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[硕士论文] 王清春
农业昆虫与害虫防治 山东农业大学 2017(学位年度)
摘要:本论文以浮萍为主要原料,制备黄粉虫人工饲料,建立浮萍-黄粉虫生物链关系。通过研究黄粉虫取食浮萍的各种最适生物学条件、幼虫肠道细菌组成变化以及虫体资源成分的变化,为利用黄粉虫转化处理浮萍提供科学依据,开拓浮萍利用新途径,探索富营养有机污水治理的生物系统技术。主要研究结果如下:
  1、黄粉虫人工饲料的研究。人工饲料配方设计,通过比较不同比例的浮萍饲料对黄粉虫幼虫的影响,结果:―50%浮萍:50%麦麸‖饲喂的黄粉虫幼虫的饲料利用率、生物量增长率、饲料转化率都高于其他处理组,幼虫的死亡率最低,为最佳浮萍基人工饲料。
  2、不同含水量的人工饲料对黄粉虫幼虫的影响。通过比较不同含水量的浮萍饲料对黄粉虫幼虫的影响,可知当浮萍基人工饲料的含水量保持为18%时,幼虫的生物量增长率、饲料利用率均最高,幼虫死亡率最低,是浮萍基人工饲料的最佳湿度范围。
  3、人工饲料条件下不同密度的黄粉虫幼虫生长情况比较。通过比较在不同虫体密度下黄粉虫取食浮萍饲料的情况,可知:当虫体密度为0.56头/cm3-1.12头/cm3时,幼虫的生物量增长率最高,保持在39.90%-39.73%范围内。伴随群体密度的增加,幼虫生物量增长率逐渐下降,当幼虫密度为3.36头/cm3时,幼虫的生物量增长率降至4.25%。同时,幼虫的饲料利用率也表现出和生物量增率大体相同的趋势,所以,本试验认为虫体最佳密度为1.12头/cm3。
  4、通过研究用浮萍代替豆饼作为黄粉虫成虫的饲料蛋白源,可知:相比于豆饼,用浮萍作为黄粉虫成虫的饲料蛋白源,可使黄粉虫成虫的平均寿命延长5d,单雌产卵量增加124粒,产卵天数延长约7d。
  5、通过比较取食浮萍饲料和纯麦麸饲料的黄粉虫幼虫虫体资源成分组成及含量可知:取食浮萍饲料的幼虫虫体中:蛋白质含量为61.7%、粗脂肪含量9.7%、粗纤维含量为10.8%、含灰9.3%;取食纯麦麸饲料的黄粉虫幼虫体中:蛋白质占52.6%、粗脂肪占29.9%、粗纤维占4.6%、灰分占3.5%。此外,两种饲料饲喂的幼虫体内的氨基酸种类都较为丰富,均有17种。必需氨基酸和非必需氨基酸的比值(EAA/NEAA),分别是浮萍组69.21%纯麦麸组69.25%,都大于标准60%;必需氨基酸与总氨基酸的比值,分别是浮萍饲料组32.32%、纯麦麸组40.90%,均在40%左右。
  6、黄粉虫肠道细菌的研究。分别比较取食浮萍饲料和纯麦麸饲料的黄粉虫幼虫肠道可培养细菌的种类和数量,可得知:以纯麦麸为饲料的黄粉虫幼虫肠道菌群种类相对单一,优势菌为芽孢杆菌属和短波单胞菌属,而取食浮萍饲料的幼虫肠道细菌种类有所增加,不仅包括芽孢杆菌属、短波单胞属,同时含有沙雷氏菌属、金黄杆菌属、埃希氏杆菌属。为今后进一步研究黄粉虫利用浮萍的内在机制提供参考。
[硕士论文] 李红雨
免疫学 石河子大学 2017(学位年度)
摘要:目的:⑴对图兰扇头蜱线粒体全基因组序列进行测定并对其结构特点进行分析,探讨扇头蜱属系统发育关系。⑵设计3个新的图兰扇头蜱种内鉴定的基因标志物,对图兰扇头蜱进行种内分子鉴定。
  方法:①根据GenBank数据库的扇头蜱属线粒体全基因组序列,设计出6对线粒体全基因组引物用于PCR扩增中国新疆图兰扇头蜱线粒体全基因组序列。运用多个基因分析软件进行线粒体全基因组序列的组装、分析,并进行进一步的12SrDNA和coxl基因的最大似然法(Maximum Likelihood,ML)系统发生学分析。②采集中国新疆南北疆7个县市等地区212只图兰扇头蜱,阿尔巴尼亚4个县市103只图兰扇头蜱,结合蜱的形态学特征及蜱线粒体16SrDNA和coxl基因,对所采集的蜱进行蜱种的初步形态学及分子生物学鉴定并进行ML法系统发育分析。根据扇头蜱属线粒体全基因组中的保守区域,设计3个新的线粒体序列基因标志物-nadl-16SrRNA人(简称为N1),nad2-coxl(简称为N2),coxl-tRNA-Lys(简称为C1),扩增和分析中国新疆和阿尔巴尼亚图兰扇头蜱的N1、N2、C1片段并进行种内基因差异分析和ML法系统发生学分析。
  结果:⑴在国际上首次测出图兰扇头蜱全线粒体基因组长为14717bp,其由13个蛋白质编码基因、22个tRNA基因、2个核糖体RNA基因和2个非编码区组成,各基因排列顺序与后沟类硬蜱相似。图兰扇头蜱全线粒体基因组核苷酸组成为A=37.80%,T=40.00%,G=9.90%,C=12.30%,A+T含量为77.80%;ML系统进化树显示图兰扇头蜱位于后沟类硬蜱分枝上,且与中国血红扇头蜱亲缘关系较近,其和血红扇头蜱中国株一道,与血红扇头蜱美国株形成姊妹种关系。⑵3个新的基因标志物(N1、N2、C1)是有效的图兰扇头蜱种内鉴定的基因工具,这3个基因标志物在中阿两国的图兰扇头蜱的差异分别为3.57-4.07%、3.57-4.39%和3.18-4.69%,将中国和阿尔巴尼亚的图兰扇头蜱分为两个不同的亚种。
  结论:①在国际上完成图兰扇头蜱线粒体的全基因组测序;与大多数典型的后生动物线粒体基因组类似,图兰扇头蜱线粒体基因组包含37个基因,包括13个蛋白质编码基因、2个rRNA基因和22个tTNA基因且仅有一个拷贝,具备2个非编码控制区,呈闭合环状结构。就目前的研究和数据而言,本研究的图兰扇头蜱与血红扇头蜱中国株在系统发生关系上最近,但未来仍然需要扩增扇头蜱属的其他种的mtDNA来进行更广阔的分析。②设计的3个新的图兰扇头蜱线粒体基因标志物-N1、N2、C1是有效的图兰扇头蜱种内鉴定基因标志物,将中国新疆和阿尔巴尼亚的图兰扇头蜱成功分为2个不同的亚种进化枝。图兰扇头蜱至少存在两个不同的亚种,未来应该大量采集世界其他地域的图兰扇头蜱进行亚种的研究。
农业昆虫与害虫防治 广西大学 2017(学位年度)
摘要:东南亚是世界生物多样性热点地区之一,然而各个国家的瘿螨分类研究极不平衡,迄今为止,未见报道老挝瘿螨。本文首次报道老挝常见植物瘿螨,采用传统的形态分类学方法,记述瘿螨总科Eriophyoidea羽爪瘿螨科Diptilomiopidae、瘿螨科Eriophyidae二科,伪足瘿螨亚科Nothopodinae、叶刺瘿螨亚科Phyllocoptinae、羽爪瘿螨亚科Diptilomiopinae三亚科,叶刺瘿螨族、小丽瘿螨族Acaricalini、项背瘿螨族Tegonotini三族,共18属21种,其中包括新属1个,新种8个,新记录种12个和一个已知种。绘制了各种外形图或主要的分类特征图,制作了检索表。描述的新属、新种如下:
  新属:南恩瘿螨属Namengella gen.nov.。
  新种:芦竹扁歧双羽爪瘿螨,新种Diptiloplatus arundinis sp.nov.;木姜子清迈瘿螨,新种Chiangmaia monopetala sp.nov.;无忧花维氏瘿螨,新种Vimola saracae sp.nov.;木姜子副鼻瘿螨,新种Pararhynacus glutinosae sp.nov.;山黄麻尖喙瘿螨,新种Acarhis tomentus sp.nov.;麻竹南恩瘿螨,新属和新种Namengella latiflorusa gen.nov&sp.nov.;软枝黄蝉佩氏瘿螨,新种Petanovicia catharticum sp.nov.;朱缨花谢氏瘿螨,新种Shevtchenkellacalliandrae sp.nov.。
  新种模式标本保存在广西大学农学院植保系。
[硕士论文] 胡红元
病原生物学 贵州医科大学 2016(学位年度)
摘要:目的:研究家蝇对农业秸秆的消化利用及体内相关糖苷水解酶基因的诱导表达,筛选体内降解纤维素、木质素、半纤维素的共生菌,为今后家蝇作为资源化昆虫对秸秆等生物质能的合理利用和开发奠定科学基础。
  方法:
  1.使用含30%麦麸的高粱秸秆粉、30%麦麸的麦秸秆粉和纯麦麸分别饲养家蝇幼虫,检测处理前后及无幼虫培养对照组饲料中粗蛋白、粗脂肪、总糖、纤维素、木质素、半纤维素含量变化;同时观察三个实验组的幼虫期、3日龄幼虫体重、蛹期、羽化率、成虫存活期及雌雄比。
  2.家蝇内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)在不同饲料饲养、不同发育期及不同组织的稳定性研究;将2.5g的纯木质素、纤维素、木聚糖(半纤维素)溶于20ml灭菌水,均匀混于湿度适宜的麦麸(50g干重)中饲养家蝇幼虫,观察BG、BGL、LAC、MAN基因的表达差异;使用纯高粱秸秆、麦秸秆代替麦麸饲养家蝇,依次传代,观察家蝇上述基因在家蝇传代过程中的表达差异。
  3.用纯麦麸、高粱秸杆、麦秸秆喂养家蝇幼虫后,分别用纤维素-刚果红培养基、木质素培养基、木聚糖培养基在需氧和厌氧条件下筛选纤维素降解真菌、木质素降解真菌和细菌、半纤维素降解细菌和真菌,观察不同饲养组的菌落形态、数量。
  结果:
  1.不同组饲养后及对照组的总糖、纤维素、木质素、半纤维素含量较饲养前都有一定程度的降低(P<0.05),且家蝇幼虫处理后比对照组降低的百分点更多(P<0.05);麦麸组、高粱秸秆组处理后及对照组相比处理前脂肪含量增加(P<0.05);高粱秸秆组和麦秸秆组的家蝇处理后饲料及对照组与处理前相比,粗蛋白含量都升高(P<0.05)。
  2.家蝇GAPDH基因在不同饲料饲养、不同发育期及不同组织的表达差异无统计学意义(P>0.05),表达较稳定。
  3.使用高粱秸秆粉,麦秸秆粉和麦麸分别饲养家蝇,我们发现幼虫期、蛹期、羽化率、成虫存活期及3日龄幼虫体重均表现差异性(P<0.05),成虫雌雄比例无差异。
  4.使用木质素、纤维素、半纤维素喂养刺激家蝇后,家蝇BG、BGL、LAC、MAN基因均呈现上调(P<0.05),但上调幅度各有不同。
  5.以麦麸为对照组,上述基因在高粱秸杆组和麦秸秆组传代中均呈现上调(P<0.05),趋势不同。
  6.筛选的能降解纤维素、半纤维素、木质素的需氧真菌数量均大于厌氧真菌,细菌数量大于真菌数量(P<0.05)。纤维素降解真菌数量呈现高粱秸秆组>麦麸组>麦秸秆;木质素降解细菌、真菌数量均表现为高粱杆组>麦秸秆组>麦麸组;半纤维素降解细菌、真菌数量均表现为麦秸秆组>高粱秸秆组>麦麸组。
  结论:
  1.家蝇可以消化利用木质纤维;家蝇体内木质纤维降解酶基因可以传代并能应激性表达;
  2.家蝇幼虫消化道存在降解木质纤维素的微生物,通过不同秸秆饲养家蝇幼虫,消化系统中不同种类的细菌、真菌群落有显著的空间分布异质现象,这些木质纤维素降解微生物能与家蝇幼虫对摄入的木质纤维素协同消化。
[硕士论文] 王佳琳
动物学 贵州大学 2016(学位年度)
摘要:腺水螨科Lebertiidae Thor,1900隶属于蜱螨亚纲Acari,绒螨目Anystides,前气门亚目Prostigmata,腺水螨总科Lebertioidea,是腺水螨总科中一个较大的类群。腺水螨科的分类研究可以追溯到1879年,瑞士学者Lebert以Pachygaster tauinsignitus为模式种建立了腺水螨属,属名为Pachygaster;因属名被Meigen(1803占用,1880年,瑞典学者Neuman将属名重新命名为Lebertia;而后,1900年,Thor将腺水螨属提升为科Lebertiidae。中国的腺水螨科研究开始于1994年,金道超首先发现多毛腺水螨亚属两新种:梁氏腺水螨Lebertia(Pilolebertia) liangi Jin,1994;齿触毛腺水螨Lebertia(Pilolebertia) ramiseta Jin,1994。截至今日,普遍认同的腺水螨科属级分类体系为4属5亚属。中国腺水螨科共报道了1属2亚属9种。
  本文共收集整理了采集于中国26省市自治区1000余号标本,并对其进行了分类学研究,记述了中国腺水螨科1属4亚属29种,其中作者增加描述1新记录属,17新种,3新记录种,并绘制了90余幅结构特征图,编制了腺水螨科世界已知属以及中国已知种检索表,此外,对中国腺水螨科的种类分布情况进行了生物地理分布分析。研究结果具体如下:
  1.建立新单元及新记录:
  新记录亚属:曙腺水螨亚属Lebertia(Eolebertia) Gerecke,2009
  新种:拟阿利亚腺水螨Lebertia(Lebertia) pseudoalia;均柱腺水螨Lebertia(Lebertia) cylinderia;Lebertia(Lebertia) maolanensis;狭体腺水螨Lebertia(Lebertia) narrowia;拟玛格里奥腺水螨Lebertia(Lebertia) pseudomaglioi;西藏腺水螨Lebertia(Pilolebertia) tibetia;展基腺水螨Lebertia(Pilolebertia) expansivua;扩基腺水螨Lebertia(Pilolebertia) extendia;拟卓越腺水螨Lebertia(Pilolebertia) pseudoinsignis;微齿腺水螨Lebertia(Mixolebertia) denticleia;桫椤腺水螨Lebertia(Mixolebertia) suoluoensis;太白腺水螨Lebertia(Mixolebertia) taibaia;多泳毛腺水螨Lebertia(Mixolebertia) variousis;多背毛腺水螨Lebertia(Eolebertia) exceedia;哈纳斯腺水螨Lebertia(Eolebertia) hanasiensis;九毛腺水螨Lebertia(Eolebertia) novemia;细长腺水螨Lebertia(Eolebertia) slenderia
  新记录种:瓦松腺水螨Lebertia(Lebertia) fimbriata Thor,1899,纳托腺水螨Lebertia(Lebertia) ignatowi Sokolow,1930,齐距腺水螨Lebertia(Pilolebertia) inaequalis Koch,1837。
  2.已经种类的重新描述和鉴定。
  对中国已知腺水螨种类进行了模式标本的检视,并进行了重新描述,包括光足腺水螨Lebertia(Lebertia) abseta Guo, Jin&Asadi,2006;卡玛腺水螨Lebertia(Pilolebertia) carmamaya Cook,1967;光缘腺水螨Lebertia(Pilolebertia) porosa Thor,1900;刷毛腺水螨Lebertia(Pilolebertia) ciliate Jin,1997;梁氏腺水螨Lebertia(Pilolebertia) liangi Jin,1994;蓖齿毛腺水螨Lebertia(Pilolebertia) pectinate Guo et Jin,2005;拟刷毛腺水螨Lebertia(Pilolebertia) pseudociliata Guo et Jin,2005;齿触毛腺水螨Lebertia(Pilolebertia) ramiseta Jin,1994;三叉腺水螨Lebertia(Pilolebertia) trifurcilla Jin,1997。
  3.生物地理学区系分析
  作者根据目前手中所掌握的种类分布情况,基于Arcview GIS3.3软件针对腺水螨科在中国的分布情况做出了相关生物地理学区系分析,分析发现华北区、华中区和西南区的腺水螨数量较大,而东北区西藏区和华南区的腺水螨数量相对较小,相关研究有待继续加强。
[硕士论文] 黄振兴
动物学 贵州大学 2016(学位年度)
摘要:巨螯螨科Macrochelidae是中气门目Mesostigmata中较为丰富的类群,因其捕食能力强,具有在生物防治方面的巨大潜能,目前全世界对巨螯螨资源调查研究仍然十分活跃。本文综述了该科的研究历史,详细介绍了巨螯螨的分类特征;本研究以全面调查贵州巨螯螨科区系为基础,对之进行了系统的分类,详细描述了调查所获的各分类单元并绘制了种的全形态图,分析了贵州巨螯螨在中国及贵州动物地理区划中的区系特点。
  1.分类记述
  本文共记述巨螯螨科6属22种。其中6新种,3中国新记录种,贵州新记录种4种,3未定种,绘制了相应的全形态图。新分类单元和新记录单元如下:
  新分类单元6个:
  梵净山小全盾螨,新种Holostaspella fanjingshanensis sp.nov.
  遵义小全盾螨,新种Holostaspellazunyiensis sp.nov.
  瘤斑雕盾螨,新种Glyptholaspis tumour sp.nov.
  拟负乳巨螯螨,新种Macrocheles submammifer sp.nov.
  道真膺盾螨,新种Nothrholaspis daozhenensis sp.nov.
  巨毛巨盾螨,新种Macrholaspis macrotrichium sp.nov.
  中国新记录单元3个:
  伯氏小全盾螨,中国新记录Holostaspella berlesei Krantz,1967
  哈氏巨螯螨,中国新记录Macrocheles hallidayi Walter and Krantz,1986
  刻纹巨盾螨,中国新记录Macrholaspis punctatus Ishikawa,1967
  贵州新记录种4个:
  忽视雕盾螨,贵州新记录Glyptholaspis neglectus Bregetova,1977
  械腹雕盾螨,贵州新记录Glyptholaspis plumiventris Hull,1925
  簇毛巨螯螨,贵州新记录Macrocheles penicilliger Berlese,1904
  拟巴氏巨螯螨,贵州新记录Macrocheles subbadius Berlese,1904
  2.区系分析
  本文系统、全面地对贵州巨螯螨在中国动物地理区划和贵州动物地理区划中的分布进行了整理和分析。贵州巨螯螨种类丰富,地理分布集中,区系类型较复杂,其主要区系特征为:依中国动物地理区划,贵州巨螯螨有6类区系型,以华中区区系型成分占主要优势,与西南区区系的联系紧密,与东北区区系和蒙新区区系的联系较强,与青藏区区系的联系最弱。按贵州动物地理区划,贵州巨螯螨也可分为6类区系型,以黔中高原丘陵省区系型为主体,物种最丰富;黔北山原峡谷省区系型与黔东南低山丘陵省区系型次之,物种数分别居次位;各跨区区系型不具优势,种类较少。贵州巨螯螨区系面貌的定性特点为:典型的黔中高原丘陵省区系;与其它区系的关联强度依次为黔北山原峡谷省、黔东南低山丘陵省、黔南低山河谷省、黔西高原中山省区系。
[硕士论文] 高小贺
生态学 河北师范大学 2016(学位年度)
摘要:长角血蜱Haemaphysalis longicornis是一种专性吸血的体外寄生虫,世界范围内广泛分布,宿主种类多样、可携带多种病原体而导致疾病,对其防治研究具有重要的经济学和流行病学意义。伊维菌素(ivermectin)是由阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)发酵产生的半合成大环内酯类多组分抗生素,是一种新型的广谱、高效和低毒抗生素类抗寄生虫药,对寄生虫特别是线虫和节肢动物均有良好的驱杀作用。
  本研究对家兔注射不同浓度的伊维菌素,分别于兔耳饲喂长角血蜱成蜱、若蜱和幼蜱,记录蜱的叮咬率、吸血期、饱血体重、产卵前期、产卵量和死亡率等生物学参数,分析伊维菌素对长角血蜱生殖和发育的影响。结果表明,伊维菌素对蜱的叮咬率、吸血期和产卵前期无显著影响(p>0,05),对长角血蜱的饱血体重、产卵量、卵的孵化率、若蜱和幼蜱的死亡率有显著影响(p<0.05)。用超景深显微镜观察对照组和处理组雌蜱卵巢在饱血当天至产卵当天的形态学变化,发现处理组雌蜱卵泡发育不良,产生皱缩。测定伊维菌素长效性实验中,对家兔注射伊维菌素后7天、14天和21天,分别于兔耳饲喂长角血蜱成蜱,记录饱血体重、产卵量和孵化率生物学参数。结果表明,处理组和对照组无显著差异,说明伊维菌素对长角血蜱没有长效的防治效果。综合实验数据得出,伊维菌素对长角血蜱叮咬率无显著影响,对若蜱和幼蜱的死亡率有显著影响,对成蜱的死亡率无显著影响,但通过显著降低吸血量和产卵量抑制长角血蜱的发育和生殖,降低长角血蜱的数量。
[硕士论文] 孙彤晗
生态学 山东师范大学 2016(学位年度)
摘要:本文是根据前期河南省昆虫学会对河南昆虫普查时在大别山地区获得大量标本的基础上,从形态学、区系分析和支序分析三方面进行研究。结果如下:
  1、从本研究调查结果可以看出,河南大别山土壤甲螨物种较为丰富,共分离获得甲螨标本4074头,所鉴定标本隶属39科57属65种,其中含有3种中国新种:双毛全高壳甲螨Teleioliodes biciliatus、河南树穴甲螨 Truncopes henanensis、刻纹扇珠甲螨Licnodamaeus sculptrata;37种河南新纪录种。
  2、对鉴定出的65种甲螨进行区系分析表明,该地区土壤甲螨在世界地理区划中的归属可以划分为12个区系型。其中,归属于古北界—东洋界的共有种最多,共27个,占41.54%。古北界特有种共18个,占27.69%。东洋界特有种共5个,占7.69%。在中国动物地理区划中的归属共计23种类型。其中,华北区—东北区—华中区和华北区—东北区—西南区—华中区—华南区共有种均为7个,各占10.77%。华北区特有种6个,占9.23%。东北区特有种和华北区—东北区—华中区—华南区共有种均为5个,各占7.69%。由于河南大别山处于古北界与东洋界的交汇处,华北区与华中区的交汇处,所以古北界种和东洋界种相互渗透,华北区与华中区种也相互渗透,所以其物种多样性丰富。通过以上结果分析,可以看出河南大别山的土壤甲螨区系组成与其所处的地理位置基本相符,但也与我国土壤甲螨分类研究不平衡有关系。
  3、用PAUP软件对39科进行支序分析可知,卷甲螨科Phthiracaridae最靠近进化树根部,是甲螨亚目较早分化出来的一支。副大翼甲螨科Parakalumnidae和大翼甲螨科Galumnidae最远离进化树根部,且具有较多的衍征,是较晚分化的一支,也是较为高等的两个科。其余大部分科之间的亲远关系与目前传统形态学分类观点是一致的,个别科存在差异,主要原因有:性状不够多;对性状缺乏评估,特征选取的精确度较低;软件运行命令的选择有误差,导致对形状识别有先后顺序;资料受到限制以及部分资料年代久远等。所以本论文中对各科的系统进化关系现在所下结论并不完全正确,需要进一步从传统形态学、分子生物学等多方面的性状综合分析研究来确定各科间的进化关系。
[硕士论文] 李静
生态学 河北师范大学 2016(学位年度)
摘要:蜱是世界上仅次于蚊子的第二大吸血节肢动物。吸血过程中不但破坏宿主(包括人)皮肤组织造成多种病原体侵染,同时蜱类也是多种极其危险病原体的传播媒介,如伯氏疏螺旋体、粒细胞无性体、斑疹伤寒等。因此对其研究具有重要的意义。雌蜱在吸血过程中身体会经历巨大的变化,特别是交配完成后,雌蜱体积会迅速增大数十倍,最终依靠大量的血液提供原料和能量来完成产卵活动,因此全面了解蜱类不同吸血期的标志性分子对于分析这一物种特殊的生活史具有重要的意义。除此之外蜱类的重要器官----唾液腺具有特殊的生理机能,可以促进蜱类在短时期内大量吸血,因此解析唾液腺的分子机能对于全面了解并开展蜱类的综合防治具有重要意义。
  本研究采用高通量第二代测序技术(Illumina HiSeq2500)对饥饿期、交配前吸血期、交配后半饱期和饱血期的亚洲璃眼蜱进行了转录组测序,以期找到不同吸血期蜱类所表达的特殊基因,为全面了解蜱类吸血和交配过程中的生理机能奠定基础,同时该数据作为后期开展唾液腺的定量蛋白质组研究的Database,为全面分析唾液腺的生理机能奠定基础。测序结果共得到16.39 GbClean Data,各样品Q30碱基百分比均不小于82.91%。将Clean Data中的Reads进行拼接组装,共得到71586条Unigene。Unigene的N50为2109,预示着基因的组装完整性较高。将这些Unigene与Nr、Uniprot、GO、COG、KOG、KEGG、Pfam七个数据库分别进行BLAST比对,其中在Uniprot库中注释上相关功能的基因数为15414个,同时对差异基因进行GO分析,从“细胞组分”、“分子功能”和“代谢过程”三方面,来对亚洲璃眼蜱生长过程中出现的差异变化进行描述。最终将这些基因翻译成相应的氨基酸序列,作为定量蛋白质组学研究的Database。通过计算Unigene的FPKM值寻找亚洲璃眼蜱体内的表达基因,并比较同一Unigene在四个时期表达值的高低变化,共发现6448个在四个吸血时期均出现表达量变化的基因。同时利用iTRAQ定量蛋白质组学方法对四个吸血时期的雌蜱唾液腺中所有蛋白质进行了高通量定量研究,用114~117四标iTRAQ试剂分别标定四个吸血时期的雌蜱唾液腺蛋白,结果显示在这四个时期表达量均出现变化的蛋白有617个。通过对结果中差异蛋白的分析,使得我们能够更加全面的了解亚洲璃眼蜱唾液腺的生理机能,以及更深层次的调控机制和部分物质的代谢规律,为研究和探寻蜱类的综合防治提供了有力的理论支撑。
[硕士论文] 冯雪皎
生态学 河北师范大学 2016(学位年度)
摘要:长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)是我国常见种类,分布广泛,携带多种病原体,严重危害人类健康和畜牧业的发展。因此研究我国不同地理种群长角血蜱遗传多样性,有利于了解长角血蜱在我国的生存状况和发展趋势,从而对长角血蜱更有效的进行防控。本研究使用COI基因、16S rRNA基因和ITS2基因对采自河北小五台山地区、贵州茂兰地区、甘肃兰州地区和湖北武汉地区的长角血蜱种群进行了种群遗传多样性分析,结果如下:
  本研究共获得93条COI序列,片段为802bp。其中变异位点79个,序列未出现插入和缺失,A+T含量大于G+C含量,具有AT偏倚性。转换高于颠换,转换比颠换值为4.256。获得75条16S rRNA序列,片段为406碱基,变异位点为17个。序列中出现了缺失位点,A+T含量高于G+C含量,具有AT偏倚性。转换大于颠换,转换比颠换值为4.711。获得79条ITS2序列长为671碱基,变异位点32个,序列存在插入和缺失,其中G+C碱基所占比值高于A+T。转换高于颠换,转换比颠换值为3.756。长角血蜱的COI基因单倍型48个,其中共享单倍型两个占单倍型比例为21.5%。单倍型多样性为0.958,核苷酸多样性为0.00847。小五台山地区单倍型多样性最高。16S rRNA基因检测出单倍型12个,其中共享单倍型一个占单倍型的比例为81.3%。单倍型多样性为0.33838,核苷酸多样性为0.00112。武汉地区单倍型多样性最高。ITS2基因单倍型26个,共享单倍型两个占单倍型比例为68.4%。单倍型多样性为0.76371,核苷酸多样性为0.000327。兰州地区单倍型多样性最高。三个基因片段共享单倍型较少独享单倍型较多有着丰富的单倍性多样性,说明长角血蜱适应能力较强。使用COI基因、16S rRNA基因和ITS2基因对长角血蜱四个地理种群进行了FST值分析。其中COI基因四个地区之间的FST值均小于0.25,说明种群之间出现了一定的遗传分化,武汉地区和小五台山地区分化程度最高。16S rRNA基因四个地区之间的FST值均小于0.25,说明种群之间出现了一定的遗传分化,茂兰地区和小五台山地区分化程度最高。ITS2基因的部分FST值大于0.25,遗传差异较大是由于ITS2进化速率较快导致的结果,武汉地区和茂兰地区分化程度最高。对长角血蜱的3个基因进行了分子差异(AMOVA)分析,三个基因的变异均来自种群内部而非种群间。使用COI、16S rRNA和ITS2基因构建单倍型网络图和贝叶斯系统发育树。三个基因的单倍型网络图中单倍型和地理单元之间没有明显的对应关系,不同地理种群的单倍型相互混杂分布,未形成明显的地理格局。通过对三个基因的单倍型分别构建系统发育树,拓扑结构显示所有长角血蜱单倍型聚集形成一个分支,但未按对应的地理单元进行聚类,相互混杂,没有明显的地理分化结构使用COI基因、16S rRNA基因和ITS2基因对四个种群联合进行中性检验和错配分析。中性检验中COI基因Tajima's D值不显著,16S rRNA基因和ITS2基因Fu's FS值不显著说明种群未出现近期的扩张。COI基因错配分析图为双峰说明种群未出现种群扩张,但16S rRNA和ITS2基因错配分析图为单峰表明种群近期经历过种群扩张。这与中性检验结果不一致,可能由于其分析数据量不足造成的结果。
[硕士论文] 孙文英
生态学 河北师范大学 2016(学位年度)
摘要:长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)是专性吸血的体外寄生虫,在自然界中存在两性生殖种群与孤雌生殖种群,可携带多种病原体而导致疾病,给人类健康和畜牧业生产带来极大危害。防御素(defensin)是一种抗微生物肽,在动植物中广泛存在,尤其在节肢动物中,由于缺乏适应性免疫反应,防御素在其先天免疫防御过程中发挥重要作用,可以有效对抗入侵的病原体。蜱作为专性吸血的特殊类群,同样具有防御素家族多肽以抵御微生物或病原体的侵袭。
  本研究以长角血蜱孤雌生殖种群为研究对象,利用Clontech建库试剂盒和3'RACE的方法构建cDNA文库,分子克隆得到三条防御素基因,分别命名为Hp-defensin-1、Hp-defensin-2和Hp-defensin-3。开放阅读框大小分别为225bp、210bp和237bp,编码氨基酸个数为74、69和78,成熟肽长度分别为38、37和46,等电点分别为9.69、8.33和9.50。通过对Hp-defensin-1进行原核表达及功能分析,结果表明,长角血蜱Hp-defensin-1与边缘革蜱(ACJ04433.1)同源性最高,为75.68%。系统发育树表明,Hp-defensin-1基因序列与革蜱属(森林革蜱KJ885301.1)亲缘关系最近。荧光定量结果表明,Hp-defensin-1表达量在不同时期和不同组织存在显著性差异(P<0.05),大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌胁迫效果依次减弱。将Hp-defensin-1连入载体pET-32(a+),并转入BL21中表达,表达产物经SDS-PAGE电泳显示目的蛋白大小约23kDa,与预测大小一致。该多肽对革兰氏阳性菌具有广谱抗菌性,对部分革兰氏阴性菌和真菌也具有一定的抗菌活性。表达产物的抗氧化实验表明,该多肽对ABTS·+和DPPH·自由基具有很强的清除能力,具有很强的抗氧化活性,但不存在溶血活性,因此对健康的人血细胞无伤害,为新型抗菌药物的研发提供了基础。
[硕士论文] 王亚楠
动物学 上海师范大学 2015(学位年度)
摘要:蜱是一种常见的吸血体外寄生虫,给畜牧业和人类的健康带来了严重的影响。蜱的寄生会引起宿主失血、不安和皮肤损伤,同时在叮咬过程中蜱可以传播多种疾病。蜱叮咬可以诱发宿主产生炎症反应、凝血反应和免疫反应等,为了克服宿主的这些反应,蜱的唾液腺通过分泌一些生物大分子干扰宿主的反应,如抗凝血分子、免疫抑制分子和抗炎症分子等,这些分子有成为治疗血凝相关疾病,肿瘤,以及自身免疫性疾病的药物的潜力,其中蜱组胺结合蛋白(Histamine binding protein)就是这些分子中的一种。蜱组胺结合蛋白是由蜱的唾液腺分泌的具有特异性结合组胺的一类功能性蛋白的总称,是蜱的重要抗炎症分子之一。
  亚洲璃眼蜱隶属于硬蜱科璃眼属,为三宿主蜱,广泛分布于我国的西北部地区(新疆、内蒙、宁夏)以及中亚地区。本实验室成功从亚洲璃眼蜱唾液腺中克隆表达出组胺结合蛋白(Histamine binding protein of Hyalomma asiaticum,HaHBP)。为了进一步深入研究HaHBP的功能特点,在已有的实验数据的基础上对亚洲璃眼蜱唾液腺中的HaHBP进行了重组表达及生物学功能分析。首先,对实验室保存的pGEX-4T-1-HaHBP/BL21重组质粒的菌种进行活化,经扩大培养,16℃低温,1M IPTG诱导,GST树脂亲和层析纯化,获得了纯度较高的HaHBP-GST重组蛋白。其次,将编码HaHBP的基因片段克隆至真核表达载体pFastBacHTa,将重组质粒转化至 DH10Bac感受态细胞中,构建重组杆粒rBac-HaHBP,转染至sf9昆虫细胞,进行重组蛋白的表达纯化。经SDS-PAGE、Western blot和IFA检测结果表明,HaHBP在Bac-to-Bac杆状病毒系统中稳定表达,重组蛋白大小与预期一致。将原核表达和真核表达的HaHBP重组蛋白在不同浓度梯度的条件下与HRP-histamine共同孵育,进行组胺结合实验,结果表明,两种表达系统所表达的重组蛋白都具有组胺结合的能力。最后,分别通过涂抹和滴鼻给药的方法探究HaHBP对二甲苯诱发小鼠耳肿模型和OVA诱发的小鼠哮喘模型的作用效果,实验结果表明,HaHBP对小鼠的耳肿和哮喘都具有一定的抑制作用。综上所述,本研究对组胺结合蛋白(HBP)的表达和生物学功能进行了初步探究,为研究新型蜱源抗组胺药物提供了新的思路。
[硕士论文] 蒋志强
动物学 贵州大学 2015(学位年度)
摘要:本文对贵州省囊螨科Ascidae区系进行了分类研究及资源特点分析。文中综述了中国以及贵州省该科的分类研究、研究目的和意义,介绍了囊螨科的分类特征;在对贵州调查所获囊螨科标本进行系统分类的基础上,分析了贵州已知囊螨的区系特征,探讨了贵州囊螨分布与环境条件的关系。
  1.新分类单元
  文中共整理囊螨科4属11种,其中详细记述6新种(已发表2种),并绘制了相应的形态特征图;编制了贵州省囊螨科种属检索表。
  记述的6新种如下(上标?者为待发表):
  贵州囊螨Asca guihzouensis sp. nov.?
  多齿蠊螨Blattisocius multidentatussp.nov.
  囊毛绥螨Lasioseius scrotiformis sp.nov.?
  两孔毛绥螨Lasioseius biporosus sp.nov.
  长板毛绥螨Lasioseius dolichospathus sp.nov.
  凹形毛绥螨Lasioseius concavus sp. nov.
  2.区系特征
  本文整理了贵州囊螨科种类在中国和贵州动物地理区划中的分布资料,对该科中国区系特征和贵州区系特征进行了分析。结果表明,中国现分布的贵州囊螨科11种中,仅华中区含8特有种。如果将跨区种计算在内,华中区最多,分布有11种,占总种数的100%;其次,蒙新区、华北区、华南区各分布有2种,各占总种数的18.2%;再次是东北区,分布有1种,占总种数的9.1%;西南区、青藏区均无分布。由此可见,贵州囊螨科在中国动物地理区划中,在种级水平上,以华中区为主,蒙新区、华北区和华南区次之。
  在贵州现分布的贵州囊螨科11种中,黔中山原丘陵省含5特有种,黔南低山河谷省含2特有种。如果将跨区种计算在内,黔中山原丘陵省最多,分布有9种, 占总种数的81.8%;其次,黔南低山河谷省分布有5种,各总种数的45.5%;再次是黔东低山丘陵省分布有2种,占总种数的18.2%;黔西高原中山省、黔北中山峡谷省均无分布。由此可见,贵州囊螨科在贵州动物地理区划中,在种级水平上,以黔中山原丘陵为主,黔南低山河谷省和黔东低山丘陵省次之。
  3.贵州囊螨分布与地形地貌及气候条件的关系
  本次调查共涉及贵州省7个市(州)18个县(区),基本涵盖了贵州省绝大部分地形地貌.。贵州省囊螨科4属11种主要分布于贵州中部及东南地区,该区域气候主要受云贵准静止锋影响降雨量充沛,且纬度较低热量条件丰富具备南亚热带的气候特征,其地貌类型为丘陵河谷地带,造就了贵州省独特的中亚热带常绿阔叶林植被类型,南部河谷地区发育了沟谷季雨林和具有热带成分的常绿阔叶林,同时该区域自然保护区繁多,为物种的进化发育提供了极好条件。
  囊螨的许多种类已经在生物防治方面得到广泛研究,本研究在贵州省中部和东南部地区发现的囊螨新种均为这些已研究种的同属种类,是具有生物防治应用潜在价值的新资源。
[博士论文] 孟浩
生态学 河北师范大学 2015(学位年度)
摘要:嗜群血蜱Haemaphysalis concinna广泛分布于中国、俄罗斯、法国和德国等欧亚大陆地区,传播伯氏疏螺旋体、森林脑炎病毒、立克次氏体和克里米亚-刚果出血热病毒等多种病原体。美洲花蜱Amblyomma americanum主要分布于美国东南部和墨西哥湾沿岸地区,近年来其分布范围和种群数量迅速增加,在美国东南部、中南部、中西部以及东部沿海地区均已发现美洲花蜱的存在。美洲花蜱传播立克次氏体和土拉杆菌等多种病原体,成为美国公共卫生领域最为重要的蜱种。
  本研究在中俄边境额尔古纳国家级自然保护区,利用野外可控自然环境研究了嗜群血蜱的生活史及其生物学特性。嗜群血蜱的生活史在其自然栖息地的可控样方中完成。以新西兰白兔Oryctolagus cuniculus domestica作为嗜群血蜱各发育阶段的宿主,在野外可控样方内观察其季节发生及行为。结果表明,嗜群血蜱的生活史即从饥饿成蜱到下一代饥饿成蜱出现的时间范围是124~186天(平均153.1天),此数据与实验室条件下明显不同。卵的孵化期在其各发育阶段所需时间最长,需要39~57天(平均41.3天)。饱血雌蜱的产卵量与饱血体重呈正相关(r=0.8562,p<0.001)。雌蜱的生殖效率指数和生殖适合度指数分别为6.2和4.3。调查了野外条件下嗜群血蜱各发育阶段的季节活动及数量变化。结果显示嗜群血蜱主要分布于灌木丛和草地。成蜱主要在2月~10月活动,高峰出现于6月。幼蜱在4月底到9月底活动,在7月底出现活动高峰。若蜱出现于3月至10月,并于7月上旬达到活动高峰。羊体主要有成蜱和若蜱的寄生且主要寄生于羊体的头部和耳朵,而幼蜱仅发现在啮齿动物体——大林姬鼠Apodemus peninsulae和花鼠Eutamias sibiricus寄生。
  成功建立了人工膜饲养美洲花蜱的方法。利用此方法,实验得到美洲花蜱的叮咬率为66.7~85.7%(平均80.4%)。未成功叮咬到人工膜上的美洲花蜱5~6天死亡。雌蜱需要10~19天(平均15天)时间饱血脱落。饱血后,需要7~18天(平均10天)的产卵前期,卵的孵化期达到两个月。雄蜱经常更换叮咬位置,先吸血后再和雌蜱进行交配。测试了Resultz和Tick Safe Release(Tick-SR)两种化学药物对美洲花蜱成蜱的致死率和脱落率。使用不同剂量的Resultz对叮咬在人工膜上的雌蜱进行处理,得到30 min、60 min、5h和24 h四个不同时间点美洲花蜱雌蜱的死亡率,并对结果数据统计分析。同样使用不同剂量的Tick-SR对叮咬在人工膜上的美洲花蜱雌蜱进行处理,得到30 sec、5min、30 min和60min雌蜱的脱落率,对结果数据统计分析。利用电生理技术检测到两种化学药物对美洲花蜱吸血电信号的影响。测得美洲花蜱吸血活动的两种电生理信号,命名为波峰1和波峰2,波峰1为美洲花蜱吸血时唾液腺分泌活动的电信号,波峰2为美洲花蜱吸血时口器的吮吸活动的电信号,且波峰1和波峰2呈现出明显的规律性。施加Resultz后,吸血活动的电信号停止;施加Tick-SR后,蜱的身体活动电信号明显增强,直至从人工膜脱落。
  测试了8种植物精油对美洲花蜱若蜱的驱避作用。8种植物精油分别为牛至、百里香、丁香、岩石、草檀香、桂皮、雪松和薄荷的提取物。结果显示,此8种植物精油的驱避效果与避蚊胺相比较,牛至的效果接近避蚊胺,其50%的驱避浓度为0.113,95%置信区间为0.09~0.14;而避蚊胺为0.020,95%置信区间为0.02~0.03,其50%的驱避浓度的95%置信区间不重叠,即彼此之间活性差异显著(p<0.05);丁香50%的驱避浓度为0.122,且其50%的驱避浓度的95%置信区间与避蚊胺不重叠,即彼此之间活性差异显著(p<0.05),与牛至的95%置信区间有重叠,即其与牛至之间活性差异不显著(p>0.05);百里香、岩石草、檀香、桂皮、雪松和薄荷的50%驱避浓度分别为0.132,0.133,0.147,0.205,0.224和0.297;95%置信区间分别为0.11~0.16,0.10~0.17,0.10~0.20,0.16~0.27,0.17~0.31和0.23~0.39,均与避蚊胺不重叠,即彼此之间活性差异显著(p<0.05)。
[博士论文] 张学潮
生物化学与分子生物学 浙江大学 2015(学位年度)
摘要:全沟硬蜱(Ixodes persulcatus)是中国东北地区优势蜱种,同时也是蜱媒疾病主要传播媒介。作为一种专性吸血的外寄生虫,血餐摄取不仅对其生活史的完成至关重要,同时也影响着病原菌和微生物群落的增殖与传播。目前,对于全沟硬蜱血餐过程中生理生化和微生物群落变化的研究匮乏,对其携带的病原菌致病机制更是知之甚少。
  本文针对以上问题进行探索性研究,并得到以下结论:⑴利用Illumina测序技术获得全沟硬蜱参考转录组(含有56900条unigene),并首次发现全沟硬蜱可能是利什曼原虫(Leishmania)载体;⑵分别比较了全沟硬蜱不同吸血阶段表达谱,发现其吸血过程中基因表达显著改变,其中未吸血和半饱蜱虫之间差异表达的unigene有12332条,半饱和饱血蜱虫之间差异表达的unigene有3261条。经GO富集分析发现差异表达基因在与血液摄取、营养代谢、呼吸、激素合成、卵发育、免疫反应、活性氧解毒、转录翻译相关的生理过程中显著富集;⑶深入分析了全沟硬蜱代谢解毒酶系和抗氧化酶系,发现这些超基因家族出现物种特异性扩增,且在应对血餐摄取和消化过程中激增的外源物质和氧压时发挥重要作用;⑷利用16S rRNA V4区Hlumina测序全面分析了全沟硬蜱吸血前后微生物群落的变化以及蜱虫叮咬后大鼠血样中微生物群落组成。分别在未吸血蜱虫、饱血蜱虫、大鼠血样中检测出了373、289、441个菌属的细菌,其中237个菌属是该三个样本共有的,推测这些细菌可能是吸血过程中经由蜱虫传播给宿主的潜在致病菌;⑸以蜱传莱姆病螺旋体Borrelia burgdorferi B31A3)为模型,初步分析了病原菌在血餐过程中感染哺乳动物的致病机制。通过基因敲除和动物模型实验分析了莱姆病螺旋体的六个编码蛋白(BBA68-BBA73),发现蛋白BBA68、BBA69、BBA71可能是感染哺乳动物必需的致病因子;⑹制备了两种基因型莱姆病螺旋体(B.burgdorferi B31 A3和B.garinii NMJW1)全菌抗血清,并利用获得的抗血清成功地对莱姆病螺旋体抗原片和幼蜱中肠病原菌进行了血清学检测;此外还利用免疫印迹法,以两种基因型莱姆病螺旋体(B.burgdorferi B31A3和B.garinii NMJW1)全菌裂解物作为抗原,检测全沟硬蜱叮咬后一个月大鼠血清的抗体反应,并分析了不同基因型全菌抗原检测到的特异条带之间的差异。
[硕士论文] 苏晓会
农业昆虫与害虫防治 西南大学 2014(学位年度)
摘要:本文采用传统分类方法对河南、重庆、云南、贵州地区寄生于鸟类羽毛上的羽螨总科的螨类进行了形态和分类上的研究。所用标本来自作者野外采集和朋友馈赠,标本现存于西南大学植物保护学院昆虫标本馆。本论文回顾记述了中国羽螨的分类研究历史的概况,因我国羽螨分类研究较少,为适应蜱螨学研究的发展速度,本文以采自国内部分地区的鸟类羽螨为主,运用K-400体视解剖镜和光学显微镜对标本进行了形态观察和描述。
  全文共研究、整理、鉴定和记述我国羽螨7科、14属、40种。其中包括4个中国新纪录属,23个新种,5个中国新记录种,描述了这些种的形态特征,对标本进行拍摄,绘制特征图,分述如下:
  (1)中国新纪录属:Strelkoviacarus Dubinin,1953、Dubininia Vassilev,1958、GymnalloptesGaud,1968、Neocalcealges Orwig,1968。
  (2)新种:背裂前毛螨Proterothrix fractura sp.nov.、灰背伯劳尾叶羽螨Proctophyllodestephronotussp.nov.、巨板尾叶羽螨Proctophyllodes plate sp.nov.、红尾鵙尾叶羽螨Proctophyllodes auroreus sp.nov.、灰喜鹊尾叶羽螨Proctophyllodes cyana sp.nov.、栗臀鳾尾叶羽螨Proctophyllodes nagaensis sp.nov.、大坪尾叶羽螨Proctophyllodes dapingensis sp.nov.、柳叶尾叶羽螨Proctophyllodes salices sp.nov.、板凸尾叶羽螨Proctophyllodes sublato sp.nov.、白领凤鹛尾叶羽螨Proctophyllodes bakeri sp.nov.、海螺尾叶羽螨Proctophyllodes council sp.nov.、相思鸟羽螨Analges argentauris sp.nov.、黄雀羽螨Analges spinus sp.nov.、乌鸫羽螨Analges merula sp.nov.、白鹡鸰羽螨Analges alba sp.nov.、黄腹山雀羽螨Analges monticolus sp.nov.、秧鸡羽掌螨Analloptes aquaticus sp.nov.、曲靖羽掌螨Analloptes qujingensis sp.nov.、虎皮鹦鹉羽掌螨Dubininia undulates sp.nov.、锯齿特鲁螨Neocalcealges acutissima sp.nov.、丽色噪鹛皮螨Passeroptes formosus sp.nov.、棕噪鹛皮螨Passeroptes poecilorhynchus sp.nov.、喜鹊皮螨Passeroptes picae sp.nov.。
  (3)中国新记录种:野鸡尾叶羽螨Proctophyllodes pheuctici Atyeo,1966、白鹡鸰尾叶羽螨Proctophyllodes motacillae Atyeo,1966、西塔羽螨Analgopsis sittae Mironov,1985、梅氏羽掌螨Dubininia melopsittaci Atyeo,1987、树鹛特鲁螨Calcealges malayensis Orwig,1968。
  模式标本均保存于西南大学植物保护学院昆虫研究所。
[硕士论文] 王利娟
森林保护学 四川农业大学 2014(学位年度)
摘要:大麦虫Zophobas morio属昆虫纲insecta、鞘翅目Coleoptera、拟步甲科Tenebrionidae、Zophobas属昆虫。与熟知的黄粉虫幼虫、蚕蛹、蟋蟀、白蜡虫和家蝇相比,大麦虫的蛋白质、氨基酸和能量均居首位,具有很高的营养价值。大麦虫现在开发利用领域较窄,主要作为高档宠物的饵料,也有报道称大麦虫可以降解塑料制品。大麦虫作为高蛋白生物,还有广泛的开发利用空间,但目前大麦虫的生物学、生理生化和人工饲养研究还不够深入,规模化人工养殖技术也不够成熟。为给大麦虫规模化人工养殖提供必要的理论依据和技术参考,本文研究了大麦虫幼虫和成虫的人工饲养条件,并对其生长发育性状和繁殖能力进行了评价,主要结论如下:
  1.大麦虫幼虫青饲料筛选结果以麦麸为基础饲料,胡萝卜、西瓜皮、莴笋叶、白菜叶为青饲料,饲喂60d大麦虫幼虫,结果发现,“麦麸+白菜叶”饲喂的大麦虫幼虫生长速度显著大于其它各试验组,并且以“麦麸∶白菜叶=6∶4”的试验组生长速度最快。
  2.大麦虫幼虫不同发育阶段的饲养条件研究结果以不同发育阶段大麦虫幼虫(0-30d、30-60d、60-90d)的平均生长速度为目标函数,选择鱼粉比例、豆粉比例、青饲料比例、料层厚度及饲养密度五个因素进行正交设计饲养试验,结果表明:
  鱼粉、豆粉、青饲料比例及饲养密度对0-30d大麦虫幼虫生长速度有极显著影响,饲料厚度对该阶段幼虫生长速度影响不显著,上述各因子对0-30d大麦虫幼虫生长速度的影响主次顺序为:青饲料比例>豆粉比例>鱼粉比例>饲养密度,经多重比较并结合饲养成本,最终筛选出0-30d大麦虫幼虫最佳饲养条件为A3B3C3D2E2。
  鱼粉、豆粉比例对30-60d大麦虫幼虫生长速度影响显著,青饲料比例和饲养密度对该阶段幼虫生长有极限著影响,饲料厚度对该阶段幼虫生长影响不显著,影响30-60d大麦虫幼虫生长速度的因子主次顺序为:饲养密度>青饲料比重>豆粉比例>鱼粉比例>饲料厚度。经过多重比较,筛选出30-60d大麦虫幼虫最佳饲养条件为A3B3C3D3E2。
  鱼粉比例及饲养密度对60-90d大麦虫幼虫生长速度有极显著影响,豆粉比例对该阶段大麦虫幼虫生长速度有显著影响,影响60-90d大麦虫幼虫生长速度的因子主次顺序是:饲养密度>鱼粉比例>豆粉比例>饲料厚度=青饲料比重。经多重比较,筛选出60-90d大麦虫幼虫最佳饲养条件为A2B3C3D3E3。
  上述3个不同发育阶段幼虫的饲养结果表明,不同发育阶段的大麦虫幼虫对饲养条件的要求有差别。其中,青饲料比例和豆粉比例是影响0-30d大麦虫幼虫生长发育的重要因素;饲养密度和青饲料比例是影响30-60d大麦虫幼虫生长发育的重要因素;饲养密度和鱼粉比例是影响60-90d大麦虫幼虫生长发育的重要因子。
  3.光照条件和青饲料种类对大麦虫成虫产卵的影响将大麦虫成虫置光照时间∶黑暗时间=12h∶12h及完全黑暗两种光照条件下饲养,结果发现完全黑暗饲养组成虫的产卵量显著高于12h光照∶12h黑暗饲养组;选择添加时令蔬菜或果皮(白菜叶、莴笋叶、胡萝卜和西瓜皮)饲喂大麦虫成虫,结果发现,饲喂不同种类青饲料成虫的产卵量差异显著:白菜叶组>莴笋叶组=胡萝卜组>西瓜皮组。
  4.大麦虫成虫饲养条件优化选择完全黑暗条件下饲养,以麦麸为基础饲料、白菜叶为青饲料,考查饲料中的鱼粉、豆粉和青饲料比例及饲料厚度和饲养密度对大麦虫成虫产卵量的影响,结果表明,鱼粉、豆粉和青饲料比例及饲料厚度和饲养密度对大麦虫成虫产卵量有极显著影响,各因子对大麦虫成虫产卵影响的主次顺序为:饲料厚度>饲养密度>豆粉比例>鱼粉比例>青饲料比重,最后经多重比较筛选出大麦虫成虫产卵的最佳饲养条件为A2B2C3D3E3。
  5.大麦虫发育历期评价选择大麦虫0日龄卵置25-30℃、相对湿度50%-90%条件培养至成虫,同时以黄、黑两种色型黄粉虫作参比,分别比较它们从卵到成虫各阶段的发育历期。结果表明,大麦虫的卵期、幼虫期、蛹期及由卵→成虫羽化的总历期分别为9.33d、82.67d、8.53d、100.53d;黑色型黄粉虫的卵期、幼虫期、蛹期和卵→成虫羽化的总历期分别是8.67d、62.93 d、6.00 d、78.06 d;黄色型黄粉虫卵期、幼虫期、蛹期、卵→成虫羽化的总历期分别是8.73d、60.40d、5.87d、75.80 d;方差分析表明,大麦虫的卵期、幼虫期、蛹期及卵→成虫羽化的总历期极显著大于两种色型黄粉虫。
  6.大麦虫幼虫发育进度评价在25-30℃、相对湿度50%-90%条件下,大麦虫幼虫历经11-16龄不等,黑色型黄粉虫幼虫历经11-12龄,黄色型黄粉虫幼虫历经10-12龄。与黄、黑两种色型黄粉虫相比,大麦虫幼虫发育极不整齐。
  7.大麦虫幼虫存活率及生长发育速度评价相同饲养条件下0-60d大麦虫幼虫的存活率和生长速度显著高于黄、黑两种色型黄粉虫同日龄幼虫的存活率和生长速度。
  8.大麦虫饲料利用率评价相同饲养条件下,同日龄的大麦虫幼虫和两种色型黄粉虫幼虫的平均饲料利用率差异不显著。
  9.大麦虫的孵化率、化蛹率、羽化率评价相同饲养条件下,大麦虫卵孵化率为74.20%,显著低于黄、黑两种色型黄粉虫卵的孵化率;大麦虫幼虫化蛹率为92.80%,显著低于黑、黄两种色型黄粉虫幼虫的化蛹率;大麦虫蛹的羽化率98.00%,极显著大于黄色型黄粉虫蛹,但与黑色型黄粉虫蛹的羽化率差异不显著。
  10.大麦虫成虫的雌性比、成虫寿命及繁殖力评价大麦虫成虫的雌雄比为0.93,显著低于黄、黑两种色型黄粉虫成虫的雌雄比;大麦虫雌、雄成虫的平均寿命分别为89.00d和102.27d,显著大于黄、黑两种色型黄粉虫雌、雄成虫的平均寿命;大麦虫成虫的平均产卵量为1083.47粒/雌,极显著高于两种色型黄粉虫的产卵量。
[硕士论文] 王培
生态学 南昌大学 2014(学位年度)
摘要:加州新小绥螨(Neoseiulus californicus)隶属于植绥螨科 Phytoseiidae、新小绥属 Neoseiulus,是我国本土发现的新记录种。本论文研究了加州新小绥螨及其猎物朱砂叶螨种群的迁徙扩散行为,主要内容和结论如下:
  (1)加州新小绥螨的室内迁徙、扩散实验表明:加州新小绥螨的扩散速度与其猎物密度呈负相关,当其所在生境中猎物密度越高,捕食螨迁徙所用时间越长;加州新小绥螨的扩散速度与其取食经历有关,当加州新小绥螨处于饥饿状态时,会显著延长其停留在原有生境中的时间,猎物密度越高,现象越明显;当加州新小绥螨自身密度较高时,其饥饿状态下扩散离开原有生境的时间与低密度的群体相比显著降低,但在低猎物密度下不明显,说明其扩散还是与可利用食物的丰富程度有关;不同螨态的加州新小绥螨雌螨(雌成螨与雌后若螨)在不同环境下扩散速度无明显区别;捕食螨的捕食量与扩散所用时间呈显著地正相关(相关系数为0.713)。
  (2)加州新小绥螨与朱砂叶螨室外释放时种群密度变化结果:当叶螨单独存在时,其密度在试验期间随着时间的推移而增加,最大种群密度为初始释放密度的约13.12倍;当捕食螨单独存在时,密度持平,可维持种群至少15天;当叶螨和捕食螨共同存在时,叶螨密度受到抑制,呈现先缓慢增加再减少的变化趋势;在第6到9天时达到峰值,此时种群密度仅为无捕食螨释放时峰值种群密度的5﹪;捕食螨密度随叶螨密度的变化而波动,高峰出现时间较叶螨密度高峰出现时间推迟约3到6天,峰值时种群密度约为初始释放密度的3.67倍。当释放益害比较低时,叶螨种群下降趋势加快,捕食螨种群增加加快。
  (3)加州新小绥螨与朱砂叶螨室外释放时种群分布变化结果:叶螨与捕食螨的分布:叶螨与捕食螨都呈聚集分布,通过泰勒幂法则得出叶螨整株数目方差与一株每片叶子平均数关系为:y=3.8x1.7,捕食螨为:y=1.3x1.8;当叶螨单独存在时,初花期时主要分布于植株下部,相对中位高度为0.28(即从地面往上28﹪株高处),中位高度为植株的第3~4片叶(每株共13片叶),随着时间推移,中位高度缓慢增高,相对中位高度略有减少,可见叶螨的迁移速度低于黄瓜植株的增长速度,旺盛期时,相对中位高度为0.58,中位高度为植株的第10~11片叶(每株共18片叶),高于初花期,推测原因是黄瓜植株底部叶片大量衰老,不能给叶螨提供充足食物;当捕食螨存在时,叶螨的分布未受明显影响,与叶螨单独存在时分布情况基本一致;捕食螨单独存在时,主要分布于植株上部,初花期时相对中位高度为0.81,旺盛期时相对中位为0.75,可能是捕食螨具有趋光性;当叶螨存在时,初花期时捕食螨相对中位高度为0.31,旺盛期时捕食螨相对中位高度为0.64,明显低于无叶螨存在时,且与叶螨的相对中位高度呈现相关性(相关系数为0.75),可见捕食螨有往高密度猎物处扩散的趋势。
[硕士论文] 李浩森
农业昆虫与害虫防治 南京农业大学 2014(学位年度)
摘要:瘿螨是一类世界性分布的植食性螨类。它们的种类繁多,目前超过4000个种类被报道。瘿螨对寄主高度专化,其中有约80%的种类仅仅被报道于一种寄主植物上。对比其它蜱螨亚纲的类群,瘿螨的个体微小,形态结构特殊。瘿螨的经济重要性仅次于叶螨,有些种类是农业害虫,又有些种类可以用于杂草的生物防治。因此,精准、快速的瘿螨分类需求不断增加。瘿螨的种内进化往往表现出寄主关联特性,这种现象被当作自然选择导致物种分化与成种的重要证据。
  之前的瘿螨分类学研究几乎全都基于形态学。然而,如果用于分类鉴定的形态特征是来自与同型进化的,那么所建立的分类系统就不能反映正确的类群内系统发育关系。因此,从另一个角度使用分子系统学方法重建瘿螨总科内的系统发育关系。选取了3个来自rRNA的分子标记和112个代表分类单元,使用贝叶斯、最大似然和最大简约的方法重建瘿螨总科系统发育。根据进化树内部良好的拓扑结构与分类单元形态特征的比较,重新修正一系列支系。对原瘿螨总科分类系统的单系测验的结果否认了其中3个科、1个亚科和4个族的单系性。祖征重建的结果表明了有5个用于分类鉴定的形态特征经历了多次独立进化,这是现行分类系统存在问题的关键。另外,瘿螨的寄主转移历史重建的结果表明寄主转移的发生局限于一定寄主范围内,这种寄主关联现象可以对瘿螨分类带来帮助。上述结果显示,通过综合形态特征、分子序列及寄主信息,可以制定出更准确的瘿螨分类系统,以及能对瘿螨的系统发育和进化有更深入的认识。
  瘿螨在形态上与蜱螨亚纲或真螨目的其他类群相比差异极大,这一进化上的间断发生的时间及其原因目前仍未得到合理解释,尤其是新发现的三叠纪的瘿螨化石,可不再认为瘿螨是近期衍生的。在瘿螨宏进化寄主关联的规律被证实后,可推测瘿螨的进化事件是由其寄主植物的进化事件所促成的。为了解决上述两个科学问题,本研究选取了18S rRNA全长序列作为分子标记,重建瘿螨总科及其相关外群的系统发育关系,并根据进化树的拓扑结构以及化石记录的校正,推算瘿螨起源与进化中若干个重要历史事件的时间。本研究结果支持瘿螨总科隶属于真螨目,但瘿螨与该目当中其它成员的亲缘关系尚不明确。通过比较瘿螨与寄主植物的进化历史,能合理地解释包括泥盘纪裸子植物起源、白垩纪被子植物爆发及白垩纪-第三纪大灭绝等重要历史事件对瘿螨起源和三大支系分化和各自辐射的驱动作用。“多样化促成多样化”,即寄主植物的多样化促使了其寄生者瘿螨的多样化。然而,外群资源少以及地区特有的瘿螨种类的缺乏或许使本研究变得片面。期待有更丰富的种类样本和更客观的同源证据,去追溯瘿螨的起源与进化历史。
  瘿螨在全球广泛地分布,几乎是有陆生植物的地方就有瘿螨的存在。由于瘿螨与其寄主的紧密关系,瘿螨的区系分布需要重点考虑各个区系的植被情况。根据分子系统发育的分析结果,本研究统计出4个瘿螨分类类群在6个世界动物分类区系的分布情况,意在反映区系的植被种类与丰度对瘿螨种类与丰度的相关性。本文也不否认其它生态因子及地理隔离对瘿螨分布格局的影响。然而,现阶段瘿螨种类调查的不充分性和地区不平衡性是本区系研究的局限。
  分子标记在揭示出瘿螨隐存成种事件上有独特优势,并且这种隐存分化往往是寄主关联的。但是不同的序列数据往往得出不同的隐存种鉴定结果。本研究使用形态测量(32个形态数量特征)、线粒体(16S rRNA)和核(28S rRNA)分子标记来判断来自不同寄主和地点的山楂四瘿螨Tetra pinnatifidae可能的隐存种。基于分子标记的结果将该形态种区分出若干个支系,尽管这些支系在形态测量上没有表现差异。16S分子标记的结果支持各支系为独立的隐存种且支系内部存在寄主关联的分化。相对的,28S并不支持16S的隐存种鉴定结果,且支系内存在种群间共享的单倍型,说明寄主种群间可能存在基因流。高水平的线粒体基因分化以及低水平的核基因分化揭示出该山楂四瘿螨种群的分化处于非常初级的阶段。
  目前已有若干个瘿螨种类表现出寄主关联差异现象,即寄生在不同寄主的种群在包括遗传水平在内的多方面存在差异。寄主植物对这些瘿螨的分化成种初级阶段起重要的作用。之前的研究表明瘿螨的寄主关联差异现象可以通过形态测量和分子标记的方法检测出。本研究假设来自中国三个不同茶区的茶橙瘿螨Acaphylla theae和龙首丽瘿螨Calacarus carinatus种群间存在寄主关联差异现象,并通过分子标记的方法检验该假设。由于不同茶区种植着不同的近期辐射的荼品种,因此预测这两个寄主专化的瘿螨种类会对应地发生分化。然而,在使用基于两个分子标记的K2P遗传距离比较、单倍型网状图分析种群配对FST和AMOVA后,并未发现瘿螨的寄主植物与其遗传多样性存在联系。此外,检测到这些种群间只存在极低的单倍型多样型和核苷酸多样性,以及不存在地理分化的结构。这种不同寄主种群间寄主关联差异现象的缺失很可能说明了这两个瘿螨种类是多种茶品种间的广食者。种群间低水平的遗传多样性暗示着这两个瘿螨种类近期迁入并通过频繁的人为经济活动而被动扩散的历史。
  自然选择对物种的分化与成种初级阶段有重要的影响,而这一认识能够体现在瘿螨形态种内的寄主关联差异(host-associated differentiation,HAD)现象上,即不同寄主对其寄生者产生不同的选择压力,致使瘿螨表现出遗传水平的差异。尽管目前已有不少的证据说明瘿螨寄主关联现象,然而HAD现象的缺失、地理隔离因素的卷入及研究种类对象局限使得可能对瘿螨与寄主间关系的理解出现偏差。本研究尝试从群落的层面上理解瘿螨进化与寄主关系的普遍规律。实验选取两个分子标记,对中国东洋界裸子植物瘿螨群落的14个形态种作种群遗传结构分析,发现即便在相似的寄主环境下,瘿螨的HAD现象亦非普遍。尽管地理隔离能对瘿螨造成分化,但频繁的被动迁移使得地理种群依然有机会交流。本论文将瘿螨间遗传多样性的差异归因于其寄主转移的历史和其寄主的进化历史的差异,即瘿螨在稳定的寄主环境下稳定选择,而在多变的寄主环境下表现出多种进化规律。
[硕士论文] 乔瑞琼
动物学 上海师范大学 2014(学位年度)
摘要:蜱是以吸血为生的蛛形纲体外寄生虫,是全球范围仅次于蚊子的第二大病原传播媒介。蜱能够传播多种病原体,这些病原体能引起人、驯养动物以及野生动物严重的疾病,甚至导致死亡。经蜱传播的病原体有真菌、病毒、立克次氏体、螺旋体、细菌和原虫等。在畜牧业生产中,蜱及蜱传病是造成巨大经济损失的重要疾病。亚洲璃眼蜱是三宿主蜱,广泛分布于我们的新疆、内蒙和宁夏以及中亚各地区,可传播新疆出血热和Q热。控制蜱的传统方法是使用杀虫剂,但药物残留等问题日益突出,因此寻求更加健康环保的抗蜱方法迫在眉睫。
  蜱在吸食血液的过程中唾液腺会分泌大量活性物质,这些活性物质可阻碍宿主的凝血功能、调节宿主免疫应答及促进病原体的发育繁殖,对蜱成功饱血及病原体传播作用重大。因此,唾液腺中的活性物质是蜱研究的重点内容。在生物的凝血过程中,丝氨酸蛋白酶是一类极为重要的功能分子,同时,机体也存在丝氨酸蛋白酶的负调控分子——丝氨酸蛋白酶抑制分子。Kunitz家族蛋白是一类重要的丝氨酸蛋白酶抑制分子,普遍存在于多种生物体内,拥有一个或多个Kunitz结构域,具有抗凝血等生物性功能。有研究已证明,Kunitz是肩突硬蜱唾液腺中含量最丰富的蛋白质之一,蜱利用Kunitz蛋白与其他唾液腺蛋白共同抵抗宿主的凝血和免疫反应,促进饱血过程。亚洲璃眼蜱唾液腺Kunitz蛋白还缺少研究。
  本实验通过基因克隆的方法从亚洲璃眼蜱唾液腺中获得两个含Kunitz功能域的分子B26和P15。为探明B26和P15基因的生物学作用机制和特点,本研究将这两个基因进行原核表达,获得这两个基因编码的抗凝血活性物质,并对其活性进行初步研究。同时检测其在蜱不同发育阶段及各组织器官表达特征。然后通过免疫保护和抗蜱疫苗试验对其编译的抗凝血物质进行动物活体验证。最后运用RNAi沉默基因,进一步分析B26和P15基因对亚洲璃眼蜱的吸附率、饱血时间、饱血重量等吸血功能相关指标的影响。结果表明P15融合蛋白对Trypsin有明显抑制作用。与GST蛋白相比,B26融合蛋白的APTT凝血时间明显延长,P15融合蛋白的APTT凝血时间有一定的延长但差异不明显。动物疫苗实验表明:免疫P15融合蛋白的兔子接种若蜱后,24h吸附率和饱血时间明显降低(P<0.001),免疫B26融合蛋白的兔子接种若蜱后,饱血重量明显降低(P<0.001)。RT-PCR结果表明B26基因在幼蜱阶段和唾液腺表达量最高,P15基因在卵和血淋巴中表达量最高。RNAi表明,B26和P15基因均对亚洲璃眼蜱24h吸附率有明显降低。综上所述,B26和P15与蟀的吸血生物学功能密切相关。
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