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[硕士论文] 汪沛
口腔医学 中国人民解放军海军军医大学;第二军医大学 2017(学位年度)
摘要:研究目的:
  牙周炎是影响口腔健康导致失牙的主要原因,传统的治疗方案仅能改善牙周环境难以修复牙周炎引起的牙槽骨缺损。牙周组织工程通过构建细胞和多种材料的复合体并移植于牙槽骨缺损处,起到重建牙周组织、治疗疾病的作用。牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)是牙周膜中具有自我增殖与多向分化潜能的干细胞,运用于牙周组织工程可显著增强牙周组织的形成和修复能力。骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins-9,BMP9)是优秀的成骨生长因子,已证实其具有较好的促干细胞成骨分化的能力,但对其作用机制尚不明确。有学者提出BMP9的作用机制包含Smad蛋白(drosophila mothers against decapentaplegic proteins,Smads)传递信号为主的BMPs-Smad经典通路,以及通过丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)传递信号的BMPs-MAPK非经典途径,其中BMPs-Smad经典通路已获得学术界普遍认可,但对于BMPs-MAPK途径尚处于探索和初级研究阶段。MAPK通路下游底物与骨生长发育并没有直接关系,但有研究报道部分MAPK家族成员参与BMPs促成骨分化,因此猜测MAPK是通过串话其他通路参与BMPs诱导成骨的过程。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)作为MAPK家族重要成员,尚没有在BMP9促进成骨分化的作用和机制中有研究报道。此前有学者证实JNK与Smad2/3蛋白可以发生相互作用,这为两条通路的串话提供了前提,但是目前为止,尚未有JNK通路和Smad2/3通路在BMP9诱导PDLSCs成骨分化过程中是否发生串话以及如何发生串话的文献报道。为了明确JNK通路是否在BMP9诱导PDLSCs成骨分化过程中发挥作用,以及JNK通路是否串话Smad信号通路,如何进行串话等问题,本项课题将深入研究讨论。
  研究方法:
  1.从牙周膜组织中通过改良组织块贴壁法获取离体细胞,通过CD146免疫磁珠分选获取PDLSCs,之后进行细胞表面标志物鉴定、组织来源鉴定、成骨分化和成脂分化能力鉴定。
  2.构建过表达Ad-BMP9载体,检测其对PDLSCs合适的感染剂量(multiplicities of infection,MOI)后诱导PDLSCs成骨分化,检测BMP9、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor2,Runx2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙蛋白(osteoclain,OCN)等成骨基因蛋白的表达情况和ALP活性等指标,分析BMP9促进PDLSCs成骨分化的能力。
  3.通过SP600125和AdR-si-JNK抑制或干扰JNK通路,验证干扰效果后,检测Runx2、ALP、OPN、OCN等成骨基因蛋白的表达情况和ALP活性、钙盐结节沉积量等指标,判断JNK通路是否参与BMP9诱导PDLSCs成骨分化。通过抑制或干扰JNK通路,检测Smad2/3和p-Samd2/3的蛋白表达,判断JNK通路是否与Smad通路有密切关系,最后通过免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)检测p-JNK是否与Smad2/3发生反应。综合分析后,判断JNK通路是否串话Smad通路并在BMP9诱导PDLSCs成骨分化过程中发挥作用。
  4.向裸鼠肌肉内移植过表达BMP9的PDLSCs,使用腺病毒干扰JNK通路,通过影像学和HE染色对比未干扰JNK通路裸鼠异位成骨状态,鉴定分析JNK通路对BMP9诱导PDLSCs体内成骨的影响。
  研究结果和结论:
  1.经磁珠分选所得的细胞同时表达CD146阳性和STRO-1阳性比例约占27.9%;免疫荧光染色显示角蛋白阴性、波形蛋白阳性,表示细胞为中胚层来源的间充质细胞,且无外胚层来源细胞的污染;茜素红S染色和油红O检测表明分选后细胞具有成骨和成脂的多向分化潜能。
  2.荧光表达显示Ad-BMP9感染PDLSCs的MOI值为30-60,感染之后BMP9基因蛋白明显增高,表明构建的腺病毒有效;此外Runx2、ALP、OPN、OCN等成骨基因蛋白和ALP活性均较对照组明显增高,结果具有统计学意义,证明BMP9具有诱导PDLSCs成骨分化的作用。
  3.分别抑制或干扰JNK通路后,p-JNK蛋白表达下降,证实JNK通路受到影响;干扰之后Runx2、ALP、OPN、OCN等成骨基因蛋白的表达情况和ALP活性、钙盐结节沉积量等指标均有不同程度下降,结果具有统计学意义,表明JNK通路参与BMP9诱导PDLSCs成骨分化;此外p-Smad的蛋白也随着JNK通路被干扰而表达下降,证实JNK通路与Smad通路关系密切,最后通过Co-IP检测证实p-JNK和Smad2/3存在相互作用,结果表明JNK通路是通过串话Smad通路参与BMP9诱导PDLSCs成骨分化的过程。
  4.影像学结果显示,添加干扰JNK通路的BMP9诱导PDLSCs体内成骨模型,所形成的异位骨或骨样组织的体积和骨密度均小于未经干扰的裸鼠;HE染色显示干扰组成骨进程处于早期,并落后于未经干扰的组,结果与体外结论类似,这表明JNK通路是BMP9诱导PDLSCs体内成骨分化的重要途径,但不是唯一途径。
[博士论文] 江浩
口腔临床医学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  龋病是一种危害人类健康的的全球性疾病。自从病因学研究证实龋病为一种细菌感染性疾病以来,人们就有关龋病的相关微生物及免疫学方面的课题做了深入的研究。大量的证据表明变异链球菌(Streptococcus mutans,变链菌)与龋病的发生、发展密切相关,是目前公认的主要致龋菌,而与其致病相关的抗原成分已被用于免疫防龋的开发和研究。
  变链菌在牙面的粘附和聚集是其在口腔定植和致病的前提和基础。与此相关的毒力因子,如表面粘附分子AgⅠ/Ⅱ(PAc)和葡糖基转移酶(GTF)在此过程中起到了关键性的作用。首先,变链菌在牙面的附着有赖于PAc的功能结构域一唾液结合区段(Saliva-binding region,SBR);而在牙面的聚集和菌斑的形成有赖于GTF合成的不溶性葡聚糖(变聚糖)。实验表明针对PAc和GTF功能域(即唾液结合区域SBR和葡聚糖结合区域GBR)的抗体能有效阻止变链菌在牙面的定植。
  在前期的研究中我们已经成功地克隆出了编码SBR和GBR的基因片段sbr和gbr,并构建了包含有sbr或/和gbr的多种DNA质粒,本实验为探求提高免疫效能的免疫方法,采用了含有CMV和nirB的双启动子表达质粒pCMVnir,并利用减毒沙门氏菌SL3261作为载体进行肠道粘膜免疫,以期获得满意的免疫效果。本研究中我们首先通过DNA疫苗的体外表达我们验证了双启动子CMV和nirB在原核载体SL3261和真核细胞中调控抗原表达的功效。然后通过胃肠粘膜免疫我们在BALB/c小鼠身上探索了双启动子DNA疫苗pCN-SS/SG的免疫原性,和其诱导的免疫反应,并且通过动物实验评价了其作为防龋疫苗对变链菌的抗定植作用。
  方法:
  第一部分:沙门菌运载的粘膜疫苗pCN-SS/SG在小鼠体内诱导的免疫反应
  1.使用前期构建的pTriEx-4-SBR和pTriEx-4-GBR质粒在JM109(DE3)大肠杆菌表达体系中诱导表达SBR和GBR,并用HisTrapTM试剂盒加以纯化来免疫BALB/c小鼠以制备抗SBR和GBR的多克隆抗体。
  2.利用前期研究中构建的质粒pCN-SS/SG和pCN-SSIE分别转化减毒沙门氏菌SL3261,和转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,并培养其转化株。
  3.将转染后的CHO细胞培养48小时,SL3261转化株在无氧条件下过夜培养,利用荧光显微镜和Western blot检测目的基因的表达情况。
  4.将pCN-SS/SG转化的SL3261于体外无抗生素的培养基中连续培养5天;并用SL3261/pCN-SS/SG口服免疫小鼠,于免疫后的不同时间点检测小鼠肝脏、脾脏、小肠PP结中沙门菌的定植情况,以及质粒pCN-SS/SG体内、外的稳定性。
  5.分别用携带质粒pCN-SS/SG或pNir-SS/SG的减毒沙门氏菌于第1和第16周通过胃肠途径免疫BALB/c小鼠,并于初次和再次免疫后动态监测小鼠血清和唾液中抗原特异性抗体IgG、IgG1、IgG2a和IgA的产生情况,以及小鼠脾细胞的Th1/Th2因子分泌情况。
  第二部分:DNA疫苗pCN-SS/SG抗变链菌定植的小鼠实验
  1.用pCN-SS/SG转化的减毒沙门氏菌SL3261/pCN-SS/SG免疫BALB/c小鼠,同时用SL3261/pNir-SS/SG免疫组作为阳性对照,用SL3261/pCMVnir免疫组作为阴性对照。
  2.第二次免疫两周后,用S.mutans UA159分别口腔接种三组BALB/c小鼠,接种前后用棉签取样检测变链菌的情况。
  3.然后从接种后的不同时间点,即第一周至第八周检测小鼠口腔中变链菌的定植情况。
  结果:
  1.克隆抗原SBR和GBR在原核启动子nirB和真核启动子CMV的调控下,能在沙门氏菌载体SL3261和真核细胞中各自稳定地表达,在信号肽的协助下,并能可溶性地分泌至细胞外。
  2.质粒持续性测试表明,pCN-SS/SG能稳定地存在于生长的SL3261中,而SL3261/pCN-SS/SG能在宿主内生存4周以上。
  3.SL3261/pCN-SS/SG免疫BALB/c小鼠后,诱发了血清IgG和唾液分泌性IgA的产生,再次免疫后抗体反应获得显著增强,并维持在较高水平且明显强于SL3261/pNir-SS/SG诱导的抗体反应。
  4.IgG亚类及细胞因子分析表明,SL3261/pCN-SS/SG免疫后的小鼠血清中不仅诱导出抗原特异性IgG2a而且有IgG1;同时脾细胞经SBR和GBR刺激后产生了Th1(IFN-γ)和Th2(IL-4、IL-10)细胞因子,且SL3261/pCN-SS/SG免疫组水平明显高于SL3261/pCMVnir对照组。
  5.在接种后的第一至八周,pCN-SS/SG和pNir-SS/SG免疫组中的变链菌水平显著低于阴性对照和空白对照组,而在第三至八周,pCN-SS/SG免疫组中的变链菌又显著低于pNir-SS/SG免疫组,且持续维持在低于空白对照组99%的水平。
  结论:
  1.双启动子CMV-nirB在载体菌SL3261和真核细胞中能很好地控制克隆抗原的表达;且表达质粒pCN-SS/SG与载体菌SL3261有很好的相容性,在宿主体内可存在较长时间。同时免疫结果表明,以减毒沙门氏菌SL3261作载体,双启动子(CMV-nirB)防龋疫苗的粘膜免疫效果,无论是在免疫强度还是持续时间上,都要优于单启动子nirB。
  2.以减毒沙门氏菌SL3261作载体进行粘膜免疫,双启动子DNA疫苗pCN-SS/SG表现出更强的抗变链菌定植的作用,而优于单启动子。
  综上所述,本实验以构建的pCN-SS/SG质粒作为抗龋DNA疫苗,以减毒沙门氏菌SL3261作载体进行粘膜免疫,成功诱导出针对变链菌PAc和GTF抗原的粘膜免疫反应。与nirB启动子单独使用相比,CMV-nirB双启动子能高效地诱导唾液IgA,从而更有效地阻止变链菌在牙面的定植。CMV-nirB这一双启动子系统作为新的策略应用于粘膜免疫,充分利用了共同粘膜免疫系统,为龋病及其它相关粘膜疾病的防止展示了有价值的前景。
[博士论文] 应王贵
口腔临床医学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  颞下颌关节紊乱病(TMD)是一类临床症状表现为颞下颌关节区疼痛、异常关节音或伴有下颌运动功能障碍的一组疾病的总称,正常人群中发病率为20%-40%,是口腔科常见病、多发病之一。其发病与生理、社会、心理因素相关,但其病因及发病机制仍未阐明。颞下颌关节骨关节炎(TMJ OA)是TMD的一个重要类型,发病率约为25%,是一类主要累及颞下颌关节髁突软骨、滑膜及软骨下骨的以关节软骨和软骨下骨质改变为主要特征的器质性病变疾病。TMJ OA的发生与IL-1β、TNF-α、IL-6等细胞因子及Notch等信号通路有着密切的关系。
  其中,IL-1可能是在众多炎性细胞因子中的一个核心因子。IL-1是一种重要的促炎细胞因子,由IL-1α与IL-1β两种蛋白质组成,可与IL-1受体结合,从而激活下游炎性通路。其作为炎症的始动因子,在软骨细胞炎症反应和细胞凋亡过程中起到关键作用。IL-1β可能通过刺激TNF-α、IL-6、ICAM-1等炎性细胞因子的分泌和抑制胶原蛋白、TIMPS等的合成来干扰关节软骨细胞代谢,促进细胞分解代谢,显著抑制软骨细胞合成基质,使软骨细胞变性及细胞外基质降解,引发关节炎症和破坏,是造成颞下颌关节器质性损害的一种重要炎性介质。
  Notch信号通路由受体、配体、细胞内效应分子、其他的效应物和Notch的调节分子等组成,在多种组织细胞的生长、分化、增殖、凋亡中起着重要作用。Notch信号通路对软骨形成、软骨细胞的存活、骨重建、维持关节软骨细胞表型及调节软骨基质代谢中起关键作用,其调节异常可导致骨性关节炎。Notch信号分子在健康成熟的关节软骨中几乎消失,但是在受损的软骨中却可检测到高水平的Notch信号分子表达,但是,目前仍未明确Notch信号通路在软骨病变中的作用机制。
  本次研究通过建立Spraguee Dawley大鼠(SD大鼠)颞下颌关节软骨细胞的体外模型,使用IL-1β对软骨细胞进行诱导刺激,采用Notch1抑制剂(Notch1siRNA)抑制Notch1信号通路的表达。通过实时定量RT-PCR、蛋白质印迹分析(WB)、酶联免疫吸附试验(ELISA)对软骨细胞Notch1蛋白及mRNA、ICAM-1蛋白及mRNA、iNOS蛋白及mRNA、NICD、MMP-1、MMP-9、TIMP-1、磷酸化NF-кB p65及细胞核、细胞质中NF-кB p65蛋白的表达和软骨细胞TNF-α、IL-6的分泌水平进行检测。讨论分析Notch1信号通路在IL-1β诱导的颞下颌关节软骨细胞的炎症反应中的作用,为TMD/TMJ OA的临床治疗提供新的研究思路。
  方法:
  本实验采用从SD大鼠颞下颌关节分离提取的髁突软骨细胞,进行细胞培养、传代,并根据施加不同干扰因子及检测指标将实验分成5部分:
  1.实验一实验细胞分为空白对照组、PBS组(阴性对照组)、1L-1β刺激组,通过实时定量RT-PCR、WB分别检测软骨细胞Notch1mRNA、Notch1蛋白、NICD蛋白的表达;
  2.实验二实验细胞分为空白对照组、Notch1siRNA组、Notch1Si-NC组(阴性对照组),通过实时定量RT-PCR、WB分别检测软骨细胞Notch1mRNA、Notch1蛋白的表达;
  3.实验三实验细胞分为空白对照组、IL-1β刺激组、Notch1siRNA+IL-1β组、Notch1Si-NC+IL-1β组(阴性对照组),通过ELISA检测软骨细胞分泌的TNF-α和IL-6,通过实时定量RT-PCR检测、WB分别检测软骨细胞ICAM-1mRNA、iNOS mRNA和ICAM-1蛋白、iNOS蛋白的表达;
  4.实验四实验细胞分为空白对照组、IL-1β刺激组、Notch1siRNA+IL-1β组,通过WB检测软骨细胞MMP-1、MMP-9、TIMP-1;
  5.实验五实验细胞分为空白对照组、IL-1β刺激组、Notch1siRNA+IL-1β组,通过WB检测软骨细胞磷酸化NF-кB p65及细胞核、细胞质中NF-кB p65蛋白的表达。
  结果:
  1.IL-1β上调了软骨细胞Notch1与NICD的表达;
  2.Notch1siRNA可降低软骨细胞Notch1的mRNA及蛋白表达;
  3.抑制Notch1信号通路可降低IL-1β诱导的软骨细胞TNF-α,IL-6的分泌水平和ICAM-1、iNOS的mRNA及蛋白表达水平;4.抑制Notch1信号通路可减轻IL-1β诱导的软骨细胞MMPs与TIMP-1的表达失衡;
  5.抑制Notch1信号通路可抑制IL-1β诱导的软骨细胞NF-кB p65核易位及磷酸化。
  结论:
  IL-1β可诱导SD大鼠颞下颌关节软骨细胞Notch1、NF-кB信号通路的激活表达,引起软骨细胞的炎症反应及细胞外基质降解。Notch1siRNA可抑制软骨细胞Notch1信号通路的激活表达,部分抑制IL-1β诱导的软骨细胞NF-кB信号通路的激活表达。抑制Notch1信号通路可减轻IL-1β诱导的大鼠颞下颌关节软骨细胞的炎症反应程度,为临床治疗TMJ OA提供一定的理论依据。
[硕士论文] 卡拉丽
口腔正畸 大连医科大学 2017(学位年度)
摘要:研究背景:安氏Ⅲ类前牙牙合对于正畸医生来说一直都是一种挑战。为了得到好的矫治效果,医生需要彻底了解错牙合畸形的病因、严重程度、患者的诉求和期望值,从而选择恰当的矫治方法。对于生长发育停止的成人来说,轻度的病人可以通过牙齿的代偿来治疗,而对于比较严重的病人来说,常常需要正颌手术。正畸正颌联合治疗相对于单纯正畸代偿治疗而言,具有更好的稳定性。正畸代偿治疗Ⅲ类开牙合有很多种方法,具体方法的选择取决于支抗的设计,患者的诉求,以及医生的技术和喜好。常用的治疗Ⅲ类开牙合的技术有多曲方丝弓(MEAW)技术,Tweed-Merrifield技术和直丝弓固定矫治技术。它们都能取得让人满意的矫治效果,但这些方法都存在一些不足。MEAW技术需要医生有很好的弓丝弯制技巧,Tweed技术需要患者的良好配合。现在有一些更好的骨支抗也对III类开牙合有较好的效果。
  研究目的:本病历试图采用自锁托槽加种植钉辅助进行Ⅲ类牵引的方法来探究其对Ⅲ类开牙合病历的矫治效果。
  方法:选取大连奥索口腔门诊一名16岁健康男性为研究对象,该患者主诉是前牙咬不上,诊断结果是骨性Ⅲ类开牙合,下唇突,上牙唇倾,前牙以及右侧后牙反牙合,下中线左偏1mm,上下前牙散隙。病因分析为遗传因素(父亲有类似面型)以及不良舌习惯。拔除上合第三磨牙,矫治方法采用Damon Clear自锁托槽以及上后牙区种植钉辅助Ⅲ类牵引。上颌进行适当弓形调整以及后牙进行交互牵引用于纠正后牙的反牙合。矫治期间督促患者进行舌肌训练以及口腔卫生宣教。主动治疗结束后采用哈雷式保持器进行保持。
  结果:患者侧貌有了明显改善,Z角达到73°。下唇突度得到一定内收,覆牙合覆盖恢复到正常。上切牙唇倾度稍有减小,1-NA从40°减小到38°,下前牙稍有内收,IMPA从92.5°减小到83°。上下前牙伸长以辅助纠正开牙合,垂直向没有明显的改变,上下磨牙有轻微伸长。
  结论:自锁托槽加上后牙种植钉辅助Ⅲ类牵引治疗该骨性Ⅲ类开病例,取得了较为满意的效果。
[硕士论文] 袁慧芳
口腔医学 郑州大学 2017(学位年度)
摘要:目的:初步探讨错牙合畸形对成年人心理的影响状况,为临床制定合理的治疗方案提供依据。方法:选取郑州大学第一附属医院口腔科2016年1月至2017年1月就诊的95例错牙合正畸治疗患者。95例错牙合正畸治疗患者全部符合错牙合畸形诊断标准,另选取正常牙合志愿者55名,共计150人作为研究对象。其中男性66例,女性84例,年龄25-50岁,平均年龄37.15±7.25岁;有错牙合畸形作为研究组,无错牙合畸形作为对照组,利用调查问卷法对研究对象进行调查分析,调查量表分为三种,分别是个人评价问卷、缺陷感量表和社交回避及苦恼量表,利用这3个量表对研究对象的心理情况进行调查分析。结果:性别对成年人心理影响无差异(p>0.05)。其中男性组中研究组的缺陷感量表(FIS)得分高于对照组,p=0.005<0.05,具有统计学差异,男性研究组的缺陷感高于对照组。年龄对成人心理具有影响,其中中年患者的缺陷感量表(FIS)得分显著低于青年患者,其中研究组FIS得分高于对照组,p=0.004<0.05,有统计学差异;居住地及受教育程度对成年人心理具有影响,居住城市的研究组 FIS得分高于正常组, p=0.014<0.05,有统计学差异;小学组对个人评价问卷(PEI)得分有影响,研究组得分高于对照组。p=0.006<0.05,有统计学差异,且对社交回避及苦恼量表( SAD)得分有影响,研究组得分高于对照组。p=0.000<0.05,中学组对FIS有影响:研究组得分于对照组。t=2.456, p=0.016<0.05,;错牙合畸形分类对成年人心理影响无明显差异,对PEI, SAD无影响。对 FIS的影响:研究组得分高于对照组。t=2.784, p=0.006<0.05,具有统计学差异。结论:1.错牙合畸形对成年人心理的影响普遍存在,它会让人们心理产生消极的负面情绪,值得临床医师的关注2.性别对成年人心理影响无明显差异。3.年龄、居住地及受教育程度对成年人心理具有影响。4.错牙合畸形分类对成年人心理影响无明显差异,对PEI,SAD无影响。5.正畸工作者在正畸治疗中应加强心理护理干预,采用科学的干预手段来解决患者的心理健康问题。6.个人评价问卷(PEI)、缺陷感量表(FIS)、社交回避及苦恼量表(SAD)可以作为新的工具,在口腔正畸科展开使用,用以评估错牙合畸形对于患者心理影响程度。
[硕士论文] 白银
口腔医学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  通过CBCT对C1、C2型根管进行扫描,测量比较颊舌侧管壁最小厚度及分布,来指导临床应用,避免根管预备意外的发生;通过比较三种预备方法应用于24颗根管类型为C1、C2型的下颌第二恒磨牙的预备效果,探索一种能够相对有效的预备下颌第二恒磨牙C型根管的方法。
  方法:
  收集根管类型为C1、C2型的下颌第二恒磨牙离体牙,各12颗。按不同分型将样本采用区组随机法分为ProTaper镍钛旋转根管锉与用NSK回旋手机载02锥度不锈钢K锉联合预备组(机用联合组)、ProTaper镍钛旋转根管锉与手用不锈钢K锉联合预备组(手用联合组)、ProTaper镍钛旋转根管锉预备组(ProTaper组)。每组每种类型各4颗。在根管预备前进行CBCT扫描和三维重建,测量C型根管距根尖2mm、5mm、8mm处影像颊舌侧根管壁的最小厚度,进行方差分析;记录C型根管距根尖2mm、5mm、8mm处影像颊舌侧根管壁的最小厚度的位置,进行卡方检验。根管预备后再进行CBCT扫描和三维重建,将预备前后同一截面影像重叠,评价各组器械根管预备后根管未预备面积百分比。采用SPSS20.0软件包进行数据统计及方差分析。
  结果:
  1.24颗下颌第二恒磨牙舌侧根管壁最小厚度均小于颊侧根管壁最小厚度(P<0.05);根冠部及根中部的颊舌侧根管壁最小厚度在根面沟中央区多见,根尖部则在近远中区多见。
  2.3种方法预备下颌第二恒磨牙的C1、C2型根管均有未预备区域。ProTaper镍钛旋转根管锉与用NSK回旋手机载02锥度不锈钢K锉联合预备组分别在根冠部[未预备面积百分比为(6.60±4.23)%]及根中部[未预备面积百分比为(13.87±2.61)%]未预备面积较小; ProTaper镍钛旋转根管锉与手用不锈钢K锉联合预备组分别在根中部[未预备面积百分比为(13.91±1.92)%]及根尖部[未预备面积百分比为(13.43±2.06)%]未预备面积较小。
  结论:
  1.下颌第二恒磨牙C1、C2型根管的舌侧根管壁较薄,是根管预备过程中侧穿危险区。
  2.对于下颌第二恒磨牙的C1、C2型根管的机械预备方式宜采用 ProTaper镍钛旋转根管锉预备主根管,使用NSK回旋手机载02锥度不锈钢K锉水平运动方向的预备方式预备峡区的根冠部,手用不锈钢K锉沿根管方向提拉式预备峡区的根中部及根尖部。
[硕士论文] 李芳芳
口腔医学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  本研究通过检测复发性阿弗他溃疡(Recurrent aphthous ulcers,RAU)伴肥胖(Obese, OB)患者、单纯RAU或OB患者与健康人的血清胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)情况及肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平,分析RAU对肥胖个体IR情况的影响及与TNF-α的相关性,为指导RAU患者进行IR的早期筛查、诊断和干预,以预防前期糖尿病的发生并延缓其向糖尿病的转化提供参考依据。
  方法:
  本研究随机选择了于2015年11月至2016年12月在山西医科大学第一医院口腔科门诊就诊并被确诊为轻型RAU的40例患者,根据身体质量指数分为RAU伴肥胖组(20例)和RAU组(20例);并选择同期就诊于山西医科大学第一医院体检中心既往无RAU病史的40例志愿者,根据身体质量指数分为肥胖组(20例)和对照组(20例)。四组分别应用美国贝克曼库尔特公司生产的AU5821系列全自动生化分析仪使用已糖激酶法检测血清中空腹血糖含量,中国科大创新有限公司生产的GC-1200γ放射免疫计数器使用放射免疫法检测血清中空腹胰岛素含量,并通过公式计算得出胰岛素抵抗指数HOMA-IR分值,采用美国分子仪器公司生产的连续波长酶标仪使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中TNF-α含量。由同一名口腔科医师对患者进行口腔黏膜检查并记录RAU发作的部位、大小及数目。收集并记录四组个人资料包括年龄,性别,身高,体重及既往病史以及检测、计算所得数据。采用SPSS22.0统计分析软件根据实验数据行统计学分析,并认为P<0.05时结果有统计学差异。
  结果:
  1. TNF-α含量RAU+OB组高于RAU组和OB组(P<0.05, P<0.05);RAU组和OB组高于对照组(P<0.05, P<0.05)。RAU与OB均可作为主效应影响TNF-α含量(P<0.05,P<0.05),且两者具有相互协同作用(P<0.05)。
  2.空腹血糖浓度RAU+OB组高于RAU组(P>0.05);RAU+OB组高于OB组(P<0.05);RAU组和OB组高于对照组(P>0.05,P>0.05);RAU可作为主效应影响血糖浓度(P<0.05),OB对血糖浓度无明显影响(P>0.05),两者无明显交互作用(P>0.05)。
  3.空腹胰岛素浓度RAU+OB组高于RAU组和OB组(P<0.05,P<0.05);RAU组和OB组高于对照组(P<0.05,P<0.05)。RAU与OB均可作为主效应影响胰岛素浓度(P<0.05,P<0.05),但两者无明显交互作用(P>0.05)。
  4. HOMA-IR值RAU+OB组高于RAU组和OB组(P<0.05,P<0.05);RAU组和OB组高于对照组(P<0.05,P<0.05)。RAU与OB均可作为主效应影响HOMA-IR值(P<0.05,P<0.05),但两者无明显交互作用(P>0.05)。
  5.相关性分析显示,血清TNF-α含量与HOMA-IR分值呈正相关性(P<0.05)。结论:
  1. RAU患者处于活动期时可能存在机体血清TNF-α、IR表达水平升高的现象,在肥胖个体更加明显。
  2. RAU患者处于活动期时可能存在机体血清空腹血糖浓度升高的现象。
  3.血清TNF-α表达水平与胰岛素抵抗指数呈正相关。
[硕士论文] 周晓晴
口腔医学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  了解大同市3~5岁儿童乳牙患龋状况、儿童饮食习惯、口腔卫生习惯、就诊情况和家长口腔保健知识/态度的情况,为大同市儿童乳牙龋病的防治工作提供流行病学依据。
  方法:
  采用分层、整群、等容量随机抽样的方法,随机抽取大同市城区3所幼儿园共324名儿童。每所幼儿园3、4、5岁儿童各36人,男童、女童各半。(一)、临床检查以视诊结合探诊的方法,检查每位儿童20颗乳牙的牙冠状况。根据记录结果计算儿童乳牙患龋率、龋均、就诊率。检查器械主要使用CPI探针、带光源口镜、棉签。(二)、问卷部分对儿童家长进行一对一询问,了解儿童饮食习惯、口腔卫生习惯、就诊情况和家长口腔保健知识/态度的情况。所有检查结果核实录入后使用SPSS l7.0软件进行统计学分析。
  结果:
  1.患龋情况
  大同市3-5岁儿童患龋率为56.17%,龋均为3.12,有98.02%的龋齿尚未得到治疗。患龋率随年龄增长显著上升(?2=15.746,P<0.001),但在男女间没有明显差异(?2=0.451,P=0.502)。乳牙龋病呈低龄化趋势,3岁幼儿患龋率已达到40.74%。显著性龋均为7.79,是整体龋均的2.5倍。
  2.儿童饮食习惯
  半数以上的儿童有睡前进食甜点或甜饮料的习惯。甜饮料的进食频率控制效果相对理想。睡前进食甜食的习惯对患龋率有影响(P=0.027)。
  3.口腔卫生习惯
  在324名受检儿童中,有31.8%的儿童三岁之前已经开始刷牙,35.2%三岁开始刷牙,有9.9%三岁之后(四岁和五岁)开始刷牙,21.9%的儿童尚未开始刷牙。在已经开始刷牙的253名儿童中,只有31.2%能保证每日刷两次牙,大部分每日刷一次(62.5%)。只有14.2%的家长能做到每天帮孩子刷牙。在247名使用牙膏刷牙的受检儿童中,9.3%的儿童家长知道牙膏中含氟,22.3%明确知道牙膏中不含氟,68.4%的家长不清楚牙膏中是否含氟。
  对刷牙频率、开始刷牙时间及家长辅助刷牙频率进行单因素分析,仅开始刷牙时间对患龋率有影响(?2=7.613,P=0.022)。
  4.家长口腔保健知识/态度
  家长在“口腔健康对自己的生活很重要”、“定期口腔检查十分必要”和“预防牙病首先要靠自己”这三项口腔常识上表现良好97.5%~87.7%。63.6%的家长同意“保护孩子的六龄齿很重要”。“母亲的牙齿不好会影响孩子的牙齿”这一项,同意和不同意此观点的各有32.7%,33.6%的家长表示不知道是否有关。
  口腔保健知识答对率较高的有6道题,答对率均在70%以上。其中,“吃糖可以导致龋齿”的答对率最高,为89.2%。“窝沟封闭能预防儿童龋齿”和“氟化物对保护牙齿没有用”两题的答对率较低,分别为23.5%和25.3%,不知晓率分别为71%和69.1%。
  家长口腔保健的知识/态度对儿童口腔健康没有明显影响(P>0.05)。
  5.就诊情况
  324名受检儿童中仅62人曾于相关医疗机构就诊。就诊原因也以咨询检查(42.9%)和治疗(46.9%)为主。275人近一年没有带孩子到医院看过牙的主要原因是家长认为孩子的牙没有问题(77.1%)。
  结论:
  由口腔健康检查表结果可见:
  1、大同市3~5岁儿童患龋率高,就诊率低。
  2、乳牙龋病呈低龄化趋势。
  3、乳牙龋病存在高危人群。
  由口腔健康问卷结果可见:
  1、儿童口腔卫生习惯欠佳,不能保证有效刷牙。
  2、开始刷牙时间晚的和有睡前进食甜食习惯的儿童患龋情况更严重。
  3、家长对氟化物防龋知识和乳牙窝沟封闭缺乏了解。
  4、家长口腔健康知识尚欠缺,态度转化为行动的能力不足,就医行为不容乐观。
[硕士论文] 樊彧丰
口腔医学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  目前对于根管冲洗剂的研究大多拘泥于 MTAD与次氯酸钠的各自原始研究上,研究指出两者存在去除玷污层、杀灭细菌以及溶解牙髓这三点共性,基于此本文通过循证医学系统评价的方法来客观判定 MTAD能否取代(部分取代)次氯酸钠在临床上的使用,探索 MTAD与次氯酸钠在玷污层去除能力以及杀菌能力方面能否替代;对 MTAD与次氯酸钠在玷污层去除能力、杀灭粪肠球菌能力、杀菌有效率三者的差异进行统计学假设检验;
  方法:
  通过检索Pubmed、Embase、Ovid MEDLINE(R) In-Process&Other Non-Indexed Citations, Ovid MEDLINE(R) Daily and Ovid MEDLINE(R)(via.ovid)、Cochranelibrary、CNKI、WANFANGDATA、SinoMed等数据库,并手工检索山西医科大学图书馆以及山西医科大学口腔医院牙周科藏书,相关会议文献,以及所有纳入研究的参考文献。严格按照 PICOS原则、纳入和排除标准,对所纳入文献进行数据提取以及偏倚风险评估。分别选择SMD、OR作为效应量指标对MTAD与次氯酸钠之间玷污层去除能力以及其杀菌有效率采用revman5.3进行META分析。当50%<I2<75%对其实验设计、实验器械及实验地点进行分析,未能找到者选择随机效应模型,谨慎接受结果;当I2>75%且异质性无法找出之者,进行描述性系统评价报道各个文献的研究过程及结果,对效应量不进行合并,采用Greadpro3.6.1对结局指标进行评级,使用AMSTAR量表评估方法学。
  结果:
  本课题共检出文章220篇,经过初筛剩余文献21篇,复筛之后排除6篇,最终纳入15篇,对照组与试验组总共483例样本,根据各结局指标分组,分别进行META分析及系统评价,META分析结果显示:在玷污层去除能力纳入4项研究,样本共计60例,其合并效应量95%可信区间是:-1.58[-2.35,-0.82],Z检验结果Z=4.07,P<0.0001,说明在次氯酸钠组与MTAD组在玷污层去除能力上差异具有统计学意义;杀灭粪肠球菌能力纳入研究3项,样本量在103例,其合并效应量95%CI:0.26[-0.14,0.65],其结果 P=0.2,说明研究结果次氯酸钠组与 MTAD组在杀灭粪肠球菌能力上差异不具有统计学意义;抑菌环直径纳入研究4项,样本量100例,因异质性为96%故放弃合并统计量的计算,转作描述性评价,针对异质性讨论结果来说,本课题并未将四者做合并,而是分述四者的结果统计:Tay组未通过无效线,95%CI:3.89[2.62,5.17];而李新军组通过无效线,95%CI:-0.43[-1.15,0.30];于鑫未通过无效线,95%CI:16.17[11.10,21.23];Torabinejad,通过无效线,95%CI:0.36[-0.63,1.35];在杀菌有效率OR这一指标中,纳入研究4项,样本量共计220例,其合并效应量Z=4.72、95%CI:14.80[4.84,45.29],说明在次氯酸钠组与MTAD组在杀菌有效率上差异具有统计学意义。
  结论:
  通过META分析可以得出:MTAD在玷污层去除能力和杀菌有效率就目前资料来说是优于次氯酸钠,两者在杀灭粪肠球菌能力上不认为有差别;对于两者在抑菌环指标上所展现的性能优劣,就目前所获的资料中尚不能得出一个如是或者否一样有明确意义的清晰结论。
[硕士论文] 王璇
外科学(整形外科) 北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院中国医学科学院 2017(学位年度)
摘要:目的:
  半侧颜面短小畸形(Hemifacial microsomia)是一种常见的以下颌骨发育不良为主要表现,常合并面部肌肉软组织缺损的先天性颅面畸形。下颌骨牵引成骨技术能有效延长下颌骨升支,目前已经成为治疗半侧颜面短小畸形的常主要治疗手段。本研究主要针对半侧颜面短小畸形下颌骨牵引成骨过程中以及术后不良事件进行统计分析,进行手术安全性评估;同时评估下颌骨牵引成骨手术对于半侧颜面短小畸形患儿咬肌体积的变化,探讨骨延长手术对于咬肌生长的影响。
  方法:回顾性研究2010年2月到2015年3月期间在中国医学科学院整形外科医院颌面整形外科中心就诊的71例采用下颌骨牵引成骨手术治疗的半侧颜面短小畸形患者。术前采用三维CT重建、计算机辅助设计、快速成形技术,术中进行下颌骨截骨术并置入延长器,术后47天以1mm/d的速率牵引成骨,下颌骨升支延长距离为20-40mm,牵引完成固定4-13个月后取出延长器,记录牵引过程中以及牵引术后遇到的所有不良事件。
  同时统计CT资料完整,没有感染、血肿等影响咬肌测量并发症的半侧颜面短小畸形患者共25例,借助Mimics软件重建患儿咬肌及头颅骨的三维立体图像,测量下颌升支后缘高度及咬肌体积。
  结果:71例半侧颜面短小畸形患儿平均随访34.4个月,所有不良事件的发生率是36.6%,轻微不良事件发生率18.3%,包括局部感染和神经损伤,中等不良事件发生率是12.7%,包括暂时性颞骨吸收、牵引器松动和严重瘢痕增生,严重不良事件发生率是5.6%,包括牙齿或牙胚损伤和重度张口受限。
  对25例患儿进行了头颅CT三维重建并测量咬肌体积。下颌骨延长术后患侧下颌升支后缘高度显著增加(32.2±6.4mm vs39.2±5.9mm,P<0.001)。术后健侧咬肌体积无显著差异(9633±297mm3vs9821±362mm3,P=0.37),而患侧咬肌体积术后较术前明显增加(5343±342mm3vs6580±413mm3,P=0.008)。ⅡA型和ⅡB型半侧颜面短小畸形患儿牵引成骨术后咬肌增加量无显著差异(740±830mm3vs1658±457mm3,P=0.33);下颌升支后缘高度增加量与咬肌体积增加量无显著相关性(相关系数R2=0.025,P=0.45)。
  结论:下颌骨牵引成骨手术是治疗半侧颜面短小畸形的一种相对安全的治疗方式,重视牵引过程中以及牵引后所有不良事件的发生,并进行妥善处理、改善治疗流程非常重要。同时,下颌骨牵引成骨一方面可以矫正下颌骨发育不良,延长患侧下颌升支高度,改善颅颌骨不对称程度;另一方面,下颌骨牵引成骨可能有助于促进患侧咬肌生长,增加咬肌体积,改善半侧颜面短小畸形肌肉软组织缺损情况。
[硕士论文] 王锦华
临床口腔医学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:第一部分实验:
  目的:
  观察NF-κB非经典通路IKKα介导的Maspin在HPDLCs中的表达。
  方法:
  组织块法原代培养HPDLCs,倒置显微镜及SP免疫组化鉴定细胞来源。CCK-8检测LPS对HPDLCs增殖的影响。免疫细胞化学定位Maspin在HPDLCs中的表达位置。实验分空白对照组(NC)、LPS1-4组(LPS终浓度分别为0.1,1,10,50 mg/L), RT-PCR及Western Blot分别检测不同浓度LPS刺激下HPDLCs中Maspin、IKKαmRNA及蛋白的表达,ELISA检测炎性因子TNF-α和IL-1β的分泌。
  结果:
  免疫细胞化学显示Maspin在正常与LPS刺激的HPDLCs中均呈胞浆表达。Western Blot结果显示,随着LPS浓度增加Maspin蛋白表达逐渐下调,呈浓度依赖性,LPS1-4组与NC组相比差异具有统计学意义(P<0.05);IKKα蛋白表达逐渐上调,呈浓度依赖性,LPS1-4组与NC组相比差异具有统计学意义(P<0.05);且二者相关性分析可知,Maspin蛋白与IKKα蛋白表达呈负相关(r=-0.959,P<0.05)。mRNA表达与蛋白表达趋势相同。ELISA结果显示,NC组中TNF-α、IL-1β分泌量较低,加入LPS刺激后,TNF-α、IL-1β随着LPS浓度增加分泌增加,与Maspin蛋白表达呈负相关。
  结论:
  Maspin在人牙周膜细胞中呈胞浆表达,且LPS刺激下人牙周膜细胞中NF-κB非经典通路IKKα介导的Maspin表达下调,并与TNF-α、IL-1β呈负相关。
  第二部分实验:
  目的:
  观察黄芩苷对HPDLCs中IKKα介导的Maspin表达的影响。
  方法:
  CCK-8检测黄芩苷对HPDLCs增殖的影响。实验分空白对照组(NC组:黄芩苷终浓度为0 mg/L,LPS终浓度为0 mg/L)、LPS刺激组(黄芩苷终浓度为0 mg/L,LPS终浓度为10 mg/L)、黄芩苷+LPS1-4组(黄芩苷终浓度依次为0.01,0.1,1,10 mg/L, LPS终浓度为10 mg/L),RT-PCR及Western Blot分别检测药物作用下Maspin、IKKαmRNA及蛋白的表达,ELISA检测炎性因子TNF-α和IL-1β的分泌。
  结果:
  LPS组与NC组相比Maspin蛋白表达下调,IKKα蛋白表达上调(P<0.01)。黄芩苷+LPS1-4组与LPS组相比,随着黄芩苷浓度的增加,Maspin蛋白表达逐渐上调,呈浓度依赖性,且黄芩苷+LPS1-4组与LPS组相比差异具有统计学意义(P<0.05);IKKα蛋白表达逐渐下调,呈浓度依赖性,且黄芩苷+LPS1-4组与LPS组相比差异具有统计学意义(P<0.01);同时Maspin蛋白与IKKα蛋白表达呈负相关(r=-0.886,P<0.05)。mRNA表达与蛋白表达趋势相同。ELISA结果显示,LPS组与NC组相比TNF-α、IL-1β分泌显著增加,黄芩苷+LPS1-4组与LPS组相比,随着黄芩苷浓度的增加TNF-α、IL-1β分泌逐渐减少,与Maspin蛋白表达呈负相关。
  结论:
  黄芩苷介导了人牙周膜细胞中NF-κB非经典通路IKKα调控的Maspin表达上调,同时抑制TNF-α、IL-1β分泌,对LPS刺激引起的细胞炎性损伤起保护作用。
[硕士论文] 李美平
麻醉学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  针对2型糖尿病患者存在的血液高黏度的病理改变,本课题选用羟乙基淀粉(130/0.4)氯化钠注射液(商品名:万汶)术前预扩容进行血液稀释,观察其对糖尿病患者血液流变学指标的影响,以探讨此方法应用于围术期糖尿病患者的临床意义。
  方法:
  根据课题的纳入、排除标准选取了进行择期手术的2型糖尿病患者40例,并随机分成两组:试验组和对照组,入手术室后给予面罩吸氧、开放静脉液路、咪达唑仑镇静、常规监测,试验组于麻醉开始前30分钟内给予羟乙基淀粉(130/0.4)氯化钠注射液8ml/kg扩容,而对照组于麻醉开始前30分钟内给予等量的乳酸钠林格液扩容。扩容期间密切关注血流动力学的波动以及输液相关并发症和过敏事件的发生,同时记录监测指标:分别于扩容前、扩容结束时、麻醉开始时、手术切皮时及扩容后(液体输注完毕)1h五个时间点记录患者的心率、血压;与扩容前、扩容结束时及扩容后1h三个时间点记录患者的血糖值;于扩容前、扩容后1h两个时间点抽取静脉血检测血液流变学指标包括全血粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数、Hb、HCT以及抽取动脉血检测血乳酸值。
  结果:
  两组患者的一般资料包括性别、年龄、身高、体重、BMI、糖尿病病史等比较,差异无统计学意义;与扩容前相比,两组扩容结束时的心率无明显变化,麻醉开始时、手术切皮时、扩容后1h的心率均有减慢,两组扩容结束时血压明显升高,麻醉开始时、手术切皮时、扩容后1h血压降低;与对照组相比,试验组患者的血压在麻醉开始时、手术切皮时降低程度较小;与扩容前相比,两组患者的血糖值在扩容结束时无明显变化,而在扩容后1h均有明显升高,但与对照组相比,试验组各时间点血糖无明显升高,结果无统计学意义;与扩容前相比,对照组扩容后的血浆粘度、红细胞聚集指数降低不明显,差异无统计学意义(P>0.05),而全血粘度、血红蛋白量、红细胞压积以及动脉血乳酸值有明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);试验组扩容后的全血粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数、血红蛋白量、红细胞压积以及动脉血乳酸值均有明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,试验组扩容前的所有检测指标差异无统计学意义(P>0.05);试验组扩容后的血浆粘度、红细胞聚集指数、红细胞压积以及动脉血乳酸值下降程度更大,差异有统计学意义(P<0.05),其余指标的比较差异无统计学意义(P>0.05)。
  结论:
  择期手术的2型糖尿病患者在术前应用乳酸钠林格液和羟乙基淀粉(130/0.4)氯化钠注射液扩容均能降低患者血液的全血粘度、血红蛋白量、红细胞压积以及动脉血乳酸值,但羟乙基淀粉(130/0.4)氯化钠注射液还能明显降低患者的血浆粘度和红细胞的聚集性,且更能稳定循环功能,对围术期糖尿病患者具有一定的临床保护作用。
[硕士论文] 张涛
口腔医学 广西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  建立犬下颌骨牵张成骨、下颌骨骨折模型及幼犬下颌骨及胚胎下颌骨模型,通过高通量测序找到牵张成骨期间可能激活的与新骨快速形成相关的因子及信号通路。
  方法:
  实验共分为7组,其中实验组分别为牵张固定0周组(D01)、牵张固定2周组(D02)、犬30天胚胎组(E)、幼犬2周组(P)、骨折固定2周(对应牵张组间歇期1周及牵张期1周)组(MF1)、骨折固定4周(对应牵张组间歇期1周、牵张期1周及固定期2周)组(MF2)及对照组(AC)。每小组实验动物为3只。D01和D02组中分别随即选取3只健康成年中华田园犬,体重约15公斤,于其右侧下颌骨施行下颌骨牵张成骨术。间歇期1周后开始以1mm/天速度将右下颌骨向近中方向牵张,牵张期1周共预计牵张7mm后牵张结束,处死D01组实验犬并收集右下颌骨牵张区标本。D02组完成牵张后固定2周,固定期结束后拍摄锥形束CT观察成骨情况,然后处死动物并收集右侧下颌骨牵张区新生标本,记录标本大体观。MF1和MF2组分别随即选取3只健康成年中华田园犬犬,体重约15公斤,于其右侧下颌骨施行下颌骨骨折手术,术式参考下颌骨牵张成骨,骨折间隙为7mm。分别于2周及4周后拍摄CBCT及处死取材,收集右下颌骨骨折间隙标本。E组为孕30天的母犬,拍摄B超确认天数后纳入实验组。P组为随机选取3只同种出生2周健康幼犬纳入实验组。AC组随机选取3只健康成年中华田园犬,体重约15公斤。处死E组、P组及AC组并收集各组右下颌骨标本。将7组标本进行高通量LncRNA测序检测。
  结果:
  1、D01、D02、MF1、MF2组动物均顺利完成手术及术后随访观察。术后没有实验犬出现相关严重并发症,牵张器及钛板固定牢固,未见松脱,亦未发现牵张器及钛板的断裂及变形。观察所有实验犬行牵张前和牵张后右侧尖牙牙位及骨折手术前后右侧尖牙牙位,可发现牵张后及骨折后下颌尖牙相对于上颌尖牙有明显的近中前移,说明右侧颌骨成功通过牵张及人为骨折延长。
  2、从7组样本中均提取出足量的总RNA,并分别成功构建了用于lncRNA测序所需的cDNA文库。成功完成了各组高通量IncRNA测序。
  3、本项目7组样品数据,总共有3504个lincRNA和3731个novel lncRNA有表达。
  4、牵张组、胚胎组、幼犬组同正常对照组及骨折组相比差异表达的lncRNA中,TCONS_00170590有可能调控其靶基因Lix1参与牵张成骨的快速成骨过程。
  结论:
  1、LncRNA TCONS_00170590在D01组、E组、P组中表达同AC组和MF1组相比有显著差异,提示牵张成骨与胚胎及幼犬发育有共同点且不同于骨折愈合。
  2、LncRNA TCONS_00170590负调控其靶基因LIX1,并且可能参与调控牵张成骨过程中的血管新生和新骨快速形成。
  3、牵张成骨中除与胚胎及幼犬共同的生长调节因素外,牵张力、微创伤等因素可能是其更快速成骨的原因。
[硕士论文] 张广峰
口腔临床医学 华北理工大学 2017(学位年度)
摘要:目的:应用Lentivirus(慢病毒)构建钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ(CaMKIIδ)过表达载体,以探索CaMKⅡδ过表达对破骨细胞分化以及下游信号分子环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)蛋白活性的影响,以进一步证实在破骨细胞分化中CaMKⅡδ的作用及调控破骨细胞分化的分子机制。
  方法:
  1.CaMKⅡδ高表达转录本筛选及重组过表达载体构建。利用50ng/mL RANKL诱导 RAW264.7细胞向破骨细胞分化,在诱导0d、1d、3d、5d后收获细胞。RT-PCR筛选出破骨细胞分化过程中稳定高表达的CaMKⅡδ转录本;并以之构建CaMKⅡδ过表达慢病毒载体,转染破骨细胞前体RAW264.7细胞,再用合适浓度的嘌呤霉素筛选出CaMKⅡδ过表达慢病毒稳定转染株。Real-time PCR和Western-blot检测CaMKⅡδ在细胞中表达。
  2.CaMKⅡδ过表达对破骨细胞生成、功能及下游分子活化T细胞核因子1(NFATc1)蛋白表达的影响。实验分成三组:对照组、空载体组和CaMKⅡδ过表达组;前者不用病毒转染,后两组分别转染空载体和重组过表达载体。三组细胞都用100ng/mL核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导细胞向破骨细胞分化;于第5d末收获细胞,应用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色及牙本质磨片吸收陷窝检测三组破骨细胞生成及骨吸收情况。应用免疫荧光细胞化学检测三组细胞中NFATc1蛋白表达情况。
  3.CaMKⅡδ过表达对信号分子CREB、ERK、JNK、p38蛋白活性的影响。实验分成两组:空载体组和CaMKⅡδ过表达组。Western-blot检测两组细胞在100ng/mL RANKL诱导下信号分子CREB在0h、1h、3h、6h、12h、24h时及ERK、JNK、p38在0min、5min、10min、15min、30min、60min时总蛋白和磷酸化蛋白水平。
  结果:
  1.RT-PCR检测显示CaMKⅡδ转录本(transcript variant)2和3在破骨细胞分化中持续高表达。本研究采用转录本2成功构建了CaMKⅡδ过表达慢病毒载体,并建立了稳定转染细胞株。Real-time PCR和Western-blot证实了CaMKⅡδ在RAW264.7细胞中过表达,其中Real-time PCR检测过表达组CaMKⅡδmRNA的表达量较对照组、空载体组分别上升了149.6%(P<0.05)和95.3%(P<0.05);Western-blot检测过表达组CaMKⅡδ蛋白表达较对照组、空载体组分别上升了36.0%(P<0.05)和32.7%(P<0.05)。
  2.经RANKL诱导5d后,CaMKⅡδ过表达组TRAP阳性破骨细胞的数目、牙本质吸收陷窝数和吸收陷窝的面积分别是22.600±3.362、3.000±1.225和1429.980±759.394μm2,与对照组(23.600±3.050、2.600±1.517、1477.160±778.798μm2)和空载体组(21.800±1.643、2.600±1.140和1322.720±225.484μm2)比较差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光细胞化学检测显示三组细胞中NFATc1蛋白荧光强度也没有明显差异。上述结果提示CaMKⅡδ过表达对破骨细胞生成、骨吸收功能及下游分子NFATc1蛋白表达无明显影响。
  3.CaMKⅡδ过表达在破骨细胞分化过程中对JNK、p38的蛋白磷酸化无显著影响(P>0.05);但CaMKⅡδ过表达下调了RANKL诱导10min、15min、30min、60min时ERK蛋白磷酸化(P<0.05);并使诱导0h、1h时CREB磷酸化蛋白水平显著升高(P<0.05)。
  结论:
  1.本实验应用转录本2成功构建了 CaMKⅡδ过表达慢病毒载体,并建立了稳定转染细胞株。
  2.CaMKⅡδ过表达对破骨细胞的分化、骨吸收及下游分子NFATc1蛋白的表达无明显影响。
  3.CaMKⅡδ过表达在破骨细胞分化中抑制了ERK蛋白磷酸化,并上调了CREB磷酸化蛋白水平;但对JNK、p38蛋白活性无明显影响。上述研究提示,高于生理水平的CaMKⅡδ虽然可以调节部分信号分子的活性,但不足以对破骨细胞分化及骨吸收功能产生影响。
[硕士论文] 华维昕
计算机技术 电子科技大学 2017(学位年度)
摘要:精准医学融合生物信息与大数据科学,以精准、准时、共享和个体化为目标,定义了一种全新的医学概念和医疗模式。口腔精准医疗作为精准医学的一个分支,旨在突破传统的临床医疗经验,精细化诊断和治疗的手段与流程,最终实现“同病异治,异病同治”的辩证施治。面部形态测量与分析是口腔疾病诊断的常规检查项目之一,在治疗方案的制定与治疗效果的评估中,都发挥着重要的价值和作用。
  依托人体测量学和医学统计学,口腔临床的面部形态测量与分析主要采用直接测量法、照片测量法和 X线头影测量法。相比其它两种方法,照片测量法使用频率最高,具有展示直观、操作简便、采样快、成本低和无危害等优点。然而,现有照片测量法在数据的处理和分析过程中,普遍采用人工标点和统计分析,存在效率低、精度差和指标过宽等不足,不能满足精准口腔医疗的需求。
  本文参照精准口腔临床检查的要求,运用图像处理和数据挖掘的方法,对病人的面部图像进行了自动化和精细化的测量和分析。首先,提出了一种基于ASM算法的人体面部测量方法,将面部指标点测量映射为人脸特征点定位。为提高精度,根据指标点的分布特点,通过对口眼区域和边缘特征点的识别,优化了方法中的全局和局部模型。
  然后,提出了一种基于DBSCAN算法的面部形态分析方法,将面部形态分析转化为多元数据分析。为消除不同测量指标量纲的影响,先采用无量纲化方法对数据进行预处理,再综合多个指标进行聚类分析,进而对病人面部形态进行细致的归类和分组。
  最后,设计并实现了一套面部形态辅助检测系统,完成了对面部的测量和分析,具有较强的临床实用价值。
[硕士论文] 陈杰威
电子与通信工程 电子科技大学 2017(学位年度)
摘要:在口腔正畸过程应用计算机视觉技术,可以帮助医生准确的了解被治疗者佩戴的固定矫治器的位移状态,减少对于医生的经验和操作熟练度的依赖,提升治疗效果,改善治疗体验。
  计算机视觉中的特征提取是非常重要的一个环节。关于特征提取的许多研究更多的采用了基于图像处理的方法,在目标体积较大、特征较为丰富的应用场景可以获得良好的效果。但口腔正畸过程中牙齿图像具有其独特的特性,比如牙齿目标小、牙齿表面较为光滑、湿润口腔的炫光较为严重等。上述特点使得采用传统的特征提取方法只能达到粗略定位的目的。本文在对牙齿图像的特征进行研究讨论的基础上,实验采用传统的特征提取方法,并进一步提出借鉴光学信息处理,采用光学匹配滤波的方法进行牙齿图像的特征提取。本文通过匹配滤波的方法实现对牙齿图像中的正畸固定矫治器的精确定位,并针对匹配滤波过程中的一些关键问题进行了深入的研究。主要工作如下:
  1.相比传统意义上的拍照,从牙齿图像的特征、正畸手术的特点、对拍摄设备的需求、位移测量的原理、分辨率与测量精度等方面进行研究;
  2.针对正畸过程的特点,对拍摄设备、照明环境等拍摄前期工作进行研究,同时对获取的原始图像需要进行的后期图像预处理的相关方法进行探讨,从而获得符合后续实验要求的图像材料;
  3.对牙齿图像进行特征点提取,论述并尝试基于传统图像处理方法的特征提取以及采用基于光学匹配滤波原理的特征提取方法,并对其实验结果进行展示与分析;
  4.从匹配滤波过程的重难点的发生原理角度进行研究,并提出改进方法,有效减轻或消除相关的干扰。同时还对如何减少计算机运算量,提高程序运行速度方面进行算法上的优化。从而使得基于光学匹配滤波原理的牙齿图像特征提取可以高效、准确的进行。
[硕士论文] 张婧瑜
口腔临床医学 华北理工大学 2017(学位年度)
摘要:目的:研究可乐型碳酸饮料对粘结二氧化锆类修复体与天然牙的三种粘固剂(3M Rely X luting、3M ESPE Rely X Veneer、PULPDENT Embrace)粘结强度的影响。为二氧化锆类修复体选择理想的粘固剂提供实验依据。
  方法:根据离体牙收集标准,选择45颗近期拔除的上颌第一前磨牙(患者知情同意并签字),生理盐水保存。用金刚砂车针将离体牙唇颊面预备成一个面积为3mm×3mm的平面,预备厚度为0.8-1mm,暴露面为釉质层,用砂纸打磨光滑后的45颗离体牙随机分成9组,用粗糙度仪测量各组离体牙打磨后的平面粗糙度无差异。选取相同质地的锆块,切割打磨烧结后,游标卡尺精确选取45个统一标准规格为3mm×3mm×3mm的二氧化锆瓷块,随机分成9组,粗糙度仪检查各瓷块粗糙度一致。将9组离体牙和锆块随机配对分成3大组,每组15颗。A组:Luting组,B组:3M Veneer组,C组:PULPDENT组。分别用3M Rely X luting、3M ESPE Rely X Veneer、PULPDENT Embrace三种粘固剂与二氧化锆锆块粘结。再将每组的15个试件随机分成3组(n=5),5分钟组:A1、B1、C1;24小时组:A2、B2、C2;对照组:A3、B3、C3。粘固剂固化后4分钟将全部试件浸泡于生理盐水中。固化后5分钟,从生理盐水中取出 A1、B1、C1组,开始浸泡于可口可乐中,5min/次,2次/日,间隔12小时;固化后24小时,从生理盐水中取出A2、B2、C2组,开始浸泡于可口可乐中,5min/次,2次/日,间隔12小时;剩余的 A3、B3、C3组生理盐水保存。所有样本可口可乐浸泡之外的时间均浸泡在生理盐水中,37℃恒温水浴箱保存。每天将所有样本的生理盐水更换一次,可口可乐每次更换后弃去,连续3个月。3个月后对试件进行检测:1抗剪切强度的测试:采用硬性脆性材检测仪对各样本进行剪切强度进行测试。所得数据采用 SPSS17.0统计学软件进行分析,统计检验的水准设为 P<0.05有统计学差异性。所得数据均以均数±标准差的形式表达。2粘结面电镜观察:剪切测试后,断裂面均发生在锆块与粘固剂之间,对此断裂面进行电镜观察,分析可乐对粘结界面的影响。
  结果:1、抗剪切强度的测试结果:1)组内粘结强度比较,A组:5分钟组<24小时组<对照组(P<0.05);B组:5分钟组与24小时组无差异性,均低于对照组;C组:5分钟组<对照组,24小时组与对照组无差异性。2)组间粘结强度比较,5分钟组、24小时组的结果均为:A组低于 B、C组(P<0.05);B组与 C组无明显差异(P>0.05)。2、扫描电镜观察结果:通过电镜观察,三种粘结剂在可口可乐浸泡下都有不同程度的溶解断裂。3M Rely X Luting组:A1组粘结面可见密集而明显的断裂纹理;A2组的粘结面也可见明显的断裂纹,但裂纹少于A1组;A3组虽然也有断裂,但单位面积内断裂纹相对较少。3M ESPE Rely X Veneer组:B1组、B2组均有微小的裂纹,B3组粘结面较光滑平坦。 PULPDENT Embrace组:C1组有明显的断裂纹,C2组粘结面有细小的裂纹,C3组无明显的断裂痕迹。
  结论:1、可乐型碳酸饮料能明显降低3M Rely X luting与二氧化锆的的粘接强度,而对3M ESPE Rely X Veneer与 PULPDENT Embrace的粘接强度的影响相对较小。2、可乐型碳酸饮料对3M Rely X luting与二氧化锆的粘结强度影响随着固化时间的延长有减小的趋势。3、可乐型碳酸饮料对3M ESPE Rely X Veneer与二氧化锆的粘结强度影响与固化时间无明显关系。4、 PULPDENT Embrace在固化24小时后受可乐型碳酸饮料的影响较小。
[硕士论文] 于雪菲
口腔临床医学 广西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:建立犬下颌骨牵张成骨模型,利用高通量测序技术对牵张后即刻和固定2周的下颌骨牵张区骨组织及犬胚胎、新生犬、骨折犬以及正常对照组犬的下颌骨组织进行microRNA的全基因组表达谱测序,获得microRNA的差异性表达,预测差异性microRNA靶基因,并通过KEGG富集分析找到牵张成骨中成骨、成血管作用相关的因子信号通路。
  方法:设立11组实验组分别为牵张固定0周组(DOI)、牵张固定2周组(DO2)、骨折固定12天(对应牵张组间歇期7天及牵张期7天)组(MF1)、骨折固定26天(对应牵张组间歇期7天、牵张期7天及固定期14天)组(MF2)、犬30天胚胎组(E1)、犬35胚胎组(E2)、犬50天胚胎组(E3)、新生犬组(NB)、幼犬2周组(P2)、幼犬4周组(P4)、对照组(AC)。每组实验动物为3只。DOI组和DO2组分别选取3只健康成年中华田园犬,于其右侧下颌骨施行下颌骨牵张成骨术,间歇期7天后开始以1mm/天速度将右下颌骨向近中方向牵张7天,并于牵张结束后即刻和固定2周后处死、收集右侧下颌骨牵张区标本。MF1和MF2组同样选取健康成年中华田园犬各3只,截断右侧下颌骨、骨折间隙为7mm,分别于术后12天和26天处死、取材纳入实验,固定时间对应牵张各组。E1、E2、E3组分别选取孕30、35、50天犬各3只,确认孕期后取各自胚胎纳入实验。NB组选择3只出生后当日新生犬,P2和P4组分别选取同种出生2周、4周的健康幼犬各3只纳入实验组。对照组选取健康成年中华田园犬,处死E1、E2、E3、NB、P2、P4组及AC组,收集右下颌骨标本。提取这几组骨组织microRNA,进行高通量microRNA测序检测。
  结果:1)大体观:实验犬均成功完成手术过程及术后随访,伤口愈合良好,无严重并发症。DOI、DO2组牵张器与固位钉牢固,未见松动脱落。右下颌骨牵张区内新生骨组织颜色鲜红,质软,多为纤维组织及类骨质,未见明显硬组织形成。
  2)从11组样本中均提取出足量的总RNA,并成功完成了各组高通量microRNA测序,总共检测到354个microRNA有表达。
  3)在牵张成骨组、胚胎组、新生组与对照组的对比中,共发现27个差异表达microRNA,相对正常对照组均有表达上调的共18个microRNA、均有下调的共9个microRNA。其中miR-494的靶基因PTEN,可能为造成牵张过程中成骨速度加快的原因之一。
  结论:miR-494在牵张成骨组、胚胎组及新生组表达而在正常对照组不表达,提示牵张成骨与胚胎发育及幼犬快速生长发育具有相似的调节方式。可能通过负调控其靶基因PTEN,从而激活PI3K-Akt信号通路促进成血管、成骨。
[硕士论文] 陈丽
口腔临床医学 华北理工大学 2017(学位年度)
摘要:目的:通过建立长期饮用碳酸饮料大鼠正畸牙移动实验动物模型,检测大鼠不同时期血液中的钙、磷及碱性磷酸酶含量,胫骨近端骨密度(BMD),上颌第一磨牙移动距离;同时观测正畸牙移动大鼠牙周组织内血小板衍生生长因子-AA(PDGF-AA)的表达情况。探讨长期饮用碳酸饮料对正畸牙移动及牙周改建的影响,为有长期饮用碳酸饮料习惯的患者正畸治疗提供实验依据。
  方法:SD雌性大鼠48只,2月龄,体重210±15g,清洁级,普通饲料饲养,动物自由饮水摄食。将48只大鼠随机分为两组:对照组和实验组,分别24只。将两组大鼠根据加力天数又随机分为0天(0d)、7天(7d)、14天(14d)、21天(21d)四小组,分别6只。对照组大鼠给予水喂养的同时实验组给予定量的碳酸饮料喂养,3个月后为各组大鼠安装正畸牙移动装置,分别于当天的同一时间段内处死大鼠,腹主动脉采血检测血 Ca、血P及ALP含量,分离左侧胫骨测定BMD,量取正畸磨牙近中移动的距离。离断右侧上颌第一磨牙及牙周组织块制成组织学切片,利用HE染色观察牙周组织的形态结构变化。采用免疫组化对切片染色,利用IPP6.0软件包半定量分析第一磨牙牙周张力侧PDGF-AA表达情况,采用统计学方法分析PDGF-AA表达的平均光密度值(MOD)。
  结果:
  1.与对照组大鼠相比,实验组大鼠血Ca、ALP含量及BMD降低,血P含量升高,差异有统计学意义;随时间的延长,两组大鼠血Ca含量逐渐降低,差异有统计学意义。
  2.在不同时间段内实验组的第一磨牙移动距离均高于对照组,差异有统计学意义。随着加力的时间延长,两组第一磨牙移动距离逐步增大,差异有统计学意义。
  3.免疫组化结果表明,两组大鼠牙周组织中可见PDGF-AA阳性表达,主要在牙周膜成纤维细胞(PDLF)、成骨细胞(OB)、血管内皮细胞(VEC)的胞浆中出现。4实验组大鼠牙周牵张侧PDGF-AA的表达均低于对照组,差异有统计学意义。施力后两组大鼠的牙周牵张侧PDGF-AA表达逐步加强,在7d到达高峰,随后逐步下降,有统计学差别。
  结论:
  1.实验证实长期饮用碳酸饮料大鼠的正畸牙近中移动距离大于正常大鼠;随时间延长,移动距离增加。提示临床考虑加力值的问题。
  2.长期饮用碳酸饮料大鼠牙周牵张侧PDGF-AA的表达低于正常大鼠,提示PDGF-AA刺激骨修复和成骨作用降低,长期饮用碳酸饮料会对牙周组织骨改建造成负面影响。
[硕士论文] 郑迎秋
口腔临床医学 华北理工大学 2017(学位年度)
摘要:目的:采用正交试验方法,探讨盐助溶液燃烧法(SSCS)制备3mol%氧化钇稳定性多晶四方相氧化锆(3Y-TZP)纳米粉体的工艺参数。粉体经成形和烧结得到氧化锆烧结体。比较其和两种临床常用氧化锆修复材料的耐磨性能,为改善氧化锆修复材料对天然牙的磨耗提供实验依据。
  方法:以硝酸氧锆和尿素为原料,采用SSCS法和冷冻干燥法制备3Y-TZP纳米粉体。利用热重-差热分析(TG-DTA)、X射线衍射仪(XRD)和透射电镜(TEM)检测分析粉体表征。采用正交试验方法考察了锆离子的浓度(A)、尿素和金属硝酸盐摩尔比(B)、KCl和金属硝酸盐摩尔比(C)、前驱体的引燃温度(D)对粉体晶粒度的影响,筛选出制备3Y-TZP纳米粉体的工艺参数。纳米粉体经常规成形和烧结后得到瓷块。以近期拔除的天然牙为对照组,爱尔创、威兰德和自制3Y-TZP三种修复材料为实验组,实验组和对照组分别与牙釉质对磨。利用微摩擦磨损试验机(UMT-3)模拟口腔环境,进行体外实验研究三种氧化锆修复材料的摩擦磨损性能。采用粗糙度仪检测实验组和对照组的表面粗糙度,维氏硬度仪测量其表面硬度,扫描电镜和光学显微镜观察其磨损表面的微观形貌,电子天平称量摩擦磨损实验后对磨物的磨损量。实验数据用SPSS17.0统计学软件进行统计学分析。
  结果:
  1.通过正交试验考察 SSCS的最佳工艺参数为A:0.085mol/L、B:1、C:3、D:400℃,其中影响粉体晶粒度主要的工艺参数为B和D即尿素加入量和引燃温度。经XRD检测分析粉体为四方相多晶体氧化锆,晶粒度(DXRD)为2.9~9.0nm。TEM观察粉体形貌为球形、高分散的、低团聚的,平均粒径约为3.0nm的纳米粉体,其结果与DXRD一致。
  2.摩擦磨损试验后,扫描电镜下观察爱尔创、威兰德和对照组的牙釉质磨斑形貌皆有裂纹和片状剥脱,发生疲劳磨损;自制3Y-TZP组牙釉质表面出现麻点状对磨材料,发生粘着磨损。实验组和对照组的牙釉质磨损量经SPSS17.0进行统计学分析,磨损量不完全相同(P=0.000,<0.05),其中威兰德和自制3Y-TZP组牙釉质磨损量与对照组接近。实验组和对照组表面粗糙度的检测结果经统计学分析无差异(P=0.051,>0.05),其表面硬度的检测结果经统计学分析不完全相同(P=0.000,<0.05)。
  结论:
  1.采用盐助溶液燃烧法制备粉体粒径为3nm的3Y-TZP纳米粉体。
  2.通过摩擦磨损的体外实验,威兰德氧化锆和自制3Y-TZP的耐磨性与天然牙釉质的性能相匹配,而爱尔创氧化锆的耐磨性能高于牙釉质。
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