死亡均有良好的灵敏度、特异度。
  4.以截断值MELD=50以及TBA=35.3为界限,将84例患者分为四组,建立Kaplan-Meier生存曲线,结果显示第四组在MELD≥50和TBA≥35.3μmol/L时,死亡风险最大,第一组MELD<50和TBA35.3<5μmol/L时,死亡风险最小,第二组MELD<50和TBA≥35.3μmol/L与第三组MELD≥50且TBA<35.3死亡风险相近,说明高TBA水平低MELD水平的患者的预后与高MELD水平低TBA水平患者的预后相似,同时也说明总胆汁酸联合MELD评分测定是对MELD评分的有效补充,更能准确的判断患者的短期预后。本研究认为血清总胆汁酸联合MELD评分能提高对失代偿期乙肝肝硬化患者短期预后的评价的准确度。
  结论:
  1.死亡组的血清总胆汁酸水平显著高于生存组,血清总胆汁酸高值患者预后较差。
  2.总胆汁酸联合MELD评分测定是对MELD评分的有效补充,更能提高对失代偿期乙肝肝硬化患者短期预后的评价的准确度。
  3.血清总胆汁酸、MELD评分均可对失代偿期乙肝肝硬化患者病情严重程度及短期预后作出判断,因此血清总胆汁酸联合MELD评分是预测肝硬化短期预后的较好指标。
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