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[博士论文] 赵莉
口腔临床医学 山东大学 2018(学位年度)
摘要:牙周炎是口腔的主要疾病之一,人群中发病率高,严重影响人们的生活质量。强调“牙周疾病重在预防”的今天,牙周炎发病机制的相关研究显得尤为重要。牙周病的主要致病因素是细菌及其代谢产物,这些致病因素破坏牙周支持组织的同时,亦能激发宿主的免疫调节应答,宿主自身的免疫应答对于牙周炎症进程同样发挥重要作用。
  亲环素A(Cyclophilin A,CyPA)又称为环胞索A结合蛋白,是免疫抑制药物环孢素A(CsA)主要的胞质结合蛋白。亲环素A在蛋白质折叠,胞内运输和T细胞激活等生物学活动中均发挥重要的作用。最新研究表明,胞外亲环素A对白细胞、单核细胞和淋巴细胞等均有趋化作用,针对亲环素A趋化作用的研究成为新的研究热点。亲环素A在炎症牙龈组织中的表达与健康牙龈组织相比显著升高,定位于炎性浸润细胞和浸润牙龈结缔组织,与炎症牙龈中MMP-1,MMP-2和MMP-9的表达密切相关。亲环素A亦可通过诱导趋化中性粒细胞,调节TNF-a/IL-8的分泌参与牙周组织的炎症反应。CD68是单核细胞谱系(如单核吞噬细胞、破骨细胞)、循环巨噬细胞和组织巨噬细胞(如Kupffer细胞、小胶质细胞)中细胞高度特异性表达的一种蛋白质。牙周组织中CD68+炎性细胞的表达水平,很大程度上决定牙槽骨破坏的水平,影响牙周炎的预后。日前,对于亲环素A和CD68+炎性细胞之间存在何种关系,这种关系在牙周炎症过程中发挥何种作用,相关研究仍然比较匮乏。
  动物实验部分,建立大鼠下颌第一磨牙结扎诱导的牙周炎实验模型,观察牙周炎自然病程中亲环素A的组织学定位和表达变化,探讨亲环素A在牙周炎病程中的作用;观察牙周炎病程中CD68+炎性细胞的表达;对比观察亲环素A和CD68+炎性细胞的组织学定位。为进一步证实亲环素A和CD68+炎性细胞间的密切关系,给予外源性的亲环素A重组蛋白,对比观察结扎诱导的牙周炎病程中CD68+炎性细胞的表达变化。结果表明:伴随牙周炎症的加重,亲环素A表达逐渐增加。阳性表达位于炎性浸润区的单核细胞和多核细胞,以及牙槽骨边缘的多核细胞。CD68+炎性细胞亦分布在浸润区的单核细胞和多核细胞,以及牙槽骨边缘的多核细胞。TRAP染色证实牙槽骨边缘的多核细胞为破骨细胞。给予外源性的亲环素A,炎性浸润区CD68+炎性细胞表达增加,牙槽骨边缘的破骨细胞增加,Miro-CT显示牙槽骨吸收增加。亲环素A可通过趋化CD68+炎性细胞,参与牙周炎性浸润和牙槽骨吸收。
  临床研究部分,收集翻瓣手术或冠延长术获取的人牙周炎牙龈组织,收集埋伏牙拔除术切除的正常牙龈组织,观察牙周炎症条件下亲环素A的表达,观察CD3+、CD4+、CD22+和CD68+炎性细胞的表达,进一步探讨亲环素A及相关炎性细胞在人牙周炎病理进程中的作用。亲环素A在人牙周炎组织中表达较正常牙龈显著增加;CD3+、CD4+、CD22+和CD68+炎性浸润细胞均可在炎症性牙龈组织中观察到;免疫荧光双染结果进一步证实亲环素A同CD68+炎症细胞间关系密切。
  本研究证实了亲环素A参与大鼠和人牙周炎症进程,亲环素A可通过上调CD68+炎性细胞,参与牙周炎性浸润和牙槽骨吸收。本研究一方面可以进一步丰富牙周炎发病机制的理论研究;另一方面,为将来研发亲环素A拮抗剂阻断亲环素A的作用,控制牙周炎性浸润和牙槽骨吸收提供新的治疗思路,有着积极的临床应用价值。
[硕士论文] 吴妍慧
口腔医学 郑州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  本研究旨在通过临床资料研究年轻恒牙酸蚀症的分布情况,并测定上下颌年轻恒牙分别被可口可乐和Gluma磷酸酸蚀剂酸蚀前后的显微硬度的变化、扫描电镜观察微观表面形貌,以探讨上下颌年轻恒牙酸蚀易感性差异的可能原因,并在此基础上进一步探讨上下颌年轻恒牙釉质的最佳酸蚀时间。
  方法:
  收集20例口腔美容科年轻恒牙酸蚀症患者,分析其酸蚀症牙位分布情况;收集口腔颌面外科门诊160颗因正畸减数拔除的新鲜上下颌年轻恒前磨牙,用于制备颊面中1/3-颈1/3的5mm×5mm的釉质标本块。釉质块除观察区外其余各面涂布两层耐酸指甲油,并用甲基丙烯酸甲酯包埋四周,磨平底面。上下颌牙齿分别分为可乐酸蚀组,磷酸酸蚀组和空白对照组,单颌各有9组,每组各8颗釉质块。可乐酸蚀组按时间梯度分为5min组,15min组,30min组,60min组;磷酸酸蚀组按时间梯度分为15s组,30s组,45s组,60s组;空白对照组样本则置于去离子水中进行对照。检测各组样本酸蚀前后显微硬度变化值,并用扫描电子显微镜(SEM)观察其釉质酸蚀后微观变化。
  结果:
  1.上下颌牙齿酸蚀的好发牙位并不相同,分别有69.64%的上颌牙齿和47.86%的下颌牙齿出现了牙齿酸蚀,上下颌间有统计学差异(P<0.05)。
  2.与空白对照组相比,不同酸蚀时间后,上下颌牙齿显微硬度随酸蚀时间延长逐渐降低,可乐组釉质显微硬度变化与酸蚀时间大致呈简单线性关系。
  3.显微硬度结果显示:可乐酸蚀组:除5min酸蚀组外,其他3组间上下颌牙齿均有统计学差异(P<0.05)。磷酸酸蚀组:除15s酸蚀组外,其余3组上下颌牙齿显微硬度变化均有统计学差异(P<0.05)。
  4.SEM结果显示:随酸蚀时间延长,釉质表面脱矿程度加重,釉质由初始的鱼鳞状及蜂窝状逐渐转变为大小不等较深的弹坑样凹陷,随酸蚀时间延长,呈现明显过度酸蚀样改变,凹陷深度变浅。高倍镜下可见排列规则的釉柱晶体变得圆钝,并逐渐丧失了形态。但无论是可乐组还是磷酸组,扫描电镜显示,在一定时间内上颌牙齿受酸蚀程度稍重于下颌牙齿。
  5.可乐组超过30min或磷酸组超过45s时,上下颌牙齿均出现不可逆性破坏,但上颌牙齿脱矿程度更重。磷酸组上颌牙齿酸蚀30s和下颌牙齿酸蚀45s时,SEM显示釉柱凹陷较深,排列较规则,结构最为清晰,酸蚀程度适中。
  结论:
  1.上颌年轻恒牙釉质酸蚀易感性略高于下颌。
  2.30s和45s可能分别是上下颌年轻恒牙釉质的最佳酸蚀时间。
  3.短时间内可乐累计饮用时间最好少于30min,以免造成牙齿不可逆破坏。
[博士论文] 卢婷
遗传学 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:本文分为以下两个部分进行探讨:
  第一部分:DD-Ⅰ致病基因Vps4b敲除小鼠认知损害及机制研究
  背景:
  阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)是一种常见的进行性神经退行性疾病,该病的主要表现为全脑不可逆性记忆功能损害,是公认的一种难治性疾病,其发病率和年龄的增长密切相关。AD的主要病理特征为细胞外β淀粉蛋白(β-amloid,Aβ)沉积和细胞内过量的Tau蛋白磷酸化形成神经纤维缠结(Neurogibrillary tangles,NFTs),从而导致突触功能障碍和神经元丢失等。囊泡转运是细胞中一个至关重要的过程,一旦囊泡转运系统不能正常工作,导致细胞内有害蛋白蓄积,蛋白溶酶体降解过程紊乱,最终导致认知损害等神经退行性疾病。
  目的:
  本研究采用CRISPR/cas9技术构建C57BL/6J背景的Vps4b+/-基因敲除小鼠模型,通过对小鼠行为学实验,评估基因敲除小鼠情感及认知能力的变化;进一步通过蛋白组学实验,确定基因敲除后与AD通路有关,通过小鼠脑组织AD相关蛋白表达的变化的验证,以及对神经元及突触可塑性等影响研究,以阐明Vps4b在小鼠认知损中扮演的角色及其具体致病机制。
  材料与方法:
  通过小鼠行为学实验探索小鼠情绪及认知能力的变化。采用iTRAQ蛋白组学实验,检测Vps4b+/-小鼠脑组织蛋白差异表达情况,免疫印记技术验证差异表达蛋白;采用免疫荧光及免疫印记实验,探讨老年小鼠脑组织蛋白差异表达情况;进一步采用尼氏染色、高尔基染色探索小鼠神经元数目及突触可塑性变化;生物信息学预测VPS4B染色质相互区域。透射电镜观察脑组织多泡体、自噬体、溶酶体结构变化。
  结果:
  小鼠旷场实验、黑白箱实验、高架迷宫实验结果显示Vps4b+/-较正常小鼠情绪更焦虑;三箱社交行为学实验、新事物识别实验,水迷宫实验结果显示Vps4b+/-,认知及记忆能力受损。iTRAQ蛋白组学结果显示Vps4b+/-小鼠AD相关通路蛋白表达明显上升,WB实验验证实验结果;免疫荧光及WB实验结构显示Vps4b+/-小鼠脑组织中App,Aβ40,Aβ42,P-Tau表达增多,Map2,Syp,Bcl2表达减少;病理结果显示Vps4b+/-小鼠神经元数目减少,神经元分枝及树突棘较正常小鼠显著减少;生物信息学预测人的大脑皮层中VPS4B与BCL2染色质区域存在相互作用。透射电镜显性Vps4b+/-小鼠脑组织内囊泡运输受损,自噬体、溶酶体明显增多。
  结论:
  Vps4b+/-基因敲除杂合子小鼠认知能力受损,其致病机制为Vps4b敲降引起App,Aβ40,Aβ42,P-Tau表达增多,Map2,Syp表达减少,从而导致小鼠脑组织神经元数目及结构受损,小鼠表现为记忆及认知功能受损。同时小鼠脑组织内囊泡运输受损,导致细胞内有害物质蓄积,也可导致神经退行性疾病。
  第二部分:AMBN突变导致牙釉质及牙本质发育缺陷研究
  背景和目的:成釉蛋白(Amcloblastin,AMBN)是一种参与釉质形成的蛋白质,并通过上皮间充质相互作用参与牙齿发育早期牙本质的形成。AMBN是釉质基质蛋白中含量仅次于釉原蛋白,在釉质形成过程中发挥重要的作用,AMBN突变可导致遗传性釉质发育不全,但AMBN变导致牙本质异常至今尚未见报导。
  材料与方法:
  以一个中国广东湛江的牙齿发育异常家系成员为研究对象,采集家系成员外周血和临床检查资料。采用Micro-CT及扫描电镜对脱落患牙超微结构进行分析。采用全外显子测序、Sanger测序技术以及家系共分离等方法,确定致病基因与突变位点并进行人群突变率筛查。采用Polyphen-2和I-TASSER分别对AMBN蛋白突变位点保守性和突变蛋白的三维构象变化情况进行预测。转染AMBN野生型和突变型真核表达载体至人源的HEK-293T细胞,比较野生型与突变型融合蛋白在细胞中亚细胞定位的差异,检测突变型AMBN在HGF细胞和HEK-293T细胞中mRNA和AMBN蛋白与野生型表达水平的差异。
  结果:
  根据家系中患者情况我们绘制了该家系图谱,确定其为常染色体显性遗传牙釉质发育不全及牙本质发育异常疾病,可同时累及恒牙及乳牙。Micro-CT结果显示,患牙釉质及牙本质密度均比正常牙齿较低,髓腔内可见高密度钙化的髓石。SEM结果表明患牙釉质釉柱排列稀疏,偶尔可见无结构钙化区域,釉牙本质界缺少连续贝壳状的曲线,呈间隙增宽的直线状,牙本质小管分布不均,大小不一。对家系成员全基因组外显子测序、Sanger测序、STR连锁分析结果显示,家系患病成员AMBN基因13号外显子(c.1069 C>T),致病突变家系出现共分离,且人群中未发现该突变。蛋白结构及有害性预测分析结果显示位于AMBN蛋白357位点在多个物种中为保高度守位点,突变后蛋白三维结构发生改变,且为有害性改变。亚细胞定位结果显示野生型及突变型AMBN融合蛋白均定位于胞浆中。qRT-PCR检测结果显示突变AMBN基因mRNA相对表达量与野生型无差异,但突变后蛋白表达水平显著高于野生型蛋白(P<0.001)。
  结论:
  本实验首次发现IMBN(c.1069 C>T)突变导致牙齿釉质发育不全合并牙本质发育异常。牙齿矿化不良,超微结构改变。新的突变位点在AMBN蛋白序列中具有高度保守性,导致蛋白三维构象发生改变,为有害突变,突变后蛋白表达量增加。本研究表明么尬埘牙釉质及牙本质发育具有重要作用。
[硕士论文] 鲁方丽
口腔医学 郑州大学 2018(学位年度)
摘要:背景与目的:
  遗传性牙本质发育不良Ⅰ型(Dentin dysplasia typeⅠ,DD-Ⅰ)是一类牙根发育不良且牙本质矿化程度降低的一类常染色体显性遗传病,主要特征是牙根短小或缺如,髓腔完全或不完全闭锁,部分无龋牙根尖有阴影。目前对DD-Ⅰ主要集中在患牙超微结构的研究,且主要对牙本质异常进行描述,本课题组2010年采集了一个DD-Ⅰ家系,对先证者口腔及患牙病理检查发现,其患牙牙槽骨高度不足,牙骨质变薄。因此,本研究拟通过体外分离培养DD-Ⅰ家系先证者的牙囊干细胞(dental follicle stem cells,DFCs),观察其生物特性及成骨/成牙骨质分化能力,从细胞生物学方面为DD-Ⅰ牙根发育病理机制寻找新的线索。
  材料与方法:
  第一部分 DFCs的体外分离培养及增殖能力的研究
  1.拔除DD-Ⅰ型家系先证者及健康人根尖发育未完全的第三磨牙,并采用改良酶消化+组织块法分离培养DFCs,分别为DD-Ⅰ组和健康对照组,倒置显微镜下观察两组细胞形态;
  2.采用免疫荧光检测抗波丝蛋白(VIM)、抗角蛋白(CK)来鉴定DFCs来源;
  3.运用有限稀释法、MTT法检测两组DFCs克隆形成率和生长曲线;
  第二部分 DFCs的成骨/成牙骨质分化能力的体外探究
  1.对两组DFCs矿化诱导14d、21d、28d后,行茜素红染色观察体外矿化结节形成情况;
  2.采用ALP染色(改良Gomori钙钴法)检测两组DFCs矿化诱导7d、14d、21d后的碱性磷酸酶活性;
  3.从mRNA和蛋白水平检测矿化相关蛋白ALP、OCN、BSP、RUNX-2的表达来评估DFCs的成骨/成牙骨质能力。
  结果:
  1.倒置显微镜下观察,DFCs为典型的成纤维样细胞,呈长梭形,两极突起较长。两组DFCs形态相似,但是传代时间不同,一般DD-Ⅰ组传代需要约3-4d,而健康对照组则传代需约5-6天。
  2.免疫荧光显示:两组DFCs的Vim(+),CK(-),说明细胞来源于间充质干细胞;
  3.细胞克隆实验显示:DD-Ⅰ组DFCs克隆形成率约为12.5%,而健康对照组DFCs克隆形成率为10.5%;
  4.MTT检测细胞生长曲线显示:两组DFCs生长曲线均呈“S”型;与健康对照组相比,DD-Ⅰ组DFCs从第3天开始增殖较快,且差异具有统计学意义(P<0.05);
  5.矿化诱导14d后行茜素红染色显示:两组DFCs均可见橘红色钙化结节及黑色钙盐成分,但与健康对照组相比,DD-Ⅰ组DFCs中钙结节数量少,面积小,钙盐成分也减少。
  6.ALP染色结果显示:DD-Ⅰ组和健康对照组ALP阳性细胞随着矿化诱导时间的增加而增加,且每个时间点中DD-Ⅰ组阳性细胞量均少于健康对照组。
  7.荧光定量PCR结果显示:随着成骨诱导时间的增加,两组ALP、OCN、BSP、RUNX-2的表达逐渐升高;两组每个时间点相比,DD-Ⅰ组各基因表达量均比健康对照组低,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。
  8.Western blot结果显示:ALP、BSP、OCN、RUNX-2在诱导从第7天开始,两组成骨蛋白的表达量逐渐增加,且每个时间点相比,DD-Ⅰ组各蛋白表达量均比健康对照组低,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。
  结论:
  1.采用“酶消化+组织块法”能成功培养出DD-Ⅰ型患牙的DFCs,且细胞形态基本正常,细胞独立生存及增殖能力较强;
  2.DD-Ⅰ型患牙DFCs向成骨/成牙骨质分化能力降低,在牙根发育过程中可能会影响牙骨质和牙槽骨的形成不足,进而造成牙根发育不足。
[硕士论文] 李晓聪
口腔医学 郑州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  细胞液泡蛋白质分选因子4B(Vacuolar protein sorting4B,VPS4B)是AAAATP酶家族成员之一,在细胞内蛋白质运输、溶酶体降解、病毒体出芽以及调节有丝分裂等过程中发挥着重要的作用。本课题组此前对一个牙本质发育不良Ⅰ型(Dentin dysplasia typeⅠ,DD-Ⅰ)家系进行外周血基因测序发现其致病基因为VPS4B,其次通过体外细胞实验初步阐述VPS4B基因通过Wnt通路调控牙齿的发育过程。为阐明该基因在牙齿发育过程中的详细作用机制,构建Vps4b基因敲除小鼠展开进一步的研究。本实验运用已成功构建的Vps4b基因敲除小鼠模型,明确Vps4b基因在牙胚发育过程中的分布情况,并探讨该基因突变对牙齿发育相关基因的影响,进一步揭示该基因在牙齿致畸中的作用机制。
  方法:
  以CRISPR-Cas9技术构建的Vps4b基因敲除小鼠模型为研究对象,采用定点交配的方式合笼,记录怀孕时间。分别于怀孕13.5、14.5、16.5天断颈处死孕鼠取胎鼠头部及尾巴;于出生后2.5天和7天处死新生小鼠取下颌骨和尾巴。采用PCR技术鉴定胎鼠及新生幼鼠的基因型。将胎鼠头部及幼鼠下颌骨石蜡包埋后获取下颌第一磨牙牙胚组织切片,通过HE染色确定各组牙胚的发育时期,免疫组织化学方法分别检测不同发育时期的正常小鼠下颌第一磨牙牙胚中Vps4b、Dspp和Col-Ⅰ的表达分布情况,并对比Vps4b基因敲除后小鼠牙胚中Vps4b、Dspp和Col-Ⅰ的表达变化。
  结果:
  PCR结果显示子代小鼠基因型为Vps4b+/+和Vps4b+-两种。HE染色表明胚胎13.5、14.5、16.5天的小鼠下颌第一磨牙牙胚分别发育至蕾状期、帽状期和钟状期,出生后2.5天、7天牙胚处于分泌期和矿化期。正常小鼠免疫组织化学染色显示:蕾状期和帽状期时,Vps4b在牙胚中广泛表达,Dspp和Col-Ⅰ均无表达;钟状期Vps4b表达于内、外釉上皮、牙乳头和牙囊,Dspp在内釉上皮和牙乳头中表达,Col-Ⅰ表达于牙乳头和牙囊;分泌期和矿化期Vps4b、Dspp和Col-Ⅰ在成釉细胞、成牙本质细胞和牙囊中均有表达,牙乳头亦可见Vps4b和Col-Ⅰ的阳性表达。小鼠基因突变后Vps4b在蕾状期成釉器中变为阴性表达,在一些组织中表达强度变弱(P<0.05);Dspp在钟状期的牙乳头和分泌期的牙囊中均未见表达,在分泌期的成釉细胞、成牙本质细胞和矿化期牙囊中阳性细胞数减少(P<0.05);Col-Ⅰ在钟状期、分泌期和矿化期的表达部位均无变化,仅在部分组织表达强度下降(P<0.05)。
  结论:
  在Vps4b+/+小鼠发育过程中Vps4b表达于不同阶段的牙胚中且随着发育的进行表达强度发生改变,说明Vps4b可能参与了牙胚的正常发育。在Vps4b+/-小鼠发育过程中Vps4b表达强度减弱,且牙齿发育相关蛋白的表达下降,推测其可能通过调节自身及牙齿发育相关蛋白的表达进而影响牙齿的发育。
[硕士论文] 杨淳贺
口腔医学 大连医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:通过建立野生型小鼠慢性根尖周炎模型,研究PLCγ2在小鼠实验性根尖周炎组织中的表达及分布情况,进而探讨PLCγ2在根尖周炎中的作用。
  方法:选用20只6周龄健康C57BL/6L野生型雄性小鼠,采用双侧下颌第一磨牙开髓术后将髓腔暴露于口腔环境的方法建立小鼠根尖周炎动物模型。分别于开髓后0、1、2、3和4周各随机处死4只小鼠,分离下颌骨。制作冰冻切片后用苏木精-伊红染色方法观察小鼠根尖组织炎症情况;免疫组织化学染色检测PLCγ2的表达与分布情况;酶组织化学染色检测根尖组织炎症区域破骨细胞的表达,以及PLCγ2的表达与破骨细胞表达的相关性。
  结果:1.HE染色结果
  HE染色的结果显示,正常对照组(0周)根尖周组织的牙周膜纤维未发生明显改变,偶有极少量炎性细胞浸润;术后1周可见根尖周组织出现小范围的炎性细胞浸润,牙周膜少量增宽,此时可见少量中性粒细胞;术后2周,炎性细胞浸润主要以中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞为主,范围较第一周逐渐增大,开始出现牙槽骨的吸收;术后3、4周,炎性细胞浸润进一步加重,多以淋巴细胞为主,牙槽骨吸收范围继续扩大。
  2.免疫组织化学染色结果
  PLCγ2的阳性细胞通过免疫组织化学反应染成深褐色,在小鼠的根尖周炎的0周到4周都有表达,并随着炎症细胞浸润范围和牙槽骨吸收范围的增大而增多。正常对照组(0周)根尖周组织中仅有少量PLCγ2的阳性表达。术后1周到4周,小鼠根尖周的炎症区域的中央和周边都可以见到PLCγ2阳性表达,主要位于淋巴细胞、浆细胞等细胞的细胞核中,细胞膜和细胞质中也有部分表达。在1、2、3、4周时由于炎症细胞浸润范围的逐渐扩大,PLCγ2阳性表达也随之增长,阳性细胞计数均有统计学差异(P<0.05),与此同时可见根尖骨破坏血管周围及根分叉区域的PLCγ2阳性表达也有所增多。
  3.PLCγ2及破骨细胞数的相关性分析结果
  通过对小鼠根尖周组织病变发展过程中TRAP染色结果发现,正常对照组(0周)根尖牙周组织中几乎不能观察到破骨细胞;术后1周,可观察到少量的经TRAP染色后细胞胞浆呈酒红色的多核破骨细胞;术后2周,破骨细胞的数量持续增加;术后3周,破骨细胞数量达到峰值;术后4周时,可以观察到破骨细胞数量有所减少。TRAP阳性细胞计数值和PLCγ2阳性细胞计数之间通过相关性分析结果显示有显著相关性(r=0.627,P<0.001)。
  结论:PLCγ2在小鼠根尖周炎性组织中的表达量随着炎性浸润范围的扩大而增加,且与破骨细胞的表达量有显著相关性,揭示其可能与根尖周炎症反应和骨吸收作用密切相关。
[硕士论文] 陈强
口腔医学 大连医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  通过收集在临床工作中确诊为口腔扁平苔藓的患者并记录其血型等信息,来分析口腔扁平苔藓与ABO血型是否具有相关性,以期为探讨口腔扁平苔藓的可能病因及相关危险因素提供依据。
  方法:
  患者知情同意,以自愿参加为原则,收集于2016年11月至2017年5月在青岛市市立医院口腔医学中心经临床表现和病理诊断确诊为口腔扁平苔藓的122例患者作为OLP组,同时收集同期在青岛市市立医院口腔医学中心就诊的356例非OLP患者作为对照组,采用口腔黏膜登记表分别记录OLP组与对照组的性别、年龄等信息,同时采用静脉采血进行ABO血型的鉴定,检测步骤严格按照ABO血型的操作程序进行。采用SPSS22.0软件对数据资料进行统计学分析,对两组样本的中各血型构成比的差异进行x2检验,P<0.05为差异具有统计学意义。
  结果:
  1.在收集的122例OLP患者中,男性35例占28.7%,女性87例占71.3%,男女比例约为1∶2.5,年龄分布24-80岁,平均53岁,其中51-60岁的患者共46例,约占OLP组的37.7%,各血型所占比重:A型血26.2%、B型32.0%、AB型血4.9%、O型血36.9%;在收集的356例非OLP患者中,男性127例占35.7%,女性229例占64.3%,男女比例约为1∶1.8,年龄分布20-80岁,平均46岁,各种血型所占比重:A型血30.3%、B型血27.8%、AB型血15.2%、O型血26.7%。经SPSS22.0软件分析数据得出,OLP组与对照组之间男女比例无统计学差异(x2=1.979,P>0.05)。
  2.口腔扁平苔藓与ABO血型的相关性研究中,OLP组与对照组中ABO各血型组成比之间的差异具有统计学意义(x2=12.27,P<0.05)。A型血与口腔扁平苔藓发病风险的相关性研究中,OR=0.816,95%CI(0.514,1.296),P>0.05,说明A型血与非A型血相比较,其在口腔扁平苔藓发病风险的影响性上的差异不具有统计学意义;B型血与口腔扁平苔藓发病风险的相关性研究中,OR=1.220,95%CI(0.781,1.905),P>0.05,说明B型血与非B型血相比较,其在口腔扁平苔藓发病风险的影响性上的差异不具有统计学意义;AB型血与口腔扁平苔藓发病风险的相关性研究中,OR=0.289,95%CI(0.121,0.691),P<0.05,说明AB型血与非AB型血相比较,其口腔扁平苔藓的发病风险更低,AB型血是抑制口腔扁平苔藓发病的一种保护因素;O型血与口腔扁平苔藓发病风险的相关性研究中,OR=1.606,95%CI(1.038,2.484),P<0.05,说明O型血与非O型血相比较,其口腔扁平苔藓的发病风险更高,O型血是促进口腔扁平苔藓发病的一种危险因素。
  结论:
  122例口腔扁平苔藓患者的发病与ABO血型具有一定的相关性,其中A型血与B型血对口腔扁平苔藓的发病无明显影响;AB型血与非AB型血相比,其口腔扁平苔藓发病风险更低,是抑制口腔扁平苔藓发病的一种保护因素;O型血与非O型血相比,其口腔扁平苔藓发病风险更高,是促进口腔扁平苔藓发病的一种危险因素。
[硕士论文] 王瞿秋子
口腔医学 大连医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  建立小鼠慢性根尖周炎模型,研究MITF(Microphthalmia-associated Transcription Factor,小眼畸形相关转录因子)在小鼠实验性根尖周炎中的表达情况。
  方法:
  选用25只6-8周龄、体重20-22g的C57BL/6J小鼠,采用对小鼠行双侧下颌第一磨牙开髓术后将髓腔暴露于口腔环境的方法,建立小鼠根尖周炎动物模型。分别于开髓后0周、1周、2周、3周、4周各时间点随机处死5只小鼠,其中0周作为正常对照组。行多聚甲醛心内固定,分离下颌骨,组织脱钙,包埋,制备冰冻切片,HE染色观察根尖周炎症进展的病理学变化,确认小鼠根尖周炎动物模型建立成功。用MITF多克隆抗体进行免疫组织化学染色,检测其表达及分布。酶组织化学染色检测根尖周组织周围破骨细胞的表达以及MITF的表达与破骨细胞表达的相关性。
  结果:
  1.HE染色
  HE染色的结果显示,术后1周,小鼠下颌第一磨牙根尖周可见少量中性粒细胞浸润;术后2周,下颌第一磨牙牙髓全部坏死,根尖周可见大量中性粒细胞和淋巴细胞浸润;术后3周,炎症浸润范围增大,淋巴细胞增多,牙槽骨出现破坏;术后4周,淋巴细胞持续增多,根尖周牙槽骨、牙骨质出现不同程度的吸收。术后0周即空白对照组小鼠下颌第一磨牙牙槽骨未见破坏,无炎性细胞浸润。HE染色结果显示,成功建立了小鼠根尖周炎动物模型。
  2.免疫组织化学染色
  术后1周,下颌第一磨牙根尖周区域有少量MITF阳性细胞;术后2到4周,MITF阳性细胞逐渐增多,在第4周达到峰值。术后0周即正常对照组根尖周组织中有少量MITF阳性细胞。术后1到4周阳性表达数量均高于0周正常对照组,该结果有统计学差异(P<0.05)。
  3、酶组织化学染色
  术后1周,下颌第一磨牙根尖周区域有少量TRAP染色阳性细胞;术后2周,TRAP染色阳性细胞数量有所增加;术后3周,TRAP染色阳性细胞大量聚集,达到峰值;术后4周,TRAP染色阳性细胞数量明显减少;正常对照组根尖周组织中可见个别TRAP染色阳性细胞。结果具有统计学差异(P<0.05)。
  MITF阳性染色OD值和TRAP阳性细胞计数值具有中度相关性。(r=0.690,P<0.01)。
  结论:
  MITF在小鼠根尖周炎症中有表达,可能对小鼠根尖周炎症进展及骨破坏起促进作用。但其在根尖周骨破坏及炎症反应的具体的功能作用有待进一步研究。
[硕士论文] 闫元元
口腔医学 大连医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  调查分析青岛地区236例OLP患者的临床分布状况以及烟酒等危险因素与OLP病损类型的关联性。并在此基础上初步探讨OLP与RAS的有无相关性。
  方法:
  选择自2013年1月至2017年1月到青岛大学附属青岛市市立医院口腔医学中心口腔黏膜科就诊并经临床及病理学确诊为OLP的患者。筛选出35岁以上患者共236例(男性62例,女性174例),进行统计学分析,用以描述236例OLP患者的临床统计学特点及某些危险因素与OLP病损类型的关联性。
  在上述研究的基础上采用病例-对照研究方法,病例组为上述236例OLP患者(男性62例,女性174例)。对照组同时按时间、性别、年龄(年龄组)相匹配的条件下纳入与病例组相同样本量的非OLP患者,既往无OLP病史称为对照组。病例组通过OLP调查问卷表收集OLP患者的RAS患病率,通过追踪调查表收集OLP患者两年后的RAS患病率。对照组均进行问卷调查和临床检查,通过对照组问卷调查表收集非OLP患者的RAS患病率。本组研究主要是研究OLP患者与非OLP患者的RAS患病病情况是否具有差异,以及OLP患者只进行了OLP相关性治疗,2年后OLP患者的RAS发病情况是否有改变。从而为OLP和RAS相关性提供佐证,并为制定预防策略提供理论依据。
  结果:
  1.将OLP临床类型分为斑纹型、糜烂型、萎缩型。在236例患者中斑纹型所占的比例最高,其次为糜烂型和萎缩型。其中糜烂型OLP男女患病人数较为接近,构成比例为1∶1∶15(x2=27.359,P<0.01)有显著统计学差异。而斑纹型与萎缩型男女相差较大,构成比例分别为1·5.05和1∶7.16(x2=2.000,P<0.01;x2=6.281,P<0.01)。按年龄进行分组,发现45-54年龄组,55-64年龄组,为OLP的高发年龄组,且男女构成比具有统计学差异(x2=6.281,P<0.05;x2=5179,P<0.05)。
  2.吸烟与非吸烟组之间(x2=46.712,P<0.01)、饮酒与非饮酒组之间(x2=32.391,P<0.01)、睡眠差与睡眠良组之间(x2=7.595,P<0.05)OLP的三种病损类型具有显著的统计学差异。吸烟组、饮酒组都以糜烂型OLP为主,睡眠差组以斑纹型为主,但在糜烂型患者中睡眠差人数占85.71%明显多于睡眠良的人数。
  3.34-45岁组OLP患者的RAS患病率最高,糜烂型OLP患者RAS患病率较高于其他类型。OLP患者中RAS患病率在不同的年龄段和不同的病损类型中具有显著的差异性(P<0.05)。
  4.病例组中RAS的患病率为41.53%,对照组为18.22%,病例组明显高于对照组经统计学检验,两者有显著性差异(x2=30.593,P<0.01)。
  5.病例组经过常规的OLP治疗,追踪观察两年后统计RAS患病率为27.54%,相对于病例组RAS患病率明显出现了降低,两者具有明显的统计学差异(X2=10.205,P<0.01)。
  结论:
  1.青岛地区236例OLP患者中发病率最高的OLP类型为斑纹型,男女相差最大的为萎缩型,发病率最高的年龄组为55-64岁年龄组。
  2.不良的生活习惯(吸烟,饮酒,睡眠差)在OLP的病损分类中存在显著统计学差异,且不良的生活习惯与糜烂型OLP关系最为密切。
  3.通过相关研究进行系统评价发现OLP和RAS具有一定正相关性。
[硕士论文] 汪沛
口腔医学 中国人民解放军海军军医大学;第二军医大学 2017(学位年度)
摘要:研究目的:
  牙周炎是影响口腔健康导致失牙的主要原因,传统的治疗方案仅能改善牙周环境难以修复牙周炎引起的牙槽骨缺损。牙周组织工程通过构建细胞和多种材料的复合体并移植于牙槽骨缺损处,起到重建牙周组织、治疗疾病的作用。牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)是牙周膜中具有自我增殖与多向分化潜能的干细胞,运用于牙周组织工程可显著增强牙周组织的形成和修复能力。骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins-9,BMP9)是优秀的成骨生长因子,已证实其具有较好的促干细胞成骨分化的能力,但对其作用机制尚不明确。有学者提出BMP9的作用机制包含Smad蛋白(drosophila mothers against decapentaplegic proteins,Smads)传递信号为主的BMPs-Smad经典通路,以及通过丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)传递信号的BMPs-MAPK非经典途径,其中BMPs-Smad经典通路已获得学术界普遍认可,但对于BMPs-MAPK途径尚处于探索和初级研究阶段。MAPK通路下游底物与骨生长发育并没有直接关系,但有研究报道部分MAPK家族成员参与BMPs促成骨分化,因此猜测MAPK是通过串话其他通路参与BMPs诱导成骨的过程。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)作为MAPK家族重要成员,尚没有在BMP9促进成骨分化的作用和机制中有研究报道。此前有学者证实JNK与Smad2/3蛋白可以发生相互作用,这为两条通路的串话提供了前提,但是目前为止,尚未有JNK通路和Smad2/3通路在BMP9诱导PDLSCs成骨分化过程中是否发生串话以及如何发生串话的文献报道。为了明确JNK通路是否在BMP9诱导PDLSCs成骨分化过程中发挥作用,以及JNK通路是否串话Smad信号通路,如何进行串话等问题,本项课题将深入研究讨论。
  研究方法:
  1.从牙周膜组织中通过改良组织块贴壁法获取离体细胞,通过CD146免疫磁珠分选获取PDLSCs,之后进行细胞表面标志物鉴定、组织来源鉴定、成骨分化和成脂分化能力鉴定。
  2.构建过表达Ad-BMP9载体,检测其对PDLSCs合适的感染剂量(multiplicities of infection,MOI)后诱导PDLSCs成骨分化,检测BMP9、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor2,Runx2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙蛋白(osteoclain,OCN)等成骨基因蛋白的表达情况和ALP活性等指标,分析BMP9促进PDLSCs成骨分化的能力。
  3.通过SP600125和AdR-si-JNK抑制或干扰JNK通路,验证干扰效果后,检测Runx2、ALP、OPN、OCN等成骨基因蛋白的表达情况和ALP活性、钙盐结节沉积量等指标,判断JNK通路是否参与BMP9诱导PDLSCs成骨分化。通过抑制或干扰JNK通路,检测Smad2/3和p-Samd2/3的蛋白表达,判断JNK通路是否与Smad通路有密切关系,最后通过免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)检测p-JNK是否与Smad2/3发生反应。综合分析后,判断JNK通路是否串话Smad通路并在BMP9诱导PDLSCs成骨分化过程中发挥作用。
  4.向裸鼠肌肉内移植过表达BMP9的PDLSCs,使用腺病毒干扰JNK通路,通过影像学和HE染色对比未干扰JNK通路裸鼠异位成骨状态,鉴定分析JNK通路对BMP9诱导PDLSCs体内成骨的影响。
  研究结果和结论:
  1.经磁珠分选所得的细胞同时表达CD146阳性和STRO-1阳性比例约占27.9%;免疫荧光染色显示角蛋白阴性、波形蛋白阳性,表示细胞为中胚层来源的间充质细胞,且无外胚层来源细胞的污染;茜素红S染色和油红O检测表明分选后细胞具有成骨和成脂的多向分化潜能。
  2.荧光表达显示Ad-BMP9感染PDLSCs的MOI值为30-60,感染之后BMP9基因蛋白明显增高,表明构建的腺病毒有效;此外Runx2、ALP、OPN、OCN等成骨基因蛋白和ALP活性均较对照组明显增高,结果具有统计学意义,证明BMP9具有诱导PDLSCs成骨分化的作用。
  3.分别抑制或干扰JNK通路后,p-JNK蛋白表达下降,证实JNK通路受到影响;干扰之后Runx2、ALP、OPN、OCN等成骨基因蛋白的表达情况和ALP活性、钙盐结节沉积量等指标均有不同程度下降,结果具有统计学意义,表明JNK通路参与BMP9诱导PDLSCs成骨分化;此外p-Smad的蛋白也随着JNK通路被干扰而表达下降,证实JNK通路与Smad通路关系密切,最后通过Co-IP检测证实p-JNK和Smad2/3存在相互作用,结果表明JNK通路是通过串话Smad通路参与BMP9诱导PDLSCs成骨分化的过程。
  4.影像学结果显示,添加干扰JNK通路的BMP9诱导PDLSCs体内成骨模型,所形成的异位骨或骨样组织的体积和骨密度均小于未经干扰的裸鼠;HE染色显示干扰组成骨进程处于早期,并落后于未经干扰的组,结果与体外结论类似,这表明JNK通路是BMP9诱导PDLSCs体内成骨分化的重要途径,但不是唯一途径。
[博士论文] 应王贵
口腔临床医学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  颞下颌关节紊乱病(TMD)是一类临床症状表现为颞下颌关节区疼痛、异常关节音或伴有下颌运动功能障碍的一组疾病的总称,正常人群中发病率为20%-40%,是口腔科常见病、多发病之一。其发病与生理、社会、心理因素相关,但其病因及发病机制仍未阐明。颞下颌关节骨关节炎(TMJ OA)是TMD的一个重要类型,发病率约为25%,是一类主要累及颞下颌关节髁突软骨、滑膜及软骨下骨的以关节软骨和软骨下骨质改变为主要特征的器质性病变疾病。TMJ OA的发生与IL-1β、TNF-α、IL-6等细胞因子及Notch等信号通路有着密切的关系。
  其中,IL-1可能是在众多炎性细胞因子中的一个核心因子。IL-1是一种重要的促炎细胞因子,由IL-1α与IL-1β两种蛋白质组成,可与IL-1受体结合,从而激活下游炎性通路。其作为炎症的始动因子,在软骨细胞炎症反应和细胞凋亡过程中起到关键作用。IL-1β可能通过刺激TNF-α、IL-6、ICAM-1等炎性细胞因子的分泌和抑制胶原蛋白、TIMPS等的合成来干扰关节软骨细胞代谢,促进细胞分解代谢,显著抑制软骨细胞合成基质,使软骨细胞变性及细胞外基质降解,引发关节炎症和破坏,是造成颞下颌关节器质性损害的一种重要炎性介质。
  Notch信号通路由受体、配体、细胞内效应分子、其他的效应物和Notch的调节分子等组成,在多种组织细胞的生长、分化、增殖、凋亡中起着重要作用。Notch信号通路对软骨形成、软骨细胞的存活、骨重建、维持关节软骨细胞表型及调节软骨基质代谢中起关键作用,其调节异常可导致骨性关节炎。Notch信号分子在健康成熟的关节软骨中几乎消失,但是在受损的软骨中却可检测到高水平的Notch信号分子表达,但是,目前仍未明确Notch信号通路在软骨病变中的作用机制。
  本次研究通过建立Spraguee Dawley大鼠(SD大鼠)颞下颌关节软骨细胞的体外模型,使用IL-1β对软骨细胞进行诱导刺激,采用Notch1抑制剂(Notch1siRNA)抑制Notch1信号通路的表达。通过实时定量RT-PCR、蛋白质印迹分析(WB)、酶联免疫吸附试验(ELISA)对软骨细胞Notch1蛋白及mRNA、ICAM-1蛋白及mRNA、iNOS蛋白及mRNA、NICD、MMP-1、MMP-9、TIMP-1、磷酸化NF-кB p65及细胞核、细胞质中NF-кB p65蛋白的表达和软骨细胞TNF-α、IL-6的分泌水平进行检测。讨论分析Notch1信号通路在IL-1β诱导的颞下颌关节软骨细胞的炎症反应中的作用,为TMD/TMJ OA的临床治疗提供新的研究思路。
  方法:
  本实验采用从SD大鼠颞下颌关节分离提取的髁突软骨细胞,进行细胞培养、传代,并根据施加不同干扰因子及检测指标将实验分成5部分:
  1.实验一实验细胞分为空白对照组、PBS组(阴性对照组)、1L-1β刺激组,通过实时定量RT-PCR、WB分别检测软骨细胞Notch1mRNA、Notch1蛋白、NICD蛋白的表达;
  2.实验二实验细胞分为空白对照组、Notch1siRNA组、Notch1Si-NC组(阴性对照组),通过实时定量RT-PCR、WB分别检测软骨细胞Notch1mRNA、Notch1蛋白的表达;
  3.实验三实验细胞分为空白对照组、IL-1β刺激组、Notch1siRNA+IL-1β组、Notch1Si-NC+IL-1β组(阴性对照组),通过ELISA检测软骨细胞分泌的TNF-α和IL-6,通过实时定量RT-PCR检测、WB分别检测软骨细胞ICAM-1mRNA、iNOS mRNA和ICAM-1蛋白、iNOS蛋白的表达;
  4.实验四实验细胞分为空白对照组、IL-1β刺激组、Notch1siRNA+IL-1β组,通过WB检测软骨细胞MMP-1、MMP-9、TIMP-1;
  5.实验五实验细胞分为空白对照组、IL-1β刺激组、Notch1siRNA+IL-1β组,通过WB检测软骨细胞磷酸化NF-кB p65及细胞核、细胞质中NF-кB p65蛋白的表达。
  结果:
  1.IL-1β上调了软骨细胞Notch1与NICD的表达;
  2.Notch1siRNA可降低软骨细胞Notch1的mRNA及蛋白表达;
  3.抑制Notch1信号通路可降低IL-1β诱导的软骨细胞TNF-α,IL-6的分泌水平和ICAM-1、iNOS的mRNA及蛋白表达水平;4.抑制Notch1信号通路可减轻IL-1β诱导的软骨细胞MMPs与TIMP-1的表达失衡;
  5.抑制Notch1信号通路可抑制IL-1β诱导的软骨细胞NF-кB p65核易位及磷酸化。
  结论:
  IL-1β可诱导SD大鼠颞下颌关节软骨细胞Notch1、NF-кB信号通路的激活表达,引起软骨细胞的炎症反应及细胞外基质降解。Notch1siRNA可抑制软骨细胞Notch1信号通路的激活表达,部分抑制IL-1β诱导的软骨细胞NF-кB信号通路的激活表达。抑制Notch1信号通路可减轻IL-1β诱导的大鼠颞下颌关节软骨细胞的炎症反应程度,为临床治疗TMJ OA提供一定的理论依据。
[硕士论文] 陆大壮
口腔临床医学 华北理工大学 2017(学位年度)
摘要:目的:研究CamkIIδ基因沉默对丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)、cAMP应答元件结合蛋白(CREB)以及活化 T细胞核因子1(NFATc1)蛋白活性和破骨细胞分化的影响及分子机制。
  方法:1、 CamkIIδ基因沉默对破骨细胞分化、功能的影响:将RAW264.7细胞分为3组:对照组、阴性载体组和干扰组。采用表达绿色荧光的阴性载体病毒转染细胞,确定最适的病毒转染 MOI值以及转染效率。重组慢病毒转染12 h后加入50ng/ml的核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导培养5 d,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、牛骨磨片吸收陷窝检测来评价破骨细胞生成及骨吸收情况;Real-time PCR和免疫印迹法检测CamkIIδ的mRNA及蛋白表达水平;免疫荧光细胞化学、免疫印迹法检测 NFATc1蛋白表达水平。2、 CamkIIδ基因沉默对CREB蛋白活化的影响:RAW264.7细胞分为阴性载体组和干扰组,转染3 d后加入50ng/ml RANKL诱导0 h、1h、3h、6h、12h、24h,免疫印迹法检测CREB蛋白磷酸化水平。3、 CamkIIδ基因沉默对 MAPKs信号活化的调节机制:RAW264.7细胞分为阴性载体组和干扰组,转染3 d后加入50ng/ml RANKL诱导0 min、5 min、10 min、15 min、30 min、60 min,免疫印迹法检测细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、氨基末端激酶(JNK)、丝裂原激活蛋白激酶(p38)蛋白磷酸化水平;4、 MAPKs信号阻断对破骨细胞分化及相关因子 NFATc1表达的影响:RAW264.7细胞分为4组:对照组、ERK1/2抑制剂(PD98059)组、JNK抑制剂(SP600125)组、P38抑制剂(SB203580)组,每组用 RANKL诱导破骨细胞分化的同时,应用相应因子的抑制剂处理,3d后免疫印迹法检测 NFATc1的蛋白表达水平,5d后TRAP染色评价破骨细胞生成。
  结果:1、阴性载体病毒转染细胞,结果显示最适病毒转染滴度 MOI值为30,转染效率为74.9%。RANKL诱导5d后,三组细胞均出现 TRAP+多核破骨细胞(胞核≥3个)和骨吸收陷窝,但干扰组破骨细胞数目、牛骨磨片骨吸收陷窝的数目和面积分别为10.8±2.1、8.5±1.1和5463±884.5μm2,显著低于阴性载体组的24.7±2.2、24.8±1.9、10491±635.3μm2和对照组的27.6±3.9、25.8±2.3、11447±710.4μm2(P<0.05);而对照组、阴性载体组之间无显著性差异(P>0.05)。Real-time PCR结果显示,与对照组相比,干扰组中CamkⅡδ的mRNA表达量显著降低,干扰效率为77.2%(P<0.05),而对照组和阴性载体组之间无显著差异(P>0.05)。免疫印迹结果显示,与阴性载体组(1.11±0.12)相比 CamkIIδ蛋白表达水平在干扰组(0.33±0.04)中显著下调,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与对照组、阴性载体组相比,干扰组 NFATc1的荧光强度明显减弱;免疫印迹法显示,干扰组NFATc1蛋白水平为1.52±0.04,较阴性载体组的2.25±0.12显著下调约72.3%(P<0.01),而对照组与阴性载体组无显著差异(P>0.05)。2、 RANKL诱导0 h、1h、3h、6h、12h、24h,免疫印迹结果显示,干扰组中 CREB磷酸化水平较阴性载体组下调了21%~56%,差异具有统计学意义(P<0.05)。3、 RANKL诱导0 min、5 min、10 min、15 min、30 min、60 min,免疫印迹结果显示CamkIIδRNA干扰组各时间点 p-ERK1/2、p-JNK和 p-p38活化均显著下调;与阴性载体组比较, p-ERK1/2、p-JNK、p-p38分别下调了55%~64%(P<0.05)、12%~40%(P<0.01)和25%~52%(P<0.01),差异均具有统计学意义。4与对照组比较, ERK1/2抑制剂 PD98059、JNK抑制剂 SP600125和 P38抑制剂 SB203580均能够显著抑制 RANKL诱发的 NFATc1蛋白表达上调;三种抑制剂分别使 NFATc1蛋白表达水平下调了37.3%(P<0.01)、42.1%(P<0.05)和38.2%(P<0.05),差异具有统计学意义。ERK1/2抑制剂组、JNK抑制剂组和P38抑制剂组中TRAP+多核破骨细胞数目分别为9.7±1.5、10.0±2.0、8.7±2.1,较对照组中的16.0±1.0分别下降了39.4%、37.5%和45.6%,
  结果:具有显著性差异(P<0.01)。
  结论: CamkIIδ基因沉默可显著抑制破骨细胞的分化和生成,CREB和MAPKs信号分子 ERK1/2、JNK、P38参与 CamkIIδ对破骨细胞分化和骨吸收功能的调控作用。
[硕士论文] 焦洛莹
化学工程 广东工业大学 2017(学位年度)
摘要:慢性根尖周炎是一种以厌氧菌感染为主的混合感染性疾病,其主要感染菌为具核梭杆菌和Solobaccterium moorei等。慢性根尖周炎破坏根尖周的牙槽骨或形成肉芽肿,具有容易复发、难以根治的特点,给人们的生活和工作带来诸多不便和麻烦。
  目前,治疗慢性根尖周炎主要通过常规根管治疗的方法,但该法操作繁琐、价格昂贵且治疗不彻底。因此寻找一种更为安全、有效的方法变得非常重要。近年来人们发现,利用IgY技术产生的抗特定病菌的抗体,能够治疗由致病菌感染引起的疾病,并且具有安全无残留、价格便宜等优点,具有很大的开发前景。
  本研究以灭活的具核梭杆菌、Solobaccterium moorei和两种菌的混合菌分别作为免疫原,免疫产蛋母鸡,共免疫五次。先用两步PEG6000沉淀法提取得到IgY粗品,再用硫酸铵盐析法纯化制得IgY纯品。然后用考马斯亮蓝染色法检测蛋白含量,用SDS-PAGE凝胶电泳法检测抗体分子量及纯度,用间接酶联免疫吸附法检测抗体效价和交叉反应,用免疫印迹法和间接荧光免疫分析法检测抗原抗体的特异性结合,并对IgY的热稳定性、酸碱稳定性、反复冻融稳定性以及对消化酶的稳定性进行了研究,最后研究了特异性IgY的抑菌活性以及交叉抑菌活性。
  实验结果显示抗具核梭杆菌IgY、抗Solobaccterium moorei IgY和抗混合菌的复合IgY的纯度分别可达到98.0%、97.8%、97.1%,它们的效价分别可达到1:32000、1:32000、1:16000,均能维持三周左右。免疫印迹分析和间接荧光免疫分析表明,特异性IgY能分别与抗具核梭杆菌和Solobaccterium moorei特异性结合。用酶联免疫吸附法检测发现特异性IgY的交叉反应较弱。稳定性的结果分析表明,IgY在温度低于75℃、pH值在4-9范围内能保持较好的的稳定性。在模拟胃液环境中,IgY对胃蛋白酶十分敏感,而在模拟肠道环境中IgY对胰蛋白酶有较好的的抵抗力。抑菌实验表明,抗具核梭杆菌IgY能够显著抑制(P<0.05)具核梭杆菌的生长,抗Solobaccterium moorei的IgY能够显著抑制(P<0.05)Solobaccterium moorei的生长,抗两种混合菌的复合IgY对具核梭杆菌和Solobaccterium moorei均有抑制作用(P<0.05)。
  在本实验中,制备了抗具核梭杆菌IgY、抗Solobaccterium moorei的IgY以及抗具核梭杆菌和Solobaccterium moorei混合菌的复合IgY。其特异性强、纯度高。此外,特异性IgY能在体外与对应病原菌发生特异性结合,并对其有较好的抑制作用。本研究为特异性IgY在慢性根尖炎的防治应用奠定了基础。
[硕士论文] 惠婷
口腔医学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:第一部分神经肽P物质对ST2细胞增殖分化的影响
  目的:
  初步探讨神经肽P物质(Neuropeptide substance,SP)对ST2细胞成骨分化过程中增殖和分化的影响,并筛选出合适的促增殖分化的SP作用浓度和时间。
  方法:
  将第三代(P3) ST2以5×103/孔铺板于96孔板,用含有不同浓度SP(10-10Mol/L、10-8Mol/L、10-6Mol/L、10-5Mol/L)的成骨条件培养基(Osteoblast Medium,OBM)进行刺激,以仅含2%胎牛血清(FBS)的OBM作为对照组(control),每组设5个复孔和1个调零孔。分别以SP刺激ST2细胞24、48、72h,CCK-8检测细胞增殖活性,筛选出合适的药物浓度。然后取第三代(P3)的ST2按8×104/孔密度铺板于6孔板,加入含有10-6Mol/L浓度SP的OBM,培养1,3,5,7天,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immune sorbentassay,ELISA)检测细胞培养上清液中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅰ型胶原蛋白(ColIaⅠ)和骨钙素(osteocalcinv,OCN)的表达,实验重复3次。并采用免疫荧光染色检测细胞ALP的活性。
  结果:
  (1)神经肽P物质(Neuropeptide substance,SP)可促进小鼠BMSCs(ST2细胞)的增殖活性,且与SP的浓度和作用时间有一定的相关关系,当SP浓度为10-6Mol/L时,细胞增殖效应最明显。
  (2)神经肽P物质(Neuropeptide substance,SP)可促进小鼠BMSCs(ST2细胞)的成骨分化,早期成骨分化标记物ALP的表达在第5天时达峰值,中晚期标志物ColIaⅠ、OCN的表达在第7天时最高。SP可增强ST2细胞ALP的活性。
  结论:
  神经肽P物质(Neuropeptide substance,SP)可促进小鼠BMSCs(ST2细胞)的增殖和成骨分化,该效应具有剂量依赖性和时间依赖性。
  第二部分 BMP信号通路对SP促ST2细胞成骨分化过程的调控作用研究
  目的:
  探讨BMP信号通路在SP促ST2细胞成骨分化过程的作用。
  方法:
  取P3的ST2以8×104/孔的密度铺板于6孔板,设3个复孔。实验分组为SP组:10-6Mol/L SP; SP+BMP通路抑制剂(Noggin)组:10-6Mol/L SP和100ng/mlNoggin;抑制剂组:100ng/ml Noggin;对照组:等体积2%FBS,培养5天或7天后采用ELISA法检测细胞上清液中ALP,ColIaⅠ和OCN的表达量,并采用免疫荧光染色检测细胞的ALP活性。
  结果:
  (1) SP可明显促进ST2细胞成骨分化标记物ALP、ColIaⅠ和OCN的表达,加入BMP信号通路抑制剂Noggin后,标记物的表达显著减少,且仅加入Noggin也可抑制ALP、ColIaⅠ和OCN的表达。
  (2)免疫荧光染色结果显示SP可促进ST2细胞ALP的表达活性,加入BMP信号通路抑制剂Noggin后,ALP活性受到抑制,单纯加入Noggin也可抑制细胞ALP的活性表达。
  结论:
  SP可促进ST2的成骨分化和ALP活性表达,而BMP信号通路抑制剂Noggin可抑制其效应的发挥,表明BMP信号通路可能在SP促ST2细胞成骨分化中产生了一定的调节作用。
[硕士论文] 王轶雄
口腔临床医学 南方医科大学 2017(学位年度)
摘要:动物研究发现,B-1a细胞能在感染性炎症或慢性炎症疾病的固有免疫机制中起到保护作用,它能在病毒或细菌入侵的早期快速清除感染源。牙周炎与肥胖,可分别引起局部感染性炎症与全身慢性炎症状态,二者相关联的流行病学报道很多,但是它们之间的免疫机制还尚不明了。本研究建立肥胖复合牙周炎小鼠模型,基于B-1a细胞存在牙周病损局部和肥胖与牙周炎相关联的理论基础,对B-1a细胞在肥胖和牙周炎两种炎症状态中发挥的病理机制进行探索。
  第一章 肥胖状态下牙周感染对小鼠牙周组织中B-1a细胞的影响
  目的:
  本章主要探讨肥胖状态下牙周感染对小鼠牙周组织中B-1a细胞的表达水平及功能的影响,分析肥胖伴牙周感染小鼠牙周组织中B-1a细胞膜表面特异性蛋白CD5,及B-1a细胞分泌的白细胞介素-10(IL-10)炎症因子和抗Ⅰ胶原抗体(抗COLⅠ抗体)的蛋白和mRNA表达变化。
  方法:
  动物模型分组:将24只小鼠随机分成两组,每组各12只。其中一组喂以高脂饲料,为肥胖组(high fat diet,HF),另一组喂以低脂饲料,为正常体重组(low fat diet,LF)。饲料诱导30周后,分别从肥胖组和正常体重组中随机抽取6只做牙周真性结扎处理(periodontitis,P),每组剩余的6只做假性结扎处理(control,C),结扎处理5天,随即产生牙周炎组(LFP组)、正常体重对照组(LFC组)、肥胖组(HFC组)、肥胖复合牙周炎组(HFP组)。
  免疫组化染色定量分析和实时定量PCR基因水平检测:通过实时定量PCR和免疫组化染色方法对牙周组织中CD5、抗COLⅠ抗体、IL-10的蛋白和mRNA表达水平进行定量检测。
  牙周组织中CD5、抗COLⅠ抗体、IL-10的表达水平分别与体重和牙周组织浸润的炎症细胞数之间的相关性分析:小鼠称重;牙周组织HE染色后对浸润的炎症细胞定量计数;将体重、炎症细胞数与三种蛋白之间进行Pearson相关性分析。
  结果:
  牙周组织中B-1a细胞的mRNA及蛋白的表达水平:B-1a细胞相关三种蛋白的牙周炎主效应均有显著性,牙周炎组中的IL-10、CD5、抗COLⅠ抗体的mRNA和蛋白表达水平均显著高于对照组(P<0.001)。
  肥胖和牙周炎对牙周组织中B-1a细胞功能的影响:CD5、IL-10、抗COLⅠ抗体的蛋白表达水平与炎症细胞数之间均呈显著正相关性(r>0,P<0.001);但三者与体重之间的相关性均不显著(P>0.05)。
  结论:
  B-1a细胞在牙周炎症早期表达上调,所分泌的抗COLⅠ抗体可以抵御细菌初期对牙周组织的破坏。但肥胖并未对炎性牙周组织中B-1a细胞的表达水平及功能产生显著性影响。
  第二章 肥胖状态下牙周感染对小鼠脾脏组织中B-1a细胞的影响.
  目的:
  本章主要探讨肥胖状态下牙周感染对小鼠脾脏组织中B-1a细胞表达水平及功能的影响,分析肥胖伴牙周感染小鼠脾脏组织中B-1a细胞膜表面特异性蛋白CD5,及B-1a细胞分泌的抗COLⅠ抗体和IL-10炎症因子的蛋白表达变化。
  方法:
  蛋白质印迹定量分析:用蛋白质印迹方法对脾脏组织中CD5、IL-10、抗COLⅠ抗体的蛋白表达水平进行定量检测。
  将脾脏组织中CD5、IL-10、抗COLⅠ抗体的表达水平分别与体重和牙周组织浸润的炎症细胞数之间进行Pearson相关性分析。
  结果:
  脾脏组织中B-1a细胞的表达水平:B-1a细胞相关三种蛋白的肥胖主效应均有显著性,肥胖组中的CD5、IL-10、抗COLⅠ抗体的蛋白表达水平均显著高于正常体重组(P<0.001)。
  肥胖和牙周炎对脾脏组织中B-1a细胞功能的影响:CD5、IL-10、抗COLⅠ抗体的蛋白表达水平与体重之间均呈显著正相关性(r>0,P<0.001),但三者与牙龈炎症细胞数之间的相关性均不显著(P>0.05)。
  结论:
  B-1a细胞在肥胖机体内表达上调,但其发挥的功能尚不明确。牙周感染并未对肥胖机体脾脏组织中B-1a细胞的表达产生显著性影响。
[博士论文] 黄馨
外科学(整形外科学) 南方医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  慢性炎症是一系列慢性疾病,如肥胖、糖尿病等的共同病理机制。肥胖机体以长期的低度慢性系统性炎症及免疫反应异常、胰岛素抵抗为重要特征,使其易感于重大代谢疾病包括糖尿病等。肥胖是糖尿病的重要病因,二者呈“孪生”流行趋势,且均可促进牙周炎的发展。而关于NLRP3信号通路在其中所起的关键作用的研究匮乏。本研究目的为探讨肥胖及Ⅱ型糖尿病导致的系统性炎症状态对牙周组织炎症的影响及NLRP3信号通路在其中所起的关键作用。
  方法:
  (1)饮食诱导16周牙周结扎10天建立肥胖小鼠牙周炎模型,记为正常饮食组、正常饮食结扎组、高脂饮食组、高脂饮食结扎组。
  (2)体内通过RT-PCR和IHC的方法检测小鼠牙龈组织内NLRP3信号通路(NLRP3,capase1,IL-1β,NFκb)及巨噬细胞表面标记物F4/80、巨噬细胞趋化因子MCP1的表达情况。
  (3)体外分离培养不同饮食背景的小鼠BMDMs并对其进行LPS刺激,通过RT-PCR及ICC检测巨噬细胞内NLRP3信号通路的表达。
  (4)收集人类健康组、慢性牙周炎组及慢性牙周炎伴Ⅱ型糖尿病组患者牙龈组织,体内通过RT-PCR及IHC检测牙龈组织内NLRP3信号通路的表达。体外分离培养人牙龈上皮细胞并对其进行高糖及LPS刺激实验,通过RT-PCR及ICC检测上皮细胞内NLRP3信号通路的表达。
  结果:
  (1)高脂饲料诱导16w小鼠的体重及血糖明显高于正常饲料组。小鼠牙槽骨吸收:牙周炎组显著高于非牙周炎组,高脂饮食组显著高于正常饮食组。血清胰岛素及炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10表达水平:高脂饮食组显著高于正常饮食组。
  (2)小鼠牙龈组织中NLRP3,Caspase1,IL-1β及NFκb的mRNA及蛋白质表达水平:牙周炎组显著高于非牙周炎组。
  (3)小鼠牙龈组织中F4/80及MCP1的mRNA及蛋白质表达水平:牙周炎组显著高于非牙周炎组,高脂饮食组显著低于正常饮食组。BMDMs中NLRP3信号通路因子的mRNA及蛋白质表达水平:LPS刺激组显著高于非刺激组,高脂饮食组显著低于正常饮食组。
  (4)人牙龈组织中NLRP3信号通路因子的mRNA及蛋白质表达水平:在伴有炎症及Ⅱ型糖尿病的牙龈组织中表达显著性升高。HGECs中NLRP3信号通路因子的mRNA及蛋白质表达水平在高糖刺激后显著升高。
  结论:
  发现,肥胖、Ⅱ型糖尿病的机体处于慢性炎症状态均加重了牙周炎的发生发展。肥胖导致感染的牙周组织内巨噬细胞数量减少及活性降低,引起牙周国有免疫的异常,最终加重了牙周炎的局部炎症状况。而Ⅱ型糖尿病患者的高糖状态可能通过牙龈上皮细胞NLRP3信号通路的高表达而加重慢性牙周炎的发生发展。
[硕士论文] 唐雪娇
口腔临床医学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:实验一 P物质对小鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响
  目的:研究不同浓度及不同时间P物质对小鼠骨髓间充质干细胞ST2细胞增殖的影响,探究P物质对ST2成骨分化标记物表达的影响,探讨P物质与ST2增殖及成骨分化可能存在的浓度和时间的相关性。
  方法:将小鼠骨髓间充质干细胞(ST2)细胞株(吉满生物科技)接种于培养皿(中皿)中传代培养,培养基为高糖DMEM培养基(含10%FBS),放置于5%CO2细胞培养箱中37℃孵育72h传代,传代至3-4代时使用。加入不同浓度(浓度为1×10-10,1×10-8,1×10-6,1×10-5mol/L)的P物质与不加P物质的对照组一起,培养3天,分别在24h,48h,72h收获细胞,进行CCK-8检测,比较ST2细胞的增殖活性。成骨诱导培养ST2细胞,分为加入1×10-6mol/L浓度的P物质的实验组和未加P物质的对照组,在1,3,5,7天分别收获细胞进行ALP免疫荧光检测,和ALP,ColⅠ的ELISA检测,分析ST2细胞成骨分化过程中的蛋白表达情况。
  结果:CCK-8检测显示在24h时除1×10^-6mol/L及1×10^-8mol/L浓度组外,其他组与对照组之间对ST2细胞增殖作用无统计学差异,48h及72h时不同浓度P物质对ST2细胞增殖活性均有促进作用且有统计学差异(P<0.05),1×10^-6mol/L及1×10^-8mol/L浓度的促进作用与对照组相比有显著差异(P<0.01),其中1×10^-6mol/L的作用效果最强;随时间变化,增殖作用增强,且各时间组间具有统计学差异(P<0.05)。ELISA检测分析结果发现ALP和ColI蛋白表达水平随时间递增,且实验组大于对照组(P<0.05)。免疫荧光染色结果发现实验组ALP荧光数目较对照组多。
  结论:P物质能够促进ST2细胞的增殖,其中1×10^-6及1×10^-8mol/L促进细胞增殖活性的作用最显著,并且P物质能够在一定的条件下促进ST2的成骨分化的标记物表达上调,且具有一定的浓度和时间的相关性。
  实验二 P物质受体NK1在ST2细胞中的表达及与成骨分化的关系探讨
  目的:观察P物质受体NK1在小鼠骨髓间充质干细胞(ST2)中的表达,及其与成骨分化各标记物的关系探讨。
  方法:小鼠骨髓间充质干细胞(ST2)细胞株(吉满生物科技)接种于培养皿(中皿)中传代培养,培养基为高糖DMEM培养基(含10%FBS),放置于5% CO2细胞培养箱中37℃孵育72h传代,传代至3-4代时使用。加入成骨诱导培养液培养7天,分别在第1,3,5,7天收获细胞进行NK1受体的免疫细胞化学染色,测量其光密度值。同一批细胞在1,3,5,7天收获细胞培养液进行ALP、OCN(骨钙素)的ELISA检测,分析其表达量的变化。
  结果:细胞免疫化学显示在第1天时NK1受体即开始表达,第3,5天表达上升,一周时NK1受体明显表达,其存在于细胞膜和细胞质,主要存在于细胞质中,成骨分化标记物中成骨分化早期标记物ALP随着时间推移ELISA结果显示表达量逐渐增加,成骨分化晚期标记物OCN在1,3,5天表达量很少,第7天开始有明显增加表达。
  结论:NK1受体在ST2细胞成骨分化的早期即开始出现,并且与促进ST2成骨分化成熟密切相关。
[硕士论文] 闫松鹤
口腔临床医学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:研究目的:
  人牙根尖乳头干细胞(stem cells from the apical papilla,SCAPs),是一种来源于正在发育的牙根尖乳头组织的间充质干细胞,在年轻恒牙的牙根发育中发挥重要作用。间充质干细胞具有免疫调控功能,那么SCAPs是否对免疫细胞有一定的调控作用,目前尚不清楚。单核巨噬细胞在免疫反应中发挥重要作用,被微生物及各种趋化因子活化可产生IL-6、TNF-α等炎性因子,从而导致炎症的发生、发展。根据巨噬细胞分泌的细胞因子和表型可将其分为两种极化类型,即促进炎症发生的M1型巨噬细胞和促进组织修复的M2型巨噬细胞。有研究发现,间充质干细胞能够抑制单核巨噬细胞的活化并促进其向M2型极化从而达到免疫抑制的作用,本实验初步探讨SCAPs对单核巨噬细胞活化和极化的免疫调控作用。
  实验方法和结果
  1.细胞培养:
  (1)SCAPs的培养:收集因正畸治疗需要而拔除的未发育完全的健康第三磨牙,无菌分离根尖乳头组织,采用酶消化法分离培养SCAPs。
  (2)单核细胞系THP-1、U937传代培养。
  (3)人单核细胞源性巨噬细胞(Monocyte-derived macrophages,MDM):淋巴细胞分离管分离健康人的外周血获得外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC),将PBMC细胞悬液置培养皿中过夜,其中的单核细胞可贴壁成巨噬细胞。
  2.SCAPs促进单核细胞THP-1向M2样巨噬细胞极化 SCAPs与THP-1通过Transwell小室进行共培养,实验组为SCAPs+THP-1;对照组为THP-1。qPCR结果显示实验组THP-1中与M1型巨噬细胞相关的TNF-α和IL-12在共培养1d时升高,其余时间点均呈下降趋势(p<0.5),与M2型巨噬细胞相关的IL-10、TGF-β1、CD163、CD206均升高(p<0.5),仅CD206在共培养3d时有下降趋势;流式细胞术检测共培养3d THP-1中TNF-α的表达情况,发现实验组的TNF-α表达显著下降(<0.5),与qPCR结果一致;WesternBlotting检测共培养后THP-1中stat3/P-stat3、smad3/P-smad3的表达情况,发现实验组P-stat3/stat3蛋白相对表达水平较对照组呈上升趋势(p<0.5)而P-smad3/smad3蛋白相对表达水平则未见明显变化(p>0.5),表明SCAPs促进THP-1向M2样巨噬细胞极化,可能与stat3通路的激活有关。
  3.SCAPs抑制PMA诱导的巨噬细胞中TNF-α的表达
  单核细胞系THP-1、U937通过佛波酯(Phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)诱导成巨噬细胞后与SCAPs共培养,实验组为巨噬细胞+SCAPs;对照组为巨噬细胞。qPCR检测共培养后巨噬细胞样THP-1中炎性因子和表面标志物的表达情况,发现实验组TNF-α的表达显著下降(p<0.5),而与极化相关的其他分子则无明显变化,仅IL-10、CD163在共培养的初期较对照组升高(p<0.5),实验组巨噬细胞样U937中TNF-α的表达也显著下降(p<0.5)。通过ELISA检测共培养上清中的TNF-α的表达量,发现实验组上清中TNF-α的表达下降(p<0.5),进一步证实与SCAPs共培养后,巨噬细胞样THP-1和巨噬细胞样U937分泌的TNF-α降低,表明SCAPs对PMA诱导的巨噬细胞极化作用不明显,却对TNF-α抑制作用明显增强。
  4.SCAPs上清抑制人单核细胞源性巨噬细胞的活化
  PBMC中的单核细胞贴壁成巨噬细胞后弃上清,加适量的SCAPs条件培养液培养4d,实验组为SCAPs条件培养液+MDM;对照组为α-MEM培养液+MDM。通过qPCR检测MDM炎性因子表达情况,实验组TNF-α、IL-12、IL-6、IL-1β的表达均较对照组降低(p<0.5),而实验组IL-10、TGF-β1的表达无明显变化(p>0.5),说明SCAPs上清可以抑制MDM的活化。
  结论:
  通过共培养,SCAPs可以促进单核细胞THP-1向M2样巨噬细胞极化,且stat3通路的激活可能参与其中;SCAPs对PMA诱导的巨噬细胞样THP-1的极化作用不明显,却可以显著抑制巨噬细胞样THP-1、U937中TNF-α的表达;SCAPs上清能够抑制人单核细胞源性巨噬细胞的活化。
[硕士论文] 高玮
口腔临床医学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  检测NF-κB(P65)在下牙槽神经损伤后的激活情况,检测不同恢复时期神经恢复的情况,分析各组药物对NF-kappa的影响,及其对神经恢复的作用。
  材料与方法:采用健康成年的wistar大鼠30只,随机分为地塞米松组、PDTC组、生理盐水组,建立大鼠下牙槽神经挤压伤模型,术后1d、2d、3d术区局部注射地塞米松(1mg/kg),PDTC(1mg/kg)以及生理盐水,在动物存活的不同时间(3d,7d,14d),采用免疫组织荧光、Western bolt的方法检测NF-κB(P65)的激活情况及神经生长相关蛋白Gap-43的表达变化,HE染色方法观察神经组织恢复情况。
  结果:
  (1)免疫荧光显示大鼠下牙槽神经挤压后7天,细胞核大且圆,且NF-κB(P65)在细胞核内高表达,无论在术后7天还是14天,地塞米松组NF-κB(P65)细胞核内激活强度都弱于其他两组。
  (2) Western结果显示生理盐水组内NF-κB(P65)在术后3、7、14天呈上升趋势,且表达量比Dex、PDTC组高。三组中,Dex组NF-κB(P65)表达最低。
  (3)、地塞米松及PDTC组在3d、7d、14d的Gap-43表达均有上升,且地塞米松效果更佳。
  (4)7d、14d地塞米松及PDTC组神经纤维组织空泡、纤维排列及纤维结构恢复均优于生理盐水组,地塞米松组恢复效果更佳。
  结论:
  地塞米松在大鼠下牙槽神经损伤后,抑制了NF-κ3(P65)的激活,且促进了神经组织再生。
[硕士论文] 康思萌
口腔医学 内蒙古医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:对比矫治保持期的患者佩戴两种保持器前后牙周临床指标变化、龈沟液中天冬氨酸转氨酶和白细胞介素-1β活性变化。对比分析两种保持器对牙周健康的影响,为临床选择提供依据。
  方法:随机将60名患者分到Hawley保持器组和透明压膜保持器组。所有研究对象进行刷牙指导后接受超声洁治,在未佩戴保持器时(T1期)、三个月(T2期)、六个月(T3期)这三个时间点,采集受检牙位的龈沟液(gingival crevicular fluid, GCF),同时检测菌斑指数(plaque index,PLI)、牙龈指数(gingival index, GI)。用全自动生化分析仪测出GCF中天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的活性,用酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay, ELISA)测出GCF中白细胞介素1-β(interleukin-1β,IL-1β)的浓度。最后将所有数据用SPSS20.0软件分析,P<0.05时具有统计学意义。
  结果:⑴GI:Hawley保持器组与透明压膜保持器横纵向比较均无统计学意义。⑵PLI:透明压膜保持器组三期T1、T2、T3期呈上升趋势,仅T3期与T1期相比有统计学意义, Hawley保持器组三期相比无统计学意义。⑶AST活性:透明压膜保持器组T1、T2、T3期呈上升趋势,但相比无统计学意义, Hawley保持器组三期无明显变化。⑷IL-1β浓度:透明压膜保持器组T1、T2、T3期呈上升趋势,仅T3期与T1期相比有统计学意义。Hawley保持器组虽T1、T2、T3期呈上升趋势,但相比均无统计学意义。
  结论:保持器促使口腔内菌斑的增加,影响口腔自洁作用,透明压膜保持器对牙周组织的影响高于Hawley保持器。
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