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[硕士论文] 吕晓敏
药剂学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:马来酸氟吡汀(FM)是非阿片类镇痛药,作用于中枢神经系统,目前临床治疗效果明确,主要用于治疗各种急慢性疼痛,包括由于肌肉紧张增高引起的疼痛、关节疾病导致的疼痛、紧张型头痛、癌痛、痛经、骨伤科、外科手术后或运动损伤后疼痛等。FM的不良反应少且一般不严重,最常见的不良反应是疲倦,其他还有眩晕、口干、嗜睡。长期服用不产生耐受性和依赖性,而且副反应症状与剂量有关,当停止服药一段时间后,由副反应表现出来的症状会逐渐减轻直至消失。目前FM的市售剂型为普通型胶囊剂,口服剂型,每日3-4次,每次用量100mg,每日最大剂量600mg,目前国内作为进口药,暂时还没有其他剂型上市。查阅文献,有制备FM口服固体速释剂型、FM缓释片,并考察其相关制剂在动物体内的药动学指标,暂无其他相关剂型的研究。
  FM现有剂型少,难以满足临床用药需求,故需要开发出安全高效的FM新剂型。在成功制备FMSSD的基础上,本实验建立生物样品中FM的HPLC测定方法,在灌胃给予FMSSD后,对大鼠血浆经时浓度和小鼠各组织中浓度以及药效考察,了解FMSSD在大鼠体内的药动学特征及小鼠体内组织分布情况,为研究FM新剂型提供基础实验依据。主要研究内容和结果如下:
  1.建立生物样品中FM的HPLC检测方法
  色谱条件:色谱柱:Symmetry C18(5μm,4.6×250mm);流动相:甲醇∶水=50∶50(V/V),用1mol/L的甲酸调pH值至6.70;柱温:25℃;流速:0.5ml/min;检测波长:320nm;进样量:20μl。FM在大鼠血浆中0.015~5.00μg/ml浓度范围内,在小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑各组织中0.064~21.33μg/g浓度范围内均呈现良好的线性关系(R2>0.9991)。该方法具有良好的专属性、精密度RSD均小于6%、稳定性RSD均小于6%、回收率大于90%,均符合相关检测要求,可用于生物样品中FM的测定。
  2.FMSSD药动学及组织分布研究
  采用大鼠血药浓度测定法研究FMSSD在大鼠体内的药动学特征,以三个剂量(9mg/kg、27mg/kg、54mg/kg)大鼠灌胃给药后,采用二室模型对数据进行处理,确定药动学参数。三组剂量血药浓度的达峰时间分别为(3.318±0.308)、(3.326±0.548)、(3.333±0.516)h;达峰时FM的血药浓度依次为(0.740±0.031)、(1.825±0.083)、(4.014±0.183)μg/ml;大鼠血浆中药物吸收半衰期t1/2kα分别为(0.837±0.364)、(0.835±0.055)、(0.831±0.057)h;分布半衰期t1/2α分别为(4.463±1.984)、(4.477±2.186)、(4.474±2.429)h;消除半衰期t1/2β分别为(6.417±3.155)、(6.333±0.326)、(6.332±0.329)h;消除率CL/F分别为(1.004±0.034)、(1.202±0.035)、(1.546±0.017)L/h/kg;时间-血药浓度曲线下面积AUC0-24分别为(8.244±0.198)、(21.624±0.453)、(45.134±0.803)μg·h/ml。
  小鼠按78mg/kg灌胃给予FMSSD后,HPLC测定2、4、8、12、24h小鼠各组织(心、肝、脾、肺、肾、脑)中FM浓度,比较药物在小鼠各组织中的分布量;同时利用FM具有荧光特性,对同等剂量灌胃给药后的小鼠组织进行冰冻切片,将切片置于荧光显微镜下观察,统计出FM在组织中的大体分布趋势,其结果与用HPLC测定FMSSD在各组织中分布的定量分析结果一致。给药后各组织各时间点药物分布有显著差异,各组织药物分布量随时间变化而变化,在4h时达最大值,FM在各组织分布量:肝>脑>肾>心>脾>肺。
  3.自制FMSSD与市售胶囊剂的生物等效性研究
  对自制FMSSD及市售胶囊剂进行生物等效性评价,分别对主要药动学参数Cmax、TmaxAUC0-t、AUC0-∞采用方差分析、双单侧t检验及(1-2α)%置信区间的方法进行生物等效性统计学分析,结果表明两种FM不同剂型间存在着显著性差异(P<0.01)。以AUC0-∞计算的相对生物利用度F为(144.388±18.400)%,在参比制剂的80.0%~125.0%范围外,说明两种制剂在大鼠体内不具有生物等效性,自制FMSSD与胶囊剂相比,具有缓慢释放、缓速分布与消除的特点。
  4.FMSSD的药效学研究
  小鼠分别灌胃给予生理盐水阴性对照、低中高(13mg/kg、39mg/kg、78 mg/kg)剂量的FMSSD、(78mg/kg)剂量的市售胶囊,采用小鼠热板法、醋酸扭体法考察各组药物镇痛效果。结果显示各给药组均能提高小鼠痛阈值、减少由醋酸导致的小鼠疼痛扭体反应次数,与生理盐水对照组比较具有显著性差异(P<0.05)。在给药后0.5~2h内,高剂量FMSSD组的小鼠痛阈提高率(36.14%~61.47%)、扭体抑制率(19.71%~49.97%)都低于市售胶囊组(45.85%~85.53%)、(28.82%~72.16%),但是高剂量FMSSD组在给药4h后小鼠痛阈提高率(95.38%)、扭体抑制率(81.64%)达最大值,市售胶囊组在给药2h后小鼠痛阈提高率(85.53%)、扭体抑制率(72.16%)达最大值。同时给药4~24h后,高剂量FMSSD组的小鼠痛阈提高率维持在(12.23%~95.38%)、扭体抑制率维持在(15.42%~81.64%);市售胶囊组的小鼠痛阈提高率维持在(1.02%~48.47%)、扭体抑制率维持在(9.84%~68.77%)。综合分析两种镇痛模型,表明在相同给药剂量下, FM市售胶囊在给药2h前迅速发挥药效,高于FMSSD,但是在2h达到最大药效后其镇痛效果下降速度快,各FMSSD组镇痛效果下降平缓,体现了缓释镇痛的优越性。同时FMSSD随着给药剂量的增加,小鼠痛阈提高率、扭体抑制率也逐渐增加,说明FMSSD的镇痛效果与剂量成正比,剂量越大,镇痛效果越明显。
[硕士论文] 徐洋
药学 江苏大学 2017(学位年度)
摘要:高良姜或“ Kha”,作为姜科植物的干燥根茎,具有温胃散寒,消食止痛等作用,是一种具有辛辣味的芳香根茎。有两种不同的高良姜:一种是小姜,是原产于中国的多年生草本植物(高良姜),有白玫瑰的锥体状花序;另一种是较大的姜科,一个无茎的多年生植物亚洲东南部草本。其已作为香料用在传统食品中,这种姜科植物,富含黄酮和酚酸类等酚类化合物。近年来对高良姜的生物活性进行了深入研究,据报道,其具有抗癌、抗细菌、杀虫、抗溃疡、抗真菌等生物活性。在许多国家高良姜现已经成为比较便宜易得的药材,且已经被广泛应用于驱风、健胃、解痉、镇痛、抗炎、抗菌药物等医疗目的。
  高良姜素作为高良姜醇提物中主要活性物质,具有某些药理活性;本实验研究表明,高良姜的醇提物及高良姜素具有降尿酸、抗痛风性关节炎的作用,但由于其在体外的水溶性较差,导致在机体内的生物利用度低,所以在临床上治疗疾病时应用会受到限制。本课题以颗粒剂为研究对象,增加水难溶性药物高良姜素的溶解度,促进其在体内外的溶解性;所以全文主要分为以下五个部分:
  第一章综述
  本部分主要针对痛风的危害,高良姜的基本理化性质、药理活性,抗痛风制剂以及颗粒剂的研究进展进行综述,并阐述了颗粒剂在治疗痛风中的应用概况,为本课题后续开展的药动、药效学及制剂学研究奠定理论基础。
  第二章高良姜提取工艺的研究
  据文献报道,高良姜醇提物中的高良姜素为高良姜中主要活性成分;所以本章首先对高良姜进行水提和醇提,再通过单因素及正交试验法,以高良姜素为检测指标,筛选出高良姜的最佳提取工艺;本章还通过紫外全波长扫描,确定了高良姜素的检测波长,建立了高良姜素的体外高效液相色谱(HPLC)测定法并进行高良姜素的方法学验证。
  第三章高良姜有效部位的分离纯化
  本章实验考察了不同型号的大孔吸附树脂对高良姜素的吸附以及解附能力,从而筛选出合适型号的大孔吸附树脂;确定能够高效分离纯化高良姜素的方法以简便、快捷、高效的方法从高良姜醇提初提物中分离纯化出高良姜素。
  第四章高良姜的提取物的降尿酸作用研究
  本章实验建立高良姜素HPLC体内分析方法,通过建立降尿酸模型确定大鼠取血时间为造模后3h即尿酸浓度最高时;分别对对照组给秋水仙碱,实验组分别给一定剂量的高良姜水提物以及醇提物,实验结果表明高良姜醇提物的降尿酸作用显著高于高良姜水提物,说明高良姜的醇提物是高良姜降尿酸作用的主要活性部位。考察并确定了高良姜醇提物降尿酸作用的高、中、低剂量,说明高良姜醇提物降尿酸时具有一定的剂量依赖性;在此基础上还检测了高良姜素的降尿酸作用,与高良姜醇提物的高剂量相比两组数据无显著性差异,说明高良姜素是高良姜醇提物中降尿酸的主要活性成分。
  第五章高良姜提取物的抗痛风性关节炎研究
  本章实验通过对大鼠的足踝关节注射一定剂量的尿酸钠,致关节肿胀,建立痛风性关节炎模型,造模后1h后分别给药高良姜素、高良姜醇提高、中、低剂量,并通过游标卡尺测量造模前后及给药后各组大鼠足踝关节处的周长,计算足踝关节的肿胀度;通过大鼠眼眶取全血并用适当的方法处理后,用试剂盒方法检测大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α和COX-2相关炎症因子的浓度,证明高良姜素与高良姜醇提物具有抗痛风性关节炎的。
  第六章高良姜速溶颗粒的制备及体内外评价
  本章实验通过湿法制粒将高良姜醇提物与辅料以一定比例混合后,并且采用正交设计筛选出高良姜颗粒剂的最佳处方。最后,从圆整度、收率、吸湿性及装量差异等方面对高良姜颗粒剂进行了体外质量评价,并且验证高良姜颗粒剂的降尿酸作用。
[硕士论文] 阮秀清
药学 江苏大学 2017(学位年度)
摘要:苯妥英钠(Phenytoinum Natricum,PN)为广谱抗癫痫药,癫痫大发作首选药物,副作用小,临床应用广泛。国内现有的上市剂型有普通片和注射剂,此外,美国药典中收载的剂型还有苯妥英钠缓释胶囊。口服给药时,PN主要通过小肠吸收,且个体吸收差异性较大;其有效血药浓度范围为10~20 mg/L,当浓度超过20 mg/L时易产生毒性反应;PN的体内半衰期较长,一般为7~42小时,患者需逐渐增加服药的剂量,待血药浓度达到稳态时,再使用维持剂量;此外,当癫痫发作频繁时还应根据病情调整服药剂量;因此有必要制备出具有一定的缓释效果又便于分取剂量的PN药物制剂。针对以上现状,本课题以PN为模型药物,以阴离子交换树脂作为药物载体,围绕缓释混悬剂的制备工艺及体内外释药进行了系统的研究,主要可分为以下五个部分:
  一、PN药物树脂的制备
  参考美国药典关于PN的体外测定方法,对PN及各辅料进行紫外全波长扫描,最终选择的紫外检测波长为258 nm,同时建立了PN在不同溶液中的体外分析方法。通过对静态法载药和动态法载药过程的各影响因素进行考察,对比实验结果,最终选用静态法制备载药树脂,并确立了最佳的载药工艺。对PN树脂制备的动力学和热力学进行研究表明,PN与阴离子树脂的离子交换反应符合一级动力学模型,该过程为吸热过程,且反应可自发向右进行。
  二、PN树脂的结合机制与体外释放
  通过SEM、XRD、DSC等方法的分析和验证,结果表明PN与树脂是通过离子交换反应所进行的化学结合。参考美国药典及相关文献,本课题选择在转速为50 rpm,温度为37.0℃±0.5℃条件下,以900 mL0.15 mol/L NaCl溶液作为标准释放介质进行体外溶出实验。并考察了溶出过程中的各实验条件对释放行为的影响。对PN树脂的释药动力学行为进行数学拟合,结果表明PN树脂的体外释放属于粒扩散过程。
  三、PN树脂的包衣工艺及处方研究
  为避免因树脂的溶胀而造成药物的突释,首先对载药树脂进行浸渍处理,再采用乳化溶剂挥干法进行包衣制备成缓释微囊;此外,对包衣过程中的各处方及工艺因素的影响进行考察;同时利用正交设计优化处方,最终确定以RL100作为包衣材料,用量为PN树脂的10%,另外,增塑剂PEG400的用量为囊材用量为的10%,在35℃条件下包衣4.5 h,最终制备出具有明显缓释效果的树脂微囊。对数据进行分析表明,PN微囊的释药行为遵循一级动力学过程,即以膜控为主,离子交换控释为辅。
  四、PN缓释混悬剂的制备
  以混悬剂的沉降体积比和再分散性作为考察指标,最终筛选出能使混悬液具有较好物理稳定性和化学稳定性的处方组成。对PN树脂微囊及自制混悬液的体外释放行为进行对比分析,结果表明混悬介质基本不影响药物的释放。此外,对最终处方进行稳定性试验考察,结果显示自制PN缓释混悬剂的稳定性良好。
  五、PN缓释混悬剂大鼠体内药物动力学研究
  本章以SD大鼠作为动物模型并建立了PN的体内液相分析方法。用PN普通片及自制混悬液对大鼠进行灌胃给药,并采用非房室模型对两者的药物动力学参数进行研究;由药时曲线可知普通片和自制混悬液的Cmax分别为24.97和16.22μg·mL-1,Tmax分别为4h和6 h;自制样品的Tmax具有一定的延后,Cmax则降低较多,表明自制PN混悬液可有效减缓血药浓度的波动幅度;降低了患者服药的风险。此外PN普通片与PN缓释混悬剂的AUC0-24分别为181.165μg·h·mL-1和172.176μg·h·mL-1,两者的的相对生物利用率为95.04%。
[硕士论文] 孙从永
药学 江苏大学 2017(学位年度)
摘要:睡眠是人体重要的生理功能,高质量而充足的睡眠可以有效恢复人体机能。睡眠由中枢神经系统发生并受之调控,同时也受机体与外界多种因素影响。随着现代社会压力的不断增加,失眠现象普遍发生,失眠发病率逐年提高,严重影响着人们的工作生活。西医药物治疗主要为镇静催眠药,存在较大的副作用,如安全性低、依赖性、成瘾性和戒断性等,因而其应用受到限制。近年来研究发现,许多天然药物(中药组方、中药提取物、中药活性成分及天然活性单体)具有良好的镇静催眠作用,而且副作用小,具有良好的开发研究价值。因此,本课题从传统中药中探寻具有改善睡眠作用的活性物质,并对活性成分的纳米制剂进行研究。
  第一章综述
  本章对天然药物治疗失眠的研究现状进行综述,重点总结分析了近10年来天然来源的镇静催眠单体及其作用机制的研究进展,展望了镇静催眠中药单体的研究新方向。随着天然产物研究的不断深入,从天然产物中寻找天然助眠活性成分将成为今后失眠研究的重要方向。
  第二章助眠天然药物 JD-XM1提取工艺及活性部位药效研究
  本章以药效跟踪法,从天然药物 JD-XM1中筛选镇静催眠活性部位,并对活性部位药效进行评价。单因素法筛选 JD-XM1的提取工艺,优选提取工艺为:乙醇浓度70%、提取温度90℃、提取时间2 h、液固比12:1。JD-XM1提取物依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯及正丁醇萃取,以阈剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠试验评价各极性部位药效,与空白组相比,正丁醇组部位能够显著缩短睡眠潜伏期(182.7±7.6 vs227.7±29.7 s,P<0.01),延长睡眠时间(5518.7±1558.3 vs2265.8±606.0 s,P<0.01)。小鼠自主活动试验和 PCPA致小鼠失眠模型评价 JD-XM1正丁醇部位药效,结果表明,正丁醇部位能够显著减少活动距离(P<0.01)和活动时间(P<0.05),且呈现剂量相关性。正丁醇部位可恢复PCPA导致的小鼠失眠行为,与模型组相比,正丁醇部位(300 mg/kg)可缩短戊巴比妥钠诱导的睡眠潜伏期,延长睡眠时间(P<0.01)。
  第三章 JD-XM1助眠活性成分的筛选及其结构分析研究
  本章采用活性跟踪法,从 JD-XM1的正丁醇活性部位中,系统分离纯化具有镇静催眠作用的活性单体,并进行结构解析。采用硅胶层析柱对 JD-XM1正丁醇活性部位进行分离纯化,得到多种流分。阈剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠试验筛选,发现 Fr6流分(二氯甲烷:甲醇=2:1)能够缩短戊巴比妥钠诱导的睡眠潜伏期,延长睡眠时间。C18柱对 Fr6继续纯化,得到白色粉末 Compound A,通过 NMR和 MS进行结构鉴定,为3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸(丁香酸)。镇静催眠药效实验显示,高剂量丁香酸(200 mg/kg)能够显著延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间(P<0.01),缩短睡眠潜伏期(P<0.05),并呈现剂量相关性。
  第四章丁香酸脂质体的制备及其体外评价
  针对本文筛选出来的 JD-XM1活性成分丁香酸,本章建立了 HPLC丁香酸的体外分析方法,并进行了方法学考察。结果表明,建立的体外分析方法,系统适用性好,制剂辅料对分析无干扰;在0.5-100μg/mL范围内线性关系良好;48 h内稳定性良好;方法日内/日间精密度高(RSD<2%);方法回收率高,可用于丁香酸的定量分析。平衡溶解度实验表明,丁香酸在各种介质中的溶解度均较低,在 pH7.4磷酸缓冲液中的溶解度最大,但仅为78.82±4.68μg/mL,而在水和 pH1.2盐酸溶液中的溶解度接近,分别为66.05±2.65μg/mL和66.86±2.19μg/mL,表明丁香酸的溶解度较差。此外,油水分配系数测定表明,丁香酸log P为1.31,表明丁香酸口服后不易在胃肠道内吸收。以薄膜分散法制备丁香酸脂质体,单因素法筛选处方,优选处方为丁香酸100 mg,大豆磷脂1200 mg,胆固醇200 mg,胆酸钠800 mg,肉豆蔻酸异丙酯800 mg,水化介质为20 mL的PBS(pH7.4),制得的丁香酸脂质体澄清,包封率高(82.20±2.30%)。体外表征表明,制备的丁香酸脂质体呈类球形,分布均匀,平均粒径为154.67±7.09 nm,粒径分布较窄,分散性系数(PDI)为0.14±0.04,Zeta电位为-27.61±3.65 mV。稳定性试验表明,丁香酸脂质体15天稳定性良好,未出现明显的絮凝或浑浊现象,且包封率未有明显变化。
  第五章丁香酸脂质体大鼠体内药动学及小鼠组织分布研究
  本章以 HPLC建立了测定大鼠血浆及小鼠组织中丁香酸含量的体内分析方法,并进行了方法学考察。在不同生物样品中,线性均良好(r2>0.99),日内、日间精密度均小于5%,样品回收率良好,符合体内药物检测的方法学要求。丁香酸脂质体的大鼠药动学研究表明,丁香酸脂质体可以提高口服生物利用度。与丁香酸原料药相比,丁香酸脂质体提高了 Cmax,给药95 min之后的血药浓度均高于原料药(1.81±0.94 vs0.12±0.03μg/mL),表明脂质体能够增加药物吸收,且延缓了丁香酸在体内的消除;t1/2显著延长(116.67±14.40 vs25.36±1.99 min),平均滞留时间显著延长(286.27±18.32 vs37.98±1.02 min),说明脂质体能够延长丁香酸在体循环时间;丁香酸脂质体显著提高了口服生物利用度,药时曲线下面积AUC0-360min显著提高,为原料药的237.30%。丁香酸脂质体的小鼠组织分布研究表明,丁香酸原料药在血浆中的浓度随着时间的延长快速下降,而脂质体在0.5 h和2 h的血药浓度均显著高于原料药,说明脂质体能够减缓药物消除过程,延长药物在体时间;丁香酸及丁香酸脂质体在各组织器官中药物浓度大小依次为:肾>肝>肺>脾>心>脑,均趋向于向肾、肝分布;脑部能够检测到丁香酸,说明丁香酸能够透过血脑屏障(BBB),脂质体可减缓药物在脑部的消除,延长药物在脑部的滞留时间,以发挥镇静催眠作用。
[硕士论文] 刘丹
药学 江苏大学 2017(学位年度)
摘要:枸橼酸喷托维林(Pentoxyverine Citrate)属于非依赖性中枢镇咳药,临床上多用于上呼吸道感染引起的咳嗽和百日咳,其镇咳效果大约相当于可待因的1/3,但无成瘾性,有轻度的阿托品样和局麻作用,对儿童患者的疗效优于成人。盐酸溴己新(Bromine Hydrochloride)适合各种支气管炎、支气管哮喘、肺气肿、支气管扩张等有黏痰而不易咳出的患者,对白色黏痰效果优于其他痰液症状。目前国内针对儿童的剂型不足药物总量的十分之一,专门用于儿童的止咳祛痰类药物数量有限。针对当前呼吸系统疾病发病率越来越高的现状,本课题以枸橼酸喷托维林、盐酸溴己新为模型药物,制备出适合儿童服用的缓释混悬液。
  一、PC/BH药物树脂的制备
  本章建立了PC/BH体外分析方法,对分析方法的精密度、稳定性、回收率进行考察,均符合要求。考察了PC/BH的平衡溶解度、油水分配系数。测定了BH的pH溶解度曲线。考察了树脂类型、药物浓度、温度对静态载药的影响。确定了PC药物树脂的制备工艺为:200 mL浓度为3.0 mg·mL-1的PC溶液,500 mg Amberlite? IRP69,温度为25℃±0.5℃,载药平衡时间为2.5 h。BH药物树脂的制备工艺为:200 mL浓度为0.4 mg·mL-1的BH溶液,80 mg Amberlite? IRP69,载药温度为25℃±0.5℃,平衡时间3 h。静态载药动力学和热力学表明PC/BH载药过程均属于一级模型,药物树脂制备过程为吸热反应。
  二、PC/BH树脂的结合机制与体外释放
  本章通过SEM、DSC、XRD等分析方法确定PC/BH与Amberlite? IRP69是以共价键进行化学结合,而非简单的物理吸附。采用f2相似因子分析法,考察了温度、介质体积、转速、离子强度和种类等因素对PC/BH药物树脂体外释放的影响。分别对PC/BH释放机制进行研究,通过Viswanathan方程拟合PC/BH树脂释放过程,结果表明 PC/BH药物树脂释放过程受到粒扩散控制。
  三、PC/BH树脂的包衣工艺及处方研究
  本章采用流化床包衣法以EC为包衣材料,乙醇为溶剂,制备了PC/BH包衣微囊。通过单因素方法考察了风量、包衣温度、包衣液流速对PC/BH微囊释放的影响,优化了包衣工艺。在此条件下,考察了包衣材料种类、包衣液浓度、药物树脂与EC的质量比、增塑剂浓度对微囊释放的影响。进一步采用正交设计优化处方,制备出具有明显缓释效果的包衣微囊。确定了PC最佳包衣处方:EC浓度为5.5%,药物树脂与EC的质量比为6:1,增塑剂用量为EC的14%。BH最佳包衣处方:EC浓度为4%,药物树脂与EC的质量比为7:1,增塑剂用量为EC的8%。考察了缓释微囊的形态、密度、粒径、含药量和释放曲线。结果表明,微囊缓释效果及重现性良好。PC/BH缓释微囊释放行为符合一级动力学,释药机制为膜控为主,粒扩散为辅。
  四、PC/BH缓释混悬液的制备
  本章测定了微囊和助悬剂的相关性质,以沉降体积比和再分散性为指标筛选助悬剂,确定助悬剂为黄原胶。考察了温度、pH、加热时间对其黏度的影响。并筛选填充剂、润湿剂,确定了最佳处方:蔗糖1.0 g、黄原胶0.8 g、丙二醇1 mL加水至100 mL,其沉降体积比为0.99。考察了PC/BH缓释混悬液的体外释放行为和稳定性。结果表明,混悬剂的释放与微囊相比,整体释放行为相似,PC/BH f2因子均大于70,且PC/BH相互之间无释放干扰。稳定性实验结果表明,其性状、药物含量和泄漏量、再分散性、沉降体积比和释放情况在放置规定时间均符合要求,说明稳定性良好。
  五、PC/BH缓释混悬液大鼠体内药物动力学研究
  本章建立了PC/BH的SD大鼠体内分析方法,考察了方法的专属性、稳定性、精密度、提取回收率、方法回收率,结果表明均符合要求。分别给予大鼠一定剂量的PC/BH缓释混悬液和普通片,研究给药后的药时浓度曲线和相关参数,对两者的相对生物利用度进行评价。由药动学参数可以看出,PC普通片和缓释混悬液的Cmax分别为659.134和403.660 ng·mL-1,Tmax分别为2 h和6 h。t1/2分别为2.841 h和4.024 h,AUC0-24分别为4180.703 ng·h·mL-1和3975.431 ng·h·mL-1。BH普通片和缓释混悬液的Cmax分别为462.648和322.104 ng·mL-1,Tmax分别为1 h和4 h,t1/2分别为4.251 h和8.222 h,AUC0-24分别为3518.678 ng·h·mL-1和3325.089 ng·h·mL-1。说明PC/BH混悬剂可降低血药浓度峰值,延长药物作用时间。PC/BH缓释混悬液相对普通片的相对生物利用度分别为95.09%和94.50%。
[硕士论文] 孙桐
药剂学 青岛科技大学 2017(学位年度)
摘要:骨关节是发生在人体关节及其周围组织的炎性疾病,临床表现为关节的红、肿、热、痛、功能障碍及关节畸形。糖皮质激素抗炎药通过抑制巨噬细胞和白细胞等炎症细胞在炎症部位的集聚,从而抑制吞噬作用、溶酶体酶的释放以及炎症介质的合成和释放,以减轻炎症的表现。中长效糖皮质激素地塞米松是治疗骨关节炎疗效较好的药,因此选择其作为治疗骨关节炎凝胶剂的主药。
  1.本研究以β-环糊精(β-CD)装载地塞米松,形成增加药物缓释效果的微胶囊剂型,通过紫外光谱分析法,硫酸显色荧光光谱分析法和热重分析法对微胶囊形成进行了验证。以单因素考察和正交试验进行了制备条件的优化,得到的微胶囊的药物包载率达到93.6%。以壳聚糖和β-甘油磷酸钠(β-GP)结合制备温敏凝胶,将上述制备的微胶囊载入温敏凝胶中,形成微胶囊-温敏凝胶复合体系,通过单因素考察优化制备条件,得到最优方案的微胶囊-温敏凝胶复合体系,发生凝胶化的时间为5min,凝胶化的温度为35℃。
  2.在释放介质去离子水、生理盐水、pH=5.8的PBS和pH=7.4的PBS中,对微胶囊的释放行为进行研究,结果表明地塞米松微胶囊在释放介质生理盐水、pH=5.8的PBS和pH=7.4的PBS中均是18h释放完全,具有一定的缓释作用,可以起到对地塞米松初步的缓释效果。将微胶囊在各个释放介质中的释放曲线进行模型拟合,拟合结果符合药典中缓释剂型规定的1级释放方程,拟合度在0.99左右。对微胶囊-温敏凝胶复合体系的释放行为进行研究,结果表明地塞米松微胶囊-温敏凝胶复合体系在释放介质去离子水、生理盐水、pH=5.8的PBS和pH=7.4的PBS中分别是96h释放90%以上,与微胶囊相比,微胶囊-温敏凝胶复合体系在以上释放介质中的缓释效果较好。将微胶囊-温敏凝胶复合体系在各个释放介质中的释放曲线进行模型拟合,拟合结果符合药典中缓释剂型规定的1级释放方程,拟合度在0.9以上。
  3.地塞米松微胶囊-温敏凝胶复合体系需直接注入关节腔中发挥作用,且具有特殊的温敏特性,所以需要选择合适的灭菌方式。本文对紫外灭菌、臭氧灭菌、电子束辐照灭菌的微胶囊-温敏凝胶复合体系分别进行了无菌检查和无菌检查的验证,对样品进行定性和定量两方面的评价,结果表明电子束辐照灭菌可以保证微胶囊-温敏凝胶复合体系处于无菌状态。
  4.用一定比例的胰酶和II型胶原酶消化大鼠乳鼠的关节软骨,进行原代软骨细胞的培养,观察软骨细胞原代培养和传代培养后的细胞的生长趋势。对高、中、低剂量微胶囊-温敏凝胶复合体系的生物相容性,关节腔给药、全身给药剂量微胶囊-温敏凝胶复合体系的生物相容性进行评价,结果显示微胶囊-温敏凝胶复合体系的生物相容性良好。
[硕士论文] 李文芳
药剂学 青岛科技大学 2017(学位年度)
摘要:本课题以暗黑鳃金龟性信息素L-异亮氨酸甲酯盐酸盐和芳樟醇,及对其有增效作用的植物源挥发物乙酸顺式-3-己烯酯和乙酸反式-2-己烯酯为目标药物,进行气体增效缓释凝胶剂的制备和工艺优化,并制定了四种增效缓释凝胶剂的质量标准体系草案,具体分为五部分。
  第一部考察了暗黑鳃金龟性信息素的吸湿性和挥发性,确定其有较强的吸湿性和挥发性,具有制备气体缓释凝胶剂的可行性。并以暗黑鳃金龟性信息素主药复合成分1为代表确定了所用凝胶基质为羧甲基纤维素钠、溶剂为无水乙醇,并确定了其比例范围和药物比例范围。
  第二部分为暗黑鳃金龟性信息素增效缓释凝胶剂的处方和工艺优化,以药物残余量为指标,采用正交实验法筛选出最优处方,结果表明四种暗黑鳃金龟性信息素增效缓释凝胶剂30d内缓释效果良好。采用红外色谱法对所制备的缓释凝胶剂进行结构表征,表明所用辅料不影响药物的化学结构。
  第三部分将四种暗黑鳃金龟性信息素增效缓释凝胶剂在自然环境中的释放数据与6种释药模型(零级、一级、 Higuchi、Ritger-Peppas、Baker-Lonsdale和Hixon-Crowell模型)相拟合,表明四种暗黑鳃金龟性信息素增效缓释凝胶剂中活性成分的释放分别符合Baker-Lonsdale、Hixon-Crowell、Hixon-Crowell和一级模型,释药机制以扩散为主,溶蚀为辅。
  第四部分建立了暗黑鳃金龟性信息素增效缓释凝胶剂的质量标准检测体系,参照《中国药典》2015版制剂质量标准的内容,对四种增效缓释凝胶剂的性状、鉴别、酸碱度、粘度、粒度等项目进行了考察,采用紫外分光光度法和气相色谱法对活性成分进行含量分析方法的建立,方法学考察结果表明,两种方法操作简单准确,精密度、稳定性和回收率均良好,紫外分光光度法适用于工业化生产,气相色谱法适用于精密分析。
  第五部分对所制备暗黑鳃金龟性信息素增效缓释凝胶剂进行了稳定性研究,结果表明,四种增效缓释凝胶剂的影响因素、加速和长期试验中,四种增效缓释凝胶剂的外观形状、pH值、含量等指标均无显著变化,低温条件下保存9个月性质稳定。
  综上所述,本课题成功研制的四种暗黑鳃金龟性信息素增效缓释凝胶剂,外观均匀细腻,性质稳定,pH值、粒度等均符合药典要求,分析方法简便准确,适用于工业化生产。
[硕士论文] 赵乐乐
药学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:右旋布洛芬(Dexibufropen,S(+)-IBU)属于有机酸类化合物,是一种临床上普遍使用的解热镇痛抗炎药,主要用于缓解类风湿关节炎,也可用于头痛、牙痛、痛经及感冒发热等。由于其半衰期短,维持血药浓度需频繁给药,长期应用易发生胃肠道溃疡和出血。本课题利用蒙脱土(montmorillonite,MMT)作为药物载体与S(+)-IBU制成12小时缓释干混悬剂,从而减少用药次数,提高患者顺应性。
  目的:
  利用MMT作为药物载体和S(+)-IBU制成S(+)-IBU/MMT缓释干混悬剂,考察其体外释放影响并分析释放特性。利用星点设计效应面法优化酸改性MMT条件,制备载药量更高、释药性适宜的S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂,同时考察其体外释放影响并分析释放机制。通过口服灌胃给予大鼠S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂,以市售S(+)-IBU混悬液为参比制剂,研究其在大鼠体内的生物利用度和药物代谢动力学特征。
  方法:
  1.处方前研究工作
  根据2015年版中国药典配制不同pH的释放介质,利用紫外分光光度法确定S(+)-IBU的最大吸收波长并测定其在不同释放介质的稳定性和平衡溶解度。
  2. S(+)-IBU/MMT缓释干混悬剂的制备及体外释放研究
  采用溶液插层法制备S(+)-IBU/MMT干混悬剂;并利用XRD和FTIR进行表征。并考察其体外释放特性,以零级动力学方程、一级动力学方程、Higuchi方程和Peppas方程拟合释放曲线,推测其释放机制。
  3. S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂的制备及体外释放研究
  筛选最适合改性MMT的无机酸;利用单因素结合星点设计效应面法优化酸改性酸化条件,以期制备负载量更高的S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂,并利用XRD、SEM对复合物进行表征。采用透析法研究介质的pH对S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬的影响,拟合释放曲线研究释放机制。
  4. S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂在大鼠体内药物动力学研究
  以市售S(+)-IBU混悬液为参比制剂,自制S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂为受试制剂,经口服灌胃,按剂量60 mg/kg分别给予大鼠参比制剂和受试制剂,测定其不同时间的血药浓度,绘制药-时曲线,并用DAS2.0药代动力学软件程序采用非隔室模型分析数据。
  结果:
  1.处方前研究工作
  S(+)-IBU在264 nm有最大吸收。初步理化性质,研究结果表明,平衡溶解度的顺序为:pH6.8磷酸缓冲液(4.28 mg/ml)>pH4.5醋酸缓冲液(0.22mg/ml)>0.1mol/L HCl(0.084 mg/ml),并且在各种介质中稳定性良好。
  2. S(+)-IBU/MMT缓释干混悬剂的制备及体外释放研究
  通过XRD和FTIR对S(+)-IBU/MMT缓释干混悬剂表征,从XRD图可知,2θ角从7.07o减少到6.72o,MMT层间距由原来1.25 nm增大到1.31 nm。从FTIR可知, S(+)-IBU/MMT的红外光谱上既有MMT和S(+)-IBU的共同特征吸收峰,也出现一些新的吸收峰,如在2390 cm-1处;同时3623cm-1、3425 cm-1、1030 cm-1处峰强度减弱。S(+)-IBU/MMT复合物的体外释放受pH影响较大,12h累积释放百分量大小为:pH6.8磷酸盐缓冲液(88%)>pH4.5醋酸盐缓冲液(36%)>pH1.0稀盐酸(18%),其释放动力学符合一级动力学过程。
  3. S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂的制备及体外释放研究
  采用硫酸改性MMT,随着硫酸浓度增大其板层结构被逐渐剥离;采用磷酸改性MMT,样品在室温下有很大吸水性,不便后续试验;采用盐酸板层结构保持完整且比表面积大;综合分析,盐酸最适合作为本实验的改性酸。星点设计最后确定的酸化条件为:盐酸浓度11%,处理时间5.5 h,温度55℃,在酸处理条件下,制备的Acid-MMT比表面积可达318.8 m2/g,孔容0.498 cm2/g。S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂体外释放受pH影响较大,12 h时pH6.8磷酸盐缓冲液中的累积释放百分量(92%)>pH1.0稀盐酸(33%)。
  4. S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂在大鼠体内药代动力学研究
  大鼠经口服给药后,测定在不同时间血浆中的S(+)-IBU浓度,应用DAS2.0药物代谢动力学分析软件处理实验数据,结果显示,市售 S(+)-IBU混悬液和自制S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂的t1/2分别为2.36±0.05 h、5.58±0.55 h;Cmax分别为123.5±41.74μg/ml、86.05±5.96μg/ml;tmax分别为0.5 h、2±0.20 h;AUC0-24分别为439.88±84.41μg/ml·h、644.49±73.26μg/ml·h;相对生物利用度为154.11%±27.41%。通过t检验进行统计分析,两种制剂药动学参数具有统计学差异(P<0.05)。
  结论:
  1. S(+)-IBU平衡溶解度随介质pH增大而增大;在不同pH释放介质中24 h内稳定。
  2. S(+)-IBU分子通过插层、物理和化学吸附方式进入MMT基层间和表面形成了稳定的药物缓释系统。S(+)-IBU/MMT缓释干混悬剂的释放有一定的pH依赖性,体外释药特征符合一级动力学模型,根据Peppas方程(释放指数n=0.41),释药机制为药物扩散。
  3.盐酸化后的MMT比表面积、孔容增大,S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂释放有一定的pH依赖性,体外释药特征符合Higuchi模型,释药机制为药物扩散与骨架溶蚀同时进行。体外释药行为更符合Higuchi模型,根据Peppas方程(释放指数n=0.86),释放机制为不规则转运。
  4. S(+)-IBU/Acid-MMT缓释干混悬剂 Cmax比市售的 S(+)-IBU混悬液小,而AUC0-24、tmax大、t1/2长,具有一定的缓释效果。
[硕士论文] 贾爱宇
药剂学 江苏大学 2017(学位年度)
摘要:蛋白多肽类药物具有分子量大、理化性质不稳定等特点,其高级结构易遭到破坏从而造成药物失活。此外,突释量较高、包封率差、药物累积释放量低也成为微球制剂研究的难点。静电纺丝工艺的制备过程在无水条件下进行,对蛋白药物的包封率较高,并且在低温下作业,没有添加表面活性剂和乳化剂,对制备过程中蛋白类药物的活性有极好的保护作用。纳米生物活性玻璃的碱性降解产物碳酸羟基磷灰石可对释放过程中微球内部的低pH值起到同步中和作用,从而可同步提PLGA微球储存和释放过程中蛋白类药物的活性。
  一、综述
  从高分子材料PLGA的研究进展、重组人干扰素的研究进展、微球制备技术的研究进展、静电纺丝技术在医药领域的应用、生物活性玻璃的研究进展等6个方面进行了综述。
  二、静电喷雾法制备干扰素微球及其处方工艺考察
  本章首先建立了重组人干扰素α-2b PLGA微球的体外释药量、包封率、载药量、粒径、活性的测定方法,并对方法学进行了考察。其次,通过单因素实验考察电压、溶液流速、接收距离、溶液浓度、PLGA分子量、BG加入量等因素对微球形态、载药量、包封率、干扰素活性等的影响。确定了制备PLGA微球的最佳静电纺丝工艺和处方为:电压控制在10~15 kV,PLGA溶液浓度为8%,注射泵流速为0.5 mL/h,接收距离为10~15 cm,PLGA分子量为30000,LA/GA比例为75/25,BG加入量为50 mg。
  三、重组人干扰素微球的质量评价及其稳定性考察
  本章使用优化得到的处方工艺分别制备了重组人干扰素α-2b PLGA微球及PLGA-BG微球,并通过粒径分布、药物累积释放量及活性变化等理化指标对两种微球的差异性进行了比较。结果表明,重组人干扰素α-2b PLGA微球及PLGA-BG微球圆整度良好,且没有黏连现象,粒径分布较均一,包封率、载药量分别为无明显差别。在体外降解实验发现,重组人干扰素α-2b PLGA-BG微球释放介质的pH在整个释放周期相对较为稳定,因而其重组人干扰素α-2b活性保持率较高,而PLGA微球释放介质pH下降较多,导致重组人干扰素α-2b活性相比下降比较快。说明BG的加入能改善微球的外环境从而使蛋白类药物保持较高的活性。且重组人干扰素α-2b PLGA累积释放率(82%)也明显高于重组人干扰素α-2b PLGA微球的累计释放量(76%),其主要原因是,由于加入BG使得PLGA微球的释药机理发生改变。最后,通过长期试验和加速试验考察了重组人干扰素α-2b PLGA-BG微球的稳定性。
  四、干扰素微球体内药动学及药效学研究
  本章首先建立了大鼠血浆重组人干扰素α-2b的酶联免疫测定法,并对该方法进行了考察。结果显示,其标准曲线方程为lg(OD)=lg(C)1.0625-2.2576精密度和回收率符合要求。进行了大鼠体内药动学研究,肌内注射给予大鼠重组人干扰素粉针、重组人干扰素α-2b PLGA微球混悬液、重组人干扰素α-2b PLGA-BG微球混悬液。实验结果显示,大鼠肌内注射重组人干扰素粉针后,Tmax为1.5h,Cmax为15390 pg/ml,血药浓度浓度可以维持48 h。PLGA微球组Tmax在8 h左右,明显高于粉针组的1.5 h。同时,血药浓度可以维持408 h,远远大于粉针组的12 h,说明微球有着明显的缓释作用。PLGA-BG微球组的Tmax也维持12 h左右,但Cmax小于微球组,血浓度可以维持552 h,明显大于微球组的408 h,说明其缓释效果比微球组更好。最后进行了重组人干扰素PLGA微球对人肾细胞癌裸鼠移植瘤生长抑制实验。比较了重组人干扰素α-2b粉针、重组人干扰素α-2b PLGA微球混悬液、重组人干扰素α-2b PLGA-BG微球混悬液3组制剂的抑瘤效果,证明了PLGA微球组和PLGA-BG微球组均有抑瘤效果, PLGA-BG微球的抑瘤效果相对显著。
[硕士论文] 陈璐
药剂学 青岛科技大学 2017(学位年度)
摘要:南极冰藻DNA光修复酶是从南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L体内发现的一种酶类,它可以修复紫外线损伤的DNA使其恢复正常空间结构。本文以从南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L体内发现的 DNA光修复酶为目标药物,制备以脂质体形式的冻干制剂,从而使其发挥日用防晒品的作用。
  1.进行了南极冰藻DNA光修复酶的提取、分离和纯化工艺的研究。研究表明,得到有效剂量蛋白的工艺条件为DNA光修复酶工程菌5000rpm离心20min,冰浴中超声破碎20min。对诱导表达和纯化后的蛋白进行SDS-PAGE检测,在66KDa附近有目的蛋白条带。加入甘露醇对DNA光修复酶的活性有保护作用。
  2.对南极冰藻DNA光修复酶脂质体制备工艺进行了探讨。结果表明,以逆向蒸发法为脂质体的制备方法,固态大豆卵磷脂和胆固醇为膜材,氯仿-乙醚的混合溶剂为有机相。以包封率(%)为指标,经单因素考察和正交试验确定了脂质体的制备工艺的最佳处方:膜材比为3:1,油相与水相比为4:1,药脂比为1:10,超声时间6min,水化温度为30℃,按最优处方制得的脂质体包封率为44.13±2.90%。
  3.探讨了脂质体的冻干工艺,以外观形态、包封率、粒径、再分散性为指标,得到最佳制备工艺条件:脂质体在-80℃预冻12h,真空冷冻干燥24h,海藻糖为冻干保护剂,所制得的冻干脂质体包封率为42.89±1.44%。冻干脂质体在4℃保存30d后粒径和包封率无明显变化且酶活稳定。
  4.建立以脂质体的外观形态、包封率、粒径和Zeta电位为指标的质量标准检测体系。所得DNA光修复酶脂质体形态呈圆形或椭圆形球体,脂质体及其冻干制剂粒径为490.9±2.3nm和591.3±1.6nm,Zeta电位在-30mV~-60mV。采用紫外分析法对脂质体制剂进行含量测定,方法学考察表明紫外分析法专属性、精密度、稳定性和重复性良好。脂质体冻干制剂的回收率在98%~102%,RSD小于2%,证明该方法准确可靠。
  本课题完成了南极冰藻DNA光修复酶的脂质体冻干制剂的研制,制备方法简便可行,冻干制剂的质量标准符合2015版中国药典要求,为DNA光修复酶在日用防晒中的应用提供了可靠的理论依据。
[硕士论文] 宋小雨
药剂学 青岛科技大学 2017(学位年度)
摘要:褐藻多糖硫酸酯是一类来源于褐藻的海洋硫酸多糖,具有抗凝血与促凝血、抗氧化、抗炎、降血脂、抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等多种药理学活性。目前,以褐藻多糖硫酸酯为主药的上市产品只有海昆肾喜胶囊(国药准字 Z20030052)。该药在临床中主要用于治疗慢性肾功能衰竭及尿毒症。然而该药只有胶囊剂型,不能满足日益增长的临床需求。因此,基于其化学特性开发新型缓释制剂对拓宽该药的临床应用具有重要意义。
  基于上述研究目的,本课题首先对所得褐藻多糖硫酸酯进行基本理化性质表征。通过高效凝胶渗透色谱与多角度激光散射仪联用测定其分子量为2.271×105Da;采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生高效液相色谱法测定其单糖组成摩尔百分比为甘露糖(Man):氨基葡萄糖(GlcN):鼠李糖(Rha):葡萄糖醛酸(GlcA):葡萄糖(Glc):半乳糖(Gal):木糖(Xyl):岩藻糖(Fuc)=0.08:0.02:0.03:0.08:0.04:0.16:0.02:0.56。通过比较粉末直接压片、湿法及熔融法三种不同制粒方法,从片重差异、硬度及脆碎度等方面对所制得的褐藻多糖硫酸酯缓释片进行考察,得出褐藻多糖硫酸酯缓释片的最佳制备方法为湿法制粒。在此基础上,本研究进一步采用正交和响应面设计实验分别对缓释片的处方进行优化,经过优化筛选,最终得出缓释片的最佳工艺处方为:主药褐藻多糖硫酸酯占片重41%,羟丙甲基纤维素(HPMC-K4M)占片重的20%,羧甲基纤维素钠占片重的20%,十八醇占片重的13%,乳糖占片重的5%,硬脂酸镁占片重的1%。
  通过对所得缓释片进行体外释放考察发现,在最优处方条件下,批内释放及批间释放均具有良好的重现性。最优处方制备所得缓释片在2h、6h及12h内平均药物累积释放分别为32%,64%和92%。模拟人工胃液及肠液的体外释放结果表明,褐藻多糖硫酸酯缓释片能够在人工胃液中保持稳定,在小肠液的弱碱性环境中有缓释效果。利用Origin9.1软件对体外释放进行分析,通过研究零级释放、一级释放、Higuchi释放及 Ritger-Peppas释放,发现褐藻多糖硫酸酯缓释片体外释放动力学符合一级释放模型,具有明显的缓释释放特征。进一步释药机理研究发现,褐藻多糖硫酸酯缓释片 Ritger-Peppas释放模型中指数 n=0.6015(0.45  通过对所得缓释片进行外观、性状、鉴别、检查、含量测定及体外释放度研究,我们初步建立了褐藻多糖硫酸酯缓释片的质量标准。制备所得三批不同批号的缓释片外观光滑,内容物为浅褐色粉末,无臭,气微。通过鉴别检查,批内及批间体外释放度均符合《中国药典》2015版要求。上述研究结果为褐藻多糖硫酸酯缓释片的进一步生产提供了理论依据。
  综上所述,本课题对褐藻多糖硫酸酯缓释片的制备工艺方法、辅料的选择对药物释放的影响及缓释片处方优化等三方面进行了系统地研究,成功制备了褐藻多糖硫酸酯缓释片。结果表明,褐藻多糖硫酸酯缓释片体外释放符合一级释放模型,在该模型下,药物释放以Fick扩散和骨架溶蚀释放为主。此外,基于上述研究,本文初步建立了褐藻多糖硫酸酯缓释片的质量标准草案。本研究为褐藻多糖硫酸酯及其它海洋多糖药物的缓释制剂应用开发利用提供了理论依据。
[硕士论文] Mukhtar, Mohammed Yusif
Pharmaceutics 江苏大学 2017(学位年度)
摘要:核小体的赖氨酸侧链经过乙酰化作用翻译修饰后在调节众多不同细胞功能中起到非常重要的作用,包括能量和物质新陈代谢、蛋白质折叠、转录和翻译。由组蛋白乙酰化酶和组蛋白去乙酰化酶催化分别完成的组蛋白赖氨酸侧链乙酰化和去乙酰化的动态平衡与表观遗传控制相关。组蛋白去乙酰化酶大致可以分为依赖NAD+和依赖锌离子的几个亚型I、 II、III和IV。其中I、II、IV是依赖锌离子的去乙酰化酶,而子家族III(即sirtuins)是依赖NAD+的去乙酰化酶。组蛋白去乙酰化酶8(HDAC8)是依赖锌离子的子家族I中的一个成员。由于结构和动力学的特征HDAC8成为这个家族中独特的一个成员,自2000年发现HDAC8以来,对于其激活剂研究报道甚少。同时,一些间接的证据表明HDACs特定亚型的激活在对于促进生理上的代谢过程有着很大的潜在功效。在未来,激活剂在全面探索 HDAC8/HDACs的生理学和药理学作用,以及开发新型治疗代谢衰老和癌症相关疾病上面有着巨大的应用潜能。本研究进行了一下五个方面的工作:(i)我们设计、合成、纯化并且表征了7个新型化合物,并将其与对照物化合物(TM-2-51)同时在HDAC8酶上进行测试,采用含有AMC(即FLUOR DE LYS-HDAC8)物质作为酶活测定的底物和基于HPLC的酶测试系统的方法,定量测量了每个化合物的激活量,以对照物 TM-2-51为参照评估化合物的效能;(ii)此外将这7个化合物同样和对照物以及不含AMC的HDAC8的底物(CH3-CO-FG-K(ac)-FSW-NH2)进行测试,定量比较了与 TM-2-51激活量的差异,从而判断这些新型激活剂是否具有底物特异性;(iii)随后,人体宫颈癌细胞核提取物(含细胞核内HDACs例如 HDAC-1 and-2)和AMC底物采用同样的测试系统进行同种型选择性测试,来测试这些新型激活剂对于HDACs是否具有选择性;(iv)为了进一步确认这些化合物的选择性,我们还采用了不含 AMC的人体宫颈癌细胞核底物CH3-CO-RHKAcKAc-CO-NH2)来代替AMC底物,进行另外一轮的酶测试;(v)选择7个化合物中表现最好的激活剂(即化合物-7)来进一步测试 HDAC-8底物的在有激活剂和无激活剂情况下的 Km值。我们的化合物在的基于 HPLC的酶测试中,无论是使用 AMC底物还是不含 AMC底物(CH3-CO-FG-K(ac)-FSW-NH2)的HDAC8的酶测试中,在损害对照物(仅在前面一个底物存在的情况下激活HDAC8)情况下均表现出激活作用,且在人体宫颈癌细胞核提取物的细胞测试结果中表现为HDAC8的选择性激活剂。然而,在某种程度上来说,对比由 Singh等发现的 N-乙酰硫脲系类的激活剂,我们的化合物来说并不是底物特异性,总的来说化合物7是最好的激活剂。本研究以及前期研究为未来探索更多的HDAC8酶选择性激活剂奠定了良好的基础,有利于今后通过小分子激活剂来更深入详尽的探索其分子学和动力学机制。
[硕士论文] 丁洋洋
药学 江苏大学 2017(学位年度)
摘要:漆黄素具有广泛的药理活性,在抗炎、抗氧化、抗凝血、抗肿瘤、抗血栓和糖尿病肾损伤的治疗等方面具有较好的作用,且来源广泛、价廉易得,对人体的毒副作用小,但是漆黄素存在难溶于水、生物利用度低的缺点,从而限制了其进一步的开发和临床应用。纳米粒制剂可以改善难溶性药物的溶解度,提高药物的物理化学稳定性、生物利用度及靶向性。本研究拟制备壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒,在对其体外释放特性和表征进行研究同时,考察其体外抗肿瘤效果及大鼠体内药代动力学特性,以期提高漆黄素的溶解度、生物利用度以及抗肿瘤效果。本文研究主要分为以下五个部分:
  第一章综述
  本章主要针对漆黄素、纳米制剂、聚乳酸纳米粒、壳聚糖进行回顾总结。内容分为五个部分,第一部分主要介绍了漆黄素的结构性质、提取分离方法,并总结了漆黄素的药理活性及其制剂研究进展。第二部分讲述了纳米制剂的优势、纳米制剂的载体材料、纳米粒包封率的测定方法及其体外释放研究方法。第三部分主要介绍聚乳酸纳米粒,介绍了聚乳酸及其在医药领域的应用以及聚乳酸纳米粒的制备方法。第四部分主要概括了壳聚糖的理化特性及其在制剂方面的应用。第五部分介绍本课题的研究目的和主要内容。这些内容为本研究得开展提供了重要参考。
  第二章漆黄素聚乳酸纳米粒的制备
  本章采用自乳化溶剂扩散法制备漆黄素纳米粒。首先建立体外漆黄素含量HPLC测定方法,该方法精密度良好,测定结果准确,日间日内精密度考察RSD<2%。随后以包封率为指标,在单因素试验基础上确定因素对应的水平,采用正交实验进行漆黄素聚乳酸纳米粒处方优化,获得最佳处方为:药载比为1:10, O/W比为1:7,F68浓度为0.5%,丙酮与乙醇体积比为3:3。因素影响顺序:药载比>O/W比>泊洛沙姆188浓度>丙酮与乙醇体积比。方差分析结果表明,药载比对包封率具有显著性影响。最后,通过使用马尔文粒径仪测定漆黄素纳米粒的粒径和Zeta电位,超滤离心法测定纳米粒的包封率对最佳处方的漆黄素聚乳酸纳米粒进行表征:平均包封率为90.35%,平均粒径为226.85nm,平均载药量为3.12%,平均Zeta电位为-15.63 mV,且RSD均小于5%,表明由正交试验筛选的最佳处方制备的漆黄素纳米粒具有良好质量和重现性。
  第三章壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒的制备、表征及其体外释放
  本章在漆黄素聚乳酸纳米粒的基础上进行壳聚糖修饰,制备壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒,以期提高抗肿瘤效果,减缓漆黄素从纳米粒突释的现象。通过考察壳聚糖含量对纳米粒粒径和电位的影响,确定修饰漆黄素聚乳酸纳米粒的壳聚糖加入量为0.2%。透射电镜观察显示聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒的外观呈现球形,表面圆整光滑,且与漆黄素聚乳酸纳米粒相比,壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒的表面明显有壳聚糖包裹,粒径也随之稍微变大,纳米粒之间无黏连现象,分散性较好,且粒径在200nm左右,分布均匀。傅里叶红外光谱分析结果可知,漆黄素和载体之间可能存在氢键缔合作用;差示扫描量热法测定结果显示,漆黄素是以非晶态形式存在于载体中。以漆黄素平衡溶解度最好的pH6.8的PBS溶液(0.5%Tween)为体外释放介质,采用动态透析法考察纳米粒体外释药特性,结果显示原料药在1 h左右释放约78%,壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒制剂释放约27%,表明与原料药相比,壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒具有显著的缓释效果。
  第四章壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒体外抗肿瘤活性研究
  本章以结肠癌HCT116细胞为模型,采用MTT法考察壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒的体外抗肿瘤效果。实验结果显示,200μg/mL的漆黄素原料药作用48h后,细胞抑制率达到68.43%,漆黄素聚乳酸纳米粒对细胞的抑制率为75.18%,而壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒对细胞的抑制率达到81.34%。而且细胞形态显著发生改变,细胞皱缩、显著变小,细胞数量减少。由此可见,与漆黄素原料药和漆黄素聚乳酸纳米粒相比,壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒具有对结肠癌细胞更好的抑制效果。
  第五章壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒大鼠体内药代动力学研究
  为考察壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒在大鼠体内的药代动力学特征,本章建立了漆黄素在血浆中的含量 HPLC测定体系,标准曲线方程为:A=0.39701C+0.04538,R2=0.9939,表明漆黄素浓度在0.1~10μg/mL范围内与峰面积比(漆黄素和内标峰面积比)呈良好线性关系,日间、日内精密度考察显示RSD均小于10%,符合体内分析测定方法的要求。雄性SD大鼠尾静脉给药后药动学参数显示,壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒制剂将漆黄素的半衰期从1.84 h延长至3.42h,减缓漆黄素在体内的清除速度。原料药在体内的平均滞留时间为4.86±0.16 h,而壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒延长到10.67±1.81 h。原料药的药时曲线下面积为8.31±1.92 hμg/mL,而壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒的药时曲线下面积为19.28±2.15hμg/mL,相对生物利用度为232%,表明本研究制备的壳聚糖修饰漆黄素聚乳酸纳米粒可以有效提高漆黄素在体内的生物利用度,延长体内的滞留时间。
[硕士论文] 王天涯
公共卫生与预防医学 华北理工大学 2017(学位年度)
摘要:目的:化学促透法是经皮给药系统应用最广泛、最有效的促透方法之一,但理想的促透剂少之又少。本研究对手性促透剂对映体l-薄荷醇(l-M)和d-薄荷醇(d-M)进行结构改造,旨在寻找出较改造前更高效、安全及不易挥发的手性促透剂。
  方法:以l-M和d-M与不同脂肪酸合成手性薄荷醇酯类衍生物,用1H-NMR和MS确定其结构。以美托洛尔(META)、氟比洛芬(FP)两种药物为模型药物,手性薄荷醇酯类衍生物为促透剂,分别在肉豆蔻酸异丙酯(IPM)系统及压敏胶分散型(DIA)贴剂中对模型药物进行促透效果评价,筛选出具有显著促透效果的促透剂。采用家兔同体左右侧自身对照法进行单次皮肤刺激和多次皮肤刺激,对其进行皮肤刺激性评价。
  结果:
  1.以l-M和d-M及不同的脂肪酸为原料,合成了12种薄荷醇酯类衍生物:薄荷醇油酸酯(l-M-OA、d-M-OA)、薄荷醇庚酸酯(l-M-HEP、d-M-HEP)、薄荷醇癸酸酯(l-M-DEC、d-M-DEC)、薄荷醇月桂酸酯(l-M-DOD、d-M-DOD)、薄荷醇十四酸酯(l-M-TET、d-M-TET)及薄荷醇硬脂酸酯(l-M-STE、d-M-STE)。利用1HNMR和MS对薄荷醇酯进行结构确证。
  2.部分薄荷醇酯类衍生物在肉豆蔻酸异丙酯(IPM)系统和压敏胶(DIA)贴剂中使META及FP的累积透过量与对照组相比显著性增加。压敏胶(DIA)贴剂中:对于META,l-M-DEC最显著,累积透过量的促透比值(ER)为1.83;对于FP,d-M-TET最显著,累积透过量的促透比值(ER)为2.33。
  3.皮肤刺激性实验中,l-M-DEC、d-M-TET作为促透剂未出现红斑、水肿等过敏反应。
  结论:手性薄荷醇酯类衍生物作为一类新型促透剂,在IPM系统及压敏胶贴剂中可促进模型药物META及FP的透皮吸收。手性薄荷醇酯作为促透剂存在最优疏水链长度和最佳促透浓度,对于META,5%(w)的l-M-DEC促透效果最佳,而对于FP,3%(w)的d-M-TET促透效果最佳。并对两种促透剂进行皮肤刺激性试验,证明其作为促透剂对皮肤无刺激性。
[硕士论文] 王阳
口腔临床医学 华北理工大学 2017(学位年度)
摘要:目的:通过建立大鼠骨质疏松、正畸牙移动实验动物模型,同时给予雷尼酸锶和强骨胶囊药物干预,检测正畸加力后大鼠不同阶段的胫骨近端骨密度、上颌第一磨牙移动距离以及牙周组织中胰岛素样生长因子1(IGF-1)和转化生长因子1(TGF-β1)的表达情况。探讨药物干预后对骨质疏松模型大鼠正畸牙移动的影响以及不同药物的治疗效果。为临床骨质疏松患者正畸治疗选择干预药物提供实验依据。
  方法:实验选取80只4周龄SD雄性大鼠,体重为(210±10)g,置于SPF级环境中饲养,大鼠自由饮食水。80只大鼠随机分成实验对照组(A组),模型对照组(B组),雷尼酸锶组(C组),强骨胶囊组(D组),每组各20只。实验性喂养一周后B、C、D组建立骨质疏松模型,给予维甲酸80mg/(kg·d)连续灌胃2周,A组给予等量蒸馏水作为对比。两周后每组随机处死5只大鼠行骨密度检测(bone mass density,BMD),确定建模成功。建模成功后,给予D组强骨胶囊溶剂90mg/(kg·d);给予C组雷尼酸锶溶剂400mg/(kg·d),进行灌胃给药;A组、B组则给予等量蒸馏水进行对比。在用药物干预治疗两周以后,所有大鼠安装正畸装置,加力后第7d、14d、21d分批处死,每次随机处死5只。取大鼠上颌第一磨牙及附近牙槽骨,测量加力侧大鼠第一磨牙牙移动距离并进行HE染色和免疫组化染色,应用半定量法分析其牙周组织中IGF-1和TGF-β1的表达情况。
  结果:
  1.B、C、D组大鼠胫骨BMD值均低于A组大鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。
  2.同一加力时间段内B组大鼠的第一磨牙移动距离高于D、C、A组大鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。
  3.C组和D组大鼠牙移动速度较B组有所减慢,差异有统计学意义(P<0.05)。
  4.免疫组织化学的检测结果显示,同一时间点C组和D组IGF-1表达较B组显著增加,且7d和14d时表达较显著,21天时表达有所降低,差异有统计学意义(P<0.05);同一时间点C组IGF-1表达显著强于D组,差异有统计学意义(P<0.05)。
  5.免疫组织化学的检测结果还显示,同一时间点C组和D组TGF-β1表达较B组显著增加,且7d和14d时表达较显著,21天时表达有所降低,差异有统计学意义(P<0.05);同一时间点C组TGF-β1表达显著强于D组,差异有统计学意义(P<0.05)。
  结论:
  1.实验证实SD雄性大鼠给予维甲酸80mg/(kg·d)连续灌胃2周,可造成骨质疏松模型。
  2.骨质疏松会使正畸大鼠的牙移动速度加快。
  3.雷尼酸锶与强骨胶囊均能降低骨质疏松并使牙周组织中IGF-1和TGF-β1高表达,提示成骨作用增强。
  4.雷尼酸锶对骨质疏松药物作用强于强骨胶囊。
[博士论文] 刘柯兰
材料科学与工程 北京化工大学 2017(学位年度)
摘要:多功能荧光材料结合荧光物质的灵敏性和功能材料实用性,具有跨领域的应用前景。苝酰亚胺衍生物(PDIs)作为一种光、热和化学稳定性优异的化合物,已被广泛应用于光电、染料、自组装和生物成像等多个领域。PDI自身的优异特性使其成为一种潜在的多功能荧光材料。通过化学修饰向PDI的“海岛”和酰亚胺位上引入官能团或聚合物可实现PDI的多功能化。与聚合物修饰特别是树枝状聚合物修饰相比,官能团修饰的PDI分子更加灵巧、精确。本论文介绍多功能PDI分子的设计合成,通过取代、加成等化学反应将具有特定官能团修饰到PDI上,得到多功能的荧光化合物。并进一步探索其在分子、离子检测,生物荧光成像,基因载体和抗癌研究方面的多功能应用。本论文研究内容总体分为以下三部分:
  1.为探索PDI在分子检测方面的应用,设计合成一种多功能荧光探针MAPDI,并研究其用于亲核性检测和还原性无机物检测的性能和机理。通过向PDI的“海岛”位引入四个具有亲核性响应的小共轭结构,抑制PDI的聚集从而提高MAPDI的荧光量子产率。MAPDI能快速实现对多种亲核试剂的检测(胺类、氨基酸类和无机物类),同时实现对检测物亲核性强弱的颜色指示。此外,MAPDI检测还原性无机物质时伴随着紫外吸收光谱的显著红移。综上,MAPDI是一种多功能荧光探针,可同时用于检测并区分不同亲核试剂及还原性无机物。
  2.为研究PDI在离子检测和生物领域中的应用,设计合成一种多功能苝酰亚胺衍生物DTPDI,并将其用于汞离子检测及荧光基因载体。通过在PDI的“海岛”位引入能够特异性与汞离子反应的“碳-硫”键及八个阳离子胺基盐酸盐,得到一种既可作为汞离子荧光探针又可作为基因载体的水溶性苝酰亚胺衍生物DTPDI。DTPDI实现对高度专一性和超敏感检测汞离子(检测极限为0.1 nM)的特点。细胞毒性实验表明DTPDI具有很好的生物相容性,能安全地在细胞内进行汞离子检测。DTPDI还能够在细胞和活体水平运载核酸并使其成功表达。综上,DTPDI是一个多功能荧光探针,可应用于汞离子的检测及基因载体中。
  3.为探索PDI作为抗癌试剂和药物载体研究等领域的应用,设计制备一种多功能的载体RGD-PDI。在PDI的酰亚胺位引入双离子基团得到DNA嵌插剂,并通过可断裂的酯键将其与RGD多肽相连接,得到RGD-PDI。RGD-PDI具有抗癌效果,可作为前药应用于生物领域。此外,利用RGD-PDI分子与抗癌药物CPT的疏水作用及π-π堆积作用,将二者共组装得到药物传递系统。在细胞内,该系统可实现双离子型PDI嵌插剂及CPT的同时释放,实现“双重化疗”。进一步研究发现,通过改变体系的组装形貌可有效地调控药物释放速率。综上,RGD-PDI是一种多功能抗癌试剂,既能作为靶向前药又能作为药物载体应用于肿瘤治疗领域。
[硕士论文] 谢雪梅
生物化学与分子生物学 聊城大学 2017(学位年度)
摘要:热熔挤出技术是一种新的制药工艺,具有可连续化操作、不使用有机溶剂、药物适用范围广、能达到高度分散等特点。本研究采用热熔挤出技术研究制备难溶性药物利托那韦固体分散体,考察该技术在制备固体分散体、提高难溶性药物溶解度方面的应用。
  目的:利托那韦临床上用于治疗HIV病人,目前中国批准上市的利托那韦制剂大部分都是雅培公司基于热熔挤出技术制备的,而国内尚未有自主研发的利托那韦片剂,因此本课题旨在探究利托那韦固体分散体在制备过程中的辅料及工艺条件,为后续利用热熔挤出技术制备利托那韦的仿制药提供借鉴。
  方法:⑴处方前研究。建立利托那韦的高效液相色谱及紫外分光光度测量法,通过对利托那韦、Soluplus、Kollidon VA64及不同质量比的混合物进行热分析,考察药物、载体的热稳定性及两者的相容性,并建立利托那韦体外溶出方法。⑵玻璃化转变温度是热熔挤出工艺中重要的参数之一,以Soluplus、Kollidon VA64为载体,采用热分析法探究不同类型的物质(水分、灰黄霉素、利托那韦、改性豆磷脂、胆固醇)对其Tg值的影响。⑶薄膜法初步筛选热熔挤出处方。以Kollidon VA64为载体,采用薄膜法制备利托那韦固体分散体。探究了不添加剂改性豆磷脂,DOPC, DPPC,Span20,PEG-6000对利托那韦固体分散体玻璃化转变温度及溶出度的影响。⑷热熔挤出技术制备利托那韦固体分散体。制备了利托那韦-Kollidon VA64、利托那韦-Kollidon VA64-改性豆磷脂、利托那韦-Kollidon VA64-Span20固体分散体,并对其各种性质进行了鉴定。
  结果:①建立了简单灵敏的高效液相色谱及紫外分光光度法,用以测定利托那韦的体外溶出度;通过对药物及辅料分解点、熔点及玻璃化转变温度分析,表明两种辅料可作为利托那韦的载体。②由结果可知,5种物质均可作为增塑剂降低Soluplus、Kollidon VA64的Tg值。含水量为2.4%的Soluplus Tg值降低约12.4℃,含水量为4%的Kollidon VA64 Tg值降低约57.6℃。50%的灰黄霉素/利托那韦/改性豆磷脂/胆固醇-Soluplus Tg降低值分别为3.6,20.8,15.5和30.5℃;50%的灰黄霉素/利托那韦/改性豆磷脂/胆固醇-Kollidon VA64 Tg降低值分别为11.0,41.1,8.9和35.4℃。利托那韦、胆固醇对Soluplus、Kollidon VA64的增塑作用均强于灰黄霉素和改性豆磷脂。③薄膜法制备的利托那韦-Kollidon VA64-DOPC/DPPC/改性豆磷脂/EPCS/Span20/PEG-6000固体分散体溶出度结果表明,添加改性豆磷脂、Span20的固体分散体溶出度更高。④热熔挤出技术制备的利托那韦-Kollidon VA64-改性豆磷脂/Span20固体分散体,能降低熔融温度,且溶出度更好。
  结论:利用Kollidon VA64为挤出物载体,改性豆磷脂及Span20为添加剂,通过热熔挤出技术制备利托那韦固体分散体,能提高其溶解度,为后续制备利托那韦仿制片提供了依据。
[硕士论文] 陈思
兽医学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:目前,临床上使用的溶栓药有尿激酶、人组织纤溶酶原激活剂等,纤溶酶原激活剂类溶栓药已经发展到第3代,以重组人纤溶酶原激活剂为代表。重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)是天然t-PA重组突变体,保留了K2和P区,提高了溶栓效果、纤维蛋白的亲和力特异性高、半衰期延迟、使用剂量减少、全身出血和颅内出血发生率降低等特点。利用乳腺生物反应器生产rhPA,大大提高生产量、目的蛋白质可以在机体内翻译,磷酸化、羧化等修饰,生物活性高,成本低,样品纯化简单等优点。通过沉淀法、超滤法、层析法等技术相结合,有效的从乳汁中分离和纯化到表达蛋白。
  本实验通过体细胞核移植技术制备了乳腺特异性表达rhPA转基因山羊,重组人纤溶酶原激活剂cDNA在山羊乳腺中特异性表达。通过ELISA、Western Blot,检测rhPA的表达产物分泌到乳汁内;经FAPA检测,表达产物有较高的比活性。
  rhPA转基因山羊制备:无菌手术取30日龄的羊胎儿,分离提取山羊胎儿成纤维细胞培养,电转染乳腺特异性表达载体BCL14/rhPA基因到胎儿成纤维细胞。用含有G418600μg/mL的细胞培养液筛选7-10天后,挑取单克隆细胞株经PCR检测筛选出阳性细胞株24株,其中选取7株作为供核细胞。用含0.5%FBS的DMEM/F12培养液饥饿72h阳性细胞株作为供核细胞。活体输卵管冲洗法获取MⅡ期的卵母细胞,去核后作为核受体进行体细胞核移植,重构胚移植到同期发情的受体羊输卵管内。
  30天、60天进行B超检查受体羊的妊娠情况,出生的小羊PCR检测是否整合rhPA基因。超数排卵供体羊42只,获得MⅡ期卵母细胞438枚,受体羊26只,移植重构胚256枚,7只受体羊妊娠,其怀孕率为26.9%,出生2只小羊,提取基因组进行PCR检测为rhPA转基因山羊(BP21、BP22)。
  获得的转基因山羊进行饲养、性成熟后,与正常公羊配种、妊娠、分娩,出生的小羊提取基因组,PCR检测为rhPA转基因山羊。收集乳汁,高速离心取乳清,ELISA免疫原性检测,半定量分析转基因山羊乳清中rhPA表达量约是92.2μg/mL。SDS-PAGA电泳和Western Blot检测克隆羊乳清,出现了约39kD大小的特异性目的条带。FAPA与ELISA检测结合显示,BP21转基因羊乳清中所含rhPA的比活性大约为阿替普酶的40倍。
  表达产物rhPA的分离和鉴定:羊乳经过超速离心、酸碱沉淀去除脂肪和酪蛋白后,上样到赖氨酸亲和层析株进行分离和纯化。SDS-PAGA电泳和Western Blot检测有纯化样品中有39kDa的特异性目的条带,FAPA检测具有溶栓活性,说明羊乳经过L-赖氨酸亲和层析纯化后依然具有溶栓活性。
  本实验利用体细胞核移植技术获得转rhPA山羊,乳汁中rhPA特异性表达含量为大约73.6μg/mL,具有高比活性。表达产物能够通过L-赖氨酸亲和层析分离和纯化出来,纯化产物回收率高、生物学活性高,为后续进一步纯化奠定基础。目前未见关于重组人纤溶酶原激活剂在山羊乳腺上表达的相关报道。
[硕士论文] 格日乐
应用化学 内蒙古大学 2017(学位年度)
摘要:RNA干扰(RNAi)是双连RNA诱导的转录后水平上的基因调控,把特异性靶mRNA降解,从而下调疾病有关的基因。它已经表现出了治疗基因的异常表达导致的各种疾病的巨大潜力。在RNAi的临床应用中,研究出高生物相容性、高效率递送载体极为关键。
  本研究前期工作中,已经制备出的核酸载体有DoGo2、DoGo3、DoGo4α2δ2、DoGo4α3δ1脂质复合物等。它们都通过调控DoGo1的亲水头部而合成出来的。本论文以天然氨基酸原料构建了三种脂质化类肽,经过调节氨基酸组成、多肽氨基酸数、胺类合成出DoGo6、DoGo311、DoGo121。我们通过1H-NMR和质谱物性确定化合物的结构与分子量等,通过透射电镜、电动电势及激光粒度等方法对脂质复合物进行表征。对DoGo6、DoGo311、DoGo121脂质复合物的生物活性进行研究。实验结果表明,它们的生物相容性均比商用的转染试剂Lipofectamine2000更好。DoGo6、DoGo311脂质复合物在较低的氨基(N)/磷酸基团(P)比例下可以与dsDNA结合。在体外转染实验中,转染质粒、siRNA(siGAPDH、siPLK1)。实验结果表明,随α氨基数的增加,能够增加DNA/siRNA转染效率,同时,DoGo6脂质复合物对293T、HeLa、HepG2等细胞株具有潜在的靶向性。
[硕士论文] 丁丽娜
材料工程 中北大学 2017(学位年度)
摘要:介孔二氧化硅纳米颗粒(MSNs)除了具有表面易功能化、细胞易于吸收、可生物降解、低毒性和优良的生物相容性这些传统的性能外,还具有独特的性能,例如高比表面积、大的孔体积、可调的孔结构和良好的物理化学稳定性等,因此MSNs在生物医学方面的应用受到了研究者的特别关注,已经被广泛应用于靶向药物输送、诊断、治疗等其他的生物医学方面。近二十年来,有大量的研究将荧光蛋白和荧光染料等不同种类的荧光物质与介孔硅掺杂,但是这些材料容易光漂白,不适合在血液内长期循环以及实时追踪。碳点(CDs)作为一种新型的荧光纳米材料,其制备方法简单,原料成本低,具有可调的发光范围、良好的光稳定性、易功能化以及良好的生物相容性和水溶性等性质,和半导体量子点比较,其最大的优点就是毒性低,使其在光催化、传感器、太阳能电池和生物成像等方面具有广泛的应用。本论文将MSNs和CDs复合得到碳基荧光介孔硅材料,不仅同时具有CDs和MSNs的优良性能,还可以作为良好的药物载体对病变细胞达到靶向治疗的目的。本论文主要通过两种不同的方法制备具有不同荧光性能的碳基荧光介孔硅,以实现生物成像与靶向治疗一体化,主要工作如下:
  (1)通过原位合成法将荧光碳点和靶向剂同时作用到MSNs上,此方法制备过程简单,原料成本低,将叶酸(FA)和氨基化MSNs(MSNs-NH2)混合,一步微波法制备出具有靶向性的荧光介孔硅(FA-CDs-MSNs),其中FA既为CDs来源又可以作为靶向剂。通过系统的研究,其产物具有低毒性、良好的荧光性能和细胞靶向性,被应用于细胞成像和靶向治疗,也被用来区别癌细胞和正常细胞,为了验证FA-CDs-MSNs对癌细胞有治疗的效果,将其承载药物阿霉素(DOX),DOX@FA-CDs-MSNs有选择性地靶向肿瘤组织和抑制癌细胞的生长,作为药物载体提高了其药物利用率和抗癌能力,减小了对其他组织的毒副作用。本论文合成的具有靶向性的的荧光介孔硅为细胞靶向和治疗构建了一个新的纳米平台。
  (2)通过共缩聚法将近红外碳点(NIR-CDs)合成到MSNs的骨架结构里,再在其表面嫁接线粒体靶向剂(3-羧丙基)三苯基溴化磷(TPP),得到具有线粒体靶向性的近红外介孔硅(NIR-MSNs-TPP)。首先将近红外碳点与异氰酸丙基三乙氧基硅烷(IPTS)共轭得到NIR-硅烷,再与TEOS共缩聚反应合成近红外介孔硅(NIR-MSNs),将其氨基化后和TPP通过酰胺反应得到最终产物。NIR-CDs在近红外区域同时具有激发和发射双光子性能,毒性非常低,可用来双光子生物成像,近红外光还具有高组织渗透性和生物友好型等特性,比低渗透性的紫外或者可见光具有非常大的优势,能够克服紫外可见光在光活化等生物应用方面的局限性。将其与MSNs复合之后,其产物不仅可以用来高渗透双光子成像还可以用于药物输送,将其修饰靶向剂TPP之后,可将药物输送至线粒体从而实现更高效的靶向治疗。
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