绑定机构
扫描成功 请在APP上操作
打开万方数据APP,点击右上角"扫一扫",扫描二维码即可将您登录的个人账号与机构账号绑定,绑定后您可在APP上享有机构权限,如需更换机构账号,可到个人中心解绑。
欢迎的朋友
万方知识发现服务平台
获取范围
  • 1 / 100
  (已选择0条) 清除 结果分析
找到 57745 条结果
[硕士论文] 衣博
临床检验诊断学 大连医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  神经胶质瘤是人体内最常见一种中枢系统神经肿瘤,发病率约占中枢神经系统的一半以上。依据其病理表现的不同,一般将其分为4个级别(Ⅰ~Ⅳ)。神经胶质瘤虽然在人体肿瘤总数发病率较低,但是其由于手术难以完全切除,术后易复发,导致其死亡率一直居高不下,目前对神经胶质瘤的诊断存在一些困难,目前传统的诊断方法依旧依赖手术取病理活检,手术过程中取病理组织经机器脱水浸蜡,包埋成蜡块进行切片、烤片,后经染色油镜下观察,进行诊断分期,取病理组织为有创操作,对患者损伤较大,对病理医师水平要求较高导致了神经胶质瘤诊断具有一定差异。由于取病里组织是一种有创检查,不仅会给患者带来痛苦,严重者会造成术后的出血从而导致颅内高压而危及患者生命,并且有的患者由于病情复杂也不能取病理组织活检。例如:患者有出血倾向,重度高血压,颅内感染等。代谢组学是通过对生物小分子代谢物定性和定量的分析,来揭示生物系统中错综复杂的生物调节机理。代谢产物是各种生理病理过程的最终产物,最能直接的反应机体的状态。神经胶质瘤的发生于发展与细胞内的代谢有着密不可分的关系,本实验的研究目的就是使用代谢组学的方法,采用液相色谱质谱(LC-MS)联用技术来对神经胶质瘤的恶性程度做出初步诊断,揭示这些代谢物与疾病发展中的联系,协助临床对神经胶质瘤恶性程度在不进行病理活检的前提下有一个初步的诊断,从而减轻患者经济和心理上的负担。此项研究是从代谢组学的角度来解释代谢物与神经胶质瘤恶性程度的关系。
  方法:
  与神经胶质瘤恶性程度有关的代谢物需要分别采用两种不同的衍生方法对样品进行样品衍生,分别使用不同的衍生试剂,本实验采用AccQTagderivatization kits、N-ethylmaleimide(NEM)分别对亚牛磺酸代谢通路及还原型谷胱甘肽进行衍生。亚牛磺酸代谢通路采用液相色谱质谱(LC-MS)联用技术对神经胶质瘤细胞(U251)分析:样品衍生采用AccQTagderivatization kits,将低压冻干样品取出恢复至室温,向冻干样品中加入70μL的硼酸盐缓冲液,置于涡旋仪上涡旋30s,再在向样品中加入20μL的衍生试剂,涡旋10s,放入离心机14000prm离心30s,取出后室温放置1分钟后,放入电子恒温水浴箱中55℃水浴衍生10min。还原型谷胱甘肽的检测采用液相色谱质谱(LC-MS)联用技术对神经胶质瘤细胞(U251)分析:首先称取还原型谷胱甘肽0.0061g溶解在1ml50%甲醇水溶液中,再称取N-ethylmaleimide(NEM)0.030g溶解在1ml50%甲醇水溶液中,将两者混合,置于涡旋仪上涡旋30s,室温放置45分钟,衍生完毕后即可上机检测。
  方法建立后我们要制作标准曲线,评估方法的日内、日间精密度及细胞内标回收率,日内精密度一般控制在5%以内,但是不能超过10%;日间精密度控制在15%即为合格。加标回收率考察的是前处理和上仪器测试全过程中待测物质的预处理情况(包括是否全部从样品中提取出来,是否在预处理过程中有损失或污染),以此来判断实验方法的可行性,加标回收率=加标后细胞标准物质量-加标前细胞标准物质量/加标物质量,加标回收率按照本实验室规定90%-110%为合格。
  验证数据显示该方法对5个AQC衍生化氨基酸具有良好的线性相关系数(0.9927~0.9997);重复性RSD为2.5%~8.6%;日内和日间精密度的RSD分别为3.41%~9.53%和6.23%~9.23%;细胞加标回收率为93%~106%。GSH和GSSH相关系数分别为0.9997和0.9869,日内精密RSD分别为5.41%和9.53%,日间精密度RSD分别为7.23%和8.46%,加标回收率分别为103%和96%。
  结果:
  通过对本实验方法进行方法学评价,对实验方法线性回归分析、日内精密度及日间精密度,细胞内标回收率进行综合评估,本实验所建立起的实验方法能够对神经胶质瘤细胞(U251)代谢物种中还原性谷胱甘肽及氧化型谷胱甘肽,亚牛磺酸、牛磺酸、胱氨酸、半胱氨酸、半胱胺亚磺酸进行绝对定量检测。
  结论:
  代谢组学可以为评估神经胶质瘤的恶性程度提供一种新的检测方法,通过测定细胞内相应代谢物含量的变化来对神经胶质瘤的恶性程度有一个初步的诊断。同时可以用于评估神经胶质瘤患者术后疗效,对预后有一个初期的判断,也可以为临床评估神经胶质瘤良恶性提供一个新的思路。
[硕士论文] 张晓彤
皮肤科 西南医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:恶性黑色素瘤(malignant melanoma,MM)是来源自人类胚胎时期神经嵴黑色素细胞高度恶性肿瘤,起病隐匿、侵袭性高、易发生转移,其预后较差、死亡率极高。随着MM发病率的逐渐增高,其极大的危害了人们的健康生活。肿瘤的发生发展,与机体自身免疫状态、炎症微环境,甚至与肿瘤生长相关血管异常的表达,有着极为密切的相关性。我们实验室已经发现脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)可通过重塑肿瘤炎症微环境以及下调多种肿瘤相关血管生成相关因子的表达,来达到抗MM的作用。但脂氧素A4抗MM作用中的免疫机制,尚不清楚。本研究旨在通过观察研究脂氧素A4对MM小鼠T细胞的作用,阐明其抑制MM生长的免疫机制。
  方法:将鼠源性MM细胞B16通过腹腔接种至C57BL/6小鼠腹部,以此成功构建MM动物模型,并通过抽签法分为磷酸缓冲盐溶液(PBS)组(对照组)和5S,6R-7-三羟甲基庚酸(BML-111)组(实验组)各6例,其中BML-111组注射脂氧素A4类似物BML-111(1mg/kg)进行干预治疗,PBS组则注射PBS缓冲液(1mg/kg),两组均每两天治疗一次,共治疗5次,每天观察记录肿瘤生长情况,并计算体重增长率。终止试验时,手术剥离小鼠肿瘤,测量肿瘤体积并称重,分别计算两组小鼠肿瘤生长抑制率(tumor growth inhibition rate,IR)并绘制肿瘤生长曲线,通过免疫组织化学测定肿瘤组织内CD8+T、CD4+T细胞的数量。手术剥离小鼠脾脏并抽取小鼠血液,通过流式实验检测两组小鼠外周血及脾脏中淋巴细胞所占比。
  结果:BML-111组中肿瘤细胞生长抑制率明显高于PBS组。两组小鼠脾脏与外周血中CD8+T、CD4+T细胞的数量差异无统计学意义。两组小鼠肿瘤组织内CD8+T、CD4+T细胞的表达差异无统计学意义。
  结论:脂氧素A4对小鼠体内MM有明显的抑制作用,但未观察到脂氧素A4通过外周血、脾脏及肿瘤组织中T细胞免疫作用影响来发挥其抗MM作用。
[硕士论文] 刘浩
外科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  本研究在前期工作的基础上,以miR-15a/16-1敲除鼠为主要研究对象,探讨CD19+Tim-1+B细胞的生物学功能以及对肝癌生长的影响。以期明确miR-15a/16-1在肝癌中的作用并揭示其机制,为阐明肝癌的发病机制及临床治疗提供实验基础。
  方法:
  1.检测miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏中调节性B细胞频率变化及其作用
  1.1 检测miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏中B细胞频率变化及其分泌的细胞因子IL-10的变化
  分别制备8-12周龄和15-18月龄miR-15a/16-1-/-小鼠和WT小鼠脾脏单细胞悬液,流式细胞术检测脾脏中B220+CD19+细胞亚群频率。用磁珠分选出CD19+细胞后经LPS刺激0h、24h、48h后收集培养上清,ELISA法检测上清中IL-10的浓度。流式细胞术检测15-18月龄miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏CD19+细胞内IL-10的表达。
  1.2 检测不同周龄miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏中CD19+Tim-1+、CD19+FcγRⅡbhi及CD19+CD5+CD1dhi细胞频率
  取8-12周龄和15-18月龄miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏制备成单细胞悬液,流式细胞术分别检测脾脏CD19+Tim-1+,CD19+FcγRⅡbhi及CD19+CD5+CD1dhi细胞亚群频率,再用胞内染色法检测CD19+Tim-1+细胞内IL-10的表达。
  1.3 检测荷瘤后的8-12周龄miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏中调节性B细胞亚群频率
  8-12周龄miR-15a/16-1-/-小鼠经H22小鼠肝癌细胞荷瘤,3周后检测脾脏中调节性B细胞亚群频率,并用胞内染色检测其分泌IL-10情况。
  1.4 检测CD19+Tim-1+细胞对CD4+T细胞的作用
  将CD19+Tim-1+细胞和CD4+T细胞以1∶1的比例进行混合培养,72小时后,流式细胞术检测CD4+T细胞CD69的表达和IFN-γ分泌情况;在CD4+T细胞和CD19+Tim-1+细胞共培养体系中加入IL-10的中和性抗体观察CD4+T细胞表面CD69的表达和IFN-γ分泌情况。
  2.CD19+Tim-1+B细胞对肝癌生长的影响
  2.1 检测肝癌病人外周血调节性B细胞的频率
  人体内调节性B细胞主要为CD19+C24hiCD38hi细胞,收集临床肝癌病人治疗前的外周血,用Perco11梯度离心分离外周血淋巴细胞,用流式细胞仪检测CD19+C24hiCD38hi调节性B细胞频率。
  2.2 观察CD19+Tim-1+细胞对移植瘤小鼠肿瘤生长的影响
  分选15-18月龄的miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏中CD19+Tim-1+细胞和CD19+Tim-1-细胞,分别过继输入H22移植瘤小鼠(5×105细胞/200μl/只)。每3天过继输入一次,共三次。观察移植瘤小鼠的肿瘤生长情况,记录下肿瘤生长曲线。三周后处死小鼠,剥离肿瘤组织并记录肿瘤体积。
  3.探讨CD19+Tim-1+B细胞发挥负向作用的机制
  3.1 STAT3信号通路的检测
  制备15-18月龄的野生型和miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏单细胞悬液,分选CD19+Tim-1+细胞,提取总蛋白后Western Blot法检测胞内STAT3,pSTAT3Tyr705和pSTAT3ser727的表达。
  3.2 STAT3抑制剂对CD19+Tim-1+细胞中IL-10分泌的影响
  分选15-18月龄的野生型和miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏CD19+Tim-1+细胞,加入STAT3抑制剂共培养8小时后,流式细胞仪检测CD19+Tim-1+细胞内IL-10的表达。
  3.3 miR-16过表达对STAT3表达的影响
  使用生物信息分析软件查找miR-16与STAT3之间的关系;分选15-18月龄的野生型和miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏CD19+Tim-1+细胞,pro-miR-16慢病毒感染后,Western Blot法检测CD19+Tim-1+细胞中STAT3的表达。
  研究结果:
  1.15-18月龄miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏中调节性B细胞频率增高
  1.1 15-18月龄miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏中B细胞频率增高且高分泌IL-10
  与同龄野生型小鼠相比,15-18月龄的miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏中B220+CD19+细胞亚群频率显著增高,且该细胞高分泌IL-10,而8-12周龄小鼠的B220+CD19+细胞频率无明显差异。15-18月龄miR-15a/16-1-/-小鼠的CD19+细胞经LPS刺激48h后培养上清中IL-10含量显著增高。以上结果说明15-18月龄miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏中分泌IL-10的调节性B细胞增多,而在8-12周龄的miR-15a/16-1-/-小鼠无变化。
  1.2 15-18月龄miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏中CD19+Tim-1+细胞频率增高
  进一步分析15-18月龄miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏中调节性B细胞亚型,显示15-18月龄miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏中的CD19+Tim-1+细胞频率较野生型小鼠显著增高,且高分泌IL-10,而CD19+FcγRⅡbhi及CD19+CD5+CD1dhi细胞亚群频率无明显差异。此结果说明miR-15a/16-1缺失可以诱导15-18月龄小鼠体内CD19+Tim-1+细胞的产生。
  1.3 8-12周龄miR-15a/16-1-/-小鼠荷瘤后脾脏中CD19+Tim-1+细胞频率增高
  8-12周龄miR-15a/16-1-/-小鼠皮下种植H22癌细胞3周后,脾脏中CD19+Tim-1+细胞频率较同龄野生荷瘤鼠显著增高,此结果说明小鼠肝癌可以引起8-12周龄miR-15a/16-1-/-小鼠中CD19+Tim-1+细胞增多。
  1.4 CD19+Tim-1+细胞抑制CD4+T细胞的活性
  CD4+T细胞与CD19+Tim-1+B细胞共培养72小时后,CD4+T细胞CD69表达量和IFN-γ分泌量显著下调,说明CD19+Tim-1+B细胞抑制CD4+T细胞的活性。但该抑制效应可被IL-10中和性抗体逆转,提示CD19+Tim-1+细胞可能通过分泌IL-10发挥抑制效应。
  2.CD19+Tim-1+细胞可促进小鼠肝癌的生长
  2.1 肝癌病人外周血中调节性B细胞频率增高
  肝癌患者治疗前外周血中调节性B细胞频率较正常人显著增高,提示调节性B细胞可能参与肝癌的发生与发展。
  2.2 过继输入CD19+Tim-1+细胞可以促进肿瘤生长
  过继输入CD19+Tim-1+细胞的荷瘤小鼠肿瘤生长速度及体积均显著大于CD19+Tim-1-细胞过继输入组小鼠,说明CD19+Tim-1+细胞可以促进肝癌的生长。
  3.miR-15a/16-1可以通过STAT3通路发挥负向调节作用
  3.1 miR-15a/16-1-/-小鼠CD19+Tim-1+细胞中STAT3表达增高
  我们用Western Blot法在蛋白水平研究miR-15a/16-1的调控信号通路,结果发现miR-15a/16-1-/-小鼠CD19+Tim-1+细胞中STAT3,pSTAT3Tyr705,pSTAT3scr727的表达较野生鼠显著上调。
  3.2 STAT3抑制剂下调miR-15a/16-1-/-小鼠脾脏CD19+Tim-1+细胞IL-10的分泌
  MiR-15a/16-1-/-小鼠脾脏CD19+Tim-1+细胞经STAT3抑制剂处理后,其胞内IL-10分泌量显著下降。进一步印证STAT3信号通路的表达变化可影响CD19+Tim-1+细胞IL-10的分泌。
  3.3 miR-16慢病毒过表达后STAT3的表达下降
  生物信息软件显示miR-16直接绑定于STAT3的3'端非编码区,CD19+Tim-1+细胞中miR-16过表达后检测STAT3的表达,发现实验组的STAT3表达较对照组明显下调,此结果说明进一步CD19+Tim-1+细胞可能通过STAT3通路发挥促进肿瘤生长的作用。
  结论:
  1)肝癌患者外周血中调节性B细胞频率增高;
  2)CD19+Tim-1+细胞可以促进肝癌的生长;
  3)miR-15a/16-1可通过STAT3信号通路抑制CD19+Tim-1+细胞分泌IL-10,从而发挥肿瘤抑制作用。
[硕士论文] 许智闻
神经外科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  根据临床中手术实际应用需要,通过对经旁路椎板劈开复位术进行相关的解剖学研究,模拟手术入路,并在标本上进行相关手术操作,明确此径路实际可操作性;获取腰椎标本,观察此径路下进行椎板撑开时的椎体结构形变情况,探讨入路的安全性;获取单个椎体单元,测量此径路下手术相关的解剖数据及视野角度,确定经旁路椎板劈开入路行腰椎手术的自由度,并从解剖学角度评估其有效性,为临床实际运用提供指导;回顾性分析临床病例,探讨该入路的优势以及临床可推广性。
  方法:
  第一部分:1.选用6例经10%福尔马林固定的成人全身尸体标本,首先在标本上进行模拟手术入路实验,经相关操作后暴露第一、第二腰椎节段一侧棘突根部及椎板,以铣刀沿一侧棘突根部纵行铣开一条骨缝并延伸至第二腰椎。以专用的椎板撑开器将骨缝分别逐步扩大至0.6cm、0.8cm、1.0cm,记录不同撑开距离下可供观察和操作的解剖结构。在扩大至1.0cm时,对硬脊膜行牵拉、切开等操作,暴露脊髓神经,缝合硬脊膜。术后逐层关闭术腔,记录操作流程。2.截取腰椎椎体节段行离体实验。观察撑开过程中椎体结构形变及周围组织损伤情况;3.将腰椎节段截取成5个椎体单元进行单独实验,以橡皮泥等模拟皮肤、脂肪、椎旁肌肉等组织,设置撑开距离依次为:0.8cm(A组),1.0cm(B组),1.2cm(C组)。观察撑开过程中,椎体、椎板、椎弓等结构有无断裂,若有断裂则记录断裂位点及断裂时的撑开距离(d)。4.以克氏针模拟视线,自左右两侧在椎管底壁进行定位,记录克氏针交汇点,以及椎管底壁的视线定位点。测量相关解剖学数据,通过公式得出不同撑开距离下,克氏针的交叉角度即视线角度,对数据进行统计学分析。
  第二部分:回顾性分析江苏省苏北人民医院神经外科应用经旁路椎板劈开入路行腰椎椎管内肿瘤切除术的10例临床资料,记录手术用时、术中出血量、术后卧床时间及并发症等情况。结合解剖研究基础及文献回顾,探讨该入路的优势以及临床可推广性。
  结果:
  第一部分:1.选用经10%福尔马林固定的成人全身尸体标本进行模拟手术入路实验。撑开至10.0mm及以上时,可清晰地观察到硬脊膜及椎管内结构,并能顺利进行硬脊膜牵拉、切开、缝合,以及脊髓神经的剥离等操作。2.多腰椎节段离体环境下撑开过程中,椎体撑开侧及对侧上下关节囊均未见明显破损,上下关节突未见明显移位,双侧椎间孔内脊神经根未见骨性卡压。3.单腰椎节段撑开过程中,观察到形变主要发生在劈开对侧椎弓根,统计断裂距离(d)大小为(11.34±0.49)mm。4.以两根克氏针模拟视线,自A组到C组,椎管底壁视线观察范围依次为(10.64±0.89)mm、(13.44±0.36)mm、(17.76±0.76)mm;根据公式得出克氏针的交叉角度依次为(26.11±2.10)°、(33.02±1.10)°、(44.27±1.99)°。
  第二部分:回顾性分析江苏省苏北人民医院神经外科共10例腰椎椎管肿瘤病例,术后病理提示神经鞘瘤,均采用经旁路椎板劈开入路行腰椎椎管内肿瘤切除术,手术平均用时239.5min(150~335min),术中平均出血116ml(50~200)ml,治疗改善率达58%,术后均无术区出血、感染、顽固性疼痛等并发症,患者术前症状均有不同程度改善。
  结论:
  第一部分:通过对腰椎标本行相关解剖学研究我们发现,经旁路椎板劈开复位技术进路简便直接,操作空间良好,对椎体及周围组织创伤小,术后椎体可自然复位是其独特的优势。熟练掌握操作技巧、充分认识相关解剖、明确安全范围是保证手术安全的重要前提。
  第二部分:经旁路椎板劈开复位技术作为治疗腰椎椎管内病变的一种创新入路,具有组织创伤小、自然复位、术后康复快、并发症少等优势。适合临床推广。
[硕士论文] 范懿魏
外科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  随着影像学技术的进步和健康体检的普及,早期肺癌的检出率越来越高。非小细胞肺癌(NSCLC)的术前分期,尤其是纵隔淋巴结分期是决定能否手术并判断患者预后的关键。研究直径≤5cm的临床早中期NSCLC患者发生纵隔淋巴结转移的独立危险因素,构建一种判断纵隔淋巴结转移的数学预测模型,为术前预测直径≤5cm的临床早中期NSCLC患者纵隔淋巴结转移提供数据支持,以期提高术前纵隔淋巴结分期的准确性,协助临床医师做出合理的诊疗决策。
  方法:
  回顾性分析2012年1月至2017年8月扬州大学临床医学院(江苏省苏北人民医院)胸外科收治的符合入组标准的NSCLC患者608例。将入组的病例以3∶1的比例随机分为两组,前者为建模组(A组),用于建立模型;后者为验证组(B组),用于进行模型的外部验证及与其他模型的比较。总结A组456例患者相关临床病史资料、影像学资料及病理情况,通过单因素和多因素分析遴选出与直径≤5cm的临床早中期NSCLC患者纵隔淋巴结转移相关的独立危险因素,并建立二元Logistic回归数学模型。通过Hosmer-Lemeshow拟合优度检验评估模型的拟合程度,通过受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)评估预测模型的准确性,并确定最佳截点值。应用B组152例患者资料,通过卡方检验判断纵隔淋巴结转移实际与预测的一致程度,并用Kappa值评价其一致率。将B组资料代入各模型,比较各数学预测模型的预测能力,判断本研究模型的临床应用价值。
  结果:
  多因素分析结果显示,患者年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、病理类型以及胸膜牵拉征5项因素是判断直径≤5cm的临床早中期NSCLC患者纵隔淋巴结转移的独立危险因素。通过对A组资料的相关分析,建立的数学预测模型为P=ex/(1+ex),其中x=-2.831+(0.825×肿瘤直径)+(1.53×肿瘤部位)+(0.779×胸膜牵拉征)+(1.883×病理类型)-(0.06×年龄),其中e为自然对数。Hosmer-Lemeshow拟合优度检验显示,预测值和观察值间差异无统计学意义,ROC曲线下面积为0.763(95%CI:0.697~0.829)。外部验证结果显示,应用本模型预测直径≤5cm的临床早中期NSCLC患者纵隔淋巴结转移的一致性良好,灵敏度为68.75%,特异度为92.65%。与VA模型及Fudan模型相比,本研究模型的适用范围更广,准确率更高。
  结论:
  1.患者年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、病理类型以及胸膜牵拉征这5项因素是判断直径≤5cm的临床早中期NSCLC纵隔淋巴结转移的独立危险因素。
  2.本研究建立的直径≤5cm的临床早中期NSCLC纵隔淋巴结转移数学预测模型为:P=ex/(1+ex),x=-2.831+(0.825×肿瘤直径)+(1.53×肿瘤部位)+(0.779×胸膜牵拉征)+(1.883×病理类型)-(0.06×年龄),其中e为自然对数。
  3.本研究所建立的数学模型对直径≤5cm的临床早中期NSCLC纵隔淋巴结转移判断具有较高的灵敏度和特异度,其预测能力和准确性均高于其他同类模型。
  4.结合本研究预测模型,对于纵隔淋巴结转移高风险患者,建议行进一步检查以明确纵隔淋巴结有无转移。
[硕士论文] 谈思源
外科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:肿瘤在生长及转移过程中伴随着大量新生血管的生成及糖代谢增加。血管新生需要血管生长促进因子及血管抑制因子共同作用,血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)是最重要的血管生长促进因子,它主要通过刺激内皮细胞(Endothelial Cells,ECs)的增殖和迁移促进新生血管的形成,而血管生长抑制因子则有新近发现的血管生长抑制因子(Vasohibin,VASH),包括VASH1及VASH2。糖代谢增加则与葡萄糖转运蛋白表达上调关系密切,目前已发现的葡萄糖转运蛋白(glucose transporter,Glut)有8种不同功能的亚型,其中跨膜转运能力最强的为Glut-1,在恶性肿瘤组织中,肿瘤细胞中Glut-1基因的表达增多,导致细胞外葡萄糖向细胞内转运增多,从而增强细胞增殖,促进肿瘤生长。本文旨在通过qRT-PCR和免疫组织化学SP染色法分别检测结直肠癌组织及其癌旁正常组织中VASH1、VEGF、Glut-1的mRNA和蛋白的表达,并结合临床病理资料分析其与结直肠癌发生、发展、侵袭和转移的关系。
  方法:选取扬州大学临床医学院(江苏省苏北人民医院)胃肠外科2014年3月~2015年3月行手术治疗的64例结直肠癌组织和癌旁正常组织标本(距离癌组织边缘5cm以上)。所有患者术前均未接受过化疗、放疗及生物治疗,所有标本均由术后病理确诊并有相应的临床病例资料。所有大体标本均在术中切下后半小时内切取,并均分成两份,一份迅速置入液氮后转-80℃冰箱冻存;另一份浸入福尔马林溶液固定后放入4℃冰箱保存。应用免疫组织化学(Immunohistochemical,IHC)染色法检测VASH1、VEGF、Glut-1蛋白在组织中的表达情况;应用Quantitative Real-time PCR(qRT-PCR)检测VASH1、VEGF、Glut-1mRNA的表达情况及其与临床病例特征的关系。
  结果:VASH1、VEGF、Glut-1在癌组织中的表达均高于癌旁正常组织,三者在癌组织中的表达与浸润范围、淋巴结转移、有无远处转移、病理分期相关,其表达随浸润范围的增加、淋巴结转移的增多逐渐上调(均P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤分型、有无血管侵犯无相关性。VASH1表达与VEGF、Glut-1互呈正相关(r=0.9058,p<0.001;r=0.9251,p<0.001;r=0.9468,p<0.001)。生存分析提示N分期、TNM分期、及VASH1、VEGF、Glut-1是否阳性表达是影响生存率的危险因素,具有统计学意义(P<0.05);而性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、T分期、M分期与生存率的影响无统计学意义。进一步将危险因素纳入Cox回归分析中,TNM分期、VEGF阳性表达是影响生存预后的独立的危险因素(P<0.05)
  结论:结直肠癌组织中VASH1、VEGF、Glut-1的mRNA和蛋白表达水平高于癌旁正常组织;VASH1表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、T分期、淋巴结转移、远处转移相关;VEGF表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、T分期、淋巴结转移、远处转移相关;Glut-1表达与TNM分期、T分期、淋巴结转移、远处转移相关;VASH1、VEGF、Glut-1在结直肠癌组织中的表达水平互呈正相关;VASH1、VEGF、Glut-1是否阳性表达是影响生存率的危险因素,TNM分期、VEGF阳性表达是影响生存预后的独立的危险因素。
[硕士论文] 施燕芸
影像医学与核医学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:本文分为以下几个部分进行探讨:
  第一部分 实时超声弹性成像对甲状腺良恶性结节的鉴别诊断价值
  目的:探讨实时超声弹性成像(RTE)对甲状腺良恶性结节的鉴别诊断价值。
  方法:回顾性分析2016年1月~2017年6月扬州大学附属医院接受超声引导下细针穿刺抽吸活检(FNA)或手术治疗的80例共98个甲状腺结节的临床资料,所有患者术前均行常规超声检查及RTE检查,获得弹性评分(ES)及应变率比值(SR)。根据病理结果将结节分为良性组(31个)和恶性组(67个)。分别绘制ES、SR、常规超声的受试者工作特征(ROC)曲线并计算曲线下面积(AUC),对比分析三者对甲状腺良恶性结节的诊断效能。
  结果:常规超声上,结节回声、均匀性、边缘、边界、声晕、纵横比(A/T)、钙化在良恶性结节中有显著差异,具有统计学意义(P<0.01)。良性结节大部分表现为低或等回声、边缘规则、边界清晰、A/T<1;恶性结节主要表现为低回声、内部回声不均匀、边缘不规则、边界模糊、A/T≥1、无声晕或不完整声晕、内有微钙化。常规超声以≥3条可疑超声特征为恶性结节的诊断标准,敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、准确性分别为86.6%、58.1%、81.7%、66.7%、77.6%。RTE良性结节中ES≤2分的占77.4%,恶性结节中ES>2分的占92.5%,ES在良恶性组间存在显著统计学差异(P<0.001)。良、恶性组平均SR分别为2.0±1.0及3.7±1.4,恶性组平均SR显著大于良性组(P<0.001)。分别以ES>2分和SR>2.7为诊断甲状腺恶性结节的临界值,其诊断敏感性、特异性、PPV、NPV、准确性分别为92.5%、80.6%、91.2%、83.3%、88.8%和80.6%、93.5%、96.4%、69.0%、84.7%。ES、SR和常规超声诊断甲状腺恶性结节的AUC分别为0.866、0.871和0.723,ES与SR的AUC均显著大于常规超声(P<0.05),ES和SR之间AUC无统计学差异(P>0.05)。
  结论:RTE检查中的ES及SR对甲状腺良恶性结节具有较高的诊断效能,能为甲状腺结节的良恶性鉴别提供依据。
  第二部分 甲状腺乳头状癌实时超声弹性成像弹性评分及应变率比值与微血管密度的相关性研究
  目的:探讨甲状腺乳头状癌(PTC)实时超声弹性成像(RTE)弹性评分(ES)及应变率比值(SR)与微血管密度(MVD)的相关性。
  方法:2016年1月~2017年12月扬州大学附属医院经手术病理证实为PTC的54例患者共58个结节纳入本研究,所有患者术前均行常规超声检查及RTE检查,术后标本均行CD34免疫组化染色及MVD计数。根据超声结节最大径分为≤10mm组(35个)、10~20mm组(15个)和>2 0mm(8个),对比各组结节的ES、SR及MVD的差异,并将ES、SR与MVD分别进行相关性分析。
  结果:58个PTC结节,ES>2分的占93.1% (54/58),SR>2.7的占77.6% (45/58)。ES和SR在最大径≤10mm、10~20mm和>20mm三组间均无统计学差异(P>0.05)。三组结节MVD分别为(47.7±8.8)条HP、(51.1±8.5)条/HP和(56.1±5.8)条/HP,MVD随肿瘤最大径增大而逐渐增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。ES为2分、3分、4分结节的平均MVD分别为(55.6±9.5)条/HP、(53.3±7.7)条HP及(43.9±6.7)条/HP,不同评分PTC组间MVD有显著统计学差异(P<0.001)。相关分析显示PTC的ES与MVD、SR与MVD均呈显著负相关(r=-0.567,P<0.001; r=-0.570,P<0.001)。
  结论:RTE在PTC术前侵袭性预测及预后评估中具有潜在的临床应用价值。
  第三部分甲状腺乳头状癌实时超声弹性成像弹性评分及应变率比值与颈部淋巴结转移的相关性研究
  目的:探讨甲状腺乳头状癌(PTC)实时超声弹性成像(RTE)弹性评分(ES)及应变率比值(SR)与颈部淋巴结转移的相关性。
  方法:分析2016年1月~2017年12月扬州大学附属医院经手术病理证实的54例患者共58个PTC结节的临床资料,所有患者术前均行常规超声检查及RTE检查,获得各结节ES及SR,并根据病理结果将结节分为颈部淋巴结转移组(29个)和颈部淋巴结未转移组(29个)。将PTC结节的ES及SR分别与术后淋巴结转移情况进行相关性分析,并绘制ES、SR的受试者工作特征(ROC)曲线。
  结果:RTE淋巴结转移组ES以3分为主(72.4%),平均SR为2.9±1.1;未转移组ES以4分为主(62.1%),平均SR为4.4±1.1。转移组ES及SR均低于未转移组,差异有显著统计学意义(分别为P<0.01; P<0.01)。相关分析显示,PTC的ES及SR与淋巴结转移均呈显著负相关(分别为r=-0.449、P=0.000; r=-0.547、P=0.000)。ES及SR的AUC分别为0.729和0.816,以ES≤3分、SR≤3.85为判断PTC淋巴结转移的临界值,其敏感性分别为82.8%及82.8%,特异性分别为62.1%及72.4%。
  结论:RTE检查有助于预测PTC颈部淋巴结转移情况,对PTC治疗方案的选择具有一定指导意义。
[硕士论文] 朱明明
病理学与病理生理学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  B细胞淋巴瘤是来源于B细胞的实体肿瘤,分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。伯基特淋巴瘤(BL)在世界卫生组织(WHO)的淋巴瘤分类中被划分为具有高增殖指数的B细胞非霍奇金淋巴瘤,相关研究发现在90%的BL中存在免疫球蛋白基因位点的c-Myc重排,表明其恶性程度与c-Myc密切相关。近年来发现越来越多的超保守RNA(T-UCRs)在肿瘤的形成与发展机制中发挥重要作用。本课题组前期研究发现在不同c-Myc表达量的伯基特淋巴瘤模型中,部分T-UCRs有明显表达差异,本课题旨在进一步筛选与c-Myc相关的T-UCRs,并探讨uc.477+在B淋巴瘤细胞中的功能与机制。
  方法:
  1.在B细胞淋巴瘤细胞系及Myc-on淋巴瘤组织中,采用链特异性RT-PCR检测芯片中筛选出的12个T-UCRs,并与普通RT-PCR方法检测的结果进行比较。选取其中的uc.477+进行进一步研究。
  2.构建uc.477+的过表达质粒uc.477+-MSCV-PIG,将质粒转染至293T细胞并包装得到病毒,感染小鼠B淋巴瘤细胞株38B9细胞以及人B淋巴瘤细胞株Romas细胞株,经嘌呤霉素筛选,使uc.477+在细胞中过表达,并用流式细胞仪检测阳性表达率,建成稳定高表达uc.477+的B细胞淋巴瘤细胞株。
  3.通过细胞计数检测uc.477+过表达对B细胞淋巴瘤细胞的增殖的影响,并与感染空载体的细胞作比较;利用流式细胞计数检测uc.477+对B细胞淋巴瘤细胞的细胞周期和凋亡的影响;将过表达uc.477+及空载体pMSCV-PIG的38B9细胞经皮下注射至BALB/c小鼠,进行荷瘤,观察肿瘤的生长速度,两周后取瘤组织,测量体积与重量。
  4.检测uc.477+的宿主基因PLP1在正常小鼠B细胞、小鼠B淋巴瘤细胞(38B9,myc3)中以及在过表达uc.477+和空载体的38B9细胞中的表达情况,探讨uc.477+与其宿主基因之间可能的关系。检测uc.12+A的宿主基因SFPQ在B淋巴瘤细胞株中的表达情况,探讨uc.12+A与SFPQ之间的关系。
  结果:
  1.链特异性RT-PCR检测结果显示uc.477+、uc.12+A、uc.388+在小鼠B淋巴瘤细胞(38B9,myc3)以及Eu-myc小鼠的自发性B淋巴瘤中表达增高,其中uc.477+上调趋势显著,所以选取uc.477+作为进一步的研究对象。
  2.选取多个来自正义链和反义链上的T-UCRs用链特异性RT-PCR和普通RT-PCR检测表达并进行结果比对,以验证链特异性RT-PCR方法的可靠性。发现uc.31+、uc.142+A、uc.468+A在myc3细胞株中链特异性反转录组的表达下调;uc.388+与uc.12+A的链特异性RT-PCR组表达比非特异性RT-PCR组低,但在这两种检测方法中,uc.388+与uc.12+A在淋巴瘤细胞株(38B9)中表达上调的总趋势没有改变,说明链特异性RT-PCR可排除来自另一条链上的RNA干扰,检测结果更为精准。
  3.体外检测38B9细胞和Romas细胞过表达uc.477+后与MSCV对照组比较,发现细胞增殖加快,凋亡减少,细胞周期显示G0-G1期减少,G2-M期增高。体内检测38B9细胞过表达uc.477+后肿瘤组织与对照组相比,重量与体积明显增大。
  4.RT-PCR检测结果显示uc.477+的宿主基因PLP1在B淋巴瘤细胞株中的表达增高,PLP1在过表达uc.477+的38B9中表达增高。同时也发现uc.12+A的宿主基因SFPQ在B淋巴瘤细胞中表达增高,SFPQ在过表达uc.12+A的B淋巴瘤细胞株中高表达,uc.12+A与SFPQ在正常B细胞与B淋巴瘤细胞中表达呈显著正相关。流式检测发现在B淋巴瘤细胞株38B9细胞中过表达uc.12+A,细胞的增殖分裂速度加快。
  结论:
  uc.477+与uc.12+A在B淋巴瘤细胞中表达增高,具有促进B细胞淋巴瘤细胞生长的作用.
[硕士论文] 陈曦
内科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)是近20年来在所有恶性肿瘤领域的诊断、治疗及预后等方面研究进展最迅速的一种血液疾病,其在血液学恶性肿瘤中的发病率仅次于淋巴瘤,且目前仍不可被治愈。而MM的治疗进展主要得益于诊断水平的提高,尤其是在血清、细胞、分子及基因等多层次方面均有长足进步。血清学诊断方面最显著的项目是血清游离轻链(Serum free light chains,sFLCs)检测,这种检测方法大大弥补了既往凭临床表现、骨髓浆细胞比例及免疫固定电泳(Immunofixation electrophor-esis,IFE)的不敏感、不定量、易漏诊等方面不足。本实验使用sFLCs联合IFE检测对多发性骨髓瘤患者进行筛选、预后判定以及疗效评估,以进一步评价血清游离轻链检测在多发性骨髓瘤患者临床管理中的价值。
  方法:
  选取2012年1月1日至2018年1月1日江苏省苏北人民医院血液科99名初治MM住院患者,并设置50名健康体检人群作为对照组,通过sFLCs联合IFE检测对MM患者进行筛选。随后对资料完整的87例MM患者进行随访,平均随访时长30.2个月,并将以上患者初诊时sFLCs检测结果结合R-ISS分期系统对MM患者进行预后判定。另通过sFLCs检测联合IFE对使用不同方案(包括CTD方案及PAD方案)治疗足四疗程的40例患者治疗前后进行疗效评估。
  结果:
  1.99例初诊MM患者及50例健康体检人群均同时采用sFLCs及IFE检测,随后通过SPSS22.0对上述不同检测方法的结果进行卡方检验,结果显示sFLCs检测和IFE具有一定的统计学差异。而sFLCs检测相对IFE更敏感,且将sFLCs及IFE检测联合起来比任何一种单一检测方法具有更高的灵敏度及特异度。
  2.将sFLCs联合R-ISS分期系统对87例于本院治疗资料完整的MM患者进行生存曲线分析,结果提示高血清游离轻链率及R-ISS分期越晚的MM患者,预后越不佳。
  3.此外,在对40名采用不同治疗方案(包括CTD方案及PAD方案)并且满四个疗程的MM患者进行疗效评估,采用Excel对其治疗前后的sFLCs检测结果进行配对样本t检验示p<0.01,说明治疗前后sFLCs的差异具有统计学意义,并且对不同治疗方案进行秩和检验发现PAD方案治疗的疗效明显优于CTD治疗方案。
  结论:
  sFLCs联合IFE检测能够筛选出MM患者,并对初诊MM患者的预后进行判定,优化治疗方案的选择,同时对治疗疗效进行检测。因此,sFLCs联合IFE检测在MM患者临床管理(包括早期诊断、预后判定以及疗效评估)中意义重大。
[硕士论文] 王雪莹
外科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:本文主要从以下几个部分展开论述:
  第一部分 T1-2N1M0期乳腺癌根治术后,放疗在疾病特异性生存中的价值
  目的:在女性中,乳腺癌已成为发展中国家乃至全球发病率最高且死亡人数最多的恶性肿瘤。目前放疗主要应用于肿块>5cm,阳性淋巴结>=4个或者切缘阳性等复发风险高的乳腺癌患者中,而对于肿块大小在5cm内、淋巴结转移1-3个的早期患者是否进行根治术后放疗,不同学者的观点之间还存在着一些争议。
  方法:基于美国国立癌症研究所SEER(Surveillance,Epidemiology, and End Results)数据库,回顾性分析2010年01月至2013年12月原发性乳腺癌患者的资料,共181878例,按照一定的纳入和排除标准,最终有7466例患者纳入本次研究,按照其是否进行乳腺癌根治术后放疗(Post-mastectomy Radiotherapy,PMRT)划分为两组:PMRT组和非PMRT组。分析患者的临床病理特征在两组中是否存在差异,并进一步单因素、多因素法探讨其相关预后因素、Kaplan-Meier法研究乳腺癌特异性生存情况(Breast Cancer-specific Survival,BCSS)。
  结果:诊断年龄、诊断年份、婚姻状态、T分期、阳性淋巴结个数、组织学分级和PMRT之间具有相关性。种族、诊断年龄、T分期、组织学分级、分子分型、术后化疗和PMRT为BCSS的独立预后因素。PMRT可以改善T1-2N1M0期患者的5年BCSS(P<0.001)。进行PMRT治疗的患者5年BCSS为92.6%,而未进行PMRT治疗的患者5年BCSS为91.0%。在T1-2N1M0期中,四种分型的5年BCSS之间存在统计学差异(P<0.001)。HR-/HER-2-类型的乳腺癌的预后最差,5年BCSS为75.2%。其他类型依次为HR-/HER-2+(90.8%)、HR+/HER-2+(94.5%)、HR+/HER-2-(93.9%)。
  结论:T1-2N1M0期乳腺癌患者在行根治术后,放疗可以改善5年BCSS,但绝对获益率仅有1.6%。四种分型乳腺癌的5年BCSS之间存在统计学差异。
  第二部分 T1-2N1M0期乳腺癌根治术后,不同分子分型对放疗敏感性的分析
  目的:本研究的第一部分基于SEER数据库,研究证实了T1-2N1M0期的患者是可以通过PMRT延长BCSS的,并且不同的分子分型的BCSS存在统计学差异。设想是否可以用分子分型进一步区分PMRT的获益程度。
  方法:分为对各型分子分型进行Kaplan-Meier生存分析,观察PMRT对各个分子分型BCSS的影响。其次,对不同的分子分型分别进行多因素分析,找出PMRT改善BCSS最显著的分子分型。最后,为了提高实验的证据等级,消除了PMRT以外其他因素对BCSS的影响,通过倾向性评分(Propensity Score Analysis,PSA)进一步验证实验结果。
  结果:Kaplan-Meier分析显示,HR-/HER-2-和HR+/HER-2+两种分子分型的患者可以通过PMRT延长BCSS,且具有统计学差异(P分别为0.025和0.01)。而在多因素分析中,PMRT可以显著提高HR-/HER-2-(三阴性乳腺癌,triple-negative breast cancer, TNBC)患者的5年BCSS(P=0.029,hr=1.519,95%CI:1.044-2.208),HR+/HER-2+的患者PMRT并不能改善BCSS(P=0.833,hr=1.108,95%CI:0.429-2.857)。在PSA后,PMRT仍然可以显著改善TNBC患者的5年BCSS(P=0.025)。
  结论:T1-2N1M0期乳腺癌患者行根治术后,不同分子分型对放疗的敏感性存在统计学差异。和其他三种分子分型相比,TNBC型从PMRT中获益最大。
[硕士论文] 林先勇
肿瘤学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  通过给予晚期结直肠癌患者重组人血管内皮抑制素注射液(恩度,Endostar)微量泵持续给药联合窗口期化疗,探究其治疗的疗效,并观察其近期疗效、影响药物疗效的因素和不良反应,为抗血管靶向药物临床治疗晚期结直肠癌优化给药方案提供依据。
  方法:
  1、收集自2015年7月至2017年10月就诊于我院肿瘤科的晚期结直肠癌患者60例,分为3组:A组20例(静脉持续泵入恩度联合窗口期化疗)、B组20例(静脉滴注恩度联合窗口期化疗)、C组20例(仅单纯化疗)。如化疗为两周方案,每四周为一个疗程;如化疗为三周方案,每三周为一个疗程,在第二、四个疗程后评价疗效,记录不良反应。
  2、通过患者住院治疗、出院后电话随访及门诊复查病情进行随访。随访时间从患者入组第1天开始计算到2017年10月31日。患者开始接受治疗作为研究的起点,最后一次治疗、随访、复查作为研究的终点。
  3、记录A、B、C三组患者治疗后的疗效指标(CR、PR、SD、PD)、无疾病进展生存期(PFS)、客观缓解率(ORR)、疾病控制率(DCR)、生活质量(QOL)及毒性反应。通过统计随访患者的PFS,分析恩度静脉持续泵入窗口期化疗对晚期结直肠癌患者预后的影响。
  4、采用SPSS19.0软件进行数据分析及统计量描述等进行结果分析。
  结果:
  三组患者均完成至少4疗程,两个疗程后评价疗效A、B、C三组ORR分别为50.0%、40.0%、35.0%,DCR分别是90.0%、75.0%、65.0%;四个疗程后评价疗效,A、B、C三组ORR分别为45.0%、35.0%、30.0%,DCR分别是90.0%、70.0%、60.0%。A组和B组相比不良反应无明显差异(P>0.05);B组和C组相比不良反应也无明显差异(P>0.05)。A、B、C组中位无疾病进展期(mPFS)分别为4.9个月、3.2个月、2.1个月,结果显示A组和B组患者的中位无疾病进展期(mPFS)均明显长于单纯化疗C组,A组患者中位无疾病进展期(mPFS)也比B组患者延长。
  结论:
  恩度持续静脉泵入联合窗口期化疗治疗晚期结直肠癌的方案有明显的疗效,结果显示:1、持续静脉泵入给药优于传统的静脉滴注给药,其可更好的发挥恩度的抗血管生成作用。2、持续静脉泵入恩度可以延长mPFS相比于静脉滴注恩度。3、恩度联合化疗较单纯化疗治疗晚期结直肠癌可显著提高治疗的有效性,且安全性高,有较好的临床意义,这种治疗方案在临床上值得推广。
[硕士论文] 苗润丰
呼吸科 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:肺磨玻璃结节可能是肺腺癌的早期阶段,但也有部分结节为浸润性腺癌。本研究的目的是通过回顾分析扬州大学附属医院经手术治疗的孤立性纯性肺磨玻璃结节患者的临床特征,影像学特征,病理分型等,确定在孤立性纯肺磨玻璃结节中预测浸润性腺癌的危险因素。
  方法:回顾扬州大学附属医院2016年1月至2017年8月期间,经手术治疗的孤立性纯肺磨玻璃结节的患者,并有明确的病理结果,最终60例患者纳入本研究。详细记录患者的一般临床资料,影像学特征,病理分型等,根据病理分型将患者分为浸润性腺癌组和非浸润性腺癌组(包括浸润前病变和微浸润腺癌,其中48例患者(80%)为非浸润性腺癌,12例(20%)患者为浸润性腺癌。比较两组在临床特征(性别,年龄,吸烟史,肺癌史,CEA,肺功能)和影像学特征(结节直径,CT值,结节位置,分叶征,胸膜凹陷征,空泡征,血管集束征,支气管充气征)以及EGFR突变比例中的差异,正态定量资料采用两独立样本t检验,计数资料采用x2检验,将单因素分析中有意义的变量纳入多因素回归分析,采用非条件二分类logistic回归,来预测孤立性纯肺磨玻璃结节中浸润性腺癌的独立危险因素,最后在ROC曲线中,把有统计学意义的危险因素作为预测指标,对浸润性腺癌进行预测。
  结果:单因素分析结果显示两组患者的CEA,结节直径,CT值,胸膜凹陷征经统计学分析有统计学意义(t=-2.287,P=0.026;t=-9.618,P<0.001;t=--2.086,P=0.041;x2=7.656,P=0.006)。非浸润性腺癌组CEA值、结节直径大小、CT值、胸膜凹陷征比例水平均低于浸润性腺癌组。两组患者的性别,年龄,吸烟史,肺癌史,肺功能,结节位置,分叶征,空泡征,血管集束征,支气管充气征,EGFR突变比例经统计学分析无统计学差异。将单因素分析有意义的变量(CEA,结节直径,CT值,胸膜凹陷征)纳入多因素回归分析,采用非条件二分类logistic回归,结果表明结节的直径(OR=3.501)和胸膜凹陷征(OR=10.644)为浸润性腺癌的独立危险因素,CT值和CEA不是浸润性腺癌的独立危险因素。采用ROC曲线,以结节直径为预测指标,对浸润性腺癌进行预测,结果显示:曲线下面积为0.889,灵敏度为91.67%,特异度为81.25%,约登指数为0.729,结果表明以结节直径为13.17mm为截断值对浸润性腺癌有很好的预测作用。
  结论:孤立性纯肺磨玻璃结节的直径大小和计算机断层扫描发现胸膜凹陷征是预测浸润性腺癌的独立危险因素,当孤立性纯肺磨玻璃结节直径大于13.17mm时对浸润性腺癌有很好的预测作用。如果考虑为浸润性腺癌,建议行肺叶切除术。
[硕士论文] 赵雪煜
中西医结合临床 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:原发性支气管肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,同时也是世界范围内癌症相关死亡的首要原因。其中,非小细胞肺癌(Non-small-cell lung cancer,NSCLC)约占肺恶性肿瘤的80%左右。近年来,虽然医疗领域内科学技术水平在不断提升,但肺癌的五年生存率仍然很低。目前,根治性手术是早期非小细胞肺癌的首选治疗手段。晚期诊断、肿瘤极易复发和转移等多种因素均可导致非小细胞肺癌的患者生存率降低。在目前的标准化治疗基础上,尽管NSCLC预后呈现良好,但肿瘤的复发和转移仍然是导致肺癌根治手术失败的主要原因。
  对于早期非小细胞肺癌患者来说,手术是首选治疗方案,术后常包括放射治疗、以铂类药为主的化疗或联合分子靶向药物等西医治疗。中医药是近年来治疗肺癌的辅助方法之一,具有重要地位。中医(Traditional Chinese Medicine,TCM)以辨证论治思想为指导的个体化综合诊疗,对减轻NSCLC患者的毒副作用、改善生活质量、延长生存时间等都产生重要影响。中医药治疗,具有预防肿瘤发生发展、减轻毒性、提高疗效、降低复发转移风险等优点。有研究显示中医治疗肺癌效果明显,但他们的随访期相对较短,缺乏与无病生存期(Disease free survival,DFS)的比较,未针对性关注早中期非小细胞肺癌患者的疗效。本论文为小样本量的回顾性队列研究,对67例Ⅱ~ⅢA期非小细胞肺癌根治术后的病人进行随访与资料分析,研究中西医结合综合治疗方案对肺癌术后患者无病生存期的影响。
  目的:以完成术后4个疗程放化疗的Ⅱ~ⅢA期非小细胞肺癌患者为研究对象,对比评价中西医结合与常规西医治疗的疗效,对影响非小细胞肺癌术后患者预后的相关因素进行分析,为延长患者的生存时间和中医综合治疗的循证发展提供依据。
  方法:病例来自江苏省苏北人民医院、扬州大学附属医院以及扬州市中医院。运用回顾性队列研究的方法,收集从2012年至2016年的Ⅱ~ⅢA期非小细胞肺癌根治术后、并且完成术后4个月辅助放化疗患者的所有临床相关资料。将患者分为2组,分别为中西医结合治疗组(接受中医综合治疗和西医常规化疗)和西医治疗组(仅接受常规化疗)。中西医结合组的中医综合治疗干预方案,主要包括根据临床辨证论治以遣药组方的复方汤剂以及相关的中成药(参一胶囊,益肺清化颗粒)等。西医组未经特殊处理,密切随访观察。研宄结果主要以无病生存期(DFS)为终点指标,即患者根治术后至肿瘤复发转移的时间。
  结果:本研究病例源于2012年1月至2016年12月期间三家医院,共67例非小细胞肺癌患者入组,中西医结合组为32例,西医组为35例,纳入病例无失访或脱落,病例资料完整。结果统计分析,西医组中位无病生存期为601天(95%置信区间[CI],375.7-826.3)。根据数据显示,中西医结合组的中位生存时间明显较西医组长,且具有统计学意义(P<0.05)。对影响非小细胞肺癌患者疾病预后的一些重要的危险因素,如年龄、体力状况评分(Eastern Cooperative Oncology Group,ECOG)、淋巴结转移和身体质量指数(Body Mass Index,BMI)等进行分析,在拥有这些独立危险因素的患者中,中西医结合组患者的无病生存时间明显比西医组的长(P<0.05)。
  结论:中西医结合疗法,可以降低肺恶性肿瘤的复发转移率,有效延长Ⅱ~ⅢA期小细胞肺癌患者的无病生存时间。
[硕士论文] 刘阳
免疫学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:髓系抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)是一群具有很强免疫抑制功能的异质性细胞,与多种肿瘤的预后呈负相关。小鼠MDSCs的表型为CD11b+Gr-1+。已有的研究表明肿瘤细胞可通过分泌IL-6、TGF-β和IL-33等细胞因子诱导MDSCs的产生,但对其能否通过膜接触的方式诱导MDSCs的产生却知之甚少。NKG2D配体表达在多种肿瘤细胞的表面,能够有效活化NK细胞和CD8+T细胞,在抗肿瘤免疫中起重要作用。然而,肿瘤细胞通过一系列的逃逸机制躲避NKG2D介导的杀伤,如肿瘤细胞产生可溶性的NKG2D配体下调NK细胞和CD8+T细胞表面NKG2D的表达水平;肿瘤细胞表面持续表达NKG2D配体也会下调杀伤细胞表面NKG2D的表达。但是,NKG2D配体能否通过诱导MDSCs产生的方式介导肿瘤的免疫逃逸现在还不是十分清楚。
  为了探讨NKG2D配体能否诱导MDSCs的产生,我们将前期研究中制备的稳定表达RAE1ε(NKG2D的配体之一)的BaF3细胞(简称BaF3-RAE1ε)和表达空载体的BaF3细胞(简称BaF3-mock)皮下注射到小鼠体内,流式检测小鼠脾脏、外周血、骨髓中CD11b+Gr-1+的细胞数量及比例。结果发现,与BaF3-mock相比,BaF3-RAE1ε荷瘤小鼠外周血和脾脏中CD11b+Gr-1+细胞的数量和比例明显上调,而骨髓中的CD11b+Gr-1+细胞的数量和比例没有明显变化。进一步给BaF3-RAE1ε荷瘤小鼠注射中和性抗NKG2D抗体后,脾脏中CD11b+Gr-1+细胞的比例和数量出现明显下降。以上结果提示:RAE1ε在体内可以通过NKG2D受体诱导CD11b+Gr-1+细胞的产生。为了研究NKG2D配体在体外能否诱导骨髓细胞分化为CD11b+Gr-1+细胞,将BaF3-mock和BaF3-RAE1ε细胞用CFSE标记,然后与骨髓细胞共培养,检测CFSE阴性的细胞中CD11b+Gr-1+细胞的比例和数量。结果发现:与BaF3-RAE1ε共培养后的骨髓细胞中CD11b+Gr-1+细胞的比例和数量出现明显的增高。进一步利用中和性抗NKG2D抗体阻断后,CD11b+Gr-1+细胞的数量和比例均出现了明显下调。以上结果提示,NKG2D的配体RAE1ε在体内和体外均可以通过NKG2D诱导CD11b+Gr-1+细胞的产生。
  为了探讨经RAE1ε诱导后的CD11b+Gr-1+细胞在细胞因子和酶的表达上有无变化,我们分别分选BaF3-RAE1ε和BaF3-mock荷瘤小鼠脾脏中的CD11b+Gr-1+细胞,检测其相关细胞因子和酶的表达情况。结果发现,经RAE1ε诱导后的CD11b+Gr-1+细胞精氨酸酶活性及IL-10的分泌显著上调,而PGE2和NO的表达没有明显变化。为了探讨经RAE1ε诱导后的CD11b+Gr-1+细胞对CD8+T细胞的增殖是否有影响,我们将分选的BaF3-RAE1ε和BaF3-mock荷瘤小鼠脾脏中CD11b+Gr-1+细胞,分别与CFSE标记的、经anti-CD3/CD28抗体活化后的脾细胞共培养,3天后检测CD8+T细胞的增殖情况。结果发现BaF3-RAE1ε来源的CD11b+Gr-1+细胞对CD8+T细胞增殖具有更强的抑制作用。在共培养体系中加入nor-NOHA(精氨酸酶抑制剂)或阻断性anti-IL-10抗体后,CD8+T细胞增殖能力得到恢复,提示经RAE1ε诱导的MDSCs可通过分泌IL-10和精氨酸酶抑制活化CD8+T细胞增殖。此外,我们还检测了BaF3-RAE1ε和BaF3-mock荷瘤小鼠血清中相关细胞因子的分泌情况,结果发现与BaF3-mock相比,BaF3-RAE1ε荷瘤小鼠血清中IL-4的分泌显著上调,IL-6和IFN-γ没有明显变化。
  为了探讨经RAE1ε诱导后的MDSCs是否具有更强的促肿瘤效应,我们将分选后的BaF3-RAE1ε和BaF3-mock荷瘤小鼠脾脏中的MDSCs,分别回输到CT-26皮下移植瘤小鼠体内,检测肿瘤的大小和小鼠的生存情况,结果发现回输BaF3-RAE1ε来源的MDSCs明显促进了皮下肿瘤的生长,降低了小鼠的生存率。进一步给小鼠体内注射中和性抗IL-10抗体或nor-NOHA后,发现注射中和性抗IL-10抗体或nor-NOHA都明显延缓了肿瘤的生长,以上结果提示,RAE1ε诱导的MDSCs通过IL-10和精氨酸酶促进肿瘤的生长。
  为了探讨RAE1ε能否在体外增强MDSCs的抑制功能,我们将CT-26荷瘤小鼠脾脏来源的MDSCs,体外与BaF3-RAE1ε和BaF3-mock共培养,检测共培养上清中的细胞因子分泌情况。结果发现与BaF3-mock相比,BaF3-RAE1ε诱导后的MDSCs高分泌1L-10和IL-4,而IL-6、IFN-γ、PGE2、TGF-β和NO的表达水平没有明显变化。阻断RAE1ε-NKG2D通路后,IL-10和IL-4的分泌明显降低。以上结果表明BaF3-RAE1ε通过NKG2D诱导MDSCs产生IL-10和IL-4。此外,我们还检测了体外RAE1ε诱导的MDSCs对T细胞增殖的影响,结果发现与BaF3-mock相比,经BaF3-RAE1ε诱导后的MDSCs对CD8+T细胞增殖具有更强的抑制效应,且在加入了中和性抗IL-10抗体后CD8+T细胞增殖能力得到了恢复,提示在体外RAE1ε通过IL-10增强MDSCs对CD8+T的抑制功能。
  总之,本研究发现NKG2D的配体RAE1ε能够通过NKG2D诱导CD11b+Gr-1+MDSCs的产生,经RAE1ε诱导后的MDSCs免疫抑制功能增强且促进肿瘤生长的作用增强。本研究提出了NKG2D配体通过诱导MDSCs的产生从而参与负向调控免疫应答的新机制,更全面地了解NKG2D配体在肿瘤免疫中的双重性,为肿瘤的预后评估和以NKG2D配体为靶向的肿瘤治疗提供新的认识。
[硕士论文] 邓心燕
中西医结合临床 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  运用Meta分析对中药注射液联合化疗对胰腺癌的疗效及安全性评估。
  方法:
  检索Pubmed、Cochrane Library、EMBASE.com、Web of Science、万方数据库、中国知网等数据库2017年10月前关于“胰腺癌”、“艾迪注射液”、“参芪注射液”等检索词的文献,同时检索会议文献和学位论文数据库,补充数据,获得所有中药注射液联合化疗治疗胰腺癌的文献,按照设定的纳入排除标准筛选文献,运用RevMan5.3软件采用Cochrane风险偏倚评估工具对纳入的随机对照试验(RCTs)进行偏倚风险质量评估,最后采用R语言进行系统分析。
  结果:
  计算共检索到279篇文献,通过排除筛选最终纳入符合标准的文献24篇,共1524名患者,共7种中药注射液。通过RevMan5.3软件分析得到文献质量不高,存在中度偏倚风险。通过Meta分析结果显示:
  ①中药注射液联合化疗治疗胰腺癌疗效有效率分析,文献异质性低,采用固定效应模型进行整合。整合后的效应值为2.3491,95%CI[1.8468;2.9878],(Z=6.96,P=0.001),有统计学意义,实验组的效应好于对照组,且发表偏倚小,敏感性较低,通过对中药注射剂的亚组分析,发现鸦胆子乳油注射液效应值最高,其次是华蟾素注射液,复方苦参注射液最低。
  ②中药注射液联合化疗治疗胰腺癌临床受益率的分析,文献异质性低,需要采用固定效应模型,效应值为2.4746,95%CI[1.9023;3.2191],(Z=6.75,P=0.001)差异有统计学意义,实验组的效应好于对照组,且发表偏倚小,敏感性较低,通过中药注射液的亚组分析,发现鸦胆子乳油注射液效应值最高,其次是华蟾素注射液为,参芪注射液最低。
  ③中药注射液联合化疗治疗胰腺癌骨髓抑制的分析,文献异质性低,OR值为0.3882,95%CI[0.2752;0.5475],(Z=-5.39,p=0.0001),差异有统计学意义,实验组的骨髓抑制明显低于对照组。且发表偏倚很小,敏感性较低,通过中药注射液的亚组分析,发现鸦胆子注射液改善骨髓抑制最好,其次是艾迪注射液,参芪注射液效果最差。
  ④中药注射液联合化疗治疗胰腺癌的疼痛症状分析,文献异质性高,需要采用随机效应模型,OR值为2.5797,95%CI[1.7082;3.8957],(Z=4.51,P=0.0001),差异有统计学意义。发表偏倚较大,敏感性较低,通过中药注射液的亚组分析,复方苦参注射液疗效优于康莱特注射液。
  ⑤中药注射液联合化疗治疗对胰腺癌患者KPS分析,文献异质性低,采用固定效应模型,OR为3.0944,95%CI[2.2452;4.2648],(Z=6.90,P=0.0000),差异具有统计学意义,发表偏倚很小,敏感性较低。通过中药注射液的亚组分析,发现复方苦参注射液效果最好,其次是康莱特注射液,康艾注射液对改善胰腺癌患者KPS效果最差。
  结论:
  一、中药注射液联合化疗治疗胰腺癌在一定程度上可以提高患者治疗有效率和临床受益率,提高患者体力,降低骨髓抑制,减轻患者疼痛症状。
  二、在中药注射液选用方面,按治疗有效率高低选择,依次为鸦胆子乳油注射液、华蟾素注射液、康艾注射液、艾迪注射液、康莱特注射液、参芪注射液、复方苦参注射液;按临床受益率高低选择,依次为鸦胆子乳油注射液、华蟾素注射液、艾迪注射液、康莱特注射液、复方苦参注射液、康艾注射液、参芪注射液;按缓解骨髓抑制有效程度选择,依次为鸦胆子乳油注射液、艾迪注射液、康莱特注射液、康艾注射液、参芪注射液;而在疼痛改善方面复方苦参注射液的疗效好于康莱特注射液;按改善体力方面选择,依次为复方苦参注射液、华蟾素注射液、康莱特注射液、康艾注射液。
[硕士论文] 翟达
中西医结合临床 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目的:观察并探讨鸦胆子油乳注射液+TP化疗同步适形调强放疗(Intensity-Modulated Radiation Therapy,IMRT)联合方案治疗食管癌的疗效与安全性,为中西医结合治疗肿瘤在临床的推广应用提供可参考依据。
  方法:将符合标准的60例食管癌患者随机分为治疗组及对照组,每组各30例,两组均采用相同方案同步放化疗治疗,即TP化疗同步IMRT。治疗组于同步放化疗全过程联合运用鸦胆子油乳注射液30ml静脉滴注治疗,每日1次。对照组则单用同步放化疗治疗。TP化疗21天为1个周期,连用2个周期。IMRT:GTV60-64Gy/28-30次,CTV54Gy/28次,PTV54Gy/28次,IMRT从TP化疗第一天开始,每周5次,共6-7周完成。于治疗过程中及治疗前后观察并评价两组患者的近期疗效、中医症状、放化疗毒副反应、体力、体重及生命质量的情况及变化。
  结果:(1)近期疗效方面,治疗组及对照组的有效率分别为60%及53.33%,治疗组的有效率高于对照组,但差异无明显统计学意义(P>0.05)。(2)中医症状方面,治疗组在吞咽困难、胸痛或背痛、神疲乏力及中医症状总积分值方面的改善率明显高于对照组(P<0.05);在吞咽疼痛、异物感及声音嘶哑症状方面两组无明显统计学差异(P>0.05)。(3)放化疗毒副反应方面,治疗组较对照组明显降低骨髓抑制、胃肠道反应及放射性反应的发生率(P<0.05);在周围神经毒性、脱发及口腔黏膜反应方面两组无明显统计学差异(P>0.05)。(4)生存质量评价由Karnofsky(KPS)体力评分、体重及欧洲癌症治疗研究组织生命质量核心量表(The European Organization for Reasearch and Treatment of Cancer Quality of Life Questionnare-Core30,EORTC QLQ-C30)评分三方面综合评估:两组治疗前后KPS体力评分的稳定率分别为86.67%及73.33%,治疗组优于对照组(P<0.05)。两组治疗前后体重变化的稳定率分别为56.67%及40.00%,治疗组优于对照组(P<0.05)。EORTC QLQ-C30量表治疗前后评分对比,两组在身体功能、角色功能、情绪功能、社会功能及物理症状维度方面,治疗后评分均较治疗前明显改善(P<0.05),认知功能及健康经济相关维度无明显统计学差异(P>0.05);两组间治疗后评分对比,在角色功能、情绪功能及物理症状维度,治疗组较对照组在治疗后评分上有明显改善(P<0.05),在身体功能、认知功能、社会功能及健康经济相关维度两组无明显统计学差异(P>0.05)。
  结论:在TP化疗同步IMRT治疗食管癌的过程中联合运用鸦胆子油乳注射液,可改善患者的中医症状,减轻放化疗治疗的毒副反应,提高患者的生存质量。
[硕士论文] 仲婕
中西医结合临床 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:表观遗传学是研究DNA序列没有发生改变的情况下表型或基因表达的遗传变化,已成为生命科学中普遍关注的前沿领域,而中药复方及其有效成分对表观遗传的作用正日益受到重视。中药可以作用于表观遗传的多个环节,以调控基因转录及其表达,但时至今日,中医证的表观遗传学特征的研究非常薄弱。结直肠癌(colorectal cancer,CRC)脾虚证的表观遗传学特征的研究尚未见报道。鉴于此,本课题就CRC脾虚证的流行病学特征、CRC脾虚证患者粪便中GATA4基因甲基化水平进行了初步研究分析,以期为从分子生物学的角度揭示证的现代机制提供参考。
  本文主要从以下几方面进行论述:
  第一部分 结直肠癌脾虚证流行病学研究
  目的:探讨结直肠癌脾虚证的流行病学特征。
  方法:收集2016年3月至2017年5月诊断为CRC脾虚证的患者110例,以IBS-D脾虚证患者58例作为对照组,且符合相关中医辨证标准,自愿填写流行病学调查表且能保证所被调查内容真实性。
  结果:CRC脾虚证患者110例,IBS-D脾虚证患者58例,CRC脾虚证患者平均年龄(63.4±11.8)岁,高于IBS-D脾虚证患者平均年龄(44.2±14.4岁),且两组之间年龄构成方面有显著差异(P<0.05);CRC脾虚证与IBS-D脾虚证在性别方面均为男性多于女性,但两组之间的性别构成差异无统计学差异(P>0.05);CRC脾虚证患者与IBS-D脾虚证患者在吸烟情况上无统计学差异(P>0.05),但两组在饮酒情况上有统计学差异(P<0.05)。CRC脾虚证患者中气虚体质最多,IBS-D脾虚证患者中阳虚体质最多,但两组在中医体质上无统计学差异(P>0.05)。CRC脾虚证患者中脾虚+湿热证人数最多,IBS-D脾虚证患者中脾虚+肝郁证人数最多。CRC脾虚证及其兼证在不同性别中分布差异无统计学意义(P>0.05);IBS-D脾虚证及其兼证在不同性别中分布差异无统计学意义(P>0.05)。
  结论:CRC脾虚证患者易兼夹湿热证,IBS-D脾虚证患者易兼夹肝郁证。
  第二部分 结直肠癌脾虚证与GATA4基因甲基化相关性研究
  目的:对CRC脾虚证与GATA4基因甲基化相关性进行探讨。
  方法:收集CRC脾虚证患者60例、IBS-D患者20例、正常健康对照组10例粪便标本,从中提取粪便DNA,采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测粪便中GATA4基因甲基化情况。
  结果:在60例CRC脾虚证患者粪便标本中,共有48例检测出GATA4甲基化阳性,阳性率为80.0%;在20例IBS-D脾虚证患者粪便标本中,共有3例粪便标本检测出GATA4甲基化阳性,阳性率为15.0%;在10例对照组粪便标本中,共有1例粪便标本检测出GATA4甲基化阳性,阳性率为10.0%。CRC脾虚证患者粪便标本中GATA4甲基化阳性率明显高于IBS-D脾虚证患者及对照组。CRC脾虚证患者与对照组粪便中GATA4甲基化阳性情况有统计学差异(P<0.05),IBS-D脾虚证患者与对照组粪便中GATA4甲基化阳性情况无统计学差异(P>0.05)。
  结论:1.GATA4基因甲基化可能是结直肠癌脾虚证的分子生物学特征之一。2.结直肠癌脾虚证GATA4甲基化水平可能高于结直肠癌非脾虚证GATA4甲基化水平。
[硕士论文] 赵丹
病原生物学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:疫苗接种的原则在于产生针对抗原的保护性免疫应答,且疫苗本身是安全的。传统的减毒疫苗存在毒力回复的潜在风险和全病原体疫苗的低免疫反应限制了其应用。与传统疫苗相比,新型疫苗的安全性高,特异型强,但普遍存在免疫原性低的缺点。因此需要免疫佐剂的加入以充分发挥疫苗的功能。
  细菌菌影(Bacterial Ghost,BG)是革兰阴性菌通过噬菌体PhiX174裂解基因E的诱导形成不含核酸、核糖体等胞质内容物的细菌空壳。细菌菌影保留了天然细菌完整的外膜结构,含有天然的免疫刺激剂,可以作为天然的免疫佐剂。
  肿瘤一直威胁着人类健康,由于发病率和死亡率均较高,因此对肿瘤的发生机制和免疫学的研究有利于开发出有效的治疗手段。随着肿瘤免疫学的不断进步,利用免疫系统的力量和特异性免疫治疗已成为肿瘤疫苗研究的重点。有效的肿瘤疫苗应增强体液免疫应答和细胞免疫应答来抑制肿瘤的生长。由于可溶性抗原引起低抗体滴度或无效的CTL反应,所以肿瘤疫苗需要佐剂的加入以发挥有效功能。
  本文旨在利用沙门菌菌影(SEG)的天然佐剂作用联合OVA抗原,评价其对抗原提呈细胞的免疫增强作用,并在细胞水平和动物水平上进一步考察SEG在启动体液免疫应答和细胞免疫应答中的作用。为促进临床疫苗佐剂及肿瘤免疫治疗的发展和进步提供思路。
  研究内容包括以下三部分:
  一、沙门菌菌影作为佐剂体外免疫功能的研究
  将重组沙门菌HA2-EBOX进行诱导制备出沙门菌菌影SEG。用透射电镜对SEG进行形态学观察。结果显示,诱导后的重组沙门菌内容物流出形成空壳结构,提示沙门菌菌影SEG成功制备。将SEG联合OVA与BMDC孵育48h后,流式检测BMDC表面分子CD86、CDS0、CD40和MHC-Ⅱ的表达,间接ELISA检测BMDC上清中的细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的分泌。同时,不同剂量的SEG联合OVA-FITC抗原与BMDC共孵育,不同时间点检测BMDC对抗原的摄取情况。结果显示,BMDC经SEG-OVA刺激后,高表达表面成熟分子CD86、CD80、CD40、MHC-Ⅱ,高分泌细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α。BMDC对抗原OVA的摄取量随着SEG剂量的增加而增加。同时,为了明确SEG在获得性免疫应答阶段所发挥的作用,检测其是否能够促进CD4+T细胞应答和涛导CD8+细胞毒性T细胞(CTL)免疫应答。我们选用转基因小鼠OT-Ⅱ的CD4+T细胞和OT-Ⅰ小鼠脾细胞分别与SEG刺激活化后的BMDC共孵育。结果显示,SEG不仅能够促进BMDC将抗原提呈给CD4+T细胞,同时将抗原交叉提呈给CD8+T细胞。
  二、SEG联合OVA诱导小鼠免疫应答的特性研究
  将不同剂量的SEG分别与BMDC和鼠巨噬细胞系RAW264.7孵育,CCK-8检测其安全性。同时,以一定剂量SEG免疫小鼠,观察小鼠两周内的生存状态。将48只6周龄左右BALB/c小鼠,随机分为6组:不同剂量的SEG联合OVA组(SEG分别为105、106、107CFU)、OVA组、SEG(107CFU)组和PBS对照组,其中OVA为50μg/只。通过皮下注射免疫接种。间接ELISA检测小鼠血清中IgG、IgG1、IgG2a抗体水平,流式检测小鼠脾脏和外周血中CD3+CD4+T、CD3+CD8+T细胞频率变化。结果表明,与单独的OVA组相比,SEG-OVA免疫组小鼠血清中IgG、IgG1、IgG2a抗体水平均明显提高,脾脏和外周血CD3+CD4+T和CD3+CD8+T细胞频率上调。SEG作为载体包裹OVA(SEG(OVA))免疫小鼠后,胞内染色检测脾脏CD4+T细胞亚群细胞因子IL-4、IFN-γ分泌情况。结果表明,与对照组相比,SEG(OVA)免疫组脾脏CD4+T细胞胞内高分泌IFN-γ,小鼠脾细胞增殖明显。
  三、SEG作为免疫佐剂对皮下黑色素瘤的抑制作用
  在预防肿瘤模型中,我们将6周龄BALB/c小鼠随机分为8组,每组10只,以铝佐剂(Alum)作为阳性对照,SEG组和PBS组作为阴性对照,实验组分别为:OVA组、SEG(OVA)组和SEG-OVA组(SEG分别为105、106、107CFU)。OVA为50μg/只。皮下免疫小鼠,在免疫后第7天,将黑色素瘤细胞B16-OVA制备成细胞悬液注射于小鼠右前肢皮下。肿瘤接种12天后,游标卡尺检测肿瘤大小,在第24天,处死小鼠,分离黑色素瘤。收集小鼠脾细胞,流式检测CD11b+Gr-1+细胞比例。结果显示,SEG作为免疫佐剂能够明显抑制小鼠肿瘤的生长。在治疗肿瘤模型中,我们用B16-OVA皮下接种小鼠,在接种后第7天,将小鼠分组并分别进行免疫:OVA组、SEG(OVA)组和SEG-OVA组(SEG分别为105、106、107CFU),OVA为50μg/只,同时以黑色素瘤(B16F10)作为阴性对照,检测SEG-OVA的特异性。收集小鼠脾细胞,流式检测CD11b+Gr-1+细胞比例。结果显示,SEG-OVA成功延缓了肿瘤的生长速度,且具有较好的特异性。
[硕士论文] 王小燕
生物学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:线粒体是真核细胞内重要的产能细胞器,参与细胞增殖、代谢、分化、信号传递、凋亡等多种细胞生理活动。细胞凋亡与胚胎发育、维持体内细胞数量的动态平衡和重要人类疾病如肿瘤的发生发展密切相关。线粒体凋亡通路一般分为三个阶段过程。在中央调控阶段,线粒体通过释放细胞色素C发挥重要作用。据报道,Bcl-2凋亡蛋白家族成员Bax和Bak通过定位于线粒体膜参与细胞凋亡过程。因此,研究线粒体相关蛋白对于深入理解细胞凋亡和肿瘤发生的分子机制具有重要意义。
  Rap2b是p53的靶基因,属Ras癌基因超家族成员。本课题组前期研究发现,降低胞内Rap2b的表达水平使肿瘤细胞对DNA损伤高度敏感,易于发生细胞凋亡。我们推测,Rap2b可能通过与线粒体膜上的蛋白质相互作用参与细胞凋亡过程。
  在本研究中,首先我们构建了慢病毒重组质粒pLKO.1-TetOn-shRNA,包装慢病毒,用于HCT116结肠癌细胞内Rap2b表达水平的可控敲降,并用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测了Rap2b和促凋亡相关基因如Bax等的mRNA和蛋白表达水平。结果显示,Rap2b的表达下调后,Bax与Puma的胞内总蛋白水平没有明显的变化,但线粒体中的Bax蛋白水平明显上升。
  接着,我们研究了Rap2b在细胞中的定位。我们先用免疫印迹法检测分离的胞浆和线粒体,发现Rap2b主要存在于线粒体部分。免疫荧光染色实验进一步证明,Rap2b定位于线粒体。
  然后,我们结合pulldown和银染-质谱分析技术筛选与Rap2b发生相互作用的线粒体蛋白。结果显示,Rap2b可能与线粒体特异的HSPA9相互作用。
  最后,我们在体内外验证了Rap2b与HSPA9的相互作用。先将HSPA9和Rap2b基因克隆至原核表达载体pET-32a和pGEX-5X-1中,在BL21(DE3)表达菌中诱导表达,并将纯化的Hi-TrxA-HSPA9蛋白与GST-Rap2b在体外进行pulldown实验。结果显示,Rap2b能在体外与HSPA9直接结合。同时,将Rap2b和HSPA9基因分别克隆至荧光双分子载体pBiFC-mCherry N159和pBiFC-mCherryC160,同时转染细胞,在激光共聚焦显微镜下观察。结果显示,Rap2b与HSPA9在体内直接相互作用。
  综上所述,Rap2b可能通过与线粒体特异的HSPA9分子相互作用定位于线粒体,并通过调节线粒体上Bax蛋白水平参与细胞凋亡过程。这一发现对深入理解Rap2b的功能及其分子机理具有重要意义。
[硕士论文] 韦治明
生物学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:肿瘤抑制基因p53在肿瘤的发生及发展过程中发挥着极其重要的作用。作为突变频率最高的抑癌基因之一,p53在50%以上的人类肿瘤中发生突变,并在肿瘤细胞内维持较高水平。Rap2b是Ras癌基因超家族和p53的新靶基因,在大多数肿瘤细胞中高表达。我们推测,肿瘤细胞中较高水平的突变p53蛋白仍在一定程度上保留了对Rap2b的诱导能力,因而表达较高水平的Rap2b,从而促进肿瘤细胞的存活。本研究旨在探讨Rap2b在p53突变的肿瘤细胞中的功能、Rap2b表达水平与p53突变之间的关系及其可能的分子基础,为深入理解Rap2b和p53在肿瘤细胞发生发展过程中的作用提供重要实验依据。
  首先,本研究参照UMD数据库中各种肿瘤的p53热点突变资料,选择46个突变位点和突变方式,设计一系列p53突变引物构建p53突变体,转染重组质粒至HCT116(p53-/-)细胞,并利用免疫印迹法检测突变体的表达情况。结果显示,31个p53突变体在该细胞中存在高水平表达。
  接着,选取能成功表达p53突变体的质粒包装慢病毒,感染人结直肠癌细胞HCT116(p53-/-),经抗生素筛选后,获得稳定表达各种p53突变体的细胞株。利用免疫印迹法检测Rap2b和p53的表达水平,以揭示不同p53突变体与Rap2b表达水平之间的关系。结果表明,p53某些位点的突变能提高肿瘤细胞内Rap2b的蛋白水平。
  然后,选取两个代表性的p53突变(p53R175H和p53R273H)细胞株,稳定敲低细胞内Rap2b的表达水平,观察Rap2b的敲低对p53突变肿瘤细胞株生长速率、迁移能力、致瘤性、阿霉素处理前后细胞周期和细胞凋亡的影响。结果表明,Rap2b敲低后p53突变肿瘤细胞的生长速率、致瘤性和细胞迁移能力显著降低,但是对细胞凋亡和细胞周期没有明显影响。
  最后,为探明p53突变肿瘤细胞表达高水平Rap2b蛋白的原因,我们研究了在p53野生型和突变型肿瘤细胞中调控Rap2b表达方式的差异。通过用Nutlin-3处理p53野生型及突变型肿瘤细胞,并在撤除Nutlin-3后的不同时间点用免疫印迹法检测p53和Rap2b的蛋白水平,我们发现在p53突变的肿瘤细胞中,p53突变体蛋白在Nutlin-3撤除后仍在较长时间范围内维持较高水平,并且p53在不同程度上丢失了对某些靶基因如p21的诱导作用,但仍然能诱导一些靶基因如Rap2b、Hdm2、Bax和Puma等的表达。我们还通过Pulldown实验发现,p53的突变严重阻碍p53与Rap2b的直接结合。
  综上所述,本研究揭示p53突变通过显著提升肿瘤细胞中p53突变体蛋白的稳定性,使肿瘤细胞中的Rap2b蛋白维持在较高水平,从而促进肿瘤细胞的生存。这一发现对于制定有效的人类癌症治疗策略具有重要意义。
  (已选择0条) 清除
公   告

北京万方数据股份有限公司在天猫、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!查看详情

手机版

万方数据知识服务平台 扫码关注微信公众号

万方选题

学术圈
实名学术社交
订阅
收藏
快速查看收藏过的文献
客服
服务
回到
顶部