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[博士论文] 王冬尧
药物分析学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:尽管组合化学、超高通量筛选、后基因组计划、计算机技术的联合应用等多种技术快速发展,在药物研发的过程中仍然存在两个瓶颈,一是靶标生物大分子的确定和验证;二是具有生物活性小分子的设计和发现。本文主要关注第一方面,即其中的靶标分析方面。
  1.整合细胞膜色谱系统的构建及在VEGFR-2受体抑制剂靶标鉴定上的应用
  细胞膜色谱技术(cell membrane chromatography,CMC)是一种生物膜技术和色谱技术结合的分析方法,在一定程度上保留了细胞膜的生物学特征,可以模拟生理状态下生物活性小分子与其细胞膜上靶蛋白相互结合的过程。
  整合细胞膜色谱系统由多种细胞膜色谱模型、高效液相色谱、飞行时间质谱整合而成,其中,多种细胞膜色谱模型既相互补充,又相互验证,弥补了生物膜生命周期短、重现性差的内在缺点;高效液相色谱可以对复杂样品进行有效分离;飞行时间质谱可以准确鉴定其中每种组分,使得到的结论与常规的细胞膜色谱相比,更加真实、准确、可信。
  本部分应用SMMC-7721/CMC和HepG2/CMC两种不同原发性肝癌的细胞膜色谱模型,构建了整合细胞膜色谱分析系统,并用于8个人工合成化合物的活性和靶点评价研究中,这8个喹唑啉类化合物是针对血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2)进行设计合成的。在使用整合细胞膜色谱系统进行靶标验证的同时,也采用经典的激酶抑制方法测定了以上8个化合物对VEGFR-2的抑制率。结果表明,化合物在整合细胞膜色谱系统中的保留行为与激酶抑制率高低排序一致,即上述两种方法存在相关性。与分别测定每个待评价化合物样品的传统方法相比,整合细胞膜色谱系统可以直接分析含有多种样品的复杂体系,得到结论真实、可靠,同时,更加节约时间和成本,可成为药物研究中的一种实用分析方法。
  2.TCP-matrine探针的合成及在matrine靶标分析中的应用
  整合细胞膜色谱系统可以快速、有效地分析生物活性小分子与细胞膜蛋白质间是否存在相互作用,然而自然生物膜上含有成百上千种活性蛋白,小分子药物可能与多种受体存在协同结合,受到各种非特异结合因素的干扰,在没有其他关于可能结合靶标相关信息的线索下,很难鉴定、确证或排除某种膜蛋白作为潜在靶标的可能性,因此,将整合细胞膜色谱系统用于生物活性小分子结合靶标的准确鉴定和验证中,尚有困难,仍然需要其他更加深入、精细、直接的靶点鉴定技术的支持和配合,如基于亲和探针的靶点分析技术。
  三功能探针(tri-functional probe,TCP)是亲和探针的一种,是一种同时具有配体基团、光反应基团、标签基团三种功能基团的探针,是生物活性小分子靶标鉴定的有效手段。
  苦参碱(matrine)是一种天然生物碱,被发现具有抗肿瘤的活性,但其直接结合靶标和相关分子作用机制尚不明确,这也是阻碍将苦参碱进一步进行结构改造、活性增强、药物剂型改良等研究开发,最终成为临床一线治疗药物的众多障碍之一。因此,寻找并鉴定到苦参碱的直接作用靶标,意义重大。
  TC P-matrine探针是一个同时具有matrine、4-苯甲酸叠氮基、生物素的亲和探针,其中matrine作为配体基团,4-苯甲酸叠氮基作为光反应基团,生物素作为标签基团,与链霉亲和素构成生物放大系统,用于靶蛋白的纯化分析。本部分将TCP-matrine亲和探针用于matrine的靶点鉴定研究中,首次证明了膜联蛋白A2(annexin A2,ANXA2)是中药苦参中的活性成分苦参碱(同时也是一个有前景的抗癌药)的直接结合靶蛋白,通过抗体阻断实验和敲低表达实验进一步证实了ANXA2是苦参碱发挥抗迁移药效的关键分子,苦参碱可以有效抑制ANXA2介导的纤溶酶原(plasminogen,PLG)向纤溶酶(plasmin,PN)的生物转化,从而抑制肿瘤细胞的迁移。
  3.TCP-MLN8237探针的合成及在MLN8237靶标分析中的应用
  MLN8237是极光激酶A(Aurora Kinase A,AKA)的小分子选择性抑制剂,具有抑制细胞生长、发育,诱导细胞凋亡,抑制细胞迁移、侵袭等多种活性,Ⅰ期临床试验也表明MLN8237在恶性肿瘤方面具有较好的治疗作用,同时存在一定程度的不良反应,如恶心、呕吐、发热、贫血等,在理论上,MLN8237可能存在其他潜在靶蛋白。寻找并鉴定到小分子MLN8237的其他直接作用靶点,为阐明其作用机制,更全面地掌握该分子特性,最终实现其广泛的临床应用,具有重要的意义。
  在明确MLN8237构效关系的基础上,对其羧基部分进行结构修饰,首次合成了TCP-MLN8237探针,该探针含有MLN8237、4-苯甲酸叠氮基、生物素三种不同的功能基团,且探针与药物分子本身在促进细胞凋亡上没有明显差异。与对照探针(骨架相同但不含有配体基团MLN8237,只含有4-苯甲酸叠氮基、生物素基团的探针)处理组相比,经紫外光照射、磁珠纯化富集、凝胶电泳分离、银离子染色等操作后,只分离得到一个差异蛋白条带,经多级蛋白质谱技术分析鉴定,该蛋白为AKA,即目前公认的MLN8237的最强靶点,说明TCP-MLN8237探针是有效的,但由于探针为刚性结构,可能对配体基团与苴靶蛋白间相互结合过程有影响,仍然存在一些的局限,具有优化和改进的空间。
  4.DNA-MLN8237探针的合成及在MLN8237靶标分析中的应用
  在TCP亲和探针的基础上,将赖氨酸的刚性骨架更新为寡核苷酸链的柔性骨架,称为DNA亲和探针,由结合探针(binding probe,BP)与捕获探针(capture probe,CP)共同组成。
  本部分利用DNA亲和探针标记方法,合成了含有MLN8237的BP,含有4-苯甲酸叠氮基、荧光素的CP,经过BP(MLN8237)与靶蛋白结合、CP(4-苯甲酸叠氮基)与靶蛋白光交联、CP(荧光素)在聚丙烯酰胺电泳胶上成像的步骤,最终鉴定得到除AKA之外的7个潜在靶蛋白,在这些潜在靶蛋白分子中,对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogen activated protein kinase,p38)和层粘连蛋白受体(laminin receptor,LAMR)进行了生物学验证,其中,MLN8237与p38亲和力约为8μM,相关生物学功能效应(促进细胞凋亡)可能被AKA所掩盖;MLN8237与LAMR亲和力约为1.8μM,可以部分解释其抗肿瘤迁移和侵袭的生物学功能,为更深入地理解MLN8237的药效、毒性、副反应提供有效信息,为全面评价MLN8237作为潜在临床候选药物提供进一步证据。同时,也说明,利用DNA亲和探针寻找小分子的靶点,是一种十分有效的分析方法。
[硕士论文] 伏为峰
控制工程 桂林电子科技大学 2017(学位年度)
摘要:药品对人民的健康生活至关重要,然而当今社会假药泛滥,严重影响了人们的生命财产安全,为此真假药鉴别技术在药品监管领域有着极其重要的实用价值。近红外光谱分析技术有着快捷、绿色、无损等优点,目前已经广泛地应用于各个领域,在药品鉴别领域也取得飞速的发展。
  然而,在近红外光谱(NIRS)药品鉴别中,由于近红外光谱往往特征维数较高,传统的特征提取方法在处理高度复杂的特征时往往比较乏力,缺乏良好的特征提取效果;同时近红外光谱药品鉴别具有显著的代价敏感性,以传统的非代价敏感方法进行药品鉴别也不科学。
  鉴于此,针对近红外光谱特征往往高度复杂的问题,本文提出了基于深度信念网络与随机森林(DBN-RFS)的药品鉴别方法,结合了深度学习在特征提取阶段展现出的优势与传统分类器良好的分类能力。首先采用深度信念网络对高维数据特征进行非线性特征提取,取DBN隐含层中最后一层的全部特征,加上随机抽取的倒数第二层的部分特征,作为随机森林的输入数据。并通过以不同活性物质浓度药品的NIR光谱数据、琥乙红霉素等药品的NIR光谱数据、多潘酮片NIR光谱数据等进行实验验证,三种样本集实验表明,DBN-RFS在分类问题中具有良好的性能,并且随着数据特征维数的上升,DBN-RFS越发显示出深度信念网络在高度复杂的特征下进行特征提取的优越性。
  同时,针对近红外光谱药品鉴别问题的代价敏感性,本文提出一种代价敏感的深度信念网络(CS-DBN)算法,先以原始数据预训练 RBM,在反向微调阶段,将评价准则由最小错分误差改为最小错分代价。并通过以不同活性物质浓度药品的NIR光谱数据、琥乙红霉素等药品的NIR光谱数据、多潘酮片NIR光谱数据等进行实验验证,三种样本集实验表明,基于最小误分类代价的深度信念网络能够体现出良好的代价敏感特性,可以很好的应用于代价敏感问题的分类。
[硕士论文] 刘婧
内科学 解放军军事医学科学院;中国人民解放军军事医学科学院 2017(学位年度)
摘要:肉毒毒素(BoNT)是由肉毒梭菌在厌氧的情况下,产生的神经外毒素,依据毒素抗原性的不同,分A~G七个亚型,其中以A型的毒性最强,是生物毒素和化学毒物中毒性最强的物质,引起的临床症状也远远重于B型和E型。A型肉毒毒素现已被广泛应用于眼睑痉挛、面肌痉挛、脑瘫、整容除皱、瘦腿瘦脸等神经肌肉阻滞功能的治疗,多汗症、胃失弛缓症等自主神经系统功能紊乱的治疗以及偏头痛、慢性疼痛等感觉神经功能的治疗。
  随着经济和社会的飞速发展,人们对美容的需求也越来越多。最近几年,使用肉毒毒素美容除皱、瘦腿瘦脸的爱美女士也越来越多。目前用于市场上的品牌有国外的Botox(保妥适,美国Allergen公司)、Dysport(英国Ipsen公司)、Myobloc(美国 Elan公司)以及国内BTXA(中国衡力)等。在我国,批准上市的用于肉毒毒素治疗疾病及美容目的的,只有美国的Botox(保妥适)和中国兰州生物制品研究所有限责任公司生产的衡力。Botox的治疗作用有颈部肌张力障碍、严重的原发性腋窝多汗症、神经源性逼尿肌过度活动、膀胱过度活动症、斜视、睑痉挛、慢性偏头痛、上肢痉挛。BTXA的治疗作用有眼睑痉挛、面肌痉挛的成人患者;急性麻痹性、内分泌肌病所引起的斜视和无法手术治疗12岁以上患者的斜视;暂时性改善65岁以下的眉间纹。但在这类肉毒毒素制品的使用过程中,也出现了一些中毒的案例,主要由注射剂量过大、注射部位药物不适当的弥散作用引起,不同程度的出现了眼睑痉挛、视物模糊、上睑下垂、饮水呛咳、吞咽困难、构音障碍、发声困难、肌力减退甚至呼吸困难等症状。
  当肉毒毒素作为一种商业用的生物制剂,对其活性的研究尤为重要。生物制品普遍采用质量和活性两种表示方法,即单位质量的生物制品中所含有的生物学活性,反映活性组成比具体情况。本研究目的是研制一种方便易用的胶体金试纸条,基于金属锌的酶切反应动力学及免疫反应原理来检测肉毒毒素的活性。检测的原理为BoNT/A掺杂的血清样品和特别设计的底物肽在孵育一段时间后,可将特异性底物肽酶切从而使氨基端的生物素与羧基端的组氨酸标签分离,使得标记胶体金颗粒的链霉亲和素-底物肽复合物不能被层析试纸条的检测线上包被的抗组氨酸标签抗体捕获,从而呈现出一个不同于BoNT/A阴性血清的结果。
  首先我们进行了 A、B型肉毒梭菌的人工培养。将 A型肉毒梭菌菌种接至TPYG液体培养基,进行肉毒梭菌的人工增菌培养。在37℃的厌氧温箱中培养48 h后,将获得的新鲜培养液接种至1 L的TPOM培养基进行产毒培养。用硫酸溶液沉淀抽提,得到粗毒。然后用硫酸铵沉淀,去除核酸。最后用凝胶柱和离子交换柱进行精制纯化。对纯化的肉毒毒素进行蛋白定量后用小鼠毒力试验来测定毒素的生物学活性。B型肉毒梭菌的培养、肉毒毒素纯化、定量及生物学活性鉴定同A型肉毒毒素,但没有精制步骤。由此而得到的A、B型肉毒毒素用于掺杂模拟临床血清样本。
  然后设计 A型肉毒毒素底物序列如下: N端生物素化-TRIDEANQRATKM-6×His-Tag。该底物肽包含三个部分:N端生物素标签、A型肉毒毒素特异性底物肽序列和组氨酸标签。其中Q-R为BoNT/A特异性切割的位点。当BoNT/A对肽段发生作用时,作为肽链内切酶,会引起肽链断裂,从而产生含有不同生物标签的肽段,从而在胶体金试纸条上呈现不同的显色模式。将抗His标签单克隆抗体、抗链霉亲和素单克隆抗体分别作为T线和C线,胶体金包被的链霉亲和素作为探针按常规的制备方法制成层析试纸条后,我们对T线浓度、底物肽最小剂量、毒素和底物肽在体外孵育时间进行了优化。根据优化结果, T线浓度为1 mg/mL;特异性底物肽的优化剂量为1 ng/μL;毒素和底物肽的体外孵育时间为12 h。此外,我们用空白对照血清、B型肉毒毒素掺杂的模拟血清和不同稀释度的A型肉毒毒素掺杂的模拟血清对试纸条的特异性及灵敏性进行了评估。根据实验的结果,胶体金层析试纸条的最低检测限可达到1.3 LD50/mL,约为20 pg/mL,灵敏度与金标准的小鼠致死实验相当,但检测时间从4天减少到12 h。
  本研究建立的方法样本和试剂消耗量少,检测流程短,操作简便易行,更适于在基层医疗机构和资源有限的偏远地区使用。通过检测活性肽酶的含量并优化酶联信号放大的反应条件,使针对有活性的A型肉毒毒素的检测较之前实验室使用的方法更加精确。在我国,肉毒中毒事件常集中发生在经济欠发达地区,交通的不便与专业设备的欠缺给肉毒中毒的诊断和救治带来很大的困难。该检测方法的建立可以有力的缓解上述地区感染肉毒中毒后的误诊及漏诊,提高诊治率。而且通过设计毒素特异性的底物肽的思路,该方案也可扩展用于其余血清型肉毒毒素的检测。此外,A型肉毒毒素目前被一些国际恐怖势力和极端组织用来制造恐慌,被列为最有可能使用的生物恐怖剂之一,因此研究它的检测对国防、军事也有着重要意义。我国现有的检测手段费时费力、成本高且需要具备专门知识的专业人员在设施齐备的专业实验室内进行。设计、开发一个快速、灵敏、方便易用的现场检测方法用于肉毒毒素的诊断和鉴定对我国的肉毒中毒,特别是目前尚无定论的婴幼儿肉毒中毒和食品安全保障体系的完善具有重大的现实意义和战略意义。
[硕士论文] 郭小桢
药物分析学 山西师范大学 2017(学位年度)
摘要:食品药品中可能存在的化学污染物影响着人类健康。由于食品样品中所含成分种类繁多,因此,在分析化学中要排除存在于不同食物样品中的各种化学物质的干扰以实现目标物质的准确分析与测定,就需要对样品进行处理。在现有的样品处理技术中,磁固相萃取(MSPE)环保简单,灵敏度和准确性高,不仅缩短了分析时间,而且实现了分析物的高效分离和富集。本文使用合成的新型磁性材料作为吸附剂,结合荧光光谱法和气相色谱法分别测定了生物样品和食品中不同种类的药物:
  1.简要介绍了磁性固相萃取的优势与应用,总结了磁性纳米材料的修饰与应用以及近年来磁性固相萃取结合磁性纳米材料在食品和生物样品中的应用。
  2.合成了聚合离子液体包覆的Fe3O4磁性材料,将其作为吸附剂,使用磁性固相萃取技术与荧光光谱法结合,用于药片,尿样和血浆样品中阿呋唑嗪,多沙唑嗪,特拉唑嗪和哌唑嗪的测定。与其他方法相比较,我们建立的方法得到了更好的分析测定结果,四种药物的线性浓度范围在0.5-45 ng mL-1之间。阿呋唑嗪,多沙唑嗪,特拉唑嗪和哌唑嗪的检出限分别为0.035、0.034、0.027和0.028 ng mL-1(n=11)。
  3.使用合成的磁性材料作为吸附剂,建立了一种应用磁性固相萃取技术结合荧光光谱法萃取人体血浆和尿液中的两种β-阻断剂卡维地洛和普萘洛尔的方法。得到了低的检出限和宽的线性范围,卡维地洛的线性范围在0.08-4.8 ng mL-1之间,普萘洛尔的线性范围在0.08-6.4 ng mL-1之间。两种药物的检出限分别为0.024和0.030 ng mL-1。样品中两种药物所得回收率的平均值分别为99.01%至100.50%和99.75%至106.01%。
  4.聚合离子液体包裹的磁性材料作为吸附剂萃取火锅样品中的罂粟碱,并通过气相色谱测定。实验结果表明,在最佳萃取条件下,吸附剂对罂粟碱有较强的吸附能力。所建立的方法测定罂粟碱得到了良好的分析结果,线性范围为0.5-20μg·mL–1,检出限为0.01μg·mL–1,加标回收率为93.3%-106.8%。说明该方法在样品前处理方面具有潜在的利用价值和发展前景。
[硕士论文] 肖梦杰
药剂学 湖北中医药大学 2017(学位年度)
摘要:环丙沙星地塞米松混悬滴耳剂是以喹诺酮类药环丙沙星结合糖皮质激素类药地塞米松的耳用无菌混悬滴耳液,每mL混悬滴耳液中含有盐酸环丙沙星3.5mg(相当于环丙沙星3mg)、地塞米松1mg及防腐剂苯扎氯铵0.1mg,其他辅料分别为氯化钠、羟乙基纤维素、泰洛沙泊、醋酸、醋酸钠、硼酸、依地酸二钠、氢氧化钠/盐酸(pH调节剂)、纯化水。我们对环丙沙星地塞米松混悬滴耳剂进行了以下相关的研究工作:
  首先我们对环丙沙星地塞米松混悬滴耳剂进行了处方工艺研究,筛选出合适的防腐剂、助悬剂和表面活性剂等,并对羟乙基纤维素、泰洛沙泊等的用量进行筛选。通过对混悬滴耳剂的性状、pH值、黏度、渗透压、粒度分布、体积沉降比等指标进行考察,并最终确定了最佳处方和处方工艺。
  其次我们对环丙沙星地塞米松混悬滴耳剂进行了系统的质量研究:参考环丙沙星地塞米松混悬滴耳剂的美国药典标准、环丙沙星和地塞米松原料药的中国药典标准,我们对环丙沙星地塞米松混悬滴耳剂进行了系统研究。考察环丙沙星地塞米松混悬滴耳剂的性状、鉴别、pH值、渗透压、粒度、微生物限度、有关物质、主药含量及防腐剂含量等指标,我们选用高效液相色谱法分别测定两种主药及防腐剂的含量和两种主药的有关物质,对含量和有关物质的测定方法进行了方法学研究,并建立了一系列控制环丙沙星地塞米松混悬滴耳剂质量的检测标准。为担保临床用药安全、有效和质量可控提供了实验依据。实验结果显示,按照拟定的质量标准,我们研制的环丙沙星地塞米松混悬滴耳剂的各项考察指标均符合要求。
  最后我们对环丙沙星地塞米松混悬滴耳剂进行了初步的稳定性研究。稳定性研究是质量研究中不可或缺的一个部分,是研究药物随温度、湿度和光照的变化随时间变化的趋势,本实验从影响因素、加速试验和长期试验三个方面对环丙沙星地塞米松混悬滴耳剂进行初步考察,实验结果显示,环丙沙星地塞米松混悬滴耳剂中两主药的杂质均略有增长,应选择在避光,阴凉处贮藏。
[硕士论文] 郭庆丽
药学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:药用辅料在药品中占据很大的质量比例,是药品中的重要组成部分之一,在制剂中主要用作填充剂、粘合剂、崩解剂、载体材料等。药用辅料的加入有利于原料药加工成药品,提高药品的稳定性和病人的顺应性,改善药品贮藏时的安全性与有效性。因此,药用辅料的质量是影响药品质量的关键因素。在药品生产过程中,首先要对药用辅料进行质量检测,以确保其质量符合投料要求。2010版药品生产质量管理规范已经明确规定,要采取核对或检验等措施,确认每一包装内的原辅料正确无误。这就对药品生产企业提出了更高要求,需要采用一种快速、准确的分析方法来满足需要。近红外光谱分析技术(Near Infrared Spectroscopy,NIRS)以其快速、方便、不破坏样品等优势成为药品生产过程中原辅料的质量分析的一种重要工具。
  本研究主要采NIRS快速鉴别药品生产过程中常用的两大类药用辅料,即淀粉类与纤维素类药用辅料。以羟丙甲纤维素(Hydroxypropyl methylcellulose,HPMC)为特征辅料,鉴别不同生产厂家、不同粘度的HPMC,并对HPMC的关键质量指标进行定量分析。为药品生产过程中药用原辅料的快速质量分析提供理论基础。
  本研究具体内容如下:
  (1)基于NIRS的淀粉类、纤维素类药用辅料的定性分析
  本研究以药物制剂生产中常用的淀粉类、纤维素类药用辅料为研究对象,分别采用AntarisⅡ傅里叶变换近红外光谱仪与Micro NIR1700微型近红外光谱仪建立淀粉类、纤维素类辅料的定性判别模型。本研究首先采用主成分分析(Principal Component Analysis,PCA)对淀粉类与纤维素类这两大类辅料进行聚类分析,然后再单独对每一大类辅料进行PCA分析,分析过程中,对于用PCA无法聚类的辅料,采用偏最小二乘判别分析(Partial least squares discriminantanalysis,PLS-DA)方法进一步分析,最终实现辅料的鉴别。Micro NIR1700微型近红外光谱仪虽然采集的数据点较少,但是光谱数据涵盖了样本的基本信息,分析结果准确度也较高,可以满足生产的需要。
  (2) NIRS用于不同生产厂家的HPMC以及不同HPMC粘度的定性鉴别分析研究
  本实验研究主要采用NIRS光纤漫反射模块对不同生产厂家的HPMC以及不同HPMC粘度进行鉴别分析,为药品质量稳定性与一致性提供快速分析方法。在鉴别不同生产厂家的HPMC时,分别采用线性模式识别方法PLS-DA与非线性模式识别方法支持向量机判别分析(Support vector machine discriminateanalysis,SVM-DA)建立定性分析模型,并比较这两种模型结果,结果表明SVM-DA所建模型结果较好,校正集识别率与拒绝率均达到0.90以上,验证集的均达到1.00,模型的预测能力也较高。在鉴别不同粘度的HPMC时,分别采用无监督的模式识别方法K最邻近法(K nearest neighbor, KNN)与有监督的模式识别方法PLS-DA建立定性分析模型。研究结果表明PLS-DA方法所建定性分析模型的识别率与拒绝率均优于KNN方法,达到0.95以上。因此可以采用光纤探头实现不同生产厂家、不同HPMC粘度的快速鉴别分析。
  (3) NIRS用于HPMC中羟丙氧基与甲氧基的定量分析研究
  本实验研究采用NIRS对HPMC分子上两种取代基羟丙氧基与甲氧基进行含量测定。首先用气相色谱法测定HPMC中羟丙氧基与甲氧基的含量,作为参考值;其次采集HPMC的近红外光谱,建立羟丙氧基、甲氧基含量与近红外光谱关联的偏最小二乘回归(Partial least squares,PLS)模型。在建立定量分析模型时,采用不同的预处理方法、不同的波段选择方法优化PLS模型,以建立最佳的定量分析模型。羟丙氧基含量的PLS模型结果为Rc、Rp、RMSEC、RMSEP分别为0.997、0.983、0.0799、0.132;甲氧基含量的PLS模型结果为Rc、Rp、RMSEC、RMSEP值分别为0.980、0.973、0.671、0.771。研究结果表明模型的稳健性与预测能力均较高。
  本论文的创新点包括:
  (1)本研究首次采用NIRS快速鉴别不同生产厂家的HPMC与不同HPMC粘度。
  (2)本研究首次将NIRS用于HPMC中羟丙氧基与甲氧基的含量测定,为快速分析HPMC的质量提供一种分析方法。
  (3)本研究首次采用iPLS-CARS波段选择方法优化PLS模型,所建模型具有较强的稳健性和较高的预测能力。
公共卫生 新疆医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:建立采用可调激光-光纤传感快速检测维生素B2和盐酸小檗碱片含量的方法及建立用荧光分光光度法测定瑞舒伐他汀钙,且用正交试验优化及提升其含量测定的质控方法,为其质量控制的研究尊定基础。
  方法:采用可调激光光源(激发波长分别为520 nm和620 nm)光纤传感技术分别快速检测药品中盐酸小檗碱和维生素B2的含量。将实验数据汇总录入Excel数据库中,并对不同厂家的盐酸小檗碱和维生素B2的激光强度等指标进行统计描述分析。运用SPSS22.0软件,对计量资料的两组比较使用t检验,两组以上的资料使用方差分析,画散点图,绘制标准曲线,做线性回归。瑞舒伐他汀钙在激发波长为ex:250 nm,发射波长em:516 nm的条件下测定其荧光强度,用三因素三水平的正交试验优化条件,后用线性回归方程找出荧光强度与浓度的回归方程。
  结果:盐酸小檗碱片剂85-120 mg,国内市场上卖的维生素B2片1-20 mg,国外的维生素B285-120 mg范围内有较强的特征波峰,质量与光的强度之间呈良好的线性关系及呈负相关,相关系数R小檗碱=0.9999、R维生素B2=0.9997(国内),R维生素B2=0.9998(国外);荧光强度与瑞舒伐他汀钙浓度在3.17-39.72 mg/L范围内具有良好的线性关系,检出限为:0.38 mg/L,以荧光强度为指标,考察pH值,甲醇浓度和时间等3个因素,选定最佳条件,将正交试验数据进行统计分析,差异有统计学意义(P<0.05)。按最佳条件进行3次重复实验,结果显示用荧光分光光度法测定瑞舒伐他汀钙含量特异性好,灵敏度高,检测线低。
  结论:本方法经过方法学验证,可用于盐酸小檗碱及维生素B2的质量控制。选用荧光分光光度计检测瑞舒伐他汀钙,结果采用紫外-分光光度法进行验证,结果令人满意。
[硕士论文] 刘俊杰
药剂学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的:1.建立测定人血清中水溶性维生素B1、B2、B6和B9的高效液相色谱-质谱顺谱联用法并验证。
  2.比较高效液相色谱-质谱/质谱联用法和电化学分析法用于临床常规测定患者血清中维生素浓度结果的相关性与一致性。
  方法:1.齐鲁医院常规送检患者血清经乙酸乙酯萃取。色谱条件;Venusil XBP-C18色谱柱(150×4.6 mm,3μm,100 A)。柱温30℃,流动相5mmol/L乙酸铵水溶液-甲醇(40∶60,v/v),流速0.5 mL/min。质谱条件:ESI离子源,正离子模式检测;干燥气温度为350℃,干燥气(N2)流速9.0 L/min,干燥气压力40 psi,毛细管电压4000 V,全扫描设定范围为m/z150-700。维生素B1、B2、 B6、 B9和内标碎片电压分别为100V、140V、100V、110V和130V,碰撞能分别为8eV、25 eV、11 eV、10 eV和25 eV。扫描方式为多反应监测(MRM)。维生素B1、B2、B6、 B9和内标用于定量的母离子-子离子对分别为m/z265→122.1、377→244、170→152、442.2→295.8、195.1→137.8。EMV为200V。采用液液萃取法萃取出血清中的维生素后,进行方法学的考察与验证。采用所建立方法,测定患者常规送检血清样本。
  2.电化学分析法:同一患者血清样本,按照规定程序操作,采用LK3000V维生素检测仪测定人血清维生素B1、B2, B6和B9的浓度。取适量的患者待测血清加入到样本处理液中,电极经过预处理后进行检测。维生素B9的检测需要电极处理后再按电极活化步骤进行电极活化。
  3.患者血清样本分别用高效液相色谱-质谱/质谱(HPLC-MS/MS)法和电化学分析法(LK3000V维生素检测仪)测定,测定结果进行统计分析。统计学处理采用SPSS19软件和MedCalc16.2.0软件。以HPLC-MS/MS法测定值作为自变量X,以电化学分析法(LK3000V维生素检测仪)测定值作为因变量Y,建立一元线性回归模型并评价相关性。运用Bland-Altman法并制图分析两种方法所测维生素B1、B2, B6和B9值的一致性。
  结果:1.维生素B1、B2、B6、B9线性范围分别为1-200 ng/mL、5-40 ng/mL、1-80ng/mL和5-40 ng/mL;r2值分别为0.9916、0.9968、0.9922和0.9914;最低定量限分别为1 ng/mL、5 ng/mL、1 ng/mL,5 ng/mL;批内、批间RSD均小于8.5%。维生素B1、B2, B6、B9,咖啡因(内标)基质效应分别71.82%、69.94%、70.91%、61.20%、81.42%;绝对回收率分别29.01%、69.39%、63.22%、26.21%、63.79%。配制低、中,高浓度维生素B1、B2、B6和B9血清样本,室温放置6h、-20℃冷冻放置1天和7天及冻融1次和处理后血清样本室温放置20h,准确度为89.8%-107.7%,RSD小于10%。结果表明,维生素B1、B2、B6和B9稳定性良好。
  2.运用电化学法测定160份患者血清中维生素B1、B2、B6和B9的浓度结果。电化学法测得维生素B1、B2、B6和B9血清浓度均值分别21.44±5.26、6.50±0.80、12.36±3.54,5.59±1.49。
  3.采用统计软件处理HPLC-MS/MS法与电化学法测定数据。建立一元线性回归模型可得:B1∶y=1.145x-2.741,n=160,决定系数r2=0.965;B2∶y=0.923x+1.091,n=160,决定系数r2=0.956;B6∶y=1.006x+0.391,n=160,决定系数r2=0.901;B9∶y=1.084x-2.241,n=160,决定系数r2=0.978.由计算结果可见,HPLC-MS/MS法测定值与电化学分析法测定值呈正相关关系,相关程度较高。运用Bland-Altman法并制图分析两种测定方法一致性,维生素B1、B2, B6和B9的95%一致性界限分别为-2.00~2.70,-0.29~1.00,-1.70~2.60,-2.12~-1.15 ng/mL。结果表明HPLC-MS/MS法与电化学法测定人血清维生素B1、B2, B6和B9的测定值具有较好的一致性。
  结论:1.所建立的HPLC-MS/MS法灵敏度高,方法准确,结果可靠,可用于常规送检患者血清水溶性维生素B1、B2、B6和B9测定。
  2.电化学法测定人血清中水溶性维生素B1、B2、B6和B9,具有方便快捷,简便易操作,灵敏度高等优点,适用于临床血清中维生素浓度的常规测定。
  3.本研究建立了金标准HPLC-MS/MS测血清中水溶性维生素浓度的方法,并与电化学法进行相关性、一致性分析。HPLC-MS/MS法与电化学法测定人血清4种维生素的测定值具有显著相关性,并且一致性较好。提示电化学法用于水溶性维生素B1、B2、B6和B9临床常规检测的准确性和实用性。电化学法(LK3000V维生素检测仪)已常规用于临床检测患者血清中维生素的浓度。
[硕士论文] 石海英
制药工程 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的:1.建立复方酮洛芬缓释奥美拉唑肠溶微丸胶囊含量测定的方法;2.建立复方酮洛芬缓释奥美拉唑肠溶微丸胶囊溶出度测定的方法,并对自制样品和参比制剂的溶出曲线进行比对;3.酮洛芬缓释微丸和奥美拉唑肠溶微丸有关物质的研究;4.建立复方酮洛芬缓释奥美拉唑肠溶微丸胶囊的质量标准。方法:1.采用HPLC法测定复方酮洛芬缓释奥美拉唑肠溶微丸胶囊含量;2.采用篮法每分钟100转为溶出方法,先盐酸溶液后缓冲液为溶出介质,HPLC法为测定方法,采用多种介质对自制样品和参比制剂的溶出曲线进行了比对;3.采用HPLC法测定酮洛芬缓释微丸和奥美拉唑肠溶微丸的有关物质;4.进行了初步的稳定性研究。结果:1.含量测定中,酮洛芬在139.93μg·ml-1~259.87μg·ml-1范围内线性关系良好,r=0.9999,中间精密度RSD为1.01%(n=12),平均回收率为98.6%;奥美拉唑线性范围为14.08μg·ml-1~26.14μg·ml-1,r=0.9998,中间精密度RSD为0.97%(n=12),平均回收率为99.5%。2.溶出度测定中,酮洛芬在2.29μg·ml-1~229.09μg·ml-1范围内线性关系良好,r=1.0000,平均回收率为98.5%,,中间精密度RSD为1.03%(n=12);奥美拉唑在0.24μg·ml-1~23.62μg·ml-1范围内线性关系良好,r=0.9999;平均回收率为99.3%,中间精密度RSD为1.67%(n=12);自制样品和参比制剂在不同的溶出介质中的f2因子均大于50。3.酮洛芬缓释微丸有关物质的检测方法中流动性、柱温、色谱柱的改变对检测均无影响,酮洛芬与杂质有较好分离,辅料不干扰测定,酮洛芬及7个已知杂质的回收率和线性均良好。4.奥美拉唑肠溶微丸有关物质的检测方法中流动性、柱温、色谱柱的改变对检测均无影响,检测限低,奥美拉唑与杂质分离良好,辅料不干扰测定,奥美拉唑及6个已知杂质的回收率和线性均良好。5.根据稳定性研究结果制定了贮存条件。结论:1所建立含量测定的方法专属性强、重现性好,检测时间短,耐用性强,测定结果准确、可靠。2.所建立的溶出度测定方法操作简便;测定结果准确可靠;可同时满足测定肠溶和缓释两种制剂形式;各批自制样品在不同的溶出介质中与市售样品的溶出行为一致,相似度较好,为两者在体内生物利用度的一致性提供了初步保障。3.酮洛芬缓释微丸和奥美拉唑肠溶微丸有关物质的检测方法均专属性强、灵敏度高、重现性好,方法准确、简便。4.所建立的质量标准能够反映本品的质量变化,为复方酮洛芬缓释奥美拉唑肠溶微丸胶囊的质量控制提供了有效的分析标准。
[博士论文] 王茉莉
药理学 河北医科大学 2017(学位年度)
摘要:替卡西林是一种新的噻烯羧基青霉素,为半合成的抗假单胞菌青霉素,其抗菌谱和药理学特性与羧苄西林类似,通过干扰粘肽交叉联结而影响细菌细胞壁的合成,引起细胞壁的缺陷或薄弱,导致细菌畸形,继以迅速溶解死亡,从而达抗菌作用。替卡西林对革兰氏阳性菌的抑菌作用低于青霉素G;对革兰氏阴性菌的抑菌作用较羧苄西林强数倍。铜绿假单胞菌易对本品耐药。由于革兰阳性菌和阴性菌都能产生β-内酰胺酶,此类酶能在青霉素类药物作用于病原体之前发挥作用并将其破坏,从而降低其疗效。克拉维酸钾对多种β-内酰胺酶均是一种强有力的抑制剂,因此,它与替卡西林钠组成的复合剂型注射用替卡西林钠克拉维酸钾,抗菌活性更强,抗菌谱更广。该制剂是由葛兰素史克公司最早研制成功的,商品名为泰门汀。近年来,有文献报道该制剂对治疗老年社区获得性肺炎(CAP)有明显的疗效,而且非发酵菌(NFGNB)对其耐药性也低。
  目前,《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)2015年版中未收载该品种的原料药及制剂,现行标准均为企业由国家食品药品监督管理局批准的申报药品标准,而且各企业的质量标准在项目设置和限度规定上都存在一些问题,不能有效控制产品的质量。
  本研究首先建立了同时测定替卡西林钠及其制剂中主成分及有关物质含量的HPLC分析方法,该方法的应用可对替卡西林钠及其制剂中杂质的加以严格控制,对主成分的含量进行准确可靠地检测,充分提高了该药品的质量控制水平;建立了HPSEC法测定替卡西林钠及其制剂中高分子化合物的含量,该方法对严格控制β-内酰胺类抗生素中高分子化合物的含量有着重要的意义;还建立了同时测定样品中7种残留溶剂的GC分析方法,并采用GC-MS的分析方法对其它未知挥发性杂质进行结构鉴定及含量测定;比较了不同替卡西林钠原料药来源(即不同R、S比例的替卡西林)的替卡西林制剂在抗菌活性和急性毒性方面的差异;本研究还建立了灵敏度高,专属性强,分析速度快的UPLC-ESI-MS/MS法同时测定大鼠血浆样品中的主成分的含量,并将该方法应用于大鼠静脉注射给药后的药物动力学研究,为注射用替卡西林钠克拉维酸钾的临床应用提供了新的参考依据。
  第一部分:HPLC法同时测定替卡西林钠及其制剂中的主成分及有关物质的含量
  目的:建立同时测定替卡西林钠及注射用替卡西林钠克拉维酸钾中主成分及有关物质的HPLC方法。对2家生产企业的6批替卡西林钠和4家生产企业的12批注射用替卡西林钠克拉维酸钾中主成分及有关物质的含量进行测定;对8家生产企业共37批次抽验样品注射用替卡西林钠克拉维酸钾制剂的质量进行考察,并对其检测结果进行分析和评价。
  方法:采用Waters XBridgeTM C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;有关物质检查以0.01 mol/L磷酸氢二铵溶液(pH7.0)为流动相A,0.01 mol/L磷酸氢二铵溶液(pH7.0)-甲醇(50:50)为流动相B,梯度洗脱;含量测定以0.01 mol/L磷酸氢二铵溶液(用磷酸调节pH值至7.0)-甲醇(80:20)为流动相,等度洗脱;流速为1.0 mL/min;检测波长为220 nm;柱温为30℃。
  结果:有关物质检查中的梯度洗脱法具有更强的分析杂质的能力,样品中各成分的分离度及检测灵敏度均满足有关物质测定要求。替卡西林杂质 A及破坏条件下产生的降解杂质峰与主成分峰分离较好;替卡西林在19.52~1561.76μg/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.9999);克拉维酸在1.22~121.79μg/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.9998);替卡西林与克拉维酸的平均加样回收率均为99.8%,相对标准偏差(RSD)分别为0.4%、0.7%(n=9)。替卡西林的检测限(LOD)为0.24μg/mL,克拉维酸的检测限(LOD)为0.19μg/mL;替卡西林杂质 A、其它最大杂质和总杂质含量的重复性的RSD均小于1.0%;替卡西林和克拉维酸的日内、日间精密度的RSD均小于1.1%;供试品溶液于12 h内低温条件下比较稳定,但在室温条件下稳定性差。原料药与制剂样品中替卡西林杂质A的含量均小于1.5%,最大单一杂质的含量均小于2.0%,总杂质的含量均小于4.0%。替卡西林和克拉维酸的含量按无水物计算,替卡西林含量测定结果分布于79.7%~85.4%之间,克拉维酸含量测定结果分布于5.1%~5.8%。
  结论:本研究建立了HPLC法测定替卡西林钠及其注射用替卡西林钠克拉维酸钾中主成分及有关物质的含量,该方法灵敏度高、专属性强、重现性好,可用于替卡西林钠及其制剂的质量控制。
  第二部分:HPSEC法分离测定替卡西林钠及其制剂中的高分子化合物
  目的:建立高效分子排阻色谱(HPSEC)法测定替卡西林钠及其制剂中的高分子化合物的分离分析方法。应用该法对2家生产企业的6批替卡西林钠原料药和4家生产企业的12批注射用替卡西林钠克拉维酸钾中的高分子化合物进行测定。对8家生产企业37批次抽验样品注射用替卡西林钠克拉维酸钾制剂的质量进行评价,并其结果进行统计学分析。
  方法:采用TSKGEL G2500PWXL凝胶色谱柱(300 mm×7.8 mm,5μm);流动相为pH7.0的0.05 mol/L磷酸盐缓冲液[取0.05 mol/L磷酸氢二钠溶液-0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液(61:39)];流速为0.6 mL/min;检测波长为230 nm;柱温为室温。通过化学反应方法对高分子化合物进行验证,采用柱切换技术将凝胶色谱峰在反相色谱系统中进行定位,并与SephadexG-10凝胶色谱柱所测定的高分子化合物进行定性比较,来判定方法的可行性。
  结果:替卡西林与其高分子化合物的色谱峰可达到基线分离(分离度为2.27),高分子化合物峰的理论板数为6000左右且对称性良好(对称性为0.90),分析时间短,20 min内即可完成。替卡西林浓度在0.50~40.16μg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999,n=7);LOQ为3.60μg/mL,LOD为1.15μg/mL;日内、日间精密度的RSD均小于3.5%。通过化学反应方法、柱切换技术验证并确定了该杂质,与SephadexG-10凝胶色谱柱所测定高分子化合物的方法相比,本研究所使用的TSKGEL G2500PWXL凝胶色谱柱可实现更高的柱效和更快的分析速度。
  结论:本研究建立了使用TSKGEL G2500PWXL凝胶色谱柱对替卡西林钠及其制剂中的高分子化合物进行检测。该方法操作简单,专属性强,灵敏度高,可以用于β-内酰胺类抗生素中高分子化合物的控制,对减少该类药品的在临床上的过敏反应具有十分重要的意义。
  第三部分:采用GC和GC-MS法同时测定替卡西林钠及其制剂中的挥发性杂质
  目的:建立顶空气相色谱法同时测定替卡西林钠及其制剂中的甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、异丙醇、乙腈、乙酸乙酯等7种残留溶剂的含量,并采用气相色谱-质谱联用技术,结合质谱数据检索对样品中的未知挥发性杂质进行结构鉴定及含量测定。
  方法:GC条件:色谱柱为DB-624毛细管柱(30 m×0.25 mm,1.40μm);柱温采用程序升温:40℃保持5 min,以10℃/min的速率升至200℃,保持4 min;氢火焰离子化检测器(FID),检测器温度250℃;分流进样,分流比:10:1;进样口温度:200℃;载气:氮气,流速:5.0 mL/min;顶空进样,平衡温度:85℃,平衡时间:30 min。GC-MS条件:色谱条件:除载气为氦气(He)、流速为1.0 mL/min外,其余条件同GC条件。质谱条件:离子源温度:230℃;传输线温度:250℃;接口温度:230℃;溶剂切割时间:4 min;四极杆温度150℃;采用电子轰击离子化(EI源);电离方式:电子能量70 eV;扫描方式:Full scan;扫描范围:m/z30~500;检测时间:3.00~25.00 min。
  结果:7种残留溶剂之间的分离度良好,理论板数分别以其待测成分的色谱峰计算均不低于5000;甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、异丙醇、乙腈、乙酸乙酯的线性范围分别为1.53~610.24μg/mL、2.55~1020.76μg/mL、2.55~1020.96μg/mL、2.56~1014.96μg/mL、2.53~1013.24μg/mL、0.86~342.72μg/mL、2.57~1026.76μg/mL(r2≥0.9983);平均回收率为89.2%~105.4%,RSD在2.2%~4.5%之间;LOQ≤2.57μg/mL;精密度的RSD≤2.3%;供试品溶液在12 h内稳定性良好。2家生产企业的6批原料药与4家生产企业的12批制剂中7种有机溶剂的残留量均符合《中国药典》2015年版中对残留溶剂限量的相关规定。生产企业C与生产企业F、生产企业D与生产企业E的替卡西林钠原料药分别来源于同一家生产企业且生产工艺相同。通过对样品中未知挥发性杂质的检测结果分析,生产企业C与生产企业F的样品中含有乙酸丁酯,生产企业D与生产企业E的样品中含有正丁醇、乙酸丁酯、二氯甲烷和2-乙基己酸。
  结论:本研究建立了GC法同时测定替卡西林钠及其制剂中7种残留溶剂的含量,并采用GC-MS法对样品中未知挥发性杂质的结构进行鉴定及含量测定。该方法操作简便,准确度高,重现性好,在所考察的浓度范围内各组分线性关系良好,各色谱峰之间的分离度均符合要求。该方法为替卡西林钠及其制剂的质量控制提供了重要依据。
  第四部分:两种原料来源的替卡西林制剂的抗菌活性及其急性毒性试验比较
  目的:建立抗生素微生物检定法中的浊度法测定替卡西林的抗菌活性,并考察两家不同原料来源的生产企业(替卡西林R、S异构体比例不同)的样品中替卡西林抗菌活性的高低。通过对小鼠进行急性毒性试验研究,比较两家不同原料来源的生产企业的样品间LD50范围的差异。
  方法:取金黄色葡萄球菌为实验菌悬液,浓度为2%~3%;一剂量法是用pH6.0磷酸盐缓冲液稀释成浓度为0.1,0.2,0.4,0.8,1.6 mg/L的标准溶液,供试品溶液浓度为0.4 mg/L,绘制标准曲线,根据标准曲线计算供试品的效价;或选择0.3 mg/L和0.6 mg/L为二剂量法测定浓度,计算供试品的效价。分别采用一剂量和二剂量法对替卡西林及其制剂中替卡西林的抗菌活性进行测定,并比较两种不同替卡西林R、S比例的注射用替卡西林钠克拉维酸钾的抗菌活性的高低。根据个体动物的体质量,依照0.4 mL/10 g的注射体积/体质量比,小鼠接受的注射液剂量为4 g/kg体重,每只小鼠注射0.5 mL。对照组动物注射相同体积比的生理盐水。注射速度约为0.2 mL/90 s,单只动物的注射时间约为3 min。观察72 h内小鼠的生长及死亡情况,并用Bliss法计算半数致死量(LD50),比较两种不同替卡西林R、S比例的注射用替卡西林钠克拉维酸钾的急性毒性的大小。
  结果:替卡西林浓度在0.1~1.6 mg/L范围内,吸光度值A与抗生素浓度的对数成良好的线性关系,相关系数r2=0.9996;平均回收率为98.1%, RSD为1.3%;日内、日间精密度的RSD分别为0.7%、1.1%。由替卡西林原料药及制剂的效价测定结果显示,生产企业C中替卡西林的效价值略高于生产企业D。依不同给药剂量经小鼠尾静脉注射注射用替卡西林钠克拉维酸钾后,与溶剂对照组动物相比,样品处理组动物会不同程度的出现异常反应、体质量下降和死亡的情况。LD50范围分别为:生产企业C为4.62~5.72 g/kg体重,生产企业D为3.42~4.30 g/kg体重。
  结论:该方法不仅适用于对替卡西林原料药抗菌活性的考察和急性毒性的研究,还可以对来自不同生产企业、含有不同替卡西林R、S比例的注射用替卡西林钠克拉维酸钾的抗菌活性和急性毒性进行比较,为临床安全用药提供了参考依据。
  第五部分:UPLC-ESI-MS/MS法测定大鼠静脉注射替卡西林制剂后血浆中的主成分及药物动力学研究
  目的:建立一种同时测定大鼠血浆中替卡西林和克拉维酸该2种主成分含量的UPLC-ESI-MS/MS方法,成功的应用于大鼠静脉注射给予注射用替卡西林钠克拉维酸钾后血浆中替卡西林R、S异构体和克拉维酸的药物动力学研究,并建立其药-时曲线,阐明药动学参数与特征。
  方法:大鼠静脉注射给予注射用替卡西林钠克拉维酸钾(500 mg/kg)后,分别于给药后0.08,0.25,0.5,0.75,1,2,4,6,9,12,18,24和48 h眼内眦静脉丛取血,制备血浆样品,采用乙腈直接沉淀蛋白法进行样品预处理,甲苯磺丁脲为内标。色谱柱为Waters ACQUITY BEH C18柱(50 mm×2.1 mm,1.7?m);柱温为30℃;流动相为A(0.1%甲酸水溶液, v/v)-B(0.1%甲酸乙腈溶液,v/v),采用梯度洗脱方式,梯度洗脱程序如下:0.0-1.00 min,80%-10%A;1.00-1.20 min,10%A等度洗脱;1.20-1.21 min,10%-80%A;1.21-1.50 min,80%A等度洗脱。每次进样前预平衡1 min。流速为0.6 mL/min。色谱柱后溶液无分流,全部进入离子源,总体分析时间3 min,进样量2μL。质谱条件:电喷雾离子源(ESI源),StepWave?离子源,离子源温度(Source Temp)为150℃,毛细管(Capillary)电压为2.0 kV,离子源补偿电压(Source Offset)为50 V,脱溶剂气温度(Desolvation Temp)为500℃,脱溶剂气(Desolvation)流量为800 L/Hr,锥孔气(Cone)流量为150 L/Hr,雾化气(Nebuliser)压力我7.0 Bar,接口处加热,采用多反应监测模式(MRM)。待测化合物和内标物的监测离子对分别为:替卡西林R(m/z385.2/160.2)、替卡西林S(m/z385.2/204.2)、克拉维酸 m/z197.9/136.0和甲苯磺丁脲 m/z271.1/91.1。
  结果:血浆中替卡西林R(m/z385.2/160.2)在30-10000 ng/mL范围内,线性关系良好(r2=0.9967),替卡西林S(m/z385.2/204.2)在10~10000 ng/mL范围内,线性关系良好(r2=0.9961),克拉维酸在30~10000 ng/mL范围内,线性关系良好(r2=0.9981),最低定量限(LLOQ)≤10.0 ng/mL。日内、日间精密度的RSD均小于4.3%,相对误差(RE)为-4.7%~5.0%。平均提取回收率为86.9%~96.4%。大鼠静脉注射注射用替卡西林钠克拉维酸钾后,血浆中替卡西林两差向异构体和克拉维酸等待测成分在大鼠体内的药物动力学药-时曲线有所差异。总体来说,大鼠静脉注射注射用替卡西林钠克拉维酸钾后,替卡西林两差向异构体和克拉维酸在体内吸收均较迅速,替卡西林(m/z385.2/204.2)和克拉维酸具有相近的消除速率。替卡西林(m/z385.2/160.2)的消除速率较慢。
  结论:本研究建立了UPLC-ESI-MS/MS法同时测定大鼠血浆中替卡西林和克拉维酸的含量,并应用于替卡西林制剂中2种主成分在大鼠体内的药物动力学研究。该方法操作简单快速、专属性强、灵敏度高,对该制剂的体内定量分析具有重要意义,且有益于其临床应用。
[硕士论文] 美克古丽·艾买提
药物分析学 新疆医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:建立可调激光-微顺序注射-阀上实验室荧光反猝灭法在线监测叔胺类药物含量的方法。
  方法:四苯硼钠对罗丹明B和亚甲基蓝的荧光信号有猝灭作用,而硫酸氢氯吡格雷,利血平,盐酸尼卡地平和盐酸丙咪嗪等药物分子中的叔胺结构质子化后,与四苯硼钠反应形成更稳定的疏水性离子缔合物,使罗丹明B和亚甲基蓝重新释放出荧光,且荧光信号的增强程度(△F)与这些药物的浓度成线性关系。根据上述原理,采用可调激光-光纤传感技术,建立一种荧光反猝灭法间接测定结构含有叔胺的药物含量的方法。
  结果:1.荧光信号的增强程度△F与硫酸氢氯吡格雷浓度线性回归方程为△F=4471.7C+12552,r=0.9984,线性范围为(0.07~2.82)×10-5 mol·L-1,检出下限为0.67×10-6 mol·L-1,重复性RSD为2.94%,加标回收率在93.0%~99.5%之间。2.荧光信号的增强程度△F与利血平浓度线性回归方程为△F=11791C+278.87, r=0.9986,线性范围为(0.048~1.16)×10-5 mol·L-1,检出下限为0.1×10-6 mol·L-1,重复性RSD为0.58%,加标回收率在95.1%~99%之间。3.荧光信号的增强程度△F与盐酸尼卡地平浓度线性回归方程为△F=2827C+608.41, r=0.9991,线性范围为(0.047~4.97)×10-5 mol·L-1,检出下限为0.31×10-6 mol·L-1,重复性RSD为1.24%,加标回收率在93.8%~102%之间。4.荧光信号的增强程度△F与盐酸丙咪嗪浓度线性回归方程为△F=3574C+667.74,r=0.9995,线性范围为(0.078~3.99)×10-5 mol·L-1,检出下限为0.52×10-6 mol·L-1,重复性RSD为0.45%,加标回收率在94.5%~97.2%之间。用该方法对市售药品进行测定,测定值与药品标示值基本相符。
  结论:该方法简便易行,高效迅速,可用于测定叔胺类药物中有效成分的含量。
药物分析学 新疆医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:建立一种在线富集-光纤传感分光光度法测定环境及胶囊壳中Cr(VI)含量。
  方法:在碱性条件下,硝酸铈为沉淀剂、用PTFE滤膜管对Cr(VI)进行在线富集、以HNO3为洗脱剂、二苯基碳酰二肼为显色剂、采用自制流通池与光纤光谱仪连接构成的流动注射分析系统对样品中Cr(VI)进行含量测定。考察了沉淀剂、洗脱剂、流速、富集时间、显色剂浓度、反应管长度和共存离子的影响。
  结果:最佳实验条件为:洗脱液为浓度0.50mol·L-1的硝酸,显色剂为浓度0.16mol·L-1的二苯基碳酰二肼、沉淀剂为浓度10×10-6mol·L-1的硝酸铈、反应管长度为1.50m、试剂-沉淀剂进样速度2.0ml·min-1,富集时间水样30分钟,胶囊壳样品5分钟、土壤样品5分钟时,Cr(VI)标准溶液逐步稀释配制成0.05~0.50μg·L-1的9个标准溶液系列,测量吸光度并绘制标准曲线。水样品线性回归方程为Y=0.2248X+0.0247,R2=0.9989检测限为9.77×10-3μg·L-1。平均相对偏差是1.11%,加标回收率为93.50%~103.93%。Cr(VI)标准溶液逐级稀释配制成0~3.50μg·L-1的8个标准溶液系列,测量吸光度并绘制标准曲线。胶囊壳样品线性回归方程为Y=0.0324X+0.0151,R2=0.9991,检测限为76.64×10-3μg·L-1。相对偏差是1.44%、加标回收率为94.33%~104.97%。Cr(VI)标准溶液逐级稀释配制成5.0~20.0μg·L-1的9个标准溶液系列,测量吸光度并绘制标准曲线。土壤样品线性回归方程为Y=0.0101X-0.0002,R2=0.999,检测限为0.70μg·L-1。相对偏差是1.25%、加标回收率为95.24%~105.23%。
  结论:该实验测定Cr(VI)的方法简单,样品通过在线富集排除干扰因素的影响,无需前处理,可以用于直接测定环境样品及胶囊壳中Cr(VI)的含量及评价。
[硕士论文] 周娜
药学 河北医科大学 2017(学位年度)
摘要:硫酸特布他林为选择性β2受体激动剂,用于支气管哮喘、慢性支气管炎和其它伴有支气管痉挛的肺部疾病,也可用于预防早产和胎儿窒息,具有选择性高、副作用少等特点,在国内外已得到广泛应用。本课题针对现行硫酸特布他林质量控制的不足,就影响其质量的关键指标——残留溶剂、工艺杂质与降解产物以及含量分别进行研究,为硫酸特布他林的质量评价和控制提供了新的方法和参考。
  在全面分析硫酸特布他林合成过程中所用溶剂的基础上,首次建立了一种同时测定硫酸特布他林中甲醇、乙醇、丙酮、叔丁基甲基醚、乙酸乙酯、四氢呋喃、苯、醋酸、甲苯和氯化苄共10种残留溶剂的顶空气相色谱法;建立了超高效液相色谱高分辨质谱联用(UHPLC-Q-TOF-MS/MS)法,用于硫酸特布他林工艺杂质与降解产物的结构解析和鉴定;建立了高效液相色谱(HPLC)法,用于硫酸特布他林的含量测定。
  第一部分:顶空气相色谱法同时测定硫酸特布他林中10种残留溶剂
  目的:建立测定硫酸特布他林中甲醇、乙醇、丙酮、叔丁基甲基醚、乙酸乙酯、四氢呋喃、苯、醋酸、甲苯和氯化苄共10种残留溶剂的顶空气相色谱法。
  方法:采用Agilent DB-624UI(30 m×0.32 mm,1.8μm)毛细管柱,柱温采用程序升温,起始柱温为40℃,保持3 min,以10℃/min升至90℃,保持1 min,再以40℃/min升至200℃,保持5 min。FID检测器,检测器温度为250℃,进样口温度为200℃。载气为氮气,流速为1.0 mL/min;分流比为15:1。顶空进样,顶空平衡温度为90℃,顶空时间为30 min。定量环温度为100℃,传输线温度为110℃。压力平衡时间为1 min,进样时间为1 min。
  结果:10种溶剂完全分离;在考察的浓度范围内线性关系良好,相关系数r均不小于0.9990,平均回收率为95.7%-102.4%,仪器精密度、重复性、稳定性、检测限和定量限均符合要求。3批供试品中甲醇的质量分数分别为0.035%、0.043%、0.043%,乙醇的质量分数分别为0.033%、0.034%、0.034%,丙酮的质量分数分别为0.00059%、0.00062%、0.00062%,叔丁基甲基醚、乙酸乙酯、四氢呋喃、苯、醋酸、甲苯、氯化苄均低于检测限(LOD)。
  结论:建立的顶空气相色谱法简单、准确、重复性好,可用于硫酸特布他林中残留溶剂的测定。
  第二部分:硫酸特布他林工艺杂质与降解产物的UHPLC-Q-TOF-MS/MS分析
  目的:采用超高效相色谱高分辨质谱联用技术(UHPLC-Q-TOF-MS/MS)对硫酸特布他林工艺杂质与降解产物进行结构解析和鉴定。
  方法:对硫酸特布他林质谱裂解规律进行研究,然后将硫酸特布他林供试品分别进行酸、碱、氧化、高温、高湿、光照降解及长期试验,采用UHPLC-Q-TOF-MS技术对获得的14种降解样品进行分析。色谱条件:采用phenomenex luna C18色谱柱(2.0 mm×150 mm,3μm),流动相为甲醇-10 mmol/L甲酸铵(用甲酸调pH至3.2),梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,进样量为5μL。质谱条件:采用DuoSprayTM离子源正离子模式,全扫描采集,采用动态背景扣除和信息依赖采集触发二级碎片的采集,每一循环采集12个最强峰的二级质谱图。根据测得的各降解产物及其碎片离子的准确质量数和可能分子组成,以硫酸特布他林质谱裂解规律为基础,比较降解产物与硫酸特布他林以及降解产物碎片离子之间的质量数变化,对其进行结构鉴定。
  结果:共鉴定出17个杂质,包括14个新的降解产物和3个已知杂质,其中3个已知杂质既是工艺杂质,也是降解产物。
  结论:硫酸特布他林在氧化、碱性水解和光照(碱性溶液)条件下不稳定;容易发生反应的官能团为叔丁胺基、苄基碳和苯环。本研究首次对降解产物可能的降解途径进行了推断。
  第三部分:硫酸特布他林的含量测定方法改进
  目的:对硫酸特布他林现有含量测定方法进行改进,建立高效液相色谱(HPLC)法用于硫酸特布他林的含量测定。
  方法:选用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为30 mmol/L甲酸铵(用甲酸调pH至3.0)-甲醇(体积比为90:10);流速为1.0 mL/min;检测波长为276 nm;进量样为10μL;柱温为室温。
  结果:方法的线性范围为0.01-0.40 mg/mL(r=1.000)。回收率为99.2%, RSD为0.8%(n=6)。仪器精密度、重复性、稳定性、检测限和定量限均符合要求。3批供试品中硫酸特布他林的含量分别为100.5%、98.9%、99.2%。
  结论:与现有电位滴定法和离子对高效液相色谱法(IP-HPLC)比较,改进的HPLC法更为简单、快速、经济,并可以从液相色谱图上直观反映样品中主要杂质的变化,可用于硫酸特布他林的含量测定。
[硕士论文] 杨少坤
药学 河北医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  近年来,RNA干扰在基因功能和基因治疗方面的研究较为广泛,已逐渐发展为一种较成熟的技术。RNA干扰是一种特异性细胞后转录机制,通过诱发相应mRNA的酶降解发挥基因沉默作用。双链小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)是RNA干扰的效应分子之一,理论上可抑制任何靶基因表达,已被列为基因型疾病的潜在治疗剂。但是,裸露的siRNA进入血清易被核酸酶降解,且siRNA带负电荷,亲水性强,导致其不易透过细胞膜进入细胞质发挥高效的RNAi作用。因此,siRNA应用的关键在于寻找安全、有效的递送载体。目前已有很多载体用于改善siRNA的核酸酶抗性而又不干扰其沉默效率。其中,细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)作为基因递送载体被广泛研究且表现出很大的优势。细胞穿膜肽通常由5~30个氨基酸构成,是一类能携带大分子物质进入细胞的阳离子或两亲性短肽。它可将不同的货物分子转运到细胞和组织中而不引起显著毒副作用。
  本文拟构建一种可以包载核酸类药物siRNA并提高其转染效果的纳米复合物。首先选取细胞穿膜肽中的八聚精氨酸(R8)作为siRNA的基本载体,采用硬脂酸和聚乙二醇对其进行修饰,合成出几种载体材料。再将载体材料与siRNA孵育制备成纳米复合物。然后,通过纳米粒度和zeta电位分析仪及琼脂糖凝胶电泳试验考察纳米复合物的理化性质和包载能力,从而筛选出能够缩合并递送siRNA入胞的复合物。最后,以MCF-7、A549为模型细胞进行细胞摄取试验,通过与市售产品(Lipofectamine2000)作比较,考察自制复合物介导siRNA入胞的效果。
  方法:
  1.载体合成:首先,合成SA-R8。先制备SA活化反应液,再取SA活化液加入到R8溶液中反应30min,然后将反应液以纯净水为透析液透析24 h,透析结束后取少量透析液进行质谱分析。接着,用合成的SA-R8与mPEG2000-Mal和mPEG5000-Mal反应合成SA-R8-PEG,同样将反应液以纯净水为透析液透析纯化,然后取适量透析液质谱检测。
  2.复合物制备及评价:合成的载体材料具备两亲性,在极性溶剂中能自组装成纳米粒;八聚精氨酸(R8)带正电荷,可通过静电相互作用缩合带负电荷的siRNA。基于以上原理,首先,用DEPC水溶解载体材料使自组装成空白纳米粒,随后加入药物siRNA涡旋静置,制备载siRNA的纳米复合物。然后,通过纳米粒度和zeta电位分析仪对复合物的粒径、电位进行测定。接着,通过琼脂糖凝胶电泳试验对复合物包载siRNA的能力进行考察。根据考察结果,筛选出粒径、电位合适且能够完全包载siRNA的复合物。最后,以MCF-7和A549两种细胞为模型细胞,将筛选出的最佳复合物与游离siRNA和市售产品(Lipofectamine2000)一同给药进行细胞摄取试验,通过流式细胞分析仪定量检测及评价自制复合物的细胞转染效果。
  结果:
  质谱检测结果显示,合成的SA-R8、SA-R8-PEG2000和SA-R8-PEG5000实际分子量与理论值一致或相近;复合物(SA-R8/SA-R8-PEG200020%)/siRNA的平均粒径在300~400nm之间,复合物(SA-R8/SA-R8-PEG500020%)/siRNA平均粒径在500~800nm之间,随着N/P比的增大,两者zeta电位从负变为正;琼脂糖凝胶电泳试验显示,两种复合物(SA-R8/SA-R8-PEG200020%)/siRNA和(SA-R8/SA-R8-PEG500020%)/siRNA均在N/P比为20:1时完全包载siRNA;细胞摄取试验分析显示两种纳米复合物能够成功地将siRNA转染到肿瘤细胞;且自制载体SR/SRP2K介导siRNA转染细胞能力与市售产品(Lipofectamine2000)不存在统计学差异(P>0.05)。
  结论:
  1.本文成功合成了载体材料SA-R8-PEG2000和SA-R8-PEG5000,且方法简便易行,重现性较好。
  2.通过静电相互作用成功制备了载siRNA的纳米复合物,且方法操作简便,重现性较好。通过粒径、电位的测定及凝胶电泳试验证明复合物能够成功包载模型药物siRNA。
  3.细胞摄取试验表明,相比游离siRNA,当N/P为20:1时,两种复合物(SA-R8/SA-R8-PEG200020%)/siRNA和(SA-R8/SA-R8-PEG500020%)/siRNA明显提高了siRNA的细胞摄取;且自制载体SR/SRP2K(载体SA-R8/SA-R8-PEG200020%的缩写)的siRNA细胞转染效果达到市售产品(Lipofectamine2000)水平。
  今后将继续对该递药系统的处方、工艺进行优化,进一步提高其转染效率,以期为肿瘤治疗提供新的方法。
[硕士论文] 刘欣欣
流行病与卫生统计学 河北医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:药品不良反应(Adverse drug reaction ADR)是指合格药品在正常用法用量下出现的与用药目的无关的有害反应。虽然我国的不良反应体系成立较晚,但目前我国的药品不良反应监测体系已经逐步完善。2012年河北省药品不良监测体系基本建立,在药品不良反应报告收集方面取得了很大进展,报告县级覆盖率达到100%,报告数达到42586例,每百万人口平均不良反应报告数达到592.7份,符合世界卫生组织的推荐数量。有资料显示,每年的药品不良反应报告中抗感染药品发生的不良反应例数较多,尤其是抗生素类的不良反应。本研究通过收集河北省药品监测评价中心抗感染药品应用情况数据分析全省2012年-2014年抗感染药品不良反应发生情况,尤其是严重不良反应与患者因素、地域因素以及用药因素等之间的关系,提出相应的预防措施,降低药品不良反应的发生率。
  方法:收集河北省各地市2012、2013、2014年医疗机构上报的抗感染药品不良反应报告数据,对数据中患者性别、年龄、严重级别、时间分布、医院级别、药物分类等内容进行描述性分析。利用Microsoft Excel软件(Microsoft Excel2010)对数据进行审核、整理。用X2检验对研究对象的性别、年龄、严重级别、医院级别、药物分类、地域分布等差异进行比较,用条件Logisitic回归分析计算相对危险估计值(Oddratio,OR)及其可信区间,所有P值基于双侧检验,统计学检验水准а均设定为0.05。
  结果:河北省2012年-2014年共收到抗感染药品不良反应病例报告33434例(男性14546例,女性15332例),其中严重病例报告740例,占报告总数的0.02%,其中2012年严重报告100例,2013年严重报告209例,2014年严重报告431例,严重药品不良反应/事件报告呈逐年上升的趋势。在11个地市中,保定市上报6288例病例报告,上报报告数量明显高于其它地市。在不同级别医疗机构中,三级医疗机构上报严重药品不良反应/事件报告178例,占比5.67%;发生药品不良反应的抗感染药物主要由抗生素类和全合成抗感染类构成。与注射给药途径相比口服给药途径更易引起不良反应。
  单因素分析发现,严重药品不良反应的发生与患者的年龄、体重、既往药品不良反应史、吸烟史、药物分类、给药途径、医院分级、地域8个因素有关。多因素分析结果显示老年患者、既往有药品不良反应史、抗生素类药物、注射给药途径、三级医疗机构、经济发达地区6个因素是不良反应的危险因素。年龄方面,老年患者更易出现不良反应(OR=2.178);既往药品不良反应史患者易发生药品不良反应;药物分类方面,合成抗感染类药品相比抗生素类更不易发生药品不良反应(OR=0.236);给药途径方面,注射给药途径更易发生药品不良反应(OR=0.556);医院分级方面,三级医疗机构更易发生药品不良反应(OR=0.928);地域方面,经济发达的城市相比较经济欠发达城市更易发生药品不良反应(OR=0.471)。
  结论:
  1、医务人员在使用抗生素治疗的时候应注意:
  1.1、对待老年患者以及有既往药品不良反应史的患者应该更加小心、谨慎,老年人基础疾病较多,多存在长期口服用药的现象,临床医务人员对老年人用药时应慎重,考虑联合用药引起的药品不良反应,坚持合理用药原则,做到个体化给药,从而降低药品不良反应的发生率。
  1.2、临床上根据病情选择合适的给药途径,能口服给药达到治疗目的,原则上尽量不选择注射给药。
  2、基层医疗机构应加强对药品不良反应的重视程度,应按照《药品不良反应报告和监测管理办法》主动上报药品不良反应报告。
[硕士论文] 李楠
卫生检验与检疫 河北医科大学 2017(学位年度)
摘要:色谱法(Chromatography)是一种对混合物进行分离分析的方法。色谱法因其具有很强的分离能力,加上现代色谱检测器具有很高的灵敏度,色谱法已然成为分析复杂混合物的重要手段。其中,应用最广泛的高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC),自20世纪60年代崛起,经过几十年的发展,在理论和实践等方面都日趋完善,目前已经广泛应用于医药、食品、环境、农业及生命科学等各个领域。高效液相色谱法与经典液相色谱法相比,具有高效、高速、高灵敏度和高自动化等特点,与气相色谱相比同时也具有应用范围广、选择性高、对温度要求低以及馏分易于收集和制备等优点。
  霉菌毒素(Mycotoxins)是一类由产毒丝状真菌产生的有毒代谢产物,能够在多种作物上存活,尤其常见于作物收获前后。霉菌毒素可通过食品或饲料进入人和动物体内,引起多脏器的损伤,危害着人类和动物的生命安全。因此,对于霉菌毒素能否进行准确的检测变得十分重要。然而,由于霉菌毒素在环境样品中是微量存在的,且其生存的基质成分复杂,这无疑给检测造成了巨大的困扰。对于常见的黄曲霉毒素(Aflatoxins),目前已有较为成熟的检测方法,但是对于同样常见的伏马菌素(Fumonisins),却一直缺乏一种有效且重现性良好的检测方法。针对这一问题,本人在论文的第一部分进行了实验方法的探索研究,并取得了较为满意的实验结果。
  利多卡因与丙泊酚是临床上广泛应用的麻醉药,联合应用于小儿手术、人工流产等的镇痛麻醉,但目前尚无同时检测这两种物质的文献报道。在论文的第二部分,采用高效液相色谱-在线净化技术,在兼顾样品检出限与线性范围的同时,串联使用了紫外(Ultraviolet, UV)和荧光(Fluorescence Detection, FLD)检测器,对血液中的麻醉药物利多卡因和丙泊酚进行了同时检测,取得了满意的实验结果,对于指导临床用药具有实际意义。
  第一部分:高效液相色谱法在线柱前衍生检测伏马菌素B1和B2
  目的:建立测定伏马菌素B1和B2的在线柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测新方法。
  方法:应用高效液相色谱技术,联用高灵敏的荧光检测器和高自动化的在线衍生技术,对玉米样品中的伏马菌素B1和B2进行检测。采集到的玉米样品粉碎后经过80%甲醇溶液震荡提取两次,离心后取上清液,经过滤膜过滤后,用 PBS缓冲液稀释待用。而后,样品溶液需经过免疫亲和柱(Immunoaffinity Column, IAC)除杂、浓缩,最终的洗脱液经滤膜过滤后进样分析。在检测之前,样品要先经过在线衍生,以邻苯二甲醛(O-phthalaldehyde, OPA)和2-巯基乙醇(2-Mercaptoethanol,2-ME)为衍生剂,而后进入C18色谱柱分离,荧光检测器检测,外标法定量。
  结果:在优化的条件下测得伏马菌素 B1和 B2的线性范围分别为0.1~5.0μg/mL(FB1)以及0.06~2.5μg/mL(FB2),线性回归方程分别为Y=7832.79+116714.74X(FB1),Y=4499.88+53501.98X(FB2),线性相关系数分别为0.9999和0.9992,最低检出限分别为0.10和0.26 mg/kg。分别对1.0μg/mL的FB1和0.5μg/mL的FB2每天连续进行7次平行测定,并连续测定7天,测得FB1的相对标准偏差为4.38%(日内)和6.90%(日间);FB2的相对标准偏差为3.15%(日内)和8.50%(日间)。对玉米样品中的伏马菌素B1和B2进行检测,其加标回收率在85.6%~119.2%之间。
  结论:该方法简便快速,自动化程度高,免去了人工衍生过程中的操作误差,检测结果准确可靠、重复性好。
  第二部分:在线净化-高效液相色谱双检测器法同时测定麻醉药物利多卡因和丙泊酚
  目的:建立同时检测血浆中麻醉药物利多卡因和丙泊酚的在线净化-双检测器-高效液相色谱新方法。
  方法:本实验基于高效液相色谱法,联用在线净化以及串联检测器技术,对利多卡因和丙泊酚进行了联合检测。对实验的色谱条件以及在线净化条件进行了优化。最终,血液样品经12000 r/min离心10 min,取上清,用甲醇沉淀蛋白后直接进样,经在线固相萃取柱在线净化,梯度洗脱经反相C18色谱柱分离,紫外检测器(UV)串联荧光检测器(FLD)检测,外标法定量。而后,对wistar大鼠注射待测药物并对其血液进行了检测。
  结果:在优化的条件下测得利多卡因的线性范围为0.08~80 mg/L,线性回归方程Y=-0.2263+0.8281X,相关系数r=0.9999,最低检出限为24μg/L。分别对0.2,2.0,20 mg/L的利多卡因连续进行6次平行测定,获得相对标准偏差为1.2~5.0%。对血液中的利多卡因进行净化检测,其加标回收率在95.4%~108.9%之间。
  在优化的条件下测得丙泊酚的线性范围为0.0025~20 mg/L,线性回归方程为 UV: Y=-0.4053+0.8262X, r=0.9999, FLD: Y=-731.3385+1999852.5522X, r=0.9999,最低检出限为0.75μg/L。分别对0.05,0.5,5.0 mg/L的丙泊酚连续进行6次平行测定,获得相对标准偏差为1.9~3.5%。同样,对血液中的丙泊酚进行净化检测,其加标回收率在96.9%~98.6%之间。
  结论:该方法简便快速,易实现自动化,可用于利多卡因和丙泊酚血药浓度的监测。
[硕士论文] 王宣
制药工程 江苏大学 2016(学位年度)
摘要:金属催化剂是以金属为主要活性组分的固体催化剂,广泛应用于工业生产,在药物合成中大量运用在加氢、脱氢、异构化或分解等反应中,是药物合成中非常重要的一类催化剂。该类催化剂反应后需要选择用吸附、络合等合适方法去除,若去除不彻底会导致重金属残留在人体内积聚,从而危害人体健康。各国药典以及ICH、EMBA等都对药品中的重金属残留进行了控制。重金属检测的方法主要有比色法、火焰原子吸收法、石墨炉原子吸收法、电感耦合等离子体质谱法和电化学分析等多种方法。本次研究选择了镍、钯、铁、铜这四种常见的金属催化剂为研究对象,进行了同种药物选择不同方法进行比较以及不同药物中重金属残留检测的方法学建立研究。
  主要分为以下四个部分:
  1.药物中镍残留的检测方法研究。分别建立了石墨炉原子吸收分光光度法和电感耦合等离子体质谱法对利伐沙班中镍残留的测定方法,并对两种方法以及结果进行比较。结果表明两种方法对结果的测量无明显差异,但电感耦合等离子体质谱法具有分析速度快、检出限更低、灵敏度高以及可多种元素同时测定等优点。
  2.药物中钯残留的测定研究。对盐酸甲哌卡因和盐酸多奈哌齐这两种原料药建立了电感耦合等离子体质谱法测定钯残留的方法学,该方法在1~200μg/L范围内线性良好,方法检出限为0.006μg/g,两种原料加标平均回收率均在98%以上,本方法线性范围广、检出限低、准确度精密度好,适用于盐酸甲哌卡因和盐酸多奈哌齐这两种原料药中钯残留的测定。
  3.药物中铁残留的测定研究。对西地那非原料药建立了电感耦合等离子体质谱法测定铁残留的方法学,该方法在5~100μg/L范围内线性良好,方法检出限为0.03μg/g,加标回收率平均为103.1%,本方法线性范围广、检出限低、准确度精密度好,适用于西地那非原料药中铁残留的测定。
  4.药物中铜残留的测定研究。对左旋多巴原料药建立了电感耦合等离子体质谱法测定铜残留的方法学,该方法在0~50μg/L范围内线性良好,方法检出限为0.01μg/g,加标回收率平均为101.4%,本方法线性范围广、检出限低、准确度精密度好,适用于左旋多巴原料药中铜残留的测定。
  本文主要以建立电感耦合等离子体质谱法检测重金属元素残留为主,并在与石墨炉原子吸收分光光度法的比较中突出了电感耦合等离子体质谱法线性范围广、检出限低、灵敏度高、干扰少、分析速度快、可进行多种元素同时测定等优点。电感耦合等离子体质谱法可以分析元素周期表中所有金属元素,在药物中痕量重金属残留的测定方面更有优势。
[硕士论文] 李婷婷
药物分析 郑州大学 2016(学位年度)
摘要:本文为考察苯磺酸左旋氨氯地平片的质量现状,借助于国家评价性抽验,按国家法定检验标准及非法定标准研究对该品种进行抽查检验,并对结果进行统计分析,发现该品种在质量标准,以及该药原辅料、配伍、生产工艺、杂质、贮藏等方面存在问题,为确保苯磺酸左旋氨氯地平片在生产、经营、使用等各个环节的质量安全进行控制,为各环节的监管提供技术支持。
  本文对抽验样品依据现标准常规检验,汇总结果并剖析。(1)结合法定检验结果,通过文献检索、企业调研及风险点分析;(2)建立本品有关物质测定的LC-MS/MS和HPLC方法并对132批次样品进行测定,考察生产工艺与有关物质关系,对水活度和环境温湿度与氨氯地平乳糖加合物杂质相关性研究;(3)采用LC-MS/MS、HPLC、TLC和红外光谱与X射线粉末衍射分析等各种方法,开展强光、高温、高湿等影响因素试验、溶出曲线一致性评价、右旋异构体考察、左旋氨氯地平立体专属性鉴别、原料晶型研究、近红外模型建立等一系列探索及评价。
  本文通过研究得出以下结果与结论:(1)按法定标准检验132批次,结果均符合规定,但发现在质量标准方面11个标准差异较大,检验项目在性状、鉴别、检查和含量测定项均存在差异,设置不全面,检验方法专属性差,有待于进一步统一提高现行标准。(2)综合探索性研究检验结果发现,1家生产企业未按批准的处方生产;部分企业处方工艺合理性欠佳;生产工艺宜采用直压工艺,若用湿法制粒工艺应控制物料干燥温度;包装宜选用遮光、阻隔性好的材料,贮藏条件宜为遮光,密封,阴凉处保存。考察11个生产企业105批次右旋异构体含量均小于1.5%的限度。考察105批次左旋氨氯地平立体专属性鉴别,均符合规定。(3)经红外光谱与X射线粉末衍射分析,各企业原料晶型一致。建立10个一致性检验模型,2个相关系数模型,发现处方中添加乳糖与未添加乳糖样品的图谱有明显差别,提示近红外光谱可初步监测各生产企业是否变更处方工艺。归纳法定检验、探索性研究检验及综合评分的结果,苯磺酸左旋氨氯地平片整体质量评价“好”。现行标准“基本可行”。
  本研究以期对苯磺酸左旋氨氯地平片进行全面综合的分析,发现该药品在安全有效、工艺的科学合理、标准的规范统一等方面的问题,提出解决问题的方法,最终提高产品质量,确保我国人民用药安全。
[硕士论文] 刘璐
药学 浙江工业大学 2016(学位年度)
摘要:目的:研究保健食品欣力林片对化学性肝损伤的辅助保护功能和机制并对其安全性毒理学进行评价。
  方法:根据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)的要求,利用酒精肝损伤模型和四氯化碳肝损伤模型研究欣力林片对化学性肝损伤的辅助保护作用和机理。功能学研究中,设三个剂量组,剂量为125、250和750mg/kg,分别相当于人推荐量的5、10和30倍。在酒精肝损伤模型中,测定肝脏组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、甘油三脂(TG)含量并进行病理组织学检查;在四氯化碳肝损伤模型中,测定小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性、小鼠肝脏组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量并进行肝脏病理组织学检查;同时用DNA片段化实验检测细胞凋亡情况、用免疫组化法和Western blot法检测肝脏组织中Bax和Bcl-2蛋白表达。按卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)的要求对欣力林片进行急性毒性试验和30天喂养试验,测定本品的大小鼠最大耐受剂量(MTD值)、大鼠体重、进食量、血常规、血液生化指标、脏器重量、脏体比等指标及并进行病理组织学检查。最后对欣力林片进行遗传毒理学评价,进行鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验、小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验。
  结果:在酒精肝损伤模型中,与空白对照组比较,模型对照组肝脏组织中GSH含量降低, TG含量升高,小鼠肝脏细胞脂肪变性得分值明显升高,说明酒精肝损伤模型成立;与模型对照组比较,高剂量组GSH含量升高;中、高2个剂量组TG含量均降低;3个剂量组肝脏细胞脂肪变性得分值均降低。在CCL4肝损伤模型中,与空白对照组比较,模型对照组小鼠血清中的ALT、AST、小鼠肝脏组织中MDA含量均升高,小鼠肝脏组织中GSH、GSH-Px含量均降低,说明四氯化碳损伤模型成立;与模型对照组比较,低、中、高剂量ALT、AST含量降低,低、中、高剂量组MDA含量降低,高剂量组GSH-Px和中、高剂量组GSH含量均降低,小鼠病理组织学结果表明欣力林片对CCL4肝损伤有一定的改善作用;在DNA片段化检测实验中,出现不同梯度的条带;在Western blot实验和免疫组化实验中,Bax的蛋白表达下调,Bcl-2的蛋白表达上调。
  在急性毒性试验中,大、小鼠均未出现中毒症状和死亡情况,且雌雄性大鼠和小鼠的最大耐受剂量(MTD)均大于18g/kg BW,按照急性毒性分级标准,欣力林片的急性毒性级别为无毒级。在30天喂养试验中,各剂量组大鼠体重、进食量、血常规和血液生化指标等指标与对照组比较均无统计学差异,大鼠脏器外观和病理切片均未发现病理变化,实验结果表明三个剂量组各项指标均未见与欣力林片相关的明显毒性反应。在Ames试验中,回变菌落数均未超过空白对照组回变菌落数的两倍,且各剂量组间无明显的剂量反应关系,可知Ames实验结果为阴性;在小鼠骨髓微核试验中,与阴性对照组比较,各剂量组微核率均无统计学差异,而阳性对照组则明显高于阴性对照组,可知小鼠骨髓微核实验结果为阴性;在小鼠精子畸形试验中,与阴性对照组比较,各剂量组精子畸形率均无显著的统计学差异,而阳性对照组精子畸形率升高且有统计学差异,可知小鼠精子畸形实验结果为阴性。综上可知,可判定欣力林片遗传毒性实验结果为阴性,表明欣力林片在本实验剂量中无遗传毒性。
  结论:欣力林片对两种化学性肝损伤均有辅助保护作用,其机制可能与抑制细胞凋亡或抗氧化作用有关。同时30d喂养试验和三项遗传毒理学试验欣力林片三剂量组均未出现明显的毒性反应。根据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)判定,欣力林片是一种有效安全的对化学性肝损伤有辅助保护作用且无毒性的保健食品。
[硕士论文] 李佳妮
药学 浙江工业大学 2016(学位年度)
摘要:本论文为国家药典委员会下达的国家药品标准提高项目,目的是运用现代分析技术,提高和完善阿那曲唑原料药及其片剂的质量标准,为中国药典增修订质量控制项目提供科学依据。
  第一部分建立了新的梯度洗脱HPLC法,分析阿那曲唑及其片剂中的有关物质。比较了国内外标准中有关物质的检查方法,对流动相、梯度洗脱程序、检测波长等实验条件进行了研究和选择。并作了方法学验证,方法专属性强、灵敏度高。
  第二部分研究了毛细管气相色谱法分析阿那曲唑中11种残留溶剂的方法。对进样方式、色谱柱、柱温、溶解介质等实验条件进行了研究和选择,并作了方法学验证,方法准确可靠。同时对多个厂家样品中检出的残留溶剂,采用气相色谱-质谱联用法进行了确证。
  第三部分研究了阿那曲唑片的溶出度检查方法。参考进口注册标准,将现行标准中的小杯法改为桨法,转速由100转/分改为50转/分,使阿那曲唑片溶出度检查方法更为科学合理。
  第四部分进行了国内外阿那曲唑片溶出曲线相似性评价,研究了国内阿那曲唑片在四种不同溶出介质中的体外溶出行为,并与国外原研片进行了溶出曲线相似性比较。结果国内3家企业的产品均与原研制剂溶出曲线相似。
  第五部分通过可模拟药物体内释放吸收行为的GastroPlus软件,依据阿那曲唑的理化性质和文献报道的药代参数,结合体外溶出实验结果,建立了体内外相关性模型,预测口服阿那曲唑片的诸药代参数,评价了其生物等效性。
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