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[硕士论文] 谢鹏
水生生物学 东北林业大学 2018(学位年度)
摘要:东方白鹳是濒危涉禽,全球种群数量仅3000余只。2017年7月-12月,利用鸟类跟踪器技术对洪河保护区的东方白鹳的繁殖期、迁徙期和越冬期栖息地生境进行调查,并采集了多个生境因子和植物优势种数据。对东方白鹳的栖息地调查数据采用多元统计等方法,比较东方白鹳在繁殖期、迁徙期和越冬期生境选择的差异性和相似性。
  对繁殖期、迁徙期和越冬期的东方白鹳选择的生境类型进行分析,结果显示:繁殖地洪河保护区东方白鹳偏爱选择沼泽湿地(Ei=0.3333),随机选择明水面(Ei=0.0909)生境;停歇地东方白鹳偏爱选择鱼塘(Ei=0.3878)生境类型,随机选择滩涂(Ei=-0.0345);越冬地偏爱选择滩涂(Ei=0.3333)和明水面(Ei=0.2308)生境,回避选择沼泽地(Ei=-0.4286),不选择鱼塘(Ei=-1)。繁殖期和越冬期东方白鹳均不选择鱼塘类型生境,而迁徙期和越冬期东方白鹳均回避选择沼泽湿地类型。
  繁殖期、迁徙期和越冬期生境因子的主成分分析结果显示,繁殖期洪河保护区内东方白鹳生境选择的主要影响因素是水因子和食物因子,其次是植被因子。停歇期影响东方白鹳生境选择的主要因素是水因子和食物因子,干扰因子对东方白鹳的影响较低。越冬期东方白鹳生境选择的主要的影响因子是水因子和植被因子,其次是食物因子,而干扰因子影响程度较低。
  东方白鹳栖息生境的优势植物调查结果显示,繁殖地洪河保护区内东方白鹳生境优势种植物为5种,停歇期优势植物共7种,越冬期优势种植物共7种。其中芦苇(Phragmites australis)是唯一广泛分布于繁殖期、停歇期和越冬期的优势种植物,薹草类植物在繁殖期和越冬期的东方白鹳生境中均有较大面积分布。
[硕士论文] 张姝
生物学;动物学 牡丹江师范学院 2018(学位年度)
摘要:哺乳动物体毛是与外界环境直接接触,同时又是动物体本身基因末端的产物,其中包含了大量的综合信息。本文以松鼠科6种鼠的体毛样本为研究对象,通过使用扫描电子显微镜观察并测量了6种鼠身体不同部位体毛的鳞片类型等4项形态学指标,并研究了6种鼠之间的亲缘关系。研究结果:(1)松鼠科6种鼠尾部和前肢针毛鳞片高度相对其他部位较小,岩松鼠(Sciurotamias davidianus)针毛鳞片高度小于其他5种鼠;松鼠科6种鼠前肢的针毛鳞片疏密度大于其他部位,草原旱獭(Marmota bobac)针毛鳞片疏密度大于其他5种鼠;松鼠科6种鼠背部、臀部、腹部针毛直径较大,有由躯干向四肢递减的趋势;(2)不同物种、同一物种不同部位、同一根体毛不同位置上的体毛的鳞片类型存在一定差异性。其中,多为简单冠状型和规则扁平型,其次是杂波型,尾部鳞片杂波型所占比例最高。(3)对6种鼠针毛鳞片的高度、直径和鳞片类型聚类分析后得到,花鼠(Tamias sibiricus)与草原旱獭亲缘关系最近。对针毛鳞片疏密度进行聚类分析得出,花鼠与长尾黄鼠(Spermophilus undulatus)亲缘关系最近。说明运用针毛鳞片高度和针毛直径作为分类标准,能够为6种鼠的亲缘关系判定提供指导,而针毛鳞片疏密度受环境因素影响较大,不能很好反应6种鼠其内在的基因特征,不适宜作为判定6种鼠之间的亲缘关系。
[硕士论文] 杨晓鹏
生物化学与分子生物学 内蒙古大学 2018(学位年度)
摘要:有性生殖是自然界中非常重要的一种繁殖方式,主要存在于哺乳类动物中。雄性动物产生的精子与雌性动物产生的卵细胞两者结合到一起形成受精卵,然后受精卵发育成为新的个体。在精子与卵子融合的过程中,涉及到许多蛋白质分子之间的相互作用,特别是膜蛋白之间的相互识别,对于精卵融合有着十分重要的意义。迄今为止,尽管在精子和卵子之间已经鉴定出至少三对相互作用蛋白,但只有精子表面蛋白IZUMO1与卵子表面蛋白JUNO之间的相互作用是精卵融合所必需的。此外,还有一种精子表面蛋白对精卵融合有着重要影响,那就是CRISP2—一种富含半胱氨酸的分泌蛋白,敲除crisp2基因会显著抑制精子与正常卵子融合的效率。CRISP2蛋白本身就能与卵子表面结合,说明卵子上也有CRISP2的受体,但位于卵子表面且能与CRISP2结合的蛋白一直未被鉴定出来。
  本实验通过构建酵母双杂交诱饵重组载体pGBK-crisp2,从实验室保存的大鼠卵巢cDNA文库中筛选与CRISP2相互作用的蛋白,以期找到能与CRISP2结合的卵子蛋白。实验一共筛选到三个cDNA:creb3l1,tl0aea56yl02和chromosome20,其中只有creb3l1属于已知基因,剩余的两个结果并不属于完整的基因,只是一些RNA或者DNA片段。下一步即可验证CREB3L1蛋白是否位于卵子表面,能否与CRISP2结合。
  为了鉴定CRISP2蛋白与CREB3L1其在卵子表面上的受体共定位,本实验克隆了大鼠crisp2的cDNA,构建了pGEX-crisp2原核表达重组载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了CRISP2-GST重组融合蛋白。以此重组蛋白免疫昆明白雌性小鼠,获得了小鼠抗大鼠CRISP2-GST重组蛋白多克隆抗体,将利用该抗体检测CREB3L1卵子上的定位和与CRISP2蛋白结合的细节。
[硕士论文] 李梦思
生物学 集美大学 2018(学位年度)
摘要:肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-bound serine proteinase,MBSP)是普遍存在于动物肌肉中的胰蛋白酶类似物。由于MBSP结构与功能间的作用缺乏深入研究,本文对鲫鱼MBSP的底物特异性进行分析,探讨并完善酶结构与功能间的关系,以拓展应用价值。
  以鲫鱼MBSP为对象,利用基因重组构建8株突变酵母表达菌株SMD1168-pPICZαA-tMBSP,表达产物分别命名为D170S、D170T、D170K、S171A、G193A、G203A、D170T/G203A、G193A/G203A。利用本实验室制备的兔抗鲫鱼MBSP多克隆抗体进行Western blot鉴定,确认重组表达产物为鲫鱼MBSP。利用荧光底物Boc-Phe-Ser-Arg-MCA(BFSR)、Boc-Gln-Arg-Arg-MCA(BQRR)、Boc-Glu-Lys-Lys-MCA(BEKK)和Boc-Val-Leu-Lys-MCA(BVLK)进行酶活力测定,仅4个突变体具酶活力(S171A、G193A、G203A、G193A/G203A)。底物特异性研究结果表明,与野生型MBSP的最适底物BQRR相比,突变体G193A与G193A/G203A无明显变化;突变体S171A的最适底物同为BQRR,但仅能水解BQRR、BFSR,不能水解BVLK、BEKK;突变体G203A的最适底物变为BEKK,且明显偏向于切割含Lys残基的底物。
  因突变体S171A专一的底物特异性,故对其进行深入分析。圆二色谱、同源建模结果显示,Ser171突变对MBSP的结构稳定性影响不大;分子对接分析结果显示,与野生型MBSP不同的是,底物BVLK、BEKK与突变体S171A的对接能量值由负值变为正值,且BVLK、BEKK作用区域彻底偏离酶分子的催化三联体与特异性底物结合口袋。由于底物与突变体S171A的作用区域发生变化最终导致突变体S171A只能选择性切割Arg残基,间接提示MBSP的催化三联体与特异性底物结合口袋在酶水解底物时发挥重要作用。
  MBSP是使鱼糜制品发生凝胶劣化的原因之一。本文选择两种胰蛋白酶抑制剂对MBSP进行抑制动力学分析,结果显示两种抑制剂对MBSP的抑制关系均属于可逆的竞争型抑制。因此MBSP能够被胰蛋白酶抑制剂抑制,从而在鱼糜制品加工过程中缓解凝胶劣化现象。其次,比较分析MBSP与胰蛋白酶对全蛋白的酶解情况,发现拟穴青蟹主要过敏原均能被MBSP降解,包括耐胰蛋白酶消化的精氨酸激酶。相比于胰蛋白酶及野生型MBSP,突变型MBSP的消化速率最快,仅在1min就能将精氨酸激酶酶解成小分子片段。
  综上所述,MBSP经分子改造后,其突变体结构稳定性不变。分子对接技术结果模拟出突变体S171A与底物的作用区域发生变化,而导致突变体S171A底物特异性的变化。本研究中MBSP表达量较高且热稳定性较好,制备较为容易,有望替代商品化的胰蛋白酶。
[硕士论文] 杨帆
野生动植物保护与利用 东北林业大学 2018(学位年度)
摘要:为探索哺乳动物群落水平上的共存机理,于2013-2016年,在黑龙江大兴安岭双河国家级自然保护区架设了124台次自动相机,研究该区域分布的8种哺乳动物黄鼬(Mustela sibirica)、紫貂(Martes zibellina)、雪兔(Lepus timidus)、欧亚猞猁(Lynx lynx)、西伯利亚狍(Capreolus pygargus)、野猪(Sus scrofa)、马鹿(Cervus elaphus)、欧亚驼鹿(Alces alces)在冷季和暖季微生境尺度下的生境利用及物种空间共存关系。应用单季节模型(Single season occupancy model)分析了微生境尺度8种动物暖季和冷季对人为干扰、植被类型、地理类型等15种生境因子的利用情况,以揭示不同季节动物生境因子利用上的差异,并应用物种间单季节模型(Two-species single season model)探究不同物种间关系下哺乳动物群落在冷暖季节的空间共存关系变化。主要研究结果如下:
  (1)生境利用的结果显示:8种哺乳动物在暖季和冷季都回避人为干扰类型的生境因子(居民点、季节道以及公路),但偏好具有农田的生境(除猞猁之外)。不同哺乳动物在暖季和冷季对植被类型生境因子的利用具有较大差异。鹿科动物(狍、马鹿、驼鹿)在冷暖季都会偏好靠近河流的生境,而肉食性动物(黄鼬、紫貂、猞猁)则会回避靠近河流的区域。8种哺乳动物在暖季和冷季对地理类型生境因子(坡向、坡度)的利用情况基本一致,且体型较大的动物(马鹿、驼鹿)选择坡向小的区域,体型较小的动物选择坡向大的区域。
  (2)物种空间共存关系结果显示:捕食关系下,紫貂-雪兔与猞猁-雪兔两组物种组合,冷季比暖季的SIF(物种互作因子,Species interaction factor)值明显上升,呈空间共存关系;猞猁-狍、猞猁-马鹿、猞猁-驼鹿三组物种组合,冷季比暖季的SIF值明显下降,呈空间回避关系。竞争关系下,在食肉动物群落中,紫貂-黄鼬和猞猁-紫貂的组合,冷季比暖季的SIF值明显下降,呈空间回避关系。食草动物群落七组物种组合中,除驼鹿与狍的物种组合外,其他六组物种组合(狍-雪兔、狍-野猪、马鹿-野猪、驼鹿-野猪、马鹿-狍、驼鹿-马鹿)冷季的SIF值较暖季都会下降,呈空间回避关系。
  (3)冷暖季动物生境利用和物种空间共存关系的综合分析结果显示:竞争关系下的食草动物群落,冷季动物相同利用的生境因子数量比暖季有所减少,同时冷季SIF值相较暖季也会下降,物种空间关系转变成以空间回避为主的状态,表明食草动物生境因子利用和物种空间共存关系的变化具有一定协同性。
  (4)暖季食草动物的体重比与SIF值的变化关系不明显,而在冷季随着体重比的增大SIF值逐渐降低(R2=0.6528),表明冷季体重相近的食草动物竞争压力会增大。
[硕士论文] 郝盟
渔业资源 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:拉萨裸裂尻鱼是西藏高原特有鱼类,在西藏雅鲁藏布江流域内广泛分布,具有极大的生态和经济价值。本研究首先利用转录组测序技术获得了丰富的转录组信息,经过生物信息分析,挖掘出大量的功能基因,同时对比分析了拉萨裸裂尻鱼体表有斑和无斑两种转录组信息的差异,最后发掘出大量的SSR位点,分析了SSR的特征,并进行了多态性引物设计筛选工作,获得的主要结论如下:
  1.利用Illumina HiSeq测序平台分别对体表有斑和无斑拉萨裸裂尻鱼的皮肤、肌肉、鳍条、肝脏和肾脏的混合样品进行转录组测序,对原始测序数据过滤、拼接组装后获得对transcript671947条,平均长度为643bp,N50为993bp,N90为264bp;unigenes444530条,平均长度为817bp,N50为1228bp,N90为347bp。
  2.对444530条unigenes进行功能注释和分类,182298条unigenes在Nr注释成功,占全部unigenes的41%,有30217(6.79%)条unigenes在所有数据库中都获得较好的注释;通过GO注释分类后分为3大类56中生物功能,注释在细胞过程生物功能最多;T类信号转导机制功能组在KOG分类中26个功能组中最大;KEGG分析为5大分支,32个小分支,231个通路。
  3.通过对差异表达基因进行筛选,获得显著差异基因2453个,其中上调1268个,下调1185个;然后对这些基因进行GO富集和KEGG富集,得到了大量和免疫与疾病相关的生物学功能和代谢通路。
  4.通过MISA软件对拉萨裸裂尻鱼转录组信息进行SSR位点查找,共检索到183556个SSR位点;双核苷酸重复类型的SSR最多,有85780个占44.4%;A/T重复基元类型最多有77206个,其次是AC/GT重复基元有55630个。
  5.通过Primer3软件对183556个SSR位点进行引物批量设计,随机挑选60对引物在某一拉萨裸裂尻鱼基因组DNA进行PCR扩增,有45对引物成功扩增出条带,有效引物比率为75%,挑选29对条带单一明亮的引物进行多态性分析。
  6.对29对引物在10条来自不同地点的拉萨裸裂尻鱼基因组DNA进行扩增,对扩增产物进行毛细管电泳,24对引物显示出多态性;这24个SSR位点具有等位基因数2-9个,均有5.7个;观测杂合度为0.3-1,平均观测杂合度为0.67;期望杂合度为0.255-0.820,平均期望杂合度为0.686;多态性信息含量0.222-0.827,平均值为0.645;24个SSR位点具有高度多态性,4个具中度多态性,1个低多态性。
[硕士论文] 马天宇
动物遗传育种与繁殖 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:分娩启动是一个复杂的生理过程,影响因素有很多,包括机体内部环境和外界环境两方面。外界因素包括摄入食物、不当的机械运动等;内在调节主要包括激素、免疫炎症以及细胞凋亡等。目前关于分娩启动过程具体分子机制的研究鲜有报道。在本实验室大白猪分娩前后胎盘组织转录本测序中筛选出GPX1差异表达基因,有研究表明GPX1可以缓解氧化应激反应,GPX1缺乏会导致非正常分娩。本试验旨在探究谷胱甘肽过氧化物酶GPX1在分娩启动的进程中的作用。
  为了探究GPX1是否在分娩启动中发挥作用,我们在怀孕15.5天孕鼠腹腔注射LPS构建小鼠早产模型,检测胎膜中ROS水平、氧化标志基因HSP90、炎症因子TNFα、IL1β以及分娩相关基因COX2的表达变化。在WISH细胞中分别转染干涉片段si-GPX1和超表达质粒,检测分娩相关基因HSP90、COX2、Caspase3、IL1β以及NFκB。为了判断GPX1发挥作用的通路,采用NFκB通路抑制剂CAPE处理WISH细胞,通过细胞免疫荧光检测NFκB以及COX2的表达变化。通过ELISA检测清平猪有无分娩征兆的羊水中PGE2的浓度。在WISH细胞中转染重组质粒pCMV-GPX124小时和48小时后,分别检测细胞上清液中的PGE2浓度。最后,通过PGE2处理WISH细胞,检测对GPX1、NFκB和COX2的影响。试验主要研究结果如下:
  1)小鼠早产模型中实验组小鼠胎膜ROS水平显著增强,氧化应激标志基因HSP90表达水平显著高于对照组,同时炎症因子TNFα、IL1β和COX2呈现高表达,蛋白结果表现一致。表明分娩启动时,氧化应激水平加剧,并出现炎症反应。在三类抗氧化标志基因GPX1、Catalase和SOD2中,实验组与对照组相比,表达水平分别是1.80、1.27和1.18倍。其中GPX1相对变化最剧烈,推断GPX1作为主要抗氧化基因。
  2)在长妊娠期及短妊娠期清平猪种中,有分娩征兆组羊水中PGE2浓度均显著高于无分娩征兆组,结果表明PGE2对分娩启动发挥重要作用。高水平GPX1可以降低HSP90的水平,表明GPX1可以降低氧化应激反应,同时激活NFκB通路上调COX2的表达,在24以及48小时后,PGE2水平均显著上升。低水平GPX1使HSP90水平升高,氧化应激水平加剧,上调炎症因子IL1β水平。GPX1从激素水平以及免疫炎症两方面参与妊娠以及分娩启动的调节。
  3)PGE2处理WISH细胞后,对GPX1产生促进作用,对NFκB以及COX2有负反馈抑制作用。这种机制可以防止PGE2水平通过NFκB通路进一步升高,避免PGE2高峰提前引发早产。GPX1的稳定表达是正常妊娠分娩的必要条件。
[硕士论文] 赵芩
养殖 四川农业大学 2018(学位年度)
摘要:动物园是开展生物多样性和自然保护公众教育的理想基地,恒河猴作为深受游客青睐的物种之一,在我国各动物园中几乎都有恒河猴的存在。然而,恒河猴作为国家二级保护动物,其圈养种群的遗传多样性状况究竟如何?目前尚缺乏系统的研究报道。本研究选取我国11个动物园211个恒河猴个体为代表,主要以线粒体DNA控制区(D-loop)区为分子标记,采用种群遗传学的分析方法,对我国动物园圈养恒河猴的遗传多样性进行评估,并试图将线粒体COⅠ和COⅡ基因作为恒河猴亚种DNA条形码在分子层面对圈养环境下的恒河猴进行亚种归类,其结果将为我国动物园圈养恒河猴的遗传管理以及野生恒河猴遗传资源的有效保护与利用提供一定的科学依据。主要结果如下:
  1)动物园恒河猴圈养种群整体拥有较高遗传多样性水平(单倍型多样性Hd:0.98,核苷酸多样Pi:0.06311)。在11个动物园圈养种群中,西藏动物园的遗传多样性水平最低,这可能是由于西藏动物园种群恒河猴来源单一,已经产生了一定的近亲繁殖。
  2)基于野生和圈养恒河猴线粒体DNA的系统发生分析结果表明,中国恒河猴主要分为两大支系,各动物园恒河猴线粒体单倍型镶嵌在多个单倍型群中,说明各动物园恒河猴来源较广泛。
  3)恒河猴各亚种的线粒体COⅠ和COⅡ基因都具有一定的遗传变异,存在亚种DNA条形码间隔,COⅠ基因构建的系统发育树能形成明显的聚类,COⅡ基因构建的系统发育树不能形成明显的亚种聚类,COⅠ基因更适合在恒河猴亚种鉴定中作为DNA条形码使用。
  4)以COⅠ基因为DNA条形码,构建的系统发育树表明,圈养恒河猴个体与已明确的野生恒河猴亚种分别聚类,显示出圈养个体较清楚的亚种归属关系。
[博士论文] 周瑜
野生动植物保护与利用 东北林业大学 2018(学位年度)
摘要:猫科动物处于食物链的顶端。由于近两个世纪以来的人为和自然因素的影响,使得很多猫科动物处于易危至濒危状态。为了保护猫科动物,科学家们对它们进行了大量的保护遗传学研究工作。相对于保护遗传学研究中对受保护物种的关注度,保护遗传学研究所使用的分子标记工具的开发并不广泛。本研究进行了一系列猫科动物保护遗传学相关研究。构建猫科动物系统发生关系框架,探索猫科动物演化历史。构建可广泛应用于猫科动物保护遗传学研究中的分子标记开发策略,对猫科动物进行了一系列保护遗传学分子标记(SSR分子标记和DNA测序)开发及检测工作,并以圈养东北虎种群为研究对象进行保护遗传学应用。
  (1)本研究首先基于线粒体基因组对猫科动物乃至猫型亚目进行了系统发生关系框架的构建工作。成功的重建了猫科动物系统发生关系框架,为猫科动物多样性的发现和保护提供依据。本研究同时还分析了猫科动物的母系分歧时间,认为猫科动物起源于约32-16.8Ma。对比全球气候变化历史,发现中中新世以来的全球气温下降持续驱动了猫科动物乃至猫型亚目物种的大量分化。
  (2)本研究基于已完成核基因组测序信息,对猫科动物四个物种基因组中不同结构SSR含量进行了统计分析,初步了解了各类型SSR在猫科动物基因组中的分布情况。分析显示不同结构SSR在猫科动物基因组中所含比例很相近。同时本研究还开发出大量猫科动物尤其是豹亚科动物的潜在可扩增SSR分子标记(虎,1.87×105个;豹,2.69×105个)并对这些位点设计引物。同时本研究还发现了猫科动物,乃至其他动物基因组中存在多拷贝SSR分布的现象。这些分子标记可供猫科动物保护遗传学研究中参考使用。本研究为猫科动物保护遗传学研究提供了可通用的分子标记开发策略。
  (3)本研究以37只圈养东北虎为研究对象,应用Illumina Hiseq测序平台对70个潜在可扩增SSR(PALs)分子标记进行重复区长度多态性检测,旨在验证这些SSR分子标记是否存在重复区长度多态性,即是否适合作为东北虎种群的保护遗传学研究的分子标记工具。本研究构建了一套生物信息学序列获取策略,并检测到这70个SSR分子标记中有9个SSR分子标记重复区长度单倍型数量<5;5个分子SSR标记重复区长度单倍型数量为5-10;22个SSR分子标记重复区长度单倍型数量>10。本研究结果表明使用NGS技术对潜在可扩增SSR分子标记的多态性进行检测是可行的。相比于传统的荧光修饰引物结合毛细管电泳测序的方法,本研究SSR分子标记多样性检测的方法更为高效,简单且低成本。同时本研究有34个SSR标记由于目标片段较长且测序末端为重复序列,导致无法组装的现象。给出的替代方案为改用测序片段较长的Illumina Miseq测序平台,会大大增加重复区测通率。
  (4)以37只圈养东北虎个体作为研究对象,首次使用3个多拷贝SSR作为分子标记进行的保护遗传学应用。同时使用Illumina Hiseq测序技术及毛细管电泳检测方法对3个多拷贝SSR分子标记进行长度多样性检测,发现它们均含有大量的长度多样性。应用这3个多拷贝SSR分子标记在圈养东北虎种群中进行基因多样性分析,结果显示这3个SSR分子标记具有较高的基因多样性。个体识别能力计算显示这3个多拷贝SSR具有极强的个体识别能力。遗传结构分析显示基于这3个多拷贝SSR分子标记的圈养东北虎种群没有出现明显分隔的遗传结构,圈养种群东北虎的遗传差异呈现均匀的过度变化,呈现中性选择压力。表明该圈养东北虎种群繁育过程存在充分的基因交流,繁育策略良好。Network分析也显示该多拷贝SSR遗传结构复杂多样且37只圈养东北虎中无相同单倍型个体存在。这些都暗示这3个多拷贝SSR分子标记具备做为DNA指纹的潜力。本研究还为37只圈养虎个体绘制了基于这3个多拷贝SSR分子标记的DNA指纹图谱。
  (5)本研究依靠Illumina Hiseq测序平台结合并行标记方法,成功的对37只圈养东北虎个体同时进行线粒体基因组测序。测序结果显示除STPH03364个体外,其余圈养东北虎个体均获得了多于10000-bp线粒体DNA序列。圈养东北虎线粒体基因组序列对比发现大量SNPs位点。应用线粒体基因组对圈养东北虎进行3种方法(NJ、ML和BI)的系统发育关系分析,结果显示该圈养群体主要由3个小体组成。STRUCTURE遗传结构分析也支持系统发生关系分析得到的3个小群体。对比本研究第五章使用核基因组中多拷贝SSR对该圈养东北虎种群的遗传结构析结果并结合本研究支系数量及群体大小变化随时间变化关系分析,认为基于该线粒体基因组的遗传学结构分析结果只能够代表该建群祖先和后引入母系种源的母系遗传结构。对比第五章使用多拷贝微卫星分析结果,认为该圈养东北虎小群体有雄性外来种源引入的历史。本研究认为对于濒危或曾一度濒危的种群进行保护遗传学研究,使用线粒体DNA的分析的结果可能会更显著的显示该种群母系建群者的遗传关系,往往不能显著表现出当下种群的遗传关系。本研究也证实使用NGS平台结合并行标记的方法对多个个体同时进行大量DNA测序的方法相对于传统的Sanger测序法,不仅可以简化工作量并获得大量的序列,并且成本也大大低于传统的Sanger法测序。本研究的测序方法可广泛应用于猫科动物保护遗传学研究中。
[硕士论文] 韦定菊
动物学 四川农业大学 2018(学位年度)
摘要:恒河猴(Macaca mulatta)是我国分布最广泛的一种非人灵长类,本论文以恒河猴作为低氧适应研究对象。通过NCBI的SNP数据库,分析和比较人与恒河猴现有的SNP数量的差异性;利用分子生物学中的巢式PCR技术,扩增恒河猴EPAS1基因已被公布的100个位点所在的22个序列片段,分析恒河猴EPAS1基因部分SNPs的遗传变异,以检验EPAS1基因在恒河猴长期的进化选择过程中受到选择作用,为恒河猴的低氧适应机制进一步研究提供分子研究证据。
  本研究所得结果如下:
  1)通过测序,我们获得新SNP位点83个,这些新SNP位点在NCBI中未曾被记录,其中41%的新SNP的特异性等位基因仅在高海拔种群中被发现。
  2)本实验在对恒河猴的100个已知SNP测序过程中,检测到SNP34个存在多态性,其中有13个位点,它们的多态性仅出现在高海拔种群中。在外显子15内,高海拔种群对GT基因型有偏向性(P=0.028,<0.05)。
  3)在PG3片段上SNP位点rs286734224,在高海拔种群中,与该位点相近的5个位点之间相互独立,而低海拔种群rs286734224和rs307462504位点之间高度连锁,PG5片段上SNP(rs303235021)、PG8片段上SNP(rs1941047)高海拔种群这两个位点与其相近的位点之间连锁完全不平衡,而低海拔种群该位点与其他相近的位点之间相互独立。
  4)位于恒河猴13号染色体的位点47074767(G/T)、47074769(G/C)、47074772(T/C),这三个位点组成的TCC基因型,仅存在于高海拔种群。rs289387673(T/C),结合等位基因频率、杂合度值、遗传分化值的结果表明,T等位基因更能满足更多环境的需求,无论是低氧还是足氧的环境。rs292834672位点的T等位基因和rs303235021位点的A等位基因仅存在于高海拔种群中。
  综上,生活在不同海拔下的恒河猴种群的EPAS1基因的SNP有不同的表示形式,特别是高海拔种群恒河猴的EPAS1基因为了满足低氧适应而呈现更多的独特的SNP。
[博士论文] 陈亮
野生动植物保护与利用 东北林业大学 2018(学位年度)
摘要:小飞鼠(Pteromys volans)是中国分布最北的滑行类哺乳动物,受到采伐的影响,全球的种群数量下降,被IUCN评为易危物种。在一月均温-30℃的大兴安岭北部,该物种不冬眠,使用皮膜在树隙间滑翔,具有较大的体表面积与体积之比,偏好利用树洞的保温特性越冬。但究竟具有何种结构特征的树洞才能被小飞鼠利用来绝热保温还处于未知状态。
  2015年,大兴安岭正式停止商业采伐,取而代之的抚育作业将采伐目标定为:濒死木、病腐木与枯立木等,而树洞最常出现在此类立木上。为了对越冬小飞鼠进行保育,需要在采伐中预留具有适合其越冬需求特征的立木。为此,本研究对该地区小飞鼠越冬树洞做了研究。
  外业结果显示,对比家域内可利用的树洞与巢树,小飞鼠偏好利用容积大、胸径粗、洞内深度深、壁厚、洞口直径小、洞口距地面高、树洞内径与外径皆大的树洞,其巢树50%为死树。利用“非损伤性鼯鼠捕捉器”活捕小飞鼠,并用“呼吸室法”获得该物种的RMR为3.46mlO2g-1h-1。内业使用“一种三维树洞合并的方法”获得具有均值特征的树洞几何模型,该模型具有偏心的特征。利用CT扫描活体小飞鼠并利用MIMICS软件建模获得小飞鼠几何模型,证明CT加MIMICS软件建模技术对建立活体动物与树洞几何模型具有可行性。
  本研究利用数字测温仪获得树洞内温度与环境温度,对比发现,树洞温度随着环境温度变化而变化,树洞对洞外热环境波幅有明显的削减作用,对温度峰值有显著的延缓作用。同时,本研究获得来自489个贮木场的树洞样本,统计结果显示,树洞内径与外径有正相关性。对树洞与巢材热物性测量发现,树洞的比热容、密度、导热系数等形成了树洞热惰性,巢材的密度与导热系数对树洞保温皆具有良好的作用。基于传热学的热阻叠加原理,本研究在利用流体力学三大守恒方程建立“外环境-树洞-小飞鼠”传热模型的框架下,以代谢产热量通过小飞鼠几何模型表面的热流密度398W/m2作为热平衡的临界值,采用CFD模拟计算树洞各变量在不同因素水平变化下小飞鼠的毛被表面平均热流密度与树洞表面平均温度值。结果表明,在“通风热损失”中,直吹洞口的强制对流风速达到15m/s时,模型的热平衡被打破。在“结构热损失”中,随着壁厚、洞内深度与巢材厚度的增加,树洞保温效果越好。随着洞口直径的增加,保温效果越差,但洞口朝向在树洞偏心结构因素的影响下对树洞内热环境影响不显著。本研究采用“实验-模型-模拟”体系的方法,利用CFD技术对连续热系统做的研究证明该方法与技术在对小型动物于树洞内保温进行研究时具有一定可行性。
  针对大兴安岭北部小飞鼠越冬树洞的研究结果,本研究对未来的抚育采伐提出如下建议:保留13.2/ha个以上的树洞;保留的树洞特征为洞口直径大于34mm;洞口高度大于2.6m;立木胸径大于22cm;保留的树种为兴安落叶松,以死树为主。本研究用数值模拟解答了树洞热环境的营造机理,并对抚育采伐中树洞的管理提出了合理建议。
[硕士论文] 宋明民
生物工程 内蒙古大学 2018(学位年度)
摘要:哺乳动物卵母细胞通过体细胞核移植(SCNT)可以将体细胞重编程为全能状态以实现动物克隆。然而,由于重编程过程中存在的诸多缺陷,大多数克隆胚胎在早期阶段发育阻滞。对于核移植胚胎发育率低的问题,研究的焦点基本在其早期发育的分子机理上,到目前为止,仅发现通过组蛋白去甲基化酶的异位表达减少H3K9me3可以大大促进SCNT胚胎发育,其潜在的分子调控机制仍没有被精准解析。
  本论文中,首先综合分析了小鼠体外受精和不同发育命运的体细胞核移植胚胎的转录组表达图谱。通过系统分析不同发育命运克隆胚胎中全基因组表达分子差异,发现细胞凋亡、自噬、胞吞和DNA修复等重要功能通路的异常激活是核移植2-cell胚胎阻滞的关键因素;干细胞多能性维持、DNA修复、细胞周期和自噬的异常激活是核移植4-cell胚胎阻滞的标志性事件。通过对不同发育命运的SCNT胚胎之间的转录组比较,在转录因子、多能性维持基因、组蛋白表观修饰因子、DNA/RNA去甲基化酶基因等与核重编程调控相关的关键因子中筛选出一系列可能影响核移植胚胎2-cell和4-cell胚胎发育阻滞相关核心基因簇:Ascl2、Bmp7、Kdm4d、Kat2b、Srcap和Zfp217基因属于克隆胚胎2-cell阻滞关键调控因子;Sall4、Ctr9、Vegfa、Hinfp、Kdm3b、Kdm5a、Kdm5b、Ctnnb1、Hdac4、Brca2、Yeats4、Atxu7和Arid4b在克隆胚胎4-cell是发挥重要的调控作用,这些基因在未阻滞克隆胚胎中高表达;Zscan4c、Id1、Pou6f1、Cited1、Nanog、Dppa2、Fgf4、Med17、Cnot1、Kdm4b、Kdm3a、Kdm7a、Kat8、Elp6、Eid1、Gadd45a、Tet1、Tet2等基因在不同命运克隆胚胎2-cell和4-cell与正常胚胎相比均存在差异,属于克隆胚胎持续未正常激活的分子标记,其中小部分基因已有研究报道,这些分子差异也许能解释SCNT胚胎发育阻滞的现象。
  此外,还对比分析了组蛋白去甲基化酶Kdm4b/4d以及Kdm5b能够克服核移植胚胎发育阻滞、提高克隆胚胎发育潜能的潜在分子机制,发现关键性的通路及核心基因簇的激活发挥了重要作用。Kdm4b/4d可以在2-cell促进维持端粒的关键调控因子Zscan4c和Zscan4d的表达。此外,还发现Kdm4d在2-cell阶段可以特异性激活Kdm5b、Tet1和Id1,鉴定出Kdm4d显著提高SCNT胚胎细胞囊胚率分子标记。另外,发现Kdm5b在4-cell可以激活干细胞维持和DNA修复等通路以及关键因子Ubtfl1、Nr5a2、Prdm14、Thoc5、Dppa3和Klf5的表达,这些关键基因的激活可能是组蛋白去甲基化酶可以克服SCNT胚胎阻滞的重要因素之一。我们的研究发现为探索调控SCNT介导的体细胞重编程的潜在分子机制和关键因子提供了重要理论依据,为深入阐明细胞重编程的分子调控机制提供一定帮助。
[博士论文] 车天栋
动物遗传育种与繁殖 四川农业大学 2018(学位年度)
摘要:脾脏在循环系统中的位置和特殊的淋巴结结构,使其成为了一种独特的淋巴器官,不仅是哺乳动物机体内最大的免疫器官,同时也是最大的血液过滤器,对维持机体的免疫稳态、衰老红细胞的回收和铁离子的转运具有重要作用。LncRNAs作为调控网络中的重要一员参与了一系列的生物学过程。目前,缺少关于蛋白编码基因和lncRNAs在脾脏不同生长发育阶段和不同物种中的研究。本研究选取家猪5个不同生长发育时间点和3头成年野猪,及其余9种哺乳动物的脾脏组织为研究对象,对一共39个样本进行链特异性lncRNA测序,通过一系列生物信息学的分析方法,对脾脏功能性转录组和调控性转录组进行研究,主要研究结果如下:
  (1)在猪不同生长发育阶段的18个样本中,一共鉴定出15,040条lncRNAs,包含了12,967个lncRNAs基因。其中,有6,898条lncRNAs在上述所有样本中共表达,约占生长发育阶段鉴定到的总lncRNAs的45.86%。
  (2)与蛋白编码基因相比,lncRNAs具有转录本长度更短、外显子数目更少和表达水平更低的特性。
  (3)在猪不同生长发育阶段的脾脏中,反义链内含子区域与lncRNAs有重叠的蛋白编码基因主要富集在T细胞活化、B细胞的增殖和分化、适应性免疫应答和金属离子的结合等生物学通路上,暗示了lneRNAs的生物学功能可能与其邻近的基因相关。
  (4)基于猪不同生长发育阶段转录组的表达量数据显示,蛋白编码基因和lncRNA均可以将样本按照不同生长发育时间点区分开。基于样本间表达量的Pearson相关系数显示,样本可以划分为胚胎发育期、哺乳期和性成熟期,且lncRNAs具有更灵敏的时空特异性。通过PSI值对蛋白编码基因外显子的可变剪切潜能进行打分,也可以将样本按照不同生长发育时间点区分开。
  (5)短时间序列(STEM)研究发现,蛋白编码基因和lncRNAs具有类似的动态表达模式。表达量呈现上升趋势的模块,基因主要富集于先天性免疫应答、适应性免疫应答和T细胞增殖的正调控作用等生物学过程;表达量呈现下降趋势的模块,基因主要富集于细胞分裂、DNA的复制、细胞增殖等生物学过程。
  (6)共表达网络的结果显示,与时间变量相关的蛋白编码基因和lncRNAs主要富集于适应性免疫应答、B细胞受体信号通路和T细胞的活化等生物学过程。
  (7)不同生长发育阶段差异表达分析结果显示,血浆铜蓝蛋白前体(ceruloplasmin precursor,CP)基因在所有时间点呈现出差异表达,其具有亚铁氧化酶活性,能将Fe2+氧化为Fe3+,并且不释放氧自由基,还与铁离子的跨膜运输有关,这与脾脏的生物学功能相一致。
  (8)在十个物种中鉴定得到4,783个1∶1的同源蛋白编码基因,其中有2,780个(58.12%)在十个物种脾脏组织中都有表达。同时,在十个物种脾脏组织中一共鉴定到1,407个具有同源关系的lncRNAs。
  (9)基于十个物种转录组的表达量数据显示,同源蛋白编码基因和同源lncRNAs均可以将样本按照不同物种区分开,且同源lncRNAs的表达模式具有较低的物种保守性。蛋白编码基因同源外显子的可变剪切潜能也可以将样本按照不同物种区分开,且在物种间的保守性较低。
  (10)既是物种特异性表达,又是表达量受到选择的基因功能富集结果显示,在农业动物中存在与药物反应相关的生物学过程。
  综上所述,脾脏转录组在猪生长发育过程中展现出了其特定的功能变化,且其生物学功能在不同物种中存在差异,这将为今后的相关研究提供参考,具有重要的理论和实践意义。
[硕士论文] 刘文光
动物学 广西大学 2018(学位年度)
摘要:红树蚬属是红树林区特有的大型双壳贝类,本研究通过走访调查和样方调查,分析了广西北海红树蚬属的分布种类、分布特征和影响分布的环境因子;通过比较红树蚬、歪红树蚬不同年龄阶段尺性状的比例关系,判别是否存在异速生长;利用16S rRNA、COI和Cytb基因比较了红树蚬和歪红树蚬的遗传差异,主要结果如下:
  (1)北海分布的红树蚬属动物有2种,红树蚬和歪红树蚬,仅分布在红树林林下滩涂。
  (2)红树蚬与歪红树蚬的分布特征基本一致,高潮区和中潮区分布密度无显著差异(P>0.05),但均显著高于低潮区(P<0.05)。红树蚬在高、中和低潮区的分布密度分别为13±4.387个/m2、14.222±4.409个/m2和5.444±4.720个/m2。歪红树蚬在高、中和低潮区的分布密度分别为10.333±3.640个/m2、9.667±4.359个/m2和3.889±3.515个/m2。歪红树蚬的分布密度略低于红树蚬。
  (3)不同年龄阶段的红树蚬、歪红树蚬的尺形态差异显著,红树蚬和歪红树蚬均可能存在异速生长。
  (4)通过对盐度、pH、粗砂,中砂,细砂、极细砂、粉砂以及密度等8个变量进行主成分分析,分析影响红树蚬和歪红树蚬分布密度的主要环境因子,盐度和中砂是影响红树蚬分布密度的主要环境因子,两个因子的方差占总成分的70%。盐度、中砂,粗砂是影响歪红树蚬分布密度的主要环境因子,三个因子的方差占总成分的69%。
  通过对红树蚬与歪红树蚬的16S rRNA基因、COI基因和Cytb基因序列分析比较,红树蚬与歪红树蚬的16S rRNA基因片段上,除插入/缺失位点外,共检测到164个变异位点,其中简约信息位点161个。COI基因的核苷酸序列中共检测到116个变异位点(除插入/缺失位点外),其中简约信息位点107个。Cytb基因片段上共检测到121个变异位点(除插入/缺失位点外),其中简约信息位点115个。基于16S rRNA、COI和Cytb基因分析红树蚬与歪红树蚬的遗传距离,发现种间遗传距离范围为0.112~0.218,种间的遗传距离远远大于种内的遗传距离。在红树蚬、歪红树蚬的COI和Cytb蛋白编码基因片段中,COI氨基酸片段上共检测到9处氨基酸替代,Cytb氨基酸片段上共检测到17处氨基酸替代。COI、Cytb基因片段的碱基替换大部分发生在密码子的第三位点,第二位点最为保守,说明大部分的突变是同义突变。
[博士论文] 卓梅琴
水产养殖 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:磷脂酰肌醇-3-激酶(Phosphatidylinositol3-kinases,PI3K)信号通路在增殖、凋亡、存活以及代谢等细胞生物学进程中发挥着重要的作用。目前,有关PI3K家族基因的结构和功能在哺乳动物中已取得了一定的进展,但是却很少有对鱼类的PI3K家族基因进行研究。胰岛素介导的PI3K信号通路(胰岛素受体底物/磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B,IRS-PI3K-AKT)是胰岛素信号通路中的经典通路。在哺乳动物中,已有大量研究表明该信号通路调控机体的营养代谢活动,促使机体糖原、脂肪和蛋白质的合成。目前在鱼类中,有关胰岛素对脂代谢研究相对缺乏,并且很少有学者关注IRS-PI3K-AKT信号通路在鱼类脂肪代谢中作用。本论文以黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)为研究对象,研究黄颡鱼PI3K家族基因的结构和功能,并结合IRS-PI3K-AKT信号通路探讨胰岛素调控黄颡鱼肝脏脂代谢的作用机制。具体包括以下几个方面:
  1、黄颡鱼pi3ks家族基因的分子克隆及组织表达分析
  为了初步了解黄颡鱼pi3ks家族基因基本特征,本研究采用RACE技术从黄颡鱼中共克隆得到7个不同亚型的pi3k,它们分别是pi3kca、pi3kcb、pi3kcd、pi3kcg、pi3kc2a、pi3kc2b和pi3kc3,全长cDNA序列分别为4585bp、5881bp、4036bp、3786bp、6350bp、6030bp和3552bp,分别编码1069、1069、1044、1104、1670、1579和877个氨基酸。氨基酸结构域分析显示,7个pi3k亚型共分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ3类,所有pi3k亚型均包括N端C2结构域、PIK结构域、催化结构域,并且所有保守结构域中,催化结构域相似度最高,而且都包含保守的ATP结合位点。进化分析显示7个黄颡鱼不同亚型pi3k明显的分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3类,在Ⅰ类中又明显的分成4大枝,并且pi3kcb跟pi3kcd的亲缘关系更相近,并且在进化上黄颡鱼与墨西哥脂鲤在硬骨鱼类分枝上亲缘关系较近,而与哺乳动物亲缘关系较远。
  通过荧光实时定量PCR技术,研究了黄颡鱼不同亚型pi3k在不同组织中的基因表达水平。结果显示:不同亚型pi3k均在卵巢中表达量最高,pi3kca、pi3kcb、pi3kc2a、pi3kc2b以及pi3kc3广泛表达于不同组织。而pi3kcd和pi3kcg属于组织特异性表达,特别是在肝脏、肠道、肾脏、心脏以及鳃中表达量非常低。
  2、黄颡鱼pi3kca、pi3kc2b和pi3kc3启动子克隆及其功能研究
  本实验以第一部分实验获得PI3K的cDNA序列为基础设计引物,利用hitail-PCR方法进行pi3k启动子区域克隆,最后共得到pi3kca、pi3kc2b和pi3kc3的5'上游启动子序列长度分别为360bp、1848bp和367bp。生物信息学分析显示pi3kca、pi3kc2b和pi3kc3的核心启动子区结构不一样,其中pi3kca和pi3kc2b包含CpG岛,但不存在CAAT和TATA盒。而pi3kc3包含CAAT和TATA盒,但不存在CpG岛。同时,根据MatInspector和JASPAR数据库,我们还预测到pi3kca启动子区可能存在HNF1、STAT和NF-kB转录因子结合位点;pi3kc2b启动子区存在FOXO1、PPAR-RXR、STAT、IK1、HNF6和HNF3转录因子结合位点;pi3kc3启动子区存在FOXO1和STAT转录因子结合位点。
  为了进一步验证黄颡鱼pi3kca、pi3kc2b和pi3kc3不同区域启动子的功能。我们通过构建pi3kca、pi3kc2b和pi3kc3启动子缺失序列表达载体,分别瞬时转染到HepG2细胞,通过双荧光素酶活性测定,确定pi3kca、pi3kc2b和pi3kc3启动子的活性区域。结果显示:pi3kca的-360/-224bp区域负调控启动子活性,而-224/+71b区域正调控启动子活性;pi3kc2b的-1848/-1522bp区域正调控启动子活性,-1522/-623bp区域不影响启动子活性,-623/-388bp负调控启动子活性,-388/-144bp正调控启动子活性,-144/+79bp区域正调控启动子活性;pi3kc3的-367/-291bp区域不影响启动子活性,而-291/+59bp区域正调控启动子活性。同时,我们还发现FOXO1抑制剂AS1842856孵育显著降低pi3kc2b和pi3kc3部分载体的启动子活性。进一步的定点突变分析和凝胶阻滞分析(electrophoretic mobility-shift assay,EMSA)证明HNF1和IK1转录因子分别能直接与pi3kca和pi3kc2b启动子结合,并负调控pi3kca和pi3kc2b启动子活性;而FOXO1转录因子能够直接与pi3kc2b和pi3kc3启动子结合,并正调控启动子活性。
  3、黄颡鱼不同组织pi3kca启动子甲基化特征的初步研究
  为了分析黄颡鱼不同组织中pi3kca的转录水平与其启动子的甲基化状态之间的关系。我们应用重亚硫酸盐修饰黄颡鱼不同组织的DNA,并通过BSP(bisulfite sequencing PCR)法测定黄颡鱼不同组织pi3kca启动子的甲基化水平,应用荧光定量PCR的方法检测黄颡鱼不同组织中pi3kca以及甲基转移酶(dnmts:dnmt1,dnmt3a,dnmt3b)的mRNA表达水平。结果共扩增得到pi3kca启动子和第一外显子CpG岛附近536bp序列,包含34个CpG位点。通过统计分析,发现pi3kca甲基化位点主要发生在转录起始位点(+1)附近的-71,-64,-52和+8CpG位点,并且pi3kca启动子在黄颡鱼不同组织中均处于低甲基化水平。定量PCR分析显示,pi3kca在不同组织中的mRNA表达水平和甲基化水平无明显相关性,而3种dnmts均在卵巢中表达量最高,这很可能与pi3kca启动子甲基化水平也在卵巢中最高有关。
  4、胰岛素激活IRS-PI3K-AKT信号通路调控黄颡鱼肝脏脂代谢的机制研究
  为了研究胰岛素对黄颡鱼肝脏脂代谢的调控机制,本研究分别结合离体肝细胞实验和活体原位注射实验来进行。首先,通过分离原代黄颡鱼肝细胞,选取(0、10nM、100nM、1000nM)四个浓度的胰岛素进行孵育肝细胞,分别在48h取样,测定的指标包括肝细胞存活率、不同亚型IRS-PI3K-AKT基因的表达、肝细胞甘油三酯(TG)的累积、脂代谢相关酶酶活与基因表达。结果显示:胰岛素有促进肝细胞TG合成的趋势,100nM胰岛素处理显著增加肝细胞TG的合成。对于不同亚型的IRS-PI3K-AKT基因表达的影响,胰岛素不同程度增加了肝细胞irs1、irs2、pi3kcb、pi3kc2a、akt1和akt2的mRNA表达水平,但不影响pi3kca、pi3kcd、pi3kcg、pi3kc2b、pi3kc3、akt3a和akt3b的mRNA表达水平。胰岛素显著促进肝细胞FAS、G6PD和6PGD酶活性的增加,但不影响CPT-Ⅰ的活性。此外,胰岛素促进fas、g6pd、6pgd和pparγ等脂代谢合成基因的表达,而降低cpt1a和pparα等脂代谢分解基因的表达。本研究表明,在黄颡鱼肝细胞中,对于不同亚型的IRS-PI3K-AKT蛋白,胰岛素很可能优先激活irs2、pi3kcb、pi3kc2a、akt1和akt2亚型。其次,胰岛素能够促进肝细胞TG的合成,但存在一定的浓度效应,其中100nM胰岛素处理组最为显著。
  其次,为了进一步验证胰岛素是否能实际调控黄颡鱼肝脏脂代谢,比较离体与在体条件下胰岛素对黄颡鱼脂代谢影响的差异。我们通过黄颡鱼腹腔注射(0、0.01μg/g、0.1μg/g、1μg/g)四个胰岛素浓度,分别在48h取样,分析黄颡鱼肝脏脂肪的沉积、肝脏脂肪代谢相关酶酶活和基因表达水平的影响。结果显示:随着胰岛素注射浓度增加,肝脏脂肪滴沉积增加,FAS酶活性也随着增加。胰岛素促进G6PD和6PGD酶活性的增加,但不影响CPTⅠ的活性。对脂代谢基因表达的影响,胰岛素有增加fas和g6pd基因表达的趋势。0.01μg/g和0.1μg/g胰岛素处理组显著增加6pgd基因的表达。0.1μg/g胰岛素注射显著增加cpt1a的表达。胰岛注射降低pparα的表达。0.01μg/g和0.1μg/g胰岛素处理组显著增加pparγ的表达。本研究表明,无论是活体注射和离体实验,胰岛素促进黄颡鱼肝脏脂肪滴的沉积,并且伴随着FAS、6PGD、G6PD和PPARγ脂肪合成相关酶酶活增加和基因表达的上调。而胰岛素对cpt1a基因的表达的影响在离体和在体实验中呈现不同的趋势,表明胰岛素对CPTⅠ的调控可能受多种因素的影响。
  5、PI3K和FOXO1信号通路在胰岛素调控黄颡鱼脂代谢中的作用
  为了深入了解PI3K和FOXO1信号通路在胰岛素影响黄颡鱼脂代谢过程中的作用机制。我们探讨了离体条件下,PI3K特异性抑制剂(Wortmannin)和FOXO1特异性抑制剂(AS1842856)的添加对胰岛素诱导黄颡鱼肝细胞脂代谢的调控变化。
  胰岛素与Wortmannin共同孵育的结果显示:与对照组相比,单独的Wortmannin孵育降低肝细胞TG的沉积,但没有影响fas、g6pd、6pgd、pparα和pparγ相关基因的表达,并且降低cpt1a基因的表达。与胰岛素处理组相比,Wortmannin提前孵育显著降低胰岛素诱导肝细胞TG的合成,并且显著降低了胰岛素诱导g6pd、6pgd和pparγ的表达,但不影响fas和cpt1a的表达。本研究再次证明胰岛素促进肝细胞脂肪合成的作用,而这一作用能够被PI3K特异性抑制剂Wortmannin阻断,表明PI3K信号通路在胰岛素影响黄颡鱼脂肪沉积过程中发挥着重要作用。
  其次,AS1842856单独孵育结果显示:AS184285显著降低所有PI3K亚型的基因表达,并且pi3kcb和pi3kc3对AS1842856的敏感度更强。
  胰岛素与AS1842856共同孵育的结果显示:与对照组相比,AS1842856单独处理显著降低TG的合成;与胰岛素处理组相比,AS1842856处理显著降低胰岛素诱导TG的合成。与对照组相比,单独AS1842856处理不影响fas和6pgd的基因表达水平,但降低g6pd、pparγ、pparα和cpt1a的表达水平。与胰岛素处理组相比,AS1842856提前孵育显著下降胰岛素诱导g6pd、6pgd和pparγ基因的表达。本研究表明,胰岛素促进肝细胞脂肪合成作用同样能够被FOXO1抑制剂AS1842856阻断,一方面说明FOXO1信号通路可能直接参与胰岛素调控脂肪代谢的合成作用,另一方面说明FOXO1抑制剂AS1842856很可能是通过抑制PI3K的转录水平来抑制PI3K信号通路,从而导致胰岛素利用PI3K信号通路促进肝细胞脂肪合成的作用再次被阻断。本研究表明AS1842856很可能从FOXO1和PI3K双重层面阻断胰岛素促进肝细胞脂肪合成作用。
[博士论文] 王维禹
野生动植物保护与利用 东北林业大学 2018(学位年度)
摘要:松鼠(Sciurus vulgaris)具有体型较大、昼行性和平均寿命较长、完全依靠秋季贮藏的红松种子度过严酷的冬季等特点,相对于其它啮齿动物,更有利于开展详细的生态方面研究。红松(Pinus koraiensis)因其种子自身特点,其天然传播与更新对动物有近乎绝对的依赖性,因此,松鼠和红松形成了密切的协同进化关系。近年来,天然红松林由于采伐等原因正在逐渐减少,人工植树造林并没有起到应有的林地恢复作用,所以,开展松鼠种群研究对红松林恢复和合理开发利用具有重要意义。长白山国家级自然保护区(Changbai Mountain National Nature Reserve)是中国建立最早、地位最重要的自然保护区之一,保护区内的阔叶红松林是世界上已为数不多的大面积原生红松针阔混交林(Broad-leaved Korean pine mixed forest),与同纬度的欧美地区相比,以其结构复杂、组成独特、生物多样性丰富而著称。但是,有关长白山国家级自然保护区内松鼠种群数量的详细研究还未见报道。本研究首先针对传统捕捉笼存在的捕获率过低等不足之处进行了改进,然后采用改进后的标志重捕法,对长白山国家级自然保护区北坡松鼠种群数量季节和年度变化,以及森林类型和人为干扰对种群的影响进行了详细研究。
  (1)松鼠标志重捕捕获方式改进
  红外相机和隐蔽观察发现,花鼠(Tamias sibiricus)干扰(花鼠盗取诱饵导致捕捉笼失效)和松鼠探究行为(松鼠进入捕捉笼前,在捕捉笼外部攀爬和寻找获取诱饵的渠道,穿过捕捉笼金属网抓取诱饵)是导致捕获失败的主要原因。根据松鼠和花鼠取食行为特征的差异(花鼠经常在地面活动,自下而上攀爬靠近捕捉笼;松鼠多数时间在树上活动,自上而下靠近捕捉笼),本研究通过增加花鼠隔离带和诱饵防护装置的方式来提高松鼠捕获成功率。
  传统方法与改进方法对比试验发现,在为期6天,每个分组试验合计布设180次捕捉笼的对比试验中,传统组(对照组)没有捕获到松鼠,单独增加诱饵防护组只捕捉到松鼠1次,并未显著提高松鼠捕获数量(x2=1.003,df=1,P>0.05);单独增加隔离带组捕获松鼠6次,显著提高了松鼠捕获数量(x2=6.102,df=1,P>0.05);同时增加隔离带和诱饵防护组,捕获松鼠35次,极显著提高了松鼠捕获数量(x2=23.149,df=1,P<0.01)。以上结果说明,同时增加隔离带和诱饵防护装置的改进方式有效提高了松鼠捕获成功率。
  (2)松鼠种群数量季节和年度变化
  采用改进后的松鼠捕获方式,利用标志重捕法,选择连续的红松结实量大年和小年延后一年(2012年~2013年)的春季(5月)、夏季(7月)和秋季(9月),对长白山国家级自然保护区北坡阔叶红松林样地中松鼠种群数量进行了调查。结果发现,所有捕获到的松鼠整体雌雄比例为42∶46,差异不显著(x2=0.182,df=1,p>0.05)。2013年与2012年雌性繁殖比例没有显著差异(x2=0.307,df=1,p>0.05)。2012年春季松鼠有一部分体重较低,其它季节体重差别不明显,2013年各季节体重差别不明显。2012年松鼠种群数量季节差异显著(x2=15.086,df=2,P<0.05),春季繁殖前最低,夏季因春季繁殖新个体而增长,秋季种群扩散后分布趋于更加均匀。2013年种群数量季节差异不显著(x2=1.980,df=2,P>0.05),2013年松鼠种群数量显著低于2012年(x2=108.435,df=1,P<0.01)。CJS和POPAN模型参数估计结果显示,2012年春、夏、秋三个季节种群密度分别为17.707±1.17只/km2、28.308±1.897只/km2和17.323±1.025只/km2,2013年春、夏、秋三个季节种群密度分别为5.406±1.563只/km2、6±1.542只/km2、8.00±0.00只/km2。
  (3)森林类型和人为干扰对松鼠种群的影响
  本研究根据森林类型和干扰类型选择了四种典型的生境。1.火灾后自然更新白桦林;2.原始红松、云杉、冷杉林;3.核心区原始阔叶红松林;4.试验区阔叶红松林。并于2012年夏、秋两个季节对四种生境松鼠种群数量进行研究。2012年夏季标志重捕结果显示,核心区原始阔叶红松林松鼠种群数量极显著(x2=25.095,df=1,P<0.01)高于原始红松、云杉、冷杉林;火灾干扰极显著(x2=547.000,df=1,P<0.01)降低了松鼠种群数量;采摘松塔干扰极显著(x2=57.748,df=1,P<0.01)降低了松鼠种群数量。火灾后自然更新白桦林与试验区阔叶红松林没有捕获到松鼠。CJS和POPAN模型种群参数估计结果显示,原始红松、云杉、冷杉林松鼠种群密度为6.00±0.470只/km2;核心区原始阔叶红松林松鼠种群密度为28.308±1.897只/km2。
  2012年秋季标志重捕结果显示,森林类型和人为干扰对松鼠数量的影响与夏季呈现相似的规律性。核心区原始阔叶红松林松鼠种群数量显著(x2=4.768,df=1,P<0.05)高于原始红松、云杉、冷杉林;火灾干扰极显著(x2=381.000,df=1,P<0.01)降低松鼠种群数量;采摘松塔干扰极显著(x2=70.674,df=1,P<0.01)降低松鼠种群数量。火灾后自然更新白桦林没有捕获到松鼠;CJS和POPAN模型参数估计结果显示,原始红松、云杉、冷杉林秋季松鼠种群密度为11.3±0.976只/km2;核心区原始阔叶红松林松鼠种群密度为15.33±0.91只/km2;试验区阔叶红松林只捕获到一只松鼠。
  综上所述,松鼠种群数量年度波动与红松结实量波动一致,时间上延后一年;季节性波动规律呈现出春季繁殖前种群数量最低,夏季升高,秋季种群分布趋于更加均匀的趋势;不同生境中,可利用种子类食物数量和阔叶植物类食物数量都可能成为松鼠种群数量限制因素;火灾、采伐和松塔采摘等人类活动都将导致松鼠种群数量下降。
[硕士论文] 楚耿博
生物工程 河南师范大学 2018(学位年度)
摘要:日本三角涡虫(Dugesia japonica)隶属扁形动物门(Platyhelminthes),涡虫纲(Turbellaria),在动物系统演化中占有重要地位,并且具有极强的损伤修复及再生能力。但到目前为止,其再生机制并不清楚。
  本实验利用生物信息学,原位杂交,RNA干扰以及实时荧光PCR技术,分析了DjSoxB1-3的蛋白结构、表达模式和功能,结果如下:
  利用生物信息学分析了DjSoxB1-3推导的氨基酸的结构和进化地位,结果显示:DjSOXB1-3属于SOXB亚家族且是不稳定的亲水性蛋白。DjSOXB1-3不仅含有SOX家族高度保守的HMG-box区域和标志性基序RPMNAFMVW,而且在HMG-box区域后面还包括8个SOXB亚家族的特征性序列标签。其中,DjSOXB2的特征基序与高等脊椎动物同源性较高且包含了一部分SOXP结构域。
  整体原位杂交及再生过程中qPCR结果显示:DjSoxB1-3基因在整体涡虫身体两侧的实质组织和再生片段的再生芽基处有较强杂交信号,特别是在再生的3-5d杂交信号较强,而这个时期是涡虫CNS形成和功能恢复的时期,DjSoxB1-3基因干扰后神经标记基因DjPC2表达水平显著下调,说明DjSoxB1-3参与了涡虫神经中枢的形成。
  DjSoxB1-2基因干扰后,整体涡虫没有明显的表型变化,但是再生涡虫的再生芽基在5-7d明显短于对照组,说明涡虫再生速度明显变慢。干扰组的尾再生头片段在再生第5d没有眼点形成。同时qPCR检测结果表明:DjSoxB1-2干扰后,干细胞标记基因DjPiwiA,细胞周期调节基因DjcyclinA/B和Djcdk,干细胞(neoblasts)早期分裂后代标记基因DjNB21.11.e表达水平显著调低,眼点标记基因Djovo在DjSoxB1干扰后期表达水平显著升高,而眼点标记基因Djtyrosinase在DjSoxB2干扰后期表达水平显著升高,说明DjSoxB1-2基因参与干细胞的增殖和组织的分化。尾再生头片段再生过程中出颈部向内凹陷的小头,头再生尾片段再生过程中出现歪尾现象,说明再生部分与原来身体的比例失调。qPCR检测结果表明:DjSoxB1干扰后背腹轴标记基因DjnlgA在干扰前期表达水平显著下调,而DjSoxB2干扰后DjnlgA和前后轴标记基因Djβ-catenin-1在干扰前期表达水平都显著下调,说明DjSoxB1-2在再生过程中参与了身体极性的构建。同时,DjSoxB1-2干扰后凋亡标志基因Djcaspase3在干扰后期表达水平显著上调,说明DjSoxB1-2基因可能与涡虫体内细胞凋亡相关。
  DjSoxB3基因干扰后,整体涡虫出现头部耳突处畸形,尾部溶解断裂和明显的运动障碍现象。再生涡虫在再生3d时没有长出明显的再生芽基,在再生的5-9d芽基明显短于对照组,说明再生速度受到了抑制。干扰组的尾再生头片段在再生第5d甚至少部分个体在再生的第7d没有形成眼点。qPCR检测结果表明:DjPiwiA,Djpcna,DjcyclinA、DjcyclinB和Djcdk,DjNB21.11.e,晚期分裂后代标记基因DjAGAT-2,zeta-NBs亚群标记基因Djzfp,sigma-NBs亚群标记基因DjSoxp1,细胞迁移标记基因Djmmp的表达水平均显著下调,眼点标记基因Djtyrosinase表达水平显著调高,说明DjSoxB3在干细胞的增殖和组织的分化起着重要作用。同时,和DjSoxB1-2一样,DjSox3基因干扰后出现了小头畸形和歪尾现象,说明再生部分与原来身体的比例失调。qPCR检测结果也表明DjSoxB3干扰后DjnlgA,Djβ-catenin-1和尾部标记基因DjFrizzled表达水平都显著下调,说明DjSoxB3在再生过程中参与了身体极性的构建。另外,DjSoxB3干扰后,肌肉标记基因Djmhcb,纤毛标记基因DjIFT和DjLC1表达水平显著下调;运动速度测量结果表明DjSoxB3干扰组涡虫的运动速度明显慢于对照组,说明DjSoxB3参与运动系统的维持。DjSoxB3干扰后凋亡标志基因Djcaspase3表达水平显著上调。因此认为DjSoxB3参与细胞的凋亡。qPCR检测结果也表明DjSoxB3干扰后DjPC2的标记基因表达水平显著下调,表明DjSoxB3参与神经中枢的形成。另外DjSoxB3干扰组对涡虫表型影响更大,同时,DjSoxB3干扰后期,DjSoxB1和DjSoxB2的表达量下调到了极显著水平,所以认为在DjSoxB家族中DjSoxB3对涡虫组织的维持及再生起着更为重要的作用,是DjSoxB家族中关键调节基因。
  DjSoxB1与DjSoxB2共干扰结果表明,除了出现DjSoxB1和DjSoxB2单独干扰的表型外,整体涡虫出现头部溶解,耳突处畸形;另外qPCR检测结果表明DjSoxB1不影响DjSoxB2的表达,DjSoxB2只在干扰后期影响DjSoxB1的表达,说明共干扰后整体涡虫出现头部溶解,耳突畸形的现象是由于DjSoxB1与DjSoxB2两个基因功能叠加造成的。DjSoxB2与DjSoxB3共干扰结果表明:除了出现DjSoxB2和DjSoxB3单独干扰的表型外,整体涡虫出现多眼点现象,尾再生头片段出现眼点比例不协调现象;qPCR检测结果表明DjSoxB2与DjSoxB3之间互相影响,说明DjSoxB2与DjSoxB3共干扰结果也是由DjSoxB2与DjSoxB3之间的协同作用造成的。
  综上所述,DjSoxB1-3基因在日本三角涡虫中广泛表达,DjSoxB基因间在功能上相互交叉,相互协同。在再生过程中参与了干细胞增殖、组织分化及极性的构建,特别是在再生早期起重要作用。
[硕士论文] 余姣姣
养殖 四川农业大学 2018(学位年度)
摘要:中华蟾蜍(Bufo gargarizans)作为我国分布较广的两栖动物之一,在国内除少数地区外都有其种群的栖息地,下至海拔120多米的田间屋后,上至海拔4300多米的高原草地都能见到其行动缓慢的身影。国内外的专家学者关于中华蟾蜍的研究不计其数,有关该群体的分类情况、系统地位一直存在争议,如今越来越多的分子证据表明中华蟾蜍不存在亚种分化而是一个独立的物种。并且作为一个海拔跨度如此大的变温物种,受不同生境的影响,其种群之间存在着差异。能在高原如此恶劣的环境下生存的中华蟾蜍有其独特的适应性,但中华蟾蜍等两栖动物的高原适应性研究相对要少。
  因此,本实验以线粒体DNA(mitochondrion DNA,mtDNA)为分子标记,1)利用D-loop区的部分片段(565bp),对四川8个地区(崇州、丹巴、青川、若尔盖、上里、石棉、温江、望鱼)及陕西汉中采集的共102个中华蟾蜍样本展开研究,分析其遗传多样性、遗传距离、种群结构和物种分类地位;2)通过对采自高低两个海拔梯度的40份中华蟾蜍样品线粒体基因组中6个基因(ND1、ND2、COX1、COX2、ATP6和ATP8)的全序列的研究,比较高海拔地区(海拔2940~3440m,18个样品)和低海拔地区(海拔550m,20(22)个样品)中华蟾蜍所受的选择压力的大小,揭示其中的差异,找出中华蟾蜍高原适应的遗传学证据。本实验的主要结果及结论如下:
  1.通过对102条中华蟾蜍D-loop区部分序列的比对分析发现:总体的碱基组成情况为T33.0%、C18.9%、A37.3%、G10.8%,碱基组成G为最小,呈现出明显的偏歧性,A+T含量达到了70.3%,远远高于G+C含量;变异(多态)位点92个,占比16.3%;可划分单倍型31个(H1~H31),占样本总量的30.39%(31/102),共享单倍型较少,仅占比12.90%(4/31),并且无任何单倍型被所有种群所共有的;四川-石棉小种群的特有单倍型的比率最高,为70.00%。
  2.9个中华蟾蜍种群都有着较高的遗传多样性,总体单倍型多样性为0.878±0.023,总体核苷酸多样性为0.04918±0.00176;相比之下,四川-望鱼小种群的遗传多样性较高,遗传资源相对更加丰富,其单倍型多样性、核苷酸多样性和平均配对差异值都是最大的,分别为0.889±0.091、0.04800±0.01137、26.833。
  3.9个中华蟾蜍小种群的K2P遗传距离为0.000~0.096,总体平均K2P遗传距离仅为0.052;分子系统发育树分析表明,来自9个地理小种群的102个中华蟾蜍样本相互嵌合,它们并没有聚集成各自相互独立的地理分支,与其他学者的研究结果保持一致,中华蟾蜍的遗传结构与它们所处地域和海拔高度均没有关联性,支持之前关于华西蟾蜍、岷山蟾蜍和中华蟾蜍是同一个种——中华蟾蜍的这一假说。
  4.ND1、ND2、ATP6、ATP8、COX1和COX2这6个基因的长度分别为946bp、1035bp、684bp、165bp、1542bp和688bp,与参考序列保持一致;和参考序列相比,ND1、ND2、ATP6、ATP8、COX1和COX2这6个基因分别有变异位点32个、36个、36个、3个、21个和17个,其中错义突变(missense mutation)位点分别有4个、11个、2个、1个、0个和3个。通过分析错义突变在群体中发生的频率,并经过皮尔逊卡方检验,最终发现仅有ND2基因中的A4767C和G5142A这2个突变位点与中华蟾蜍高海拔群体的高原低氧适应呈现极显著正相关关系(P<0.01),提示ND2基因可能是中华蟾蜍高原适应的一个候选基因。
[博士论文] 王伟
畜牧学;动物遗传育种与繁殖 东北农业大学 2018(学位年度)
摘要:鸡是重要的非哺乳类脊椎模式动物,已被广泛用于发育生物学、病毒学和免疫学研究。由于鸡具有天然的高血糖和胰岛素抵抗的特性,使得鸡成为了研究人类肥胖、胰岛素抵抗和二型糖尿病的潜在动物模型。在现代肉鸡产业中,肉鸡的腹脂过度沉积给肉鸡业生产带来了严重的经济和环境问题,已成为一个亟待解决的难题。要解决这个难题,就必需要了解鸡的脂肪组织是如何形成的,即必须了解鸡脂肪细胞的分化及其分子调控机制。目前,鸡的永生化前脂肪细胞系至今尚未建立,导致鸡的脂肪生成机制和肥胖症发病机理研究滞后。本研究的目的是建立永生化的鸡前脂肪细胞系,并揭示鸡脂肪细胞分化过程中的基因表达规律。
  研究首次利用鸡的端粒酶逆转录酶(chTERT)和鸡的端粒酶RNA(chTR)重建了鸡前脂肪细胞的端粒酶活性,并成功建立了两个永生化的鸡前脂肪细胞系。首先克隆了chTERT和chTR基因,构建了这两个基因的逆转录病毒表达载体pLXRN-chTERT和pLPCX-chTR,分别与pVSV-G共转染GP2-293包装细胞,制备了相应的逆转录病毒。分离培养原代鸡前脂肪细胞,采用单独感染chTERT逆转录病毒和联合感染chTERT、chTR两种逆转录病毒的方法,利用药物筛选获得了两个永生化的鸡前脂肪细胞系,同时证明了鸡前脂肪细胞的端粒酶活性的限速成分是chTERT而不是chTR。研究将单独感染chTERT逆转录病毒的永生化鸡前脂肪细胞系命名为immortalized chicken preadipocyte1(ICP1),将联合感染chTERT和chTR逆转录病毒的永生化鸡前脂肪细胞系命名为immortalized chicken preadipocyte2(ICP2)。细胞增殖特性分析结果表明,ICP1和ICP2细胞在体外累积群体倍增数(PDs)均超过了100,达到了永生化细胞的判定标准;细胞形态学和β-gal染色分析结果都表明,ICP1和ICP2保持了原代鸡前脂肪细胞的基本形态,并且没有出现衰老表型;半定量RT-PCR和TRAP分析结果表明,ICP1和ICP2细胞高表达端粒酶基因,且具有极高的端粒酶活性;DNA倍体分析结果表明,ICP1和ICP2细胞是非整倍体;锚定不依赖性生长分析结果表明,ICP1和ICP2细胞没有发生恶性转化;同工酶分析和PCR物种鉴定分析结果表明,ICP1和ICP2细胞是鸡源细胞,并且排除其它细胞污染的可能性;分化特性分析结果表明,ICP1和ICP2细胞保持了原代鸡前脂肪细胞的分化能力,其脂肪细胞分化标记基因的表达模式与原代鸡前脂肪细胞相似。最后,应用Agilent鸡全基因4×44K芯片,分析了鸡前脂肪细胞系在整个分化过程中的基因表达谱,筛选出与鸡脂肪细胞分化相关的差异基因,并进行了基因功能注释和基因通路分析。
  本研究首次报道了通过单独转导chTERT或联合转导chTERT和chTR能够重建鸡的端粒酶活性,并成功建立了两个永生化的鸡前脂肪细胞系,同时利用细胞系开展了鸡前脂肪细胞分化过程中的基因表达谱分析。所建立的永生化鸡前脂肪细胞系为研究鸡脂肪形成、脂类代谢、肥胖和相关疾病等提供了理想的体外细胞模型,研究结果同时为永生化其它类型的鸟类细胞提供了线索。鸡前脂肪细胞分化过程中的表达谱分析结果为进一步揭示鸡前脂肪细胞分化的分子机制奠定了基础。
[硕士论文] 盛清宇
野生动植物保护与利用 东北林业大学 2018(学位年度)
摘要:在种群遗传多样性研究中,从2015年1月至2017年1月期间,在长白山北部区域采集了266份狍粪便样品,实验室提取DNA后,筛选了10个微卫星位点对该地区7个西伯利亚狍(Capreolus pygargus)的局域种群进行遗传多样性和性别偏倚扩散分析,目的在于为狍种群资源的保存利用以及后续研究狍作为猎物对东北虎、东北豹的影响提供支持。获得主要研究结果如下:
  1)7个地区的西伯利亚狍种群遗传多样性程度均较高。等位基因数在7.3~11.1之间,平均等位基因数为8.9。等位基因丰富度整体水平较高,为7.5。观测杂合度和期望杂合度大小范围在0.7~0.76之间,种群遗传一致性较低,种群遗传多样性丰富、变异程度较高。7个种群中,仅黄泥河种群的Fis值为负值(-0.01),其余6个种群的Fis值均大于0,在0.021~0.061之间,表明种群内部可能存在一定程度的近交。
  2)遗传多样性研究结果表明,研究区域内的狍种群具备优良的选育和遗传潜力,是可以进行持续利用的种质资源。
  3)在种群遗传结构和性别偏倚扩散机制研究中,应用空间自相关分析发现了汪清区域的狍种群在5~10km的距离等级内存在明显的空间遗传相关性,表明汪清区域狍种群空间遗传结构由于基因流受限所导致的。
  4)长白山北部区域狍种群遗传结构表现出的性别间差异和偏雌扩散的模式,可能是由以下两方面的原因导致的:一是狍雌雄个体冬季栖息地利用差异,后代较少的雌性个体,需要在冬季进行较长距离的迁移,以回到出生地来加入具有亲缘关系的集群中;二是狍一夫一妻制以及雄性保卫领地的交配策略可能导致雌性狍需要通过较长距离的迁移来寻找并选择拥有较好资源配偶。
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