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运用免疫特异性分离混合细胞体系的建立
成果信息
立项支持
  • 公布年份:
    2014
  • 中图分类:
    D918.91
  • 关键词:
  • 成果简介:
    混合斑的检验是法医物证学领域的世界性难题。该研究依据精子膜抗体、细胞A、B抗原抗体与抗原的免疫反应,借助磁珠在磁场下可控运动的特点分离捕获混合斑中的精子,免疫组化技术标识A、B细胞并应用LCM进行不同细胞的分离,经DNA提取、PCR荧光复合扩增、毛细管电泳及激光扫描分析,实现混合精斑及混合上皮细胞的分离检验。该研究运用MOSPD3抗体、SPAG8抗体与生物素-亲和素-磁珠构成精子靶向捕获复合体,特异性、稳定性好,在国内外尚属首次报道。该研究通过A、B抗体与上皮细胞表面抗原结合,免疫组化染色后标识不同血型的上皮细胞,LCM切割分离,10个细胞即可以获得完整的单一DNA分型,该研究在国内外亦未见报道。研究过程中,共形成研究论文5篇(1篇SCI,2篇中文核心,1篇CSCD核心,1篇会议论文集),国家专利2项,形成技术方法2项。该项目基于抗原抗体反应、磁珠靶向捕获、免疫标识、LCM、低体积扩增等技术手段,初步实现了精斑的分离检验,为进一步研究奠定了基础。免疫磁珠分离技术操作简单,省时,为自动化处理混合精斑提供了新思路。该研究应用的免疫磁珠不与女性上皮细胞结合,可以特异性捕获混合细胞中的精子,有效的去除女性上皮细胞及其他成分的干扰。在混有女性上皮细胞数为10000个左右的混合样本中,当精子数为200个左右时,免疫磁珠捕获法联合应用QIAamp○R DNA Micro试剂盒,进行PCR扩增后检出率高于差异裂解法。该研究建立免疫磁珠技术适用于强奸案件中女性阴道拭子、内裤等检材的检验,免疫标识技术适用于强奸案中男性阴茎拭子、乳头擦拭物以及盗窃案件中烟头、矿泉水瓶等口腔脱落细胞类检材的检验。已应用于实际案例50余起,有效缩短了检验时限、节约了实验成本,具有较高的社会及经济效益。
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